Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Пневмосклероз как мультифакториальный процесс (обзор литературы) 10
1.1. Современные представления о полиэтиологичности пневмосклероза 11
1.2. Клеточные взаимоотношения в легких при формировании пневмосклероза 23
1.3. Особенности повреждения легких при эндотоксикозе 30
Глава 2. Материал и методы исследования 39
2.1. Моделирование хронического эндотоксикоза 39
2.2. Методы оценки и выраженность эндотоксикоза 42
2.2. Морфологические методы исследования 43
2.3. Методы морфометрии и математической обработки данных 45
Глава 3. Патоморфологическая характеристика легких при хроническом эндотоксикозе 47
3.1. Динамика прироста соединительной ткани в легких 47
3.2. Иммуногистохимическое исследование легких при хроническом эндотоксикозе 61
Обсуждение полученньгх результов 85
Выводы 94
Список литературы
- Клеточные взаимоотношения в легких при формировании пневмосклероза
- Особенности повреждения легких при эндотоксикозе
- Морфологические методы исследования
- Иммуногистохимическое исследование легких при хроническом эндотоксикозе
Введение к работе
Актуальность работы.
Развитие многих хронических заболеваний, таких как атеросклероз, болезни печени и желчевыводящих путей, почек, эндокринопатий и др., сопровождаются повышенным образованием эндогенных токсических соединений (ЭТС) и/или недостаточным удалением их из организма. Когда эти соединения распространяются по жидким средам (крови, лимфе, тканевой жидкости) и вызывают повреждение клеток внутренних органов, следует говорить о развитии эндотоксикоза (ЭТ) [Яковлев М.Ю., 1998, 2000, 2005; Мишнев О.Д., с соавт., 2001, 2003; Щеголев А.А., с соавт., 2002; Богомолова Н.В., 2005; Новочадов В.В., Писарев В.Б., 2005; Feldman A.M., McTiernan С, 2004; Jortani S.A., et al., 2004].
В отличие от острого процесса, хронический ЭТ выделен как самостоятельный общепатологический синдром сравнительно недавно, а его органопатология находится на настоящий момент в стадии изучения. Сущность хронического ЭТ состоит в необратимой тканевой перестройке внутренних органов с ограничением их функции под постоянным действием сравнительно умеренных концентраций эндогенных токсических соединений. В работах, выполненных на кафедре патологической анатомии Волгоградского государственного медицинского университета в последние годы, указывается на обязательное вовлечение печени, легких и почек в сложный пато- и морфогенез хронического ЭТ [Новочадов В.В., 1998-2005; Фролов В.И., 2002, 2004].
Легкие выступают в качестве одного из наиболее уязвимых для ЭТС органов, как в силу высокого транзита через них крови, так и в связи с присутствием большого количества клеток-мишеней с ярко выраженными
межклеточными взаимодействиями [Ерохин В.В., Романова Л.К., 2000; Харланова Н.Г., 2001; Хусинов А.А., 2004; Cole A.M., Waring A.J., 2001; Herskovic J.J., 2002; Huang H., et al., 2005]. Тем не менее, универсальным исходом хронического ЭТ для легких становится формирование пневмоск-лероза. Альвеолярные эпителиоциты двух типов, макрофаги, эндотелий, фибробласты и транзиторные лейкоцитов, эпителиальные и гладкомышеч-ные клетки бронхов, а также нейроэндокринные клетки имеют различный рецепторный аппарат и локализацию [Коган Е.А., с соавт., 2003, 2006; Тарасова Т.В., с соавт., 2003; Черняев А.Л., Самсонова М.В., 2004, 2006; Втю-рин Б.В., с соавт., 2006; Toward Т., Broadley К., 2002; Abraham Е., 2003; Crapo J.D., 2003; Werlich Т., et al., 2004; Hetland R.B. et al., 2005], что предполагает их неоднозначную роль в формировании пневмосклероза.
Имеющиеся в настоящее время работы, посвященные механизмам образования соединительной ткани в легких как результат хронического ЭТ, немногочисленны [Doucet С, et al., 2002; Gozal Е., et al., 2002; Bodo M, et al., 2003; Shimabukuro D.W., et al., 2003; Beck-Schimmer В., et al., 2006], они не выделяют эндогенные токсические соединения в качестве самостоятельного фактора морфогенеза.
С этих позиций актуальным представляется экспериментальное исследование морфофункциональных изменений в легких при хроническом ЭТ в аспекте изучения его тканевой перестройки и формирования пневмосклероза.
Цель работы - получить в эксперименте новые данные о динамике и механизмах формирования пневмосклероза при хроническом эндотоксико-зе для улучшения диагностики хронических заболеваний легких в патоло-го-анатомической практике.
Задачи исследования.
Изучить в динамике хронического экспериментального эндотокси-коза у крыс характер тканевой перестройки в легких и гистотопографию развития пневмосклероза.
Показать изменения тканевого распределения макрофагов и мио-фибробластов легких, и их участие в новообразовании соединительной ткани в легких.
Выявить изменения иммуногистохимических маркеров тканевой перестройки, сопутствующих формированию пневмосклероза при хроническом эндотоксикозе.
Выявить наиболее информативные количественные критерии развития пневмосклероза при хроническом эндотоксикозе.
Научная новизна.
С помощью гистологических и количественных методов исследования показано, что формирование пневмосклероза при хроническом ЭТ не идет диффузно, а начинается с увеличения объемной доли соединительной ткани в области корня легкого и в каудальном направлении. В дальнейшем прирост соединительной ткани происходит преимущественно в периферических сегментах легких, а вблизи корня легкого - замедляется.
С помощью гистологических и иммуногистохимических методов показано, что количество и структурные признаки реакции макрофагов и миофибробластов легких территориально соответствуют зонам формирования пневмосклероза только на относительно ранних сроках его развития. Показано, что структурная перестройка сосудов в легких по своей выраженности и срокам развития следует за динамикой развития пневмосклероза.
Выявлены количественные морфологические признаки, основанные на раздельной морфометрии отдельных сегментов легких, позволяющие с высокой точностью оценивать динамику и характер формирования пневмосклероза по текущей гистотопографии соединительной ткани.
Научно-практическая значимость.
Полученные данные расширяют современные представления о характере и динамике формирования пневмосклероза при хронической патологии, сопровождающейся эндотоксикозом.
Предложенные автором количественные критерии для оценки пневмосклероза имеют значение для повышения качества диагностики легочной патологии, выделяя компонент, связанный с развитием хронического ЭТ.
Основные положения, выносимые на защиту.
Формирование пневмосклероза при хроническом эндотоксикозе имеет морфологические особенности, позволяющие выделить изменения, опосредованные действием эндогенных токсических соединений.
Двухфазная динамика новообразования соединительной ткани в легких отражает особенности тканевого распределения ключевых клеток, принимающих участие в формировании пневмосклероза при хроническом эндотоксикозе.
Иммуногистохимическое выявление и морфологический анализ тканевого распределения макрофагов, миофибробластов, а также экспрессии альфа-1-антитрипсина в легких позволяет уточнить характер и динамику прироста соединительной ткани в органе.
Апробация работы и публикации.
Основные результаты диссертационного исследования докладывались и обсуждались на 61-й итоговой конференции НОМУС Волгоградско-
го государственного медицинского университета (Волгоград, 2003), II Общероссийской конференции с международным участием «Проблемы морфологии» (Сочи, 2003), итоговой научной сессии Волгоградского государственного медицинского университета (Волгоград, 2004), IV Научно-практической конференции молодых ученых мед. факультетов и университетов России (Тула, 2004), 10-й конференции молодых исследователей Волгоградской области (Волгоград, 2005), научно-практической конференции «Совершенствование и развитие профилактического направления деятельности учреждений здравоохранения Волгоградской области» (Волгоград, 2005); Всероссийском научном симпозиуме «Эндотоксикоз: природа, диагностика, принципы коррекции» (Волгоград, 2005); 2-й Всероссийской заочной электронной конференции «Проблемы регенерации» (Курск, 2006); II съезде Российского общества патологоанатомов (Москва, 2006).
Апробация работы осуществлена на расширенном заседании сотрудников кафедры патологической анатомии Волгоградского государственного медицинского университета 20 мая 2006 года.
По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, в том числе 3 -в центральной печати.
Реализация и внедрение результатов исследования.
Работа была выполнена на кафедре патологической анатомии (зав. кафедрой - член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор В.Б. Писарев) ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» (ректор - академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор В.И. Петров).
Материалы диссертации внедрены в учебный процесс кафедр патологи-ческой анатомии и судебной медицины Волгоградского государственного медицинского университета. Практические рекомендации используются в работе Волгоградского научного центра РАМН и администрации Волгоградской об-
ласти, областного бюро судебно-медицинской экспертизы и областного пато-лого-анатомического бюро.
Структура и объем диссертации.
Диссертация изложена на 123 страницах машинописного текста, содержит 9 таблиц, иллюстрирована 40 рисунками. Она состоит из введения, обзора литературы, главы материалов и методов исследования, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов. Список использованной литературы содержит 258 источников (95 на русском и 163 на иностранных языках).
Клеточные взаимоотношения в легких при формировании пневмосклероза
При массивном или же многократном повреждении легких происходит тканевая перестройка, касающаяся, прежде всего, клеточных взаимоотношений в легочной паренхиме с формированием пневмосклероза. Первыми на повреждающий агент реагируют эпителиоциты первого типа, составляющие основу эпителиальной выстилки (95-96% всех эпителиоцитов) и находящиеся преимущественно в альвеолярном отделе легких. Они имеют характерное строение (полигональные, гладкие, имеют цитоплазматиче-ские выросты с непрерывным гликокаликсом) и ряд сугубо специфичных для них веществ: эстераза, глутаминтрансфераза, рецепторы к лектину, ци-токератин-18. Эпителиоциты первого типа не обладают регенераторной способностью в ответ на повреждение [Strieter R.M. et al., 2002; Shimabu-kuro D.W. et al., 2003; Kuebler J.F. et al., 2004].
Восполнение клеточного состава идет за счет альвеолоцитов второго типа, обладающих высокой способностью к пролиферации, основная часть которых находится в- неактивном состоянии. В отличие от альвеолоцитов первого типа они располагаются вблизи пор Кона, несколько мельче, кубической или призматической формы, имеют две апикальные поверхности, открывающиеся в смежные альвеолы. Цитоплазматические выросты отсутствуют. Для них также характерно содержание специфичных веществ: гли-копротеин 330 kDa, щелочной фосфатазы, фосфолипидов, белков сурфак-танта и цитокератина-19 [Шуфникова Е.А., 1996; Diemel R.V. et al., 2002; Memon R.A. et al., 2002; Kuebler J.F. et al., 2004].
Существует множество факторов, регулирующих пролиферацию эпителиоцитов второго типа в легочной паренхиме например, такие как мак-рофагальные факторы и факторы, находящиеся в бронхоальвеолярной жидкости, эпидермальный фактор роста, фактор роста фибробластов, белок и т.д. При массивном повреждении эпителиоцитов 1-го типа они практически полностью замещаются эпителиоцитами 2-го типа, нередко приобретая признаки клеточного атипизма, что может служить предрасполагающим фактором для развития рака легких. Нарушение процессов регенерации эпителия происходит также за счет активного развития склероза интерсти-ция и появления быстро пролиферирующих фибробластов [Бородай Е.А., 2003; Kuebler J.F. et al., 2004].
В то же время, альвеолоциты 2-го типа секретируют коллагеназу и другие ферменты, разрушающие межклеточный матрикс; рецепторы к компонентам матрикса; синтезируют фибронектин, ламинин, коллаген IV и VIII типов, протеогликаны, а также множество цитокинов и других эффектор-ных молекул. Повреждение эпителиоцитов 2-го типа является предпосылкой для развития диффузного пневмосклероза. При этом альвеолярная мембрана становится извилистой и утолщается, просвет альвеол уменьшается. В некоторых случаях в просвете альвеол может обнаруживаться фибринозный экссудат с последующей его организацией и более быстрым развитием пневмосклероза. Среди эпителиоцитов располагаются нейроэндокринные клетки, относящиеся к APUD-системе. Их строение, функция и численность изменяются не только в зависимости от возраста и локализации, но и в зависимости от патологических изменений в легких [Хусинов А.А., 2004; Ito Т., 1999; Kahler СМ. et al., 2002; Kunkel S.L. et al., 2003 Tunctan B. et al., 2003].
При развитии склеротических процессов и нарушении архитектоники легкого, уменьшается число функционально активных нейроэндокринных клеток, что приводит к нарушению местного и общего гомеостаза путем изменения синтеза и секреции биологически активных веществ, таких как ВИП, нейропептид Y, вещество Р, нейротензин и т.д., снижая адаптивную функцию легких к повреждающим факторам. Источником некоторых регуляторов пролиферации эпителиоцитов являются представители мононук 25 леарных фагоцитов, в частности легочные макрофаги. Последние в зависимости от локализации подразделяются на альвеолярные (50% всех легочных макрофагов), интерстициальные, бронхиальные и плевральные. Альвеолярные макрофаги располагаются в гипофазе сурфактанта между апикальной частью эпителиоцитов и мембраной сурфактанта [Diemel R.V. et al., 2002; Kahler CM. et al., 2002].
В условиях хронического воспаления, они оказывают повреждающее действие, путем синтеза проинфламаторных медиаторов и выделения токсичных продуктов метаболизма в результате процессов фагоцитоза. В связи с переходом альвеолярных макрофагов на аэробные условия существования, у них усилилась гидролитическая активность, бактерицидные свойства, за счет синтеза супероксиддисмутазы, обладающей антиоксидантными свойствами. Однако, для формирования полноценной фагоцитарной защиты, макрофаги вынуждены привлекать другие полинуклеары, синтезирующие перекись водорода [Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989; Неговский В.А. с соавт., 2000; Мороз В.В., с соавт., 2001].
Кроме этого, в процессах метаболизма преобладает окислительное фосфорилирование липопротеидов и фосфолипидов с образованием токсичных метаболитов. Последние, в свою очередь, инактивируются фосфо-липазой и липазой, на активность которых влияет а-антитрипсин и ингибиторы гидролаз [Зорин Н.А., с соавт., 2004].
Особенности повреждения легких при эндотоксикозе
Являясь активным метаболическим центром, легкие подвергаются наибольшему воздействию, в условиях хронической интоксикации, продуктами эндогенного происхождения, когда малосимптомное течение эндоток-сикоза, вызывает необратимые изменения в паренхиме органа. Наиболее часто происходит взаимодействие с различными бактериальными эндотоксинами, например ЛПС грамотрицательных бактерий, экзотоксинами стафилококков. По мнению J.H.Vemooy et al., 2002, хронические ингаляции малых доз ЛПС, содержащегося в органических пылевых примесях, сигаретном дыме, воздухе замкнутых пространств, распространено гораздо шире, чем это принято считать. В детальном исследовании ткани легких мышей, подвергавшейся такой процедуре в течение 1-2 мес, авторы обнару 31 живали хроническое воспаление, характеризующееся перибронхиальной и периваскулярной агрегацией CD4+, CD8+ и CD 19+ лимфоцитов, аккумуляцией в паренхиме скопления макрофагов и CD8+ лимфоцитов. Параллельное развитие метаплазии слизистых клеток, утолщение стенки воздухоносных путей и необратимое расширение части альвеол убедило авторов в том, что хроническая ингаляция малых доз ЛПС, является классической моделью хронической обструктивной болезни легких человека [Hoffmann H.J. et al., 2002; Jeffery P., Zhu J., 2002].
ЛПС-индуцированный эндотоксикоз выражается активацией макро-фагально-фагоцитарной системы, при многократном воздействии приводящей к формированию пневмофиброза, дыхательной недостаточности и в отдельных случаях предрасполагая к развитию рака легких. Увеличение числа альвеолярных макрофагов является важным звеном повреждения и защиты при ЭТ. Показана их роль в фагоцитозе ЛПС-нагруженных лейкоцитов и вывод из организма с бронхосекретом как элиминирующая функция. Имеется корреляция между количеством ЛПС-положительных макрофагов и степенью повреждения легочной ткани [Пермяков М.К. с соавт., 1995; Яковлев В.Н., Алексеев В.Н., 1998; Бардахчьян Э.А., с соавт., 1999].
В норме высвобождение моноцитов в альвеолярное пространство ограничено не только механическими факторами, но и регулируется активностью адгезивных молекул и хемотоксических протеинов. ЛПС способен многократно усиливать процесс миграции моноцитов, однако, в большей степени стимулирующая роль принадлежит не самому ЛПС, а медиаторам нейтрофильного происхождения. Так что в условиях эндотоксемии правильнее говорить о развитии совместной миграции макрофагов и нейтро-филов [Втюрин Б.В., с соавт., 2006; Maus U. et al., 2002; Akatsu H. et al. 2002; KrishnadasanB. et al., 2004; Panoskaltsis-Mortari A. et al., 2004].
Тяжесть легочного повреждения и, соответственно, развитие пневмофиброза обусловлено выработкой цитокинов, селектинов, интегринов и эн 32 дотелинов, т.е. основных проинфламаторных медиаторов. Отдельного внимания заслуживают миофибробласты легких, высвобождение медиаторов из которых в норме считается одним из регуляторов гемопоэза и ряда иммунных реакций. Как показано C.Doucet et al. (2002), за счет наличия CD40 рецептора эти клетки способны воспринимать воздействие ЛПС, а выделяемые ими медиаторы участвуют в формировании пневмофиброза при хроническом токсическом повреждении легкого.
Однако, роль цитокинов в развитии хронического ЭТ и формировании пневмосклероза неоднозначна. Так, ИЛ-6 и ИЛ-10 совместно с ядерным фактором каппа уменьшают содержание ФНО и нейтрофильную инфильтрацию, обуславливающую действие лизосомальных ферментов на легочную паренхиму [Carlsen Н., et al., 2002; Haddad J.J., Land S.C., 2002; Клогге A. et al., 2002].
Также ИЛ-10 обладает антифосфодиэстеразной активностью, усиливая действие ингибиторов фосфодиэстеразы [Gorbel М. et al., 2002]. Помимо положительного действия, ИЛ-10 способствует развитию метаплазии бронхиального дерева с выраженной лимфоцитарной инфильтрацией [Lee C.G. et al., 2002; Hollingsworth J.W. et al., 2005]. ИЛ-9 снижает генерацию активных форм кислорода альвеолярными макрофагами [Pilette С. et al., 2002]. ИЛ-1 и ФНО способны стимулировать выработку GM-CSF, увеличивая лейкоцитарную инфильтрацию. Повышение уровня GM-CSF активирует фиброгенез в легочной паренхиме, в некоторых случаях, например при развитии нейтропении, приобретая первично хронический характер. В условиях хронического эндотоксикоза большое значение придается интерферон-регулирующим факторам. у-Интерферон способствует нейтрофильному притоку в альвеолы и развитию лейкоцитарной инфильтрации межальвеолярной перегородки. Миелопероксидаза лейкоцитов относится к ферментам с широким спектром субстратной активности.
Морфологические методы исследования
Морфологическому исследованию во всех сериях экспериментов были подвергнуты ткани легких.
Перед изготовлением микропрепаратов проводили фиксирование фрагментов легких в течение 48 ч, в 10%-ном растворе нейтрального формалина. После фиксации материал проводили по общепринятой гистологической методике через батарею спиртов возрастающей концентрации, хлороформ и заливали в парафин. С парафиновых блоков готовили срезы толщиной 4-6 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином по общепринятой методике. Свежезамороженные срезы были использованы для окраски Суданом III для изучения тканевого распределения липидов [Сар-кисов Д.С., Перов Ю.Л. 1996; Коржевский Д.Э., 2005]. Для выявления соединительной ткани использовали окраску по ван Гизону. С целью обнаружения структурных компонентов соединительной ткани срезы окрашивали по методу Масона, который заключается в последовательном окрашивании гематоксилином Вейгерта, кислым фуксином, фосфорно-вольфрамовой кислотой и анилиновым синим. При этом ядра приобретают темно-синюю окраску, цвет цитоплазмы варьирует от розового до красного; коллагеновые и ретикулярные волокна становятся синими; фибрин, эритроциты и мышечные волокна - красными; гиалин - разных оттенков голубого и красного.
Полученные микропрепараты были описаны, с типичных из них - изготовлены микрофотограммы. Фотосъемка части препаратов проведена на микроскопе Micros (Германия) с фотокамерой Pixera (Япония). В дальнейшем съемка сочеталась с количественным морфологическим исследованием.
Для выявления пролиферативной активности в ткани легких использовали моноклональные антитела к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA, DakoCytomation, Дания).
При анализе результатов окраски учитывали, что экспрессия PCNA выявляется не только в клетках, вступающих в стадию пролиферации, но и на этапах внутриклеточной регенерации после ее обратимого повреждения.
Для выявления миоцитов стенок легочных сосудов и единичных мио-фибробластов межальвеолярных перегородок использовали моноклональ-ные антитела к десмину (D33, DakoCytomation, Дания). Использование данной окраски позволяло выявлять самые ранние (12-24 ч) процессы инициализации фиброгенеза в ткани после ее токсического повреждения [Мишнев О.Д., с соавт., 2001,2003].
Использование антител к альфа-антитрипсину позволяло выявить его тканевое распределение и клетки-источники белка: бронхиальный эпителий и эпителиоциты 2 типа [Романова Л.К., 1996; Петров СВ., Райхлин Н.Т., 2004]. Использовали моноклональные антитела к данной антипротеазе (DakoCytomation, Дания).
Также использовали моноклональные антитела к макрофагальному антигену (НАМ56, DakoCytomation, Дания). Данный антиген выявляется как в моноцитах крови, так и в тканевых мононуклеарных фагоцитах, как резидентных, так и мигрирующих из кровотока.
Визуализацию проводили с помощью непрямого иммунопероксидаз-ного метода с высокотемпературной и ферментной демаскировкой антигенов. Для достоверности полученных результатов применяли позитивные и негативные контроли антигенов, а так же негативные контроли антител [Петров СВ., Райхлин Н.Т., 2004; Kelman Z., 1997; Rosa М.А., et al. 2000; PauneskuT. etal., 2001].
Иммуногистохимическое исследование легких при хроническом эндотоксикозе
С помощью гистологических и количественных методов исследования показано, что формирование пневмосклероза при хроническом ЭТ не идет диффузно, а начинается в образования очагов в периферических отделах легочных долей с нарастанием доли соединительной ткани в каудаль-ном и латеральном направлении.
Установлено, что формирование пневмосклероза при хроническом эн-дотоксикозе имеет морфологические особенности, позволяющие выделить изменения, опосредованные действием эндогенных токсических соединений.
При морфологическом исследовании легких в моделях с хронической интоксикацией бактериальным ЛПС с ТХМ, и сочетанного применения ЛПС и гентамицина к 30 суткам в ткани легких выявлено равномерное утолщение межальвеолярных перегородок, что является следствием спадения межальвеолярных капилляров, выраженной макрофагальной инфильтрацией, пролиферации фибробластов и накопления коллагеновых волокон. Таким образом, данный процесс носит комплексный характер и обусловлен сочетанным действием параллельно происходящих процессов.
В просвете примерно трети альвеол выявлялись скопления клеток, слизи и белкового экссудата, не закрывающие их просвета. Легочные вены были резко полнокровными с элементами стаза. Стенка бронхов содержала все слои, но мышечные волокна были атрофичными, окраска их была бледной, между миоцитами обнаруживались скопления лимфоцитов. В просвете бронхов выявлялись скопления слизи с примесью лимфоцитов. Такие скопления закупоривали просвет отдельных бронхов, в рядом лежащих межальвеолярных перегородках имелись очаги диапедезных кровоизлияний. К 60 сут практически у всех экспериментальных животных выявляли довольно характерную картину выраженного утолщения межальвеолярных перегородок, при котором диаметр просвета альвеол становился сопоставимым с размерами межальвеолярной перегородки.
Липиды при окраске Суданом III выявлялись в большом количестве в виде мелкокапельных включений в цитоплазме альвеолярных макрофагов и фибробластов. При этом количество липидов увеличивалось по направлению к капиллярам. В межклеточном пространстве альвеолярных перегородок липиды выявлялись в виде крупных капель. В просвете альвеол выявлялись как липидные массы, соответствующие скоплениям слизи, так и единичные истинные капли.
На этом фоне выявлялись области с более выраженными преобразованиями в виде разрастания соединительной ткани. Области, прилегающие к крупным и средним сосудам, содержали участки диапедезных кровоизлияний в ткань межальвеолярной перегородки различной распространенности. Установлено, что в этот период уменьшалось перибронхиальное и пе-риваскулярное формирование пневмофиброза, при этом отчетливо выявлялся прирост истинной соединительной ткани.
К 90 суткам хронического ЭТ произошла гистотопографическая реверсия нарастания соединительной ткани. В противовес ранним срокам эксперимента, на позднем этапе более плотные и массивные участки соединительной ткани обнаружены в латеральном и каудальном направлении от корня легкого. Формирование диффузного интерстициального фиброза, по нашему мнению, усиливалось не только за счет увеличения компонентов соединительнотканной стромы, но и вследствие значительного спадения альвеол и сужения их просвета.
Выявлены количественные морфологические признаки, основанные на радиальной морфометрии, позволяющие с высокой точностью оценивать скорость прироста соединительной ткани по ее текущей гистотопографии в легких.
При проведении морфометрии выявлено выраженное снижение воздушности альвеолярной ткани: с 60% у животных группы сравнения до 38% - у крыс с хроническим ЭТ. Значительно возрастала объемная доля соединительной ткани. Так, у интактных крыс объем соединительной ткани со-ставлял лишь 0,8±0,2 мкм /мкм , у животных опытной группы на 30-е су-тки - 12,1±1,0 мкм /мкм , а на 90-е сутки данный показатель составил 23,6±0,3 мкм /мкм . Нарастание объемной доли сосудов при хроническом ЭТ в сочетании с их ремоделированием свидетельствует об истощении адаптационных резервов и развитии декомпенсаторного процесса, завершающегося по мере прогрессирования патологии пневмофиброзом.
Сравнение выраженности пневмосклероза в экспериментальных группах позволяет рекомендовать сочетанное введение бактериального ЛПС и гентамицина, а также ТХМ и ЛПС, в качестве моделей ЭТ с относительно поздней, но крайне выраженной тканевой перестройкой легких с формированием диффузного пневмосклероза.
Следующим моментом, заслуживающим обсуждения, является участие сосудистого компонента в формировании картины повреждения легочной ткани при хронической интоксикации.
В современных исследованиях в области патологии происходит закономерное смещение акцентов от органов-объектов болезни к клеточным и молекулярным мишеням. Проблема ЭТ, с этих позиций, выдвигает два ключевых пула клеток, максимально вовлекающихся в опосредование эффектов эндогенных токсических соединений: мононуклеарные фагоциты (макрофаги) и сосудистый эндотелий [Яковлев М.Ю., 1998, 2005; Банин В.В., 2002; Andonegui G. et al., 2002; Dvorin E.L. et al., 2003; Tsokos M. et al., 2003].
