Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 8
1.1. Строение нейроглии и микрососудов головного мозга в норме 8
1.2. Морфология опухолей астроцитарного ряда . 24
Глава 2. Материалы и методы исследования 52
Глава 3. Изменение компонентов гематоэнцефалического барьера в опухолях головного мозга астроцитарного ряда и в периопухолевой зоне 57
Глава 4. Иммуногистохимическая характеристика опухолей астроцитарного ряда 102
Заключение 154
Выводы 170
Практические рекомендации 172
Список литературы 173
Список сокращений 217
- Морфология опухолей астроцитарного ряда
- Материалы и методы исследования
- Изменение компонентов гематоэнцефалического барьера в опухолях головного мозга астроцитарного ряда и в периопухолевой зоне
- Иммуногистохимическая характеристика опухолей астроцитарного ряда
Введение к работе
Актуальность темы. Кровоснабжение опухолевой ткани имеет огромное значение для ее прогрессии и прогноза. Известно, что для любой опухоли требуется образование новых сосудов, этот процесс необходим для роста опухоли более 0,2 см в диаметре (Demeule М, Regina А., 2004). В последнее время достигнут значительный прогресс в понимании механизмов неоангиогенеза, охарактеризованы индукторы и ингибиторы ангиогенеза, которые регулируют пролиферацию и миграцию эндотелиальных клеток (Hanahan, 1996). В то же время литературные данные показьшают, что большее внимание уделяется морфологическому исследованию клеточного состава, строению опухолевых клеток, тканевому атипизму, наличию или отсутствию вторичных изменений в опухоли (некроз и кровоизлияние (Nafe R., Schlote W., 2004)), а ультраструктурное исследование сосудов и периваскулярной области практически не проводилось.
В настоящее время морфологическому изучению опухолей нервной системы посвящено большое число исследований (Wahl et. al, 1991; Rutten et. al, 1992; Pascual-Castroviejo et. al, 1995; Liberski, Kordek, 1997; Demuth Т., Berens M. R, 2004; Hartmann C, et al., 2005). Однако данный раздел онкологии остаётся одним из наименее изученных, что связано со сложностью структурной организации нервной системы (Zorziet. al, 1992; Scarpelliet. al, 1994; Tomlinsonet. al, 1994).
Наиболее распространенным видом опухолей головного мозга являются астроцитарные опухоли, отличающиеся значительной вариабельностью структуры в зависимости от степени анаплазии (Burger, Scheithauer, 1994; Escalone Zapata, 1994; Bertossi et. al, 1997). В последнее время в диагностике опухолей стали широко использоваться иммуногистохимические методы, основанные на выявлении белков, специфичных для клеток разного гистогенетического происхождения (Zorzi et. al, 1992; Luo, 1993; Huang et al., 1996). Несмотря на значительные достижения в этой области, многие вопросы остаются недостаточно выясненными: в частности, некоторые антигенные характеристики клеток пролиферирующих сосудов и гигантских клеток, распределение трех изоформ NO синтазы в тканях опухолей. Противоречивые данные относятся даже к выявлению глиального фибриллярного кислого белка (ГФКБ) - иммуноположительные клетки
встречаются при всех опухолях астроцитарного ряда, но степень реакции различается и зависит не только от степени злокачественности опухоли, но и от местных тканевых особенностей строения опухолей (Березин, 1985; Burger Р. С. et al., 1991; Коршунов А. Г., Лахтее-ваС. В., 1998).
В прогрессии опухолей головного мозга немаловажное значение придается пролиферации кровеносных сосудов (Jansen M.et al., 2004; Demeule Met al., 2004). Взаимосвязь опухолевых клеток с кровеносными сосудами, хотя и описана в ряде работ (Sumpio В. Е. et al., 2002), остается недостаточно выясненной, особенно методом имму-ногистохимии и электронной микроскопии.
Также в работе большое внимание уделяется важной проблеме, которая нередко становится основной причиной смерти больных -проблеме нарушения гематоэнцефалического барьера (ГЭБ). Морфологическому изучению нарушения гематоэнцефалического барьера при опухолях головного мозга посвящено большое число исследований (Bertossi М. et al., 1997; Demeule М. et al., 2004). Однако остается множество нераскрытых вопросов и самый главный из них: каковы структурные причины нарушения гематоэнцефалического барьера
Цель исследования. Целью работы является изучение ультраструктурных и иммуногистохимических особенностей пролифери-рующих сосудов микроциркуляторного русла и периваскулярнои области в анапластических астроцитарных опухолях головного мозга, а также исследование экспрессии белков промежуточных фила-ментов и других антигенных свойств опухолевой ткани астроцитом разной степени дифференцировки.
Задачи исследования. В связи с вышеизложенным были поставлены следующие задачи:
1. Электронно-микроскопически и иммуногистохимически иссле
довать структурные проявления нарушения гематоэнцефалического
барьера при астроцитарных анапластических опухолях головного
мозга.
2. Исследовать изменения в ультраструктуре эндотелиоцитов,
перицитов и астроцитов (в области контактов отростков астроцитов с
базальной мембраной эндотелия).
-
Электронно-микроскопически и иммуногистохимически изучить перифокальную зону при анапластическх астроцитарных опухолях головного мозга.
-
Изучить экспрессию ряда иммуногистохимических маркеров (ГФКБ, виментин, белок S-100, нейрофиламенты, коллаген IV типа, пролиферационный маркер Ki-67, онкопротеин р53) в анапластиче-ских астроцитарных опухолях головного мозга и в периопухолевой зоне.
-
Провести анализ экспрессии NO-синтазы (три изоформы) в опухолях головного мозга астроцитарного ряда.
Научная новизна работы. В результате проведенных исследований получены следующие основные новые данные:
интерстициальный отек и набухание отростков и тел астроци-тов наиболее выражены в тех периваскулярных пространствах, где наблюдается значительное утолщение базальной мембраны со снижением ее электронной плотности;
пролиферирующие кровеносные капилляры отличаются спаз-мированным просветом и усиленным развитием внеклеточного пе-риваскулярного компонента (резкое утолщение эндотелиальной базальной мембраны и большое число волокон коллагена);
в сосудистых клубках пролиферирующий эндотелий является виментин-иммунопозитивным и N0 синтаза (три изоформы) - имму-нонегативным;
некоторые периваскулярные гигантские клетки глиобластом являются ГФКБ-иммунонегативными и не содержат промежуточные филаменты в цитоплазме перикариона;
многие опухолевые астроциты в астроцитарных опухолях являются N0 синтаза (три изоформы) - иммунопозитивными. Максимальная степень иммунореактивности выявлена для индуцибельной формы N0 синтазы;
в анапластических опухолях встречается большое число атипических клеток, которые теряют способность экспрессировать ГФКБ; характерный маркер для данного типа клеток.
установлено, что в периопухолевой зоне возникает гиперплазия астроцитарной глии и многие ГКФБ-иммунопозитивные реактивные астроциты не экспрессируют виментин.
Научно-практическое значение работы. Результаты исследований значительно расширяют представления о межклеточных взаимосвязях в ткани опухолей головного мозга и периопухолевой зоне, структурных причинах нарушения гематоэнцефалического барьера и функционально неполноценного ангиогенеза. Полученные данные позволяют дифференцированно подходить к выбору иммуногисто-химических маркеров в диагностике конкретно взятой опухоли. Эти данные могут быть использованы патоморфологами при диагностике и дифференциальной диагностике опухолей головного мозга, а также материал может быть использован в учебных курсах гистологии, патологии и невропатологии.
Основные положения, выносимые на защиту
-
Ультраструктурная и иммуногистохимическая характеристика пролиферирующих кровеносных сосудов и неопластических астро-цитов в опухолевой ткани и периопухолевой зоне.
-
Экспрессия белков цитоскелета и других иммуногистохимиче-ских маркеров в анапластических опухолях головного мозга
-
Закономерности экспрессии 3-х изоформ NO-синтазы в астро-цитарных опухолях головного мозга
Апробация работы. Материалы и основные положения диссертации доложены и обсуждены на конференции «Гистохимический анализ изменчивости и регенерации тканей» (г. С.-Петербург, 1997); конференциях молодых ученых Мордовского госуниверситета им. Н. П. Огарева (Саранск, 1997, 1998); Международном симпозиуме «Структура и функции вегетативной нервной системы» (г. Воронеж, 1998); Областной научно-практической конференции «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (Пенза, 2000); Областной научно-практической конференции «Актуальные вопросы клинической медицины» (Пенза, 2004).
Внедрение в практику. Полученные данные позволяют дифференцированно подходить к выбору иммуногистохимических марке-
ров в диагностике конкретно взятой опухоли. Эти данные могут быть использованы патоморфологами при диагностике и дифференциальной диагностике опухолей головного мозга; также материал может быть использован в учебных курсах гистологии, патологии и невропатологии.
По материалам диссертации опубликовано 18 научных работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 211 страницах машинописи, состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, списка литературы, 87 рисунков. Список литературы включает 430 наименований, из которых 44 отечественных и 386 иностранных.
Морфология опухолей астроцитарного ряда
Первое морфологическое описание глиом сделал в- 1864 году Р.Вирхов, разделив их на две большие группы - мягкие глиомы и твёрдые и указав, что последние более доброкачественны.
Одно из ранних описаний морфологии глиобластом принадлежит Stroebe (1895), который расценил сосудистую реакцию этих опухолей как саркоматозную, что послужило основанием к первоначальному их названию "глиосаркома" (Borst, 1902).
Bailey (1933) и Cushing (1927) дали классическое для своего времени описание морфологии и клиники астроцитом и глиобластом.
Углубленным изучением морфологии опухолей головного мозга, в частности глиом, занимались Гейманович (1936), Белецкий (1936-1960), Лазарев (1937), Хает (1937), Могильницкий (1939), Смирнов (1951-1959), Хоминский (1952-1969), Архангельский (1960-1978), Чайка (1965-1978) и другие.
Последние 3-4 десятилетия характеризовались активацией изуче-ниягглиом головного мозга, в том числе астроцитарного происхождения. Исследования развивались в направлении І изучения генеза этих опухолей, степени их анаплазии, причин и путей прогрессирования и малиг-низации (Арутюнов, 1959; Авцин, 1972; Хоминский, 1962, 1974; Чайка и др. 1978; Ромоданов и др. 1980; Hoshino et al. 1972; Canstans, Schlienger, 1981; Levine, Schmidek et al. 1993 и другие).
Более новые данные о строении опухолей головного мозга, в1 том числе астроцитарного ряда, были достигнуты благодаря достижениям молекулярной биологии и иммуногистохимии (Schiffer, 1994).
В основу многочисленных классификаций опухолей мозга, в том числе глиом, были положены различные принципы. Согласно дисэм-бриогенетическому (дисонтогенетическому) принципу опухоли астроцитарного ряда состоят из клеточных элементов глии, находящихся на разных стадиях созревания (Robert, 1918; Globus, Strauss, 1925).
Bailey, Cushig (1926) в своей монографии описали протоплазмати-ческую и фибриллярную астроцитомы, соответствующую мягким и твёрдым глиомам Вирхова, менее зрелую - астробластому, а также мультиформные спонгиобластомы, происходящие, по их мнению, из эмбриональных спонгиобластов. Однако впоследствии они отказались от этого термина в пользу термина "мультиформная глиобластома" в связи с тем, что в результате своих последующих исследований пришли к выводу, что в описываемой опухоли спонгиобластьг сравнительно редки, а большинство клеток сходны с дедиференцированными астроцитами, из которых могут состоять и мультиформные глиобластомы.
В глиогенетической схеме нейроэктодермальных опухолей Hortega del Rio (1939) выделяет астроцитомы, астробластомы и глиобластомы. Elidge et al. (1935) приводят, в свою очередь, описание трёх видов астроцитом: пиелоидных, тучноклеточных, и диффузных, a Alpers et Rowe (1937) делят эти опухоли на четыре группы: пилоидные, кистоз-ные, гигантоклеточные и клеточные.
Гаккель (1939) в своей классификационной схеме, описывает две группы астроцитом: протоплазматические и фиброзные, а также астробластомы и "гетерогенные глиобластомы". Zulch в предложенной им ранее (1956, 1968) классификации подразделил астроцитомы на фиброз ные, протоплазматические, гигантоклеточные, описывая ещё злокачественные астроцитомы и мультиформные глиобластомы.
Существенные возражения-гистогенетическому принципу в трактовке развития большинства глиом высказали ряд отечественных и иностранных исследователей: Робинзон (1936), Хает (1937), Лазарев и Динабург (1937), Muller (1933), Scherer (1935, 1940). Они предложили для классификации принцип учёта гистологического строения опухоли и степени дистрофических или прогрессивных изменений опухолевой ткани.
Классификации опухолей центральной- нервной системы были предложены ещё многими отечественными и иностранными исследователями: Снесарев (1936), Гейманович, Хает (1936), Лазарев, Динабург (1936, 1937), Белецкий (1937), Бирюков (1941), Поленов, Бабчин (1931, 1954), Ostertag (1941). Классификацию опухолей мозга, основанную на основе анаплазии клеток, мозговой ткани с подразделением всех опухолей на четыре степени злокачественности, предложил Karnohan (1952), а на три степени злокачественности Hernschen (1955).
Материалы и методы исследования
Исследования выполнены на материале астроцитарных опухолей головного мозга человека. Использовали операционный материал, полученный из нейрохирургического отделения Областной клинической больницы им. Н.Н.Бурденко (г.Пенза), Республиканской клинической больницы (г. Саранск) и института нейрохирургии им. А.Л.Поленова (г.Санкт-Петербург). После получения операционного материала кусочки ткани без видимого некроза и кровоизлияний фиксировали в фиксаторе в глутаровом альдегиде на фосфатном буфере от 12 до 24 часов и заливали в эпон-аралдитовые блоки. Количество изученных опухолей по отдельным нозологиям представлено в табл. № 1. Для разрешения поставленных задач мы забирали и фиксировали удаленные во время операций участки тканей исследуемых опухолей. Фиксацию материала осуществляли погружением кусочков ткани в 2 % растворе параформа с 2 % раствором глутарового альдегида на ОДМ фосфатном буфере (рН 7,2) в течении 12-24часов при t 4-5 С Затем материал промывали 0Д5М (рН 7,2) фосфатным буфером (3 смены по 30 минут) и производили дополнительную постфиксацию в 1% растворе осмиевой кислоты на 0,2М фосфатном буфере (рН 7,2) - 2 часа (t 4-5 С). Для обезвоживания кусочки постепенно проводили через спирты возрастающей концентрации до абсолютного этанола (50%, 70%, 96%, 100% - 3 смены по 30 минут), затем использовали две смены ацетона. Перед заливкой проводили пропитку материала в смеси эпоксидных смол с ацетоном в соотношении 1:1 в течение 24 часов. Для полного замещения органических растворителей кусочки помещали в чистую заливочную смесь без ацетона на 30 минут при t 60-50 С Полимеризацию проводили в течение 2 суток при 60-50С. Перед приготовлением ультратонких срезов делали полутонкие срезы, окрашенные толуидиновым синим по J.Lynn (1965) . После обнаружения в полутонких срезах наиболее интересных участков и прицельной заточки пирамидки, получали ультратонкие срезы на ультрамикротоме Ultrocut-Reichert. Контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца по J.Venable, R.Coggeshal (1965), и просматривали в электронном микроскопе ЭБМ-100 при ускоряющем напряжении 75-80 кв. Материал фиксировали в 4%-м параформальдегіде и 0,25%ТМІ глутаровом альдегиде на 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,2) в течение 4 часов. Срезы получали на криостате. Криостатные срезы (10 мкм) обрабатывали на предметных стеклах. Для иммуногистохимического исследования использовали первичные антитела против: ГКФБ-поликлонал из кроликаВАКО (Z 0334) 1:1000, виментин - поликлонал из овцы Affinity Biologicals Inc. (САМ-АР) 1:1000, коллаген 4 моноклонал (Клон IV-4H12) Calbiochem 1: 1000; S100 бета поликлонал из кролика DAKO (А 5110) 1:500, енолаза нейрональная моноклон (клон NSE-P2) BD Biosciences Pharmingenl: 1000; нейрофиламенты 200 поликлонал из кролика SIGMA\ (N4112)1:1000; нейрофиламенты 160 моноклонал (Клон NN18) SIGMA 1: ЮООі nNOS polyclonal from rabbit AEEXIS (ALX-210-529) 1:500, eNOS polyclonal from rabbit ALEXIS (ALX-210-505) 1:1000; iNOS polyclonal from rabbit AEEXIS (ALX-210-503) 1:200, P53 monoclonal (clone 80) BD Biosciences Pharmingen 1: 250; Ki-67 monoclonal (Clone КІ67) Chemiconl :500. МІВ polyclonal (RB4537/4538) Abgent 1:100. Использовали пероксидазно-антипероксидазный и авидин-биотиновый методы. Для блокирования эндогенной; перексидазы срезы обрабатывали 1,5% растворе Н2О2 в метаноле. После инкубациис первичными антителами в течение ночи на холоде срезы инкубировали с вторичными; антителами, конъюгированными с биотином илипероксидазой хрена в течение 30 мин -1 часа (разведение 1:200) и после удаления вторичных антител с авидин-биотиновым комплексом 45 минут (ABC Kit фирмы VECTOR); В качестве хроматогена был использован диаминобензидин. В некоторых случаях использовали автоклавирование при 70С, помещая срезы, инкубированные с первичными антителами, в автоклав на 2 часа. Как показал анализ этих препаратов, наряду с незначительным повышением интенсивности окраски возникает высокое неспецифическое окрашивание ткани. После окрашивания гематоксилином срезы заключали в акватекс. В качестве контроля использовали материал без инкубации в растворе первичных антител. Для выявления иммунного окрашивания использовали стандартный пероксидазно-антипероксидазный метод (ПАП-метод) и авидин-биотиновый комплексный метод. Помимо иммуногистохимического окрашивания материала во всех случаях проводилась окраска препаратов гематоксилин-эозином и по Ван-Гизону по стандартным методикам. В связи с тем, что продукт реакции выявлялся иногда лучше в черно-белом свете, в работе представлены наряду с цветными и черно-белые микрофотографии.
Изменение компонентов гематоэнцефалического барьера в опухолях головного мозга астроцитарного ряда и в периопухолевой зоне
Основное внимание в данной части работы будет уделено ультраструктуре пролиферирующих кровеносных сосудов и окружающих клеток в опухолях. Сосудистый компонент в строении нейроэктодермальных новообразований может быть сложного состава, обусловленного разнообразием строения кровеносных сосудов в различных опухолях одного гистогенеза и даже в различных участках одной и той же опухоли.
Особенностью микроциркуляторного русла центральной нервной системы является наличие периваскулярной астроцитарной муфты. Анатомически астроциты, совместно с эндотелиоцитами сосудов, формируют гематоэнцефалический барьер.
Эндотелий капилляров центральной нервной системы отличается от эндотелия других сосудов наличием плотных межклеточных контактов, малой пиноцитозной активностью и отсутствием пор и фенестр. Именно такие структурные особенности эндотелия- как полагают (Kimelberg Н.К., 2004; Banks W.A, 2005),, определяют барьерную функцию кровеносных капилляров центральной нервной системы.
Собственное электронно-микроскопическое и иммуногистохимическое исследование показало значительное изменение в строении стенки капилляров при анапластических опухолях астроцитарного ряда. Естественно, при этом, встречались капилляры нормального строения.
В работе рассмотрены изменения в ультраструктуре эндотелиоцитов, перицитов и астроцитов, а также область контактов отростков астроцитов с базальной мембраной эндотелиальной выстилки.
Изученные анапластические астроцитарные опухоли отличались значительной пролиферацией кровеносных сосудов. Выраженность пролиферации кровеносных сосудов прямо зависела от степени анаплазии опухолей. В опухолях происходит разрастание мелких сосудов со значительной перестройкой структуры их стенки вследствие беспорядочного размножения клеток (в основном эндотелиальных).
При гистологическом исследовании в глиобластомах отмечали, во-первых, увеличение числа новообразованных тонкостенных кровеносных сосудов (рис. 1) заполненных кровью и, во-вторых, образование «сосудистых клубков» представляющих собой конгломераты крупных эндотелиальных клеток и перициов зачастую без просвета (рис. 2). По-видимому, образование «сосудистых клубков» связано с тем, что эндотелиоциты в недостаточном количестве выделяют протеазы (например, активатор плазминогена) которые необходимы, для того чтобы разрушить базальную мембрану материнского капилляра или венулы и проложить себе путь для дальнейшего роста. Или за счет повышенного синтеза факторов (кислый фактор роста фибробластов и основной фактор роста фибробластов) стимулирующих пролиферацию фибробластов и выработку ими большого количества коллагена и компонентов аморфного вещества базальной мембраны, что также затрудняет нормальный рост капилляров, но не останавливает пролиферацию эндотелиоцитов.
А также в исследованных опухолях мы часто обнаруживали набухание эндотелиальных клеток, выстилающих просвет кровеносного сосуда, который при этом максимально суживался или практически перекрывался. При набухании большинство эндотелиальных клеток увеличиваются в объеме и перекрывают просвет сосуда. В неизмененном кровеносном сосуде лишь одна из эндотелиальных клеток глубоко вдается в его просвет на уровне ядра, остальные клетки представлены тонким слоем цитоплазматических тел.
Следует отметить, что мелкие пролиферирующие сосуды микроциркуляторного русла не всегда было возможно идентифицировать на светооптических препаратах и только сопоставление электронно-микроскопических препаратов с полутонкими срезами позволяет отнести маленькие клеточные агрегаты, как они выглядят в световом микроскопе, с кровеносными сосудами. Во многом такая особенность связана с тем, что вновь образованные сосуды, как уже отмечалось выше, практически лишены просвета, и соприкасающиеся поверхности контактирующих клеток образовывали узкую межклеточную щель, характерную для простого контакта (Рис. 3). Поэтому многие из окружающих пролиферирующие микрососуды были большого размера и соответствовали гигантским клеткам на светомикроскопических препаратах.
Морфология эндотелиальных клеток отличалась выраженным полиморфизмом. Размеры, форма и степень осмиофилии цитоплазмы значительно варьировали. Ядра эндотелиоцитов также отличались разнообразием форм, наиболее часто встречались овальные ядра (рис. 3, 4, 8). Отдельные клетки имели неправильную форму ядер и отличались глубокими инвагинациями ядерной оболочки (Рис. 5).
Встречались многоядерные эндотелиоциты с ядрами разнообразной формы и величины (рис. 6), а также эндотелиальные клетки с сегментированными ядрами, разделенными узкими перемычками.
Значительная вариабельность была отмечена со стороны ядерного хроматина: в отдельных клетках он был гомогенно диспергированный, в других находился в виде крупных глыбок обычно вблизи кариолеммы, изредка встречались крупные ядрышки.
Иммуногистохимическая характеристика опухолей астроцитарного ряда
В данной части работы мы основное внимание уделяли исследованию опухолей с выраженной пролиферацией кровеносных сосудов, т.е. анапластическим астроцитомам и глиобластомам с пролиферацией сосудов, а также опухолям, с которыми приходится проводить дифференциальную диагностику.
Анапластическая астроцитома характеризуется неоднородностью гистологической картины, в опухолевой ткани встречаются участки с выраженными признаками малигнизации и участки с типично доброкачественными формами астроцитом. Малигнизированные участки характеризуются полиморфизмом ядер, более плотным по сравнению с соседними участками расположением клеток (Рис.38), наличием частых митозов. В анапластических астроцитомах обнаруживаются пролиферирующие кровеносные сосуды, а также участки некроза различной величины. Несмотря на то, что в классификациях опухолей головного мозга нет подразделения анапластических астроцитом на опухоли с гемистоцитическим компонентом и пилоцитарным компонентом, мы условно выделяли такие формы по преобладанию в первом случае крупных астроцитов с обильной эозинофильной цитоплазмой и одним и значительно реже двумя эксцентрично расположенными ядрами. Во втором случае преобладали веретенообразные клетки с длинными извитыми отростками, а также клетки звездчатой формы.
Экспрессия на ГФКБ в большинстве анапластических астроцитом была положительной. Яркая реакция наблюдалась вблизи кровеносных сосудов, при этом «астроцитарные ножки» полностью окружали кровеносные сосуды (Рис.38, 39).
«Гемистоцитические» анапластические астроцитомы обладали более высокой степенью экспрессии на ГФКБ. Клетки с более выраженными признаками атипизма находились вблизи пролиферирующих кровеносных сосудов, где отмечалась более высокая степень реакции на ГФКБ.
Глиобластома - это высокозлокачественная нейроэктодермальная опухоль, гистогенез которого без иммуногистохомического исследования невозможно бывает определить из-за сильной дезорганизации ткани. Она встречается при многих гистологических типах опухолей, преимущественно в мелкоклеточном и полиморфно-клеточном вариантах. Обнаруживается во всех отделах головного мозга. Зачастую трудно отличить от анапластической астроцитомы. Однако прогноз более неблагоприятный (глиобластому относят к IV степени злокачественности, анапластическую астроцитому к III степени злокачественности). Как уже отмечалось, выделяют два вида глиобластом - мелкоклеточную глиобластому (глиобластому с саркоматозным компонентом, глиосаркому) и мультиформную (гигантоклеточную) глиобластому.
Мелкоклеточная глиобластома представлена множеством мелких округлой или веретенообразной формы, плотно лежащих клеток с гиперхромным ядром, большим количеством митозов, в том числе патологических. Характерным являются "псевдополисады" - очажки коагуляционного некроза, окруженные валом радиально расположенных опухолевых клеток (Рис.40), а также пролиферация эндотелиальных и адвентициальных клеток с формированием сосудистых клубочков.
Мультиформная опухоль состоит из различных участков: в одних наблюдаются полиморфные клетки, среди них одно- или многоядерные гигантские клетки, а также встречаются маленькие астроцитарные, олигодендроглиальные или эпендимальные ареолы. Очень часты атипические митозы. Изменения в сосудах представлены большим количеством новообразованных сосудистых петель и клубочков не только в самой опухоли, но и в зоне инфильтративного роста. Глиобластомы также характеризуются выраженными вторичными изменениями в опухолевой ткани - крупные зоны кровоизлияний сочетались с очагами некрозов.
Диагностика глиобластомы остается сложной задачей: из-за выраженного клеточного полиморфизма приходится дифференцировать с метастазами карцином, а также с анапластической астроцитомой.
Сосудистая пролиферация в опухоли заставляет дифференцировать глиобластому с ангиобластомой. Реакция на глиальный фибриллярный кислый белок.
Степень иммунореактивности и число ГКФБ иммунопозитивных клеток глиобластом и анапластических астроцитом значительно колебались от опухоли к опухоли, при этом были выявлены противоречивые данные: чаще при нарастании анаплазии число ГФКБ - позитивных клеток в опухоли уменьшается (—70-80%), реже наблюдается повышение реакции (-20-30%). Но в то же время выявлена интересная закономерность - вблизи пролиферирующих микрососудов и очагов некроза количество иммунопозитивных клеток и степень реакции возрастает.
Нередко в мультиформных глиобластомах встречались участки представленные пролифератами из новообразованных кровеносных сосудов, которые были иммунонегативны на ГФКБ (Рис.41). На этой же микрофотографии отчетливо видны отростки астроцитов практически полностью окружающие «сосудистые клубки». Вокруг находились иммунопозитивные гигантские клетки и астроциты нормальных размеров. Часть гигантских клеток не давали положительной реакции на ГФКБ, однако рядом с ними, нередко в прямом контакте находились иммунопозитивные клетки (Рис. 42).
![Патоморфологические изменения головного мозга при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила (экспериментальное исследование) [Электронный ресурс]](/i/i/4314/192218.png "Патоморфологические изменения головного мозга при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила (экспериментальное исследование) [Электронный ресурс] Белик Татьяна Анатольевна")
![Морфофункциональные изменения головного мозга при патологии щитовидной железы в условиях макро- и микроэлементозов (клинико-нейропсихологическое и экспериментальное исследование) [Электронный ресурс]](/i/i/4290/181440.png "Морфофункциональные изменения головного мозга при патологии щитовидной железы в условиях макро- и микроэлементозов (клинико-нейропсихологическое и экспериментальное исследование) [Электронный ресурс] Павлова Любовь Арнольдовна")
