Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы современные представления о биологических эффектах оксида азота и его роли в развитии патологии желудочно-кишечного тракта 11
1.1. Физиологические и патофизиологические свойства оксида азота 11
1.2. Роль оксида азота в регуляции функций желудочно-кишечного тракта 17
1.3. Оксид азота и заболевания желудочно-кишечного тракта 21
1.4. Влияние антисекреторных препаратов на метаболизм оксида азота 26
Глава 2. Материалы и методы исследования 29
2.1. Общая характеристика обследованных больных 29
2.2. Методика определения нитратов в желудочном соке 40
Глава 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение 47
3.1. Клинические особенности эзофагогастро-дуоденальных заболеваний 47
3.2. Содержание конечных продуктов метаболизма оксида азота в желудочном соке у больных с заболеваниями верхнего отдела пищеварительного тракта 63
3.2.1.Особенности метаболизма оксида азота в желудочном соке у больных с эзофагогастродуоденальными заболеваниями 63
3.2.2. Динамика содержания NO в желудочном соке у больных в зависимости от обсеменённости Helicobacter pylori слизистой оболочки гастродуоденальной зоны 75
3.2.3. Особенности метаболизма оксида азота в желудочном соке у больных с эзофагогастродуоденальными заболеваниями в зависимости от кислотности желудочной секреции 81
3.3. Комплексный анализ влияния схем эрадикационной терапии на активность оксида азота в желудочном соке у больных с гастродуоденальными заболеваниями, ассоциированными с Helicobacter pylori 84
Заключение 101
Выводы 111
Практические рекомендации 112
Список литературы 113
Приложения
- Роль оксида азота в регуляции функций желудочно-кишечного тракта
- Влияние антисекреторных препаратов на метаболизм оксида азота
- Методика определения нитратов в желудочном соке
- Содержание конечных продуктов метаболизма оксида азота в желудочном соке у больных с заболеваниями верхнего отдела пищеварительного тракта
Введение к работе
Актуальность темы исследования. В последние годы и клиницисты, и экспериментаторы уделяют большое внимание роли оксида азота (NO) в патогенезе различных заболеваний, в том числе и желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) [81, 94, 102, 108, 112, 114, 124, 125, 126, 139, 167, 185]. NO, относящийся к новому классу универсальных регуляторов физиологических функций, синтезируется клетками эндотелия с помощью эндотелиальной NO-синтетазы из аминокислоты L-аргинина [38, 53]. Конечными продуктами метаболизма его являются нитраты и нитриты [14]. NO играет важную роль как в физиологических, так и в патологических процессах пищеварительного тракта [22, 187, 193]. Полиморфизм проявлений действия его связан с присутствием в пищеварительной системе различных форм NO-синтетаз. NO относится к медиаторам неспецифической защиты слизистой оболочки желудка [41]. Он регулирует моторику пищеварительного тракта, желудочную секрецию, микроциркуляцию, стимулирует секрецию слизи и в физиологических условиях оказывает цитопротективное действие [116, 120]. N0 является также главным ингибиторным медиатором, определяющим расслабление гладкой мускулатуры пищевода и желудка, тонкой и толстой кишок, сфинктеров Одди и анального [45]. Он связывается с кислородом, образуя пероксинитрит, и принимает участие в формировании воспалительных процессов в желудке, поджелудочной железе и кишечнике [79]. Негативное действие содержания NO начинает проявляться, когда его суммарная концентрация либо резко снижается, либо возрастает, приводя к функциональному и структурному повреждению органа [30].
Несмотря на то, что в последние годы расширены представления о тонких механизмах патогенеза заболеваний системы пищеварения на органном, клеточном и молекулярном уровнях, многие аспекты патогенеза доязвенной и язвенной патологии, в том числе роли в нем N0, остаются недостаточно изученными, хотя наиболее признанной остается кислотно-пептическая теория ульцерогенеза [3]. Имеющиеся в литературе данные о функциональной активности NO у больных с заболеваниями верхнего отдела пищеварительного тракта (гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью - ГЭРБ, хроническим гастритом и язвенной болезнью - ЯБ) базируются преимущественно на результатах исследований конечных продуктов метаболизма (нитратов и нитритов) в сыворотке крови [31, 47, 48, 49, 52, 59]. При этом у больных хроническим атрофическим гастритом (ХАР) установлено трехкратное снижение, а у больных ГЭРБ, ЯБ - достоверное повышение концентрации NO. Между тем очевидна ограниченность получаемой информации о концентрации N0 при исследовании его в крови, поскольку при вышеуказанных заболеваниях подобные сдвиги могут быть обусловлены многими факторами, в частности, наличием сопутствующей патологии других органов и систем организма. Метод определения N0 в крови в связи с простотой исследования и быстрым получением результатов может использоваться только для ориентировочной оценки особенностей метаболизма N0 и напряженности нитро-ксиадренергической системы.
В этой связи представляет значительный клинический интерес изучение уровня NO непосредственно в желудочном соке при заболеваниях верхнего отдела пищеварительного тракта (в том числе хеликобактер-ассоциированных заболеваний), возможности его определения в качестве маркёра для оценки выраженности заболеваний пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки и эффективности проводимой терапии.
Работа выполнена по плану НИР ГОУ ВПО «ДГМА МЗ СР РФ». Номер госрегистрации темы диссертации 0120.0810701.
Цель исследования: изучение роли NO по уровню конечных продуктов его метаболизма — нитратов и нитритов в желудочном соке при заболевани- ях верхнего отдела пищеварительного тракта и динамики его активности при различных вариантах медикаментозной терапии. Задачи исследования:
Определить содержание метаболитов NO (нитратов и нитритов) в желудочном соке и провести его сравнительный анализ у больных ГЭРБ, хроническим гастритом, ЯБ двенадцатиперстной кишки до и в конце курсов лечения.
Изучить связь между уровнем метаболитов NO (нитратов и нитритов) в желудочном соке и секреторной функцией желудка у больных хроническим гастритом, ЯБ двенадцатиперстной кишки в период обострения.
Исследовать связь между выраженностью воспалительного процесса в слизистой оболочке желудка у больных хроническим неатрофическим гастритом (ХНГ) и уровнем NO в желудочном соке.
Оценить связь между фазой ЯБ двенадцатиперстной кишки и уровнем N0 в желудочном соке.
Выявить связь между концентрацией N0 в желудочном соке и степенью обсеменённости Helicobacter pylori (HP) у больных с заболеваниями верхнего отдела пищеварительного тракта.
Изучить сравнительную эффективность различных вариантов соче-танной медикаментозной терапии в зависимости от концентрации NO в желудочном соке у больных с гастродуоденальной HP-ассоциированной патологией.
Научная новизна исследования
Впервые в клинической практике проведена сравнительная оценка диагностической информативности исследования NO в желудочном соке при различных заболеваниях верхнего отдела пищеварительного тракта в зависимости от присутствия или отсутствия HP.
Установлена высокая активность продуктов метаболизма NO в желудочном соке у больных ГЭРБ, ХНГ и ЯБ двенадцатиперстной кишки; у больных ХАГ выявлено снижение содержания NO.
Отмечена роль NO в формировании моторных нарушений верхних отделов пищеварительного тракта, поддержании воспалительной реакции и деструкции в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки у больных ХНГ и ЯБ двенадцатиперстной кишки.
Установлено, что хеликобактерная инфекция стимулирует образование N0 в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки, что способствует развитию и течению воспалительного и деструктивного процессов в слизистой оболочке гастродуоденальной зоны.
Выявлено наличие положительной корреляционной связи между уровнем N0 в желудочном соке и объёмом желудочной секреции у больных с заболеваниями гастродуоденальной зоны.
Из стандартных схем тройной эрадикационной терапии оптимальной является схема, включающая ингибитор протонной помпы (омепразол) в сочетании с двумя антибактериальными препаратами (кларитромицин-амоксициллин). Такое сочетание препаратов более эффективно при лечении ХНГ и ЯБ двенадцатиперстной кишки, способствует нормализации содержания N0 в желудочном соке вследствие эрадикации HP.
Практическая значимость результатов исследования
Практически важным является определение концентрации NO в желудочном соке у пациентов с эзофагогастродуоденальной патологией, что даёт дополнительную информацию о роли N0 в развитии воспалительного и деструктивного процессов в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки.
Результаты проведённых исследований свидетельствуют об изменении содержания N0 в желудочном соке при заболеваниях верхнего отдела пище- варительного тракта в зависимости от инфицированности или отсутствия HP, в связи, с чем исследование концентрации N0 в желудочном соке в динамике в комплексе с другими клинико-эндоскопическими и морфологическими методами является, несомненно, информативным в оценке эффективности эра-дикационной терапии.
Сочетанное применение тройной эрадикационной терапии (омепразол-кларитромицин-амоксициллин) при лечении ХНГ и ЯБ двенадцатиперстной кишки является оптимальным из существующих методов тройного медикаментозного лечения, так как эрадикация HP в пилородуоденальной зоне и нормализация содержания N0 в желудочном соке благоприятствуют стабилизации ремиссии.
Личное участие автора в получении результатов исследования
Обследование больных, в том числе определение метаболитов NO в желудочном соке, подготовка индивидуальных карт обследования пациентов, обработка медицинской документации, анализ полученных результатов и их статистическая обработка проводились лично автором.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Высокая активность продуктов метаболизма N0 в желудочном соке является одним из основных факторов формирования моторных нарушений верхних отделов пищеварительного тракта, развития и течения воспалительного и язвенного процессов в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки.
2.Снижение уровня N0 в желудочном соке является характерным для атрофии слизистой оболочки желудка.
3. Роль инфекции HP в развитии воспаления и язвообразования в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки реализуется, помимо других механизмов, через активацию продуктов метаболизма NO в желудочном соке.
4. Сочетанное применение тройной эрадикационной терапии (омепразол-кларитромицин-амоксициллин) при лечении ХНГ и ЯБ двенадцатиперстной кишки способствует нормализации содержания NO в желудочном соке вследствие эрадикации HP.
Внедрение результатов работы в клиническую практику и учебный процесс. Методика определения N0 по уровню конечных продуктов его метаболизма (нитратов и нитритов) в желудочном соке при заболеваниях эзо-фагогастродуоденальной зоны (ГЭРБ, хроническом гастрите и ЯБ двенадцатиперстной кишки) внедрены в практику клинической лаборатории Республиканской клинической больницы (РКБ) МЗ Республики Дагестан (РД). Результаты работы используются в лечебной работе в отделении гастроэнтерологии РКБ и учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий со студентами лечебного факультета на кафедре госпитальной терапии №3 Дагестанской государственной медицинской академии (ДГМА).
Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Центральной проблемной комиссии ГОУ ВПО «ДГМА МЗ СР РФ» (Махачкала, 2007), 59-й конференции молодых ученых и студентов ДГМА (Махачкала, 2008), съезде терапевтов Юга России «Врач XXI века: сегодня и завтра» (Ростов-на-Дону, 2009), межкафедральной научной конференции ГОУ ВПО «ДГМА МЗ СР РФ» (2009).
Публикации. По теме диссертационного исследования опубликованы 7 печатных работ, в том числе 1 статья напечатана в журнале, рекомендованном ВАК МОН РФ: «Клиническая Медицина».-2009.-№7.- С.50-52.
Объём и структура работы. Диссертация изложена на 134 страницах, состоит из введения, трёх глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 195 источников, в том числе отечественных - 63 и иностранных - 132. Работа иллюстрирована 33 таблицами и 15 рисунками.
Роль оксида азота в регуляции функций желудочно-кишечного тракта
Следует отметить, что исследованиям роли NO в регуляции моторики ЖКТ посвящено больше публикаций, чем другим функциям. Однако большинство данных об N0 применительно к пищеварительному тракту получены экспериментальным путем [18].
Во многих работах обсуждается роль NO в регуляции функций ЖКТ (моторики, секреции), участие его в гастропротекции, развитии воспалительных реакций [45, 76, 98, 164, 175, 180, 182]. При этом NO рассматривают как главный ингибиторный медиатор, определяющий расслабление гладкой мускулатуры пищевода и желудка, тонкой и толстой кишок, желчного пузыря, сфинктера печеночно-поджелудочной ампулы (Одди) [45, 76, 98, 164, 175, 180, 182]. NO также является нейротрансмиттером, участвующим в нейрогенном расслаблении внутреннего анального сфинктера человека [148].
Полиморфизм проявлений NO связывают с присутствием в пищеварительной системе различных форм NOS. Наличие и активность NO системы в тканях определяется иммунохимическим методом с помощью антисывороток к NOS, гистохимически по NADPH-диафоразе, а также по продукции цитруллина и МО-сенсорами, точность которых достигает 1 нМ. С помощью этих методов NOS обнаружена во многих тканях ЖКТ. Показано, что источником N0 в ЖКТ служат эпителий, сосудистый эндотелий, гладкие мышцы, тучные клетки, нейтрофилы и макрофаги, энтеральные нейроны [14, 15, 145].
Сведения о распределении NOS в энтеральной нервной системе свидетельствуют о большой распространенности NOS в энтеральных нейронах разных отделов ЖКТ у лабораторных животных и человека, а также о сосуществовании NOS с пептидными и классическими ко-трансмиттерами, в том числе и в вегетативных нервах, снабжающих ЖКТ [45].
Иннервация гладких мышц ЖКТ осуществляется нитрергическими нервами, содержащими NOS [75]. Выявлено содержание NOS в нейронах сплетения Ауэрбаха. Стимуляция этих нейронов сопровождается секрецией NO и релаксацией гладких мышц кишечника.
Нитрергические нейроны выявлены также в адвентиции сосудов ЖКТ, что свидетельствует о нейротрансмиттерной роли N0 в периферических нервах пищеварительного тракта [54, 63, 184]. В эксперименте доказано и со временем подтверждено в исследовании in vitro и у человека наличие нисходящей нитроэргической иннервации ректоанального ингибирующего рефлекса морских свинок [169]. Все это обеспечивает базу для возможного участия NO в механизмах нервной регуляции функций ЖКТ как через энте ральную нервную систему, так и вегетативную иннервацию.
NO, продуцируемый посредством конститутивных NO-синтаз, относят к числу наиболее важных факторов защиты слизистой оболочки желудка, в то время как N0, синтезированный индуцибельной NOS, принимает участие в формировании воспалительных процессов в желудке, поджелудочной железе и кишечнике [59, 79, 116, 120].
С N0 связаны процессы слизеобразования в кишечном эпителии. Выявлено, что слизистая оболочка кишечника отвечает на раздражение желчными кислотами образованием NO за счет активации NOS [120].
Эффекты N0 на клетки кишечного эпителия, местную микроциркуляцию, висцеральную нервную систему и воспалительный процесс предполагают его возможную роль как потенциального медиатора транспорта воды и электролитов в кишечнике. Установлено содержание NO в стенке кишечника крыс и способность ингибиторов NOS, переводить у экспериментальных животных (мышей, крыс, морских свинок, кроликов, собак) абсорбцию жидкости в кишечнике в секрецию. Однако продукция NOS в высоких концентрациях при некоторых патофизиологических условиях также приводит к секреции жидкости в просвет кишки [145].
Рядом авторов показана роль NO в регуляции желудочно-кишечного кровотока, что имеет важное значение в реализации секреторной функции желудка, способности его слизистой противостоять воздействию факторов агрессии и заживлению эрозий и язв [107, 191].
Эндогенное образование NO как вазодилататора очень важно в поддержке микроциркуляции в мезентеральных сосудах и целостности слизистой оболочки кишечника. Ингибирование NOS ведет к значительному снижению мезентерального кровотока. Ишемия кишечника способствует вторичной секреции воды и электролитов за счет глубокого торможения абсорбции воды и натрия на поврежденных ворсинках, в то время как непо врежденные клетки продолжают секрецию натрия, хлора и воды [191].
Регулятором перистальтики ЖКТ является также бактериальная флора кишечника. Компоненты мембран клеток кишечных бактерий — липополи-сахариды — обладают способностью активировать NOS непосредственно в гладкомышечных клетках [34].
В физиологических условиях эндогенный NO — один из медиаторов внешней секреции поджелудочной железы, а присутствующий в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки NO — один из медиаторов дуоденальной секреции бикарбонатов в ответ на кислотное раздражение ее слизистой оболочки [113, 173].
Кроме того, NO относится к медиаторам неспецифической защиты слизистой оболочки желудка (наподобие простагландинов) от химических и механических воздействий, повреждающих слизистую оболочку, например от этилового спирта и желчи, кислотного воздействия, водно-иммерсионного воздействия и др. [73, 105, 158].
В последние годы изучается возможное влияние на продукцию N0 дополнительного введения в пищевой рацион продуктов, богатых L-аргинином (соевые бобы, свинина, индейка, орехи, шоколад, ячмень, зерна злаков, овсяные зерна). Однако эти исследования еще не завершены [28].
Влияние антисекреторных препаратов на метаболизм оксида азота
Проблема лечения кислотозависимых заболеваний остается одной из самых актуальных в современной гастроэнтерологии. При этом нельзя не отметить, что намечающаяся тенденция к стандартизации лечения, направленная на подавление секреторной функции желудка, в значительном проценте случаев не приводит к полному излечению от кислотозависимого заболевания. Предлагаемые различные схемы лечения едины по своей сути: содержат мощный ингибитор желудочной секреции и антихеликобактерные препараты [23, 26, 58, 60].
Как известно, при ишемии слизистой оболочки желудка увеличивается секреция хлористоводородной кислоты, нарушается микроциркуляция вследствие инициации факторов воспаления, которые играют роль в перерастании эрозивных повреждений в хронические язвы. В опытах на изолированном ишемизированном желудке крысы при перфузии растворов омеп-разола и ранитидина продемонстрировано подавление секреции хлористоводородной кислоты и гастрина, улучшение кровотока в зоне ишемии желудка, тем самым предотвращение перехода эрозий в язву желудка [72, 73, 130].
Цитопротективный эффект рабепразола установлен у крыс при повреждении желудка этанолом. Рабепразол вводили крысам интраперитонеально один раз в сутки в течение 3 дней, затем в желудок вводили этанол в количестве 1 мл. Введение рабепразола совмещалось с введением производных L-аргинина или индометацина. Повторное введение рабепразола заметно уменьшало вызванное этанолом повреждение желудка, хотя при однократном введении этого не отмечалось. Ингибитор NOS нитро-Ь-аргинин-метил-эфир (L-NAME) блокировал эффект рабепразола, а субстрат NO его восстанавливал. Следовательно, введение рабепразола оказывает цитопро-тективный эффект при повреждении этанолом посредством релизинга NO. Вполне понятный эффект, если учесть, что улучшение кровообращения — одно из ключевых звеньев в гастропротекции, a NO, как теперь доказано, ключевое звено в механизме вазодилатации, вызванном этанолом.
Ланзопразол и омепразол также проявляют свои цитопротективные влияния через активацию секреции NO. Об этом свидетельствует тот факт, что при применении ингибиторов N0 повышается частота язв у крыс [77, 166].
Современные данные свидетельствуют о том, что известные и широко применяемые в практике ингибиторы хлористоводородной кислоты оказывают свое действие через релизинг NO.
Эрадикационная терапия Н. pylori сопровождается значительным уменьшением активности iNOS и каталазы, что ведет к снижению образования NO и может уменьшать его негативное действие [28].
Подводя краткий итог обзора литературы, следует отметить, что изложенные материалы лишь фрагментарно отражают успехи, достигнутые в области исследования роли N0 в развитии заболеваний ЖКТ. В целом эта область исследований представляет собой новое перспективное и увлекательное направление, в котором можно ожидать немало новых успехов уже в ближайшем будущем, способное обеспечить прогресс в практической медицине.
Несмотря на огромное количество публикаций, посвященных NO, многие вопросы, касающиеся роли его в регуляции гастродуоденальной мото рики и желудочной секреции, а также метаболизма N0 при кислотозависи-мых заболеваниях остаются недостаточно изученными. В частности, в литературе имеются данные, посвященные исследованию конечных продуктов метаболизма (нитратов и нитритов) в сыворотке крови у больных ГЭРБ, хроническим гастритом и ЯБ двенадцатиперстной кишки. Между тем, очевидна ограниченность получаемой информации о состоянии NO при исследовании его в крови, поскольку при вышеуказанных заболеваниях подобные сдвиги могут быть обусловлены наличием, в частности, сопутствующей патологии других органов и систем организма. В свете вышеизложенного представляется перспективным изучение уровня NO, непосредственно, в желудочном соке при заболеваниях эзофагогастродуоденальной зоны. Можно полагать, что такого рода исследования смогут обеспечить идентификацию объективных клинических и функциональных критериев, которые будут иметь значение для совершенствования диагностики, разработки новых лекарственных препаратов и улучшения терапии кислотозависимых заболеваний.
Методика определения нитратов в желудочном соке
Количественное определение концентрации NO затруднено из-за короткого времени жизни этого свободного радикала. Для оценки продукции NO наиболее часто применяется измерение концентрации стабильных метаболитов N0 - нитритов и нитратов в биологических жидкостях. Была модифицирована имеющаяся методика определения концентрации NO в биосредах (в сыворотке крови и моче) [9,20]. Принцип метода. Метод основан на экстракции нитратов из желудочного сока, восстановлении их металлическим кадмием до нитритов на кадмиевой колонке с последующим определением образующихся нитритов по цветной реакции с реактивом Грисса. Приготовление губчатого кадмия; Цинковые гранулы средней величины (100-120 штук) распределяли по дну кристаллизатора диаметром от 25 до 30 см и заливали раствором сернокислого кадмия (37 г сернокислого кадмия растворяли в воде и разбавляли водой до 1000 мл). Через 3-4 часа осадок кадмия отделяли от цинка и помещали в стакан с водой, избегая соприкосновения с воздухом, и дважды промывали водой. Осадок кадмия и 400 мл раствора помещали в гомогенизатор и измельчали 10 секунд. Измельченный кадмий переносили в стакан и отмывали водой от пылевидных частиц. После этого его оставляли на ночь в 0,1 Н растворе НС1, перемешивали несколько раз для удаления всех пузырьков газа из кадмия. Кадмий хранили под слоем воды. Реактивы: а) для осаждения белков: 1) 50% раствор сульфата цинка 2) 17% раствор феррицианида железа При осаждении белков соблюдали необходимое значение рН во избежание получения мутного фильтрата, появляющегося при рН менее 8,5 при пропускании исследуемого раствора через колонку. Образующийся осадок затруднял работу колонки. Поэтому при рН менее 8,5 добавляли 30% раствор NaOH. б) приготовление аммиачного буфера: 50 мл концентрированной соляной кислоты (плотность 1,19 г/см ) + 600 мл дистиллированной воды + 135 мл концентрированного водного аммиака (плотность 0,9 г/см3). После проверки рН (рН 9,6-9,7) объём раствора доводили дистиллированной водой до метки. в) приготовление раствора соляной кислоты 0,1 Н: фиксанал промывали, разбивали бойком и выливали в колбу на 1 л и доводили дистиллированной водой до метки. г) приготовление растворов для проведения цветной реакции: 1)в колбу на 250 мл помещали 0,1 г сульфаниламида 1 200 мл дистиллированной воды + 10 мл концентрированной соляной кислоты. Выдерживали в кипящей водяной бане до полного растворения осадка (хранили 2 недели). 2) раствор М-(1-нафтил)-этилендиаминдигидрохлорида (НЭДа): 0,1 г НЭДа взвешенного с точностью до первого десятичного знака, растворяли в мерной колбе вместимостью 50 мл в дистиллированой воде и доводили объём раствора до метки. Раствор хранили не более 2-х недель. д) растворы кислоты соляной (плотность 1,19 г/см ): 0,1 Ни2Ни раствор (1 + 1) мл. Подготовка кадмиевой колонки к работе Собирали установку согласно рис. 2.2. На дно стеклянной колонки помещали тонкий слой стеклянной ваты, колонку заполняли водой и вносили суспензию кадмия фарфоровой ложкой на высоту 13-5 см. При заполнении ко лонки давали воде периодически стекать, следя, чтобы уровень воды не опускался ниже поверхности кадмия. Поверхность кадмия в колонке должна быть всегда покрыта жидкостью. Регенерирование кадмиевой колонки.
Перед началом работы и после каждого анализа кадмиевую колонку промывали последовательно 25 мл 0,1 Н соляной кислотой, 50 мл дистиллированной воды и 25 мл аммиачного буфера, разбавленного водой в 10 раз. Уровень жидкости всегда должен быть выше слоя кадмия. Проверка восстановительной способности кадмиевой колонки а) Восстановительную способность кадмиевой колонки проверяли каж дый раз перед проведением серии анализов. При закрытом кране в сборник колонки пипеткой вносили 20 мл рабочего раствора азотнокислого калия и 5 мл аммиачного буферного раствора. Устанавливали скорость элюции 3-5 мл/мин и собирали элюат в мерную колбу вместимостью 100 мл. Когда сборник опустеет, стенки его дважды смывали водой порциями по 15 мл и воду также пропускали через слой кадмия. Собирали около 100 мл элюата, доводили объём до метки водой и перемешивали. б) Проводили контрольное определение, повторяя операцию, как указано выше, используя 20 мл воды вместо раствора азотнокислого калия. в) В две мерные колбы вместимостью 50 мл вносили пипеткой в одну 10 мл испытуемого элюата, в другую 10 мл контрольного элюата и далее прово дили определение с реактивом НЭДа, как описано ниже. Если содержание нитрит-иона, найденного по градуировочному графику, менее 0,27 мкг в 1 мл измеряемого раствора (менее 90% расчётного значения), колонку переподготавливали. Для этого из колонки пористый кадмий переносили в стакан, содержащий раствор 2 Н НС1, выдерживали 10 мин, промывали несколько раз водой, заполняли колонку и снова определяли восстановительную способность кадмиевой колонки.
Содержание конечных продуктов метаболизма оксида азота в желудочном соке у больных с заболеваниями верхнего отдела пищеварительного тракта
Таким образом, подводя итог анализированному фрагменту работы, можно отметить: 1) ГЭРБ развивается на фоне значительных воспалительных изменений в слизистой оболочке желудка. В связи с доминированием у пациентов ГЭРБ диффузного хеликобактерного гастрита можно предположить, что инфекция HP, индуцируя иммунное воспаление с развитием пангастрита, обусловливает формирование моторно-эвакуаторных нарушений верхних отделов ЖКТ - изменения антрального отдела инициируют и поддерживают десинхронизацию в работе нижнего пищеводного сфинктера — ведущую причину ГЭРБ. 2) обнаружена более низкая частота выраженных атрофических изменений слизистой оболочки желудка при наличии HP по сравнению с группой больных ХАГ, где инфекция отсутствовала (12,5% против 16,7%). Это свидетельствует о том, что при реализовавшейся атрофии значение HP, как патогена, снижается, а в дальнейший морфогенез атрофии, вероятно, начинают включаться иные механизмы, в частности, иммуноморфологические; 3) у пациентов ХНГ активность воспалительного процесса в слизистой оболочке желудка тесно коррелирует со степенью обсеменения слизистой оболочки HP; 4) частота обострений и продолжительность язвенного анамнеза сопровождаются учащением и повышением степени обсеменения HP в слизистой оболочке гастродуоденальной зоны. Такая особенность течения ЯБ двенадцатиперстной кишки с высокой долей вероятности может указывать на связь с инфицированностью HP. Это служит основанием для включения в схему лечения больных с непрерывно рецидивирующим течением заболевания, а также продолжительностью болезни более 5 лет препаратов антибактериального действия, если нет подтверждения наличия бактерий специальными методами или при отсутствии такой возможности.
Для оценки особенностей метаболизма NO при заболеваниях верхнего отдела пищеварительного тракта обследуемым пациентам проводилось в динамике определение концентрации NO в желудочном соке. Результаты исследования N0 в желудочном соке у больных с заболеваниями эзофагога-стродуоденальной зоны (ГЭРБ, ХАГ, ХНГ и ЯБ двенадцатиперстной кишки) до и после курсов лечения представлены в таблице ЗЛО.
Как видно из представленных в таблице ЗЛО данных, уровень NO в желудочном соке у здоровых лиц составил 3,34+0,17 мг/л. У пациентов с заболеваниями эзофагогастродуоденальной зоны показатели NO в желудочном соке отличаются от таковых у здоровых лиц. Так, у больных ГЭРБ в период обострения выявляется значимое повышение уровня NO в желудочном соке (4,32+0,22 мг/л) (Р 0,05) по сравнению с контрольной группой. После окончания курса лечения показатель NO, хотя и снизился (3,62+0,18 мг/л), но оставался выше, чем у лиц контрольной группы (Р 0,05). Данный факт свидетельствует о влиянии NO на мышечный тонус верхних отделов желудочно-кишечного тракта.
