Содержание к диссертации
Введение
1. Общая характеристика работы 4
1.1. Введение 4
1.2. Актуальность проблемы 5
1.3. Цель исследований 8
1.4. Задачи исследований 9
1.5. Научная новизна 9
1.6. Практическая значимость 10
1.7. Основные положения, выносимые на защиту 11
1.8. Апробация результатов исследований 12
1.9. Публикация 13
1.10. Структура и объём диссертации 13
2. Обзор литературы 14
Глава 1. Лихорадка Западного Нила 14
2.1.1. Возбудитель 14
2.1.2. Ареалы вируса в России и за рубежом 17
2.1.3. Членистоногие переносчики 24
2.1.4. Позвоночные хозяева 27
2.1.5. Патология у человека 31
Глава 2. Другие арбовирусные инфекции 35
2.2.1. Крымская-Конго геморрагическая лихорадка 35
2.2.2. Лихорадка Дхори 43
2.2.3. Лихорадка Синдбис 45
2.2.4. Лихорадка Батаи 48
2.2.5. Вирусы комплекса Калифорния 52
2.3. Заключение по обзору литературы 53
3. Собственные исследования 55
. Глава 1. Материалы и методы 55
3.1.1. Общая характеристика мест сбора полевых материалов 55
3.1.2. Методы сбора и хранения полевого материала 62
3.1.3. Методы изоляции вирусов 66
3.1.4. Методы детекции вирусной ДНК 67
3.1.5. Методы идентификации изолятов 68
3.1.6. Методы серологического обследования людей и сельскохозяйственных животных 69
3.1.7. Методы статистической обработки материалов 69
3.1.8. Объём и общая характеристика полевых материалов 70
Глава 2. Экологические особенности циркуляции арбовирусов в антропогенных биоценозах среднего пояса дельты Волги 77
3.2.1. Изоляция вирусов 77
3.2.2. Заражённость позвоночных животных 81
3.2.3. Заражённость клещей 83
3.2.4. Заражённость комаров 87
3.2.5. Заражаемость сельскохозяйственных животных 90
3.2.6. Заражаемость населения 93
3.2.7. Заключение по Главе 2 111
Глава 3. Экологические особенности циркуляции арбовирусов в природных биоценозах среднего пояса дельты Волги 113
3.3.1. Изоляция вирусов 113
3.3.2. Заражённость птиц 115
3.3.3. Заражённость комаров 117
3.3.4. Заключение по Главе 3 123
3.4. Глава 4. Экологические особенности циркуляции арбовирусов в
нижнем поясе дельты Волги 124
3.4.1. Изоляция вирусов 124
3.4.2. Заражённость птиц 124
3.4.3. Заражённость комаров 128
3.4.4. Заключение по Главе 4 130
3.5. Обсуждение 131
3.6. Выводы 153
4. Список литературы
- Основные положения, выносимые на защиту
- Крымская-Конго геморрагическая лихорадка
- Методы идентификации изолятов
- Заражённость комаров
Введение к работе
Природные циклы циркуляции вирусов, возбудителей природно-очаговых инфекций, сложны. Порой бывает трудно выделить основной цикл, на который накладываются дополнительные. Уже имеющиеся данные показывают, что изучение популяционных взаимоотношений вирусов, членистоногих переносчиков и позвоночных хозяев представляет сложнейшую и, вместе с тем, самостоятельную проблему, от решения которой зависят прогнозирование и меры предупреждения заболеваемости. Это составляет существо экологии возбудителей. А поскольку эволюция является историей экологии видов то, в конечном счёте, такого рода исследования направлены на изучение эволюции возбудителей. Причём, важно изучать взаимосвязи природных и антропогенных очагов. Обычно в системе вирусы - членистоногие переносчики - позвоночные хозяева устанавливается состояние взаимной толерантности. Это характерно для устоявшихся очагов. При попадании вирусов в новую экосистему или нарушение равновесия за счёт абиотических факторов происходят, казалось бы, непредсказуемые эпизоотические (эпидемические) последствия. Часто это бывает связано с антропогенными изменениями природных экосистем. Представляло интерес проследить эти процессы на примере среднего и нижнего поясов дельты Волги, расположенных в пределах Прикаспийско-Туранской физико-географической страны, на территории которой были известны 5 арбовирусных инфекций, а перед началом нашей работы (1999 г. и в последующие годы) произошло существенное обострение эпидемической ситуации на юге России по лихорадке Западного Нила (ЛЗН) и Крымской Конго геморрагической лихорадке (ККГЛ) ().
Основные положения, выносимые на защиту
1. В результате исследований выявлен эпицентр эндемичной территории, расположенный в среднем поясе дельты Волги, где сформировались стабильные и активные природные и антропогенные очаги вируса ЗН с одновременной циркуляцией патогенных для человека вирусов Синдбис, Батаи, Крымской-Конго геморрагической лихорадки, Дхори, что определяет необходимость использования адекватных диагностических тест-систем.
2. В антропогенных биоценозах среднего пояса дельты Волги уровень циркуляции вируса ЗН и риск заражения населения наивысший, эпидемически значимыми переносчиками являются орнитофильные комары {Diptera Culucidae), Culex pipiens L., Anopheles hyrcanus Pall, Coquillettidia richiardii Fie, стойловые комары Anopheles messeae Pall, а все фазы метаморфоза клещей Hyalomma marginatum, Koch, 1844 (Acari, Ixodidae). имеют существенное значение в поддержании вирусных популяций ЗН, ККГЛ, Дхори, особенно в межэпидемическом периоде; среди позвоночных важное значение в циркуляции арбовирусов принадлежит врановым птицам, зайцам, домашним животным. Результаты рекомендуется использовать для построения дифференцированной системы профилактических мероприятий.
3. В природных биоценозах среднего и нижнего поясов дельты Волги циркуляция вируса ЗН поддерживается орнитофильными комарами An. hyrcanus и Coq. richiardii, а среди птиц - бакланами (Pelicaniformes, Phalacrocoracidae, Phalacrocorax — Ph. car bo), цаплями (Ciconiiformes, Ardeidae — A. purpurea, A. cinerea, Egretta — E. alba, Nicticorax — N. nicticorax), лысухами (Gruiformes, Rallidae, Fulica — F. atra), крачками (Charadriiformes, Laridae, Sterna —S. hirundo, S. sandvicensis, S.albifrons). Бакланов рекомендуется использовать в качестве индикаторных видов для определения уровня циркуляции вируса ЗН в природных биоценозах.
4. Домашние животные (прежде всего лошади, крупный рогатый скот) могут выступать в роли простых и дешевых индикаторов активности циркуляции вируса ЗН и других арбовирусов на различных территориях и в разные годы. изолированных в антропогенных и природных биоценозах из различных источников штаммов вируса ЗН (5), Синдбис (4), Батаи (2), ККГЛ (3), Дхори (1) депонированы в Государственную коллекцию вирусов и используются в научных и прикладных исследованиях.
1. В среднем и нижнем поясах дельты Волги выявлены сочетанные природные и антропогенные очаги вирусов, передающихся комарами - ЗН (Flaviviridae, Flavivirus, комплекс японского энцефалита), Синдбис (Togaviridae, Alfavirus, комплекс Западного энцефалита лошадей), Батаи (Bunyaviridae, Orthobunyavirus, комплекс Буньямвера)) и клещами -ККГЛ (Bunyaviridae, Nairovirus, комплекс ККГЛ), Дхори (Orthomyxoviridae, Thogotovirus, комплекс Тогото).
2. Эпицентр ЛЗН расположен в среднем поясе дельты Волги, где по данным 6-летнего изучения, выявлены наивысшие показатели зараженности комаров, клещей, птиц и заражаемости домашних животных и населения.
3. Активность циркуляции вируса ЗН в антропогенных биоценозах существенно выше по сравнению с природными.
4. Основное эпизоотическое и эпидемическое значение в антропогенных биоценозах имеют орнитофильные комары Culexpipiens, Anopheles hyrcanas, Coquillettidia richiardii и стойловые комары Anopheles messeae, клещи Hyalomma marginatum, в природных биоценозах - орнитофильные комары Anopheles hyrcanus и Coquillettidia richiardii.
5. Основным резервуаром вируса ЗН среди позвоночных в антропогенных биоценозах являются врановые птицы, голуби, зайцы и домашние животные, в природных биоценозах - бакланы, цапли, лысухи, крачки.
6. Не выявлено принципиальной разницы в циркуляции вируса ЗН в западном, центральном и восточном секторах среднего и нижнего поясов дельты Волги, представляющих единую экосистему.
7. Абсолютное большинство ОТ-ПЦР положительных проб от птиц, комаров, клещей изолированных из природных биоценозов относится к первому генотипу вируса ЗН, в единичных случаях - ко второму и четвертому генотипам.
Результаты исследования доложены и обсуждены на: ».. 1. XII Международном Конгрессе по вирусологии (Париж, 27 июля-1 августа 2002). 2. Международном симпозиуме «Информационные технологии в медицине и здравоохранении» (Карловы Вары, Чехия, 22-29 мая 2004г.). 3. Международной научной конференции «Современные проблемы эпизоотологии» (Краснообск, 30 июня 2004г.) 4. III Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 20-24 января 2004г.) 5. VI Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ «Санитарная охрана территорий государств СНГ: проблемы биологической безопасности и противодействия биотерроризму в современных условиях» (Волгоград, 13-14 сентября 2005г.) 6. XII Международной орнитологической конференции Северной Евразии (Ставрополь, 31 января-5 февраля 2006г.)
Крымская-Конго геморрагическая лихорадка
Возбудитель. Вирус ККГЛ входит в одноимённый комплекс рода Nairovirus семейства Bunyaviridae: название род получил от прототипного вируса болезни овец Найроби (Nairobi sheep disease). L сегмент РНК и кодируемый им L белок, у наировирусов существенно больше, чем у представителей других четырёх родов (Orthobunyavirus, Hantavirus, Phlebovirus, Tospovirus) семейства (159). Эндемичным вирусом рода Nairovirus, распространённым в России и экологически связанным с облигатными паразитами чистиковых птиц клещами Ixodes uriae, является вирус Сахалин, значение которого для, патологии человека не выявлено (39, 40). Вирусная этиология ККГЛ впервые установлена в 1945г. в Крыму экспедицией под руководством М.П. Чумакова, а в 1963 г. вирус впервые изолирован от больных людей в Узбекистане (штамм Ходжа) и в Астраханской области от личинок и нимф клещей Hyalomma marginatum (табл. 2) (20, 23, 57, 63). Однако первые, дошедшие до нас описания болезни («хуни-бини», «хонгирифта»), приведены в XII веке в трудах таджикского врача Абу-Ибрахим- Джурджаши (3). Современная история открытия ККГЛ относится к июню 1944 г., когда в северо-западной степной части Крыма стали возникать случаи тяжёлого заболевания с геморрагическим синдромом, названного «острый инфекционный капилляротоксикоз» (3). В экспедиции под руководством М.П. Чумакова было установлено, что инфекционный агент передаётся через укусы клещей Hyalomma pi umbeum (marginatum) и заболевание получило название Крымская геморрагическая лихорадка. В 1967г. было установлено тождество вируса КГЛ с вирусом Конго, выделенным в 1966 г. в Африке, после чего заболевание получило название Крымская-Конго геморрагическая лихорадка (ККГЛ) (3,П7, 159).
Ареал. Штаммы вируса многократно изолировали от больных людей в Пакистане, Ираке, Иране, Китае, Греции, Болгарии, Румынии, Югославии, Объединённых Арабских Эмиратах, в Сенегале, Нигерии, ЮАР, Кении, Уганде, Танзании, Эфиопии, Египте, Верхней Вольте, Мавритании, Зимбабве (3, 117), Турции (40, 117). По серологическим данным вирус активен в Южной Франции, Венгрии, Индии (40). Представление об известном и прогнозируемом ареале ККГЛ в мире даёт рис.4 (3). На территории СССР вспышки и спорадическая заболеваемость ККГЛ выявляли на Украине (Крым, Ворошиловградская область) в Молдавии, Туркменистане, Узбекистане, Таджикистане, Казахстане, Азербайджане, Ростовской области, Краснодарском и Ставропольском краях, республиках Калмыкия и Дагестан (3, 40). Членистоногие переносчики. Вирус изолирован, по крайней мере, от 27 видов клещей, главным образом, иксодовых (Acari: Ixodidae, Muri, 1878), относящихся к подсемейству Amblyomminae (табл. 2, 3) (40). Однако их роль в поддержании вирусной популяции неравнозначна. Исходя из данных рис. 4, табл. 3 и табл. 4 очевидна основная роль в сохранении вируса и его трансмиссии клещей рода Нуаіотта, в условиях южной России — H.marginatiim, в Средней Азии H.an.anatolicum и H.detritum, в Казахстане H.asiaticum. В Астраханской области в 1968г. заражённость Нmarginatum была у имаго - 1,33%, нимф - 0,2% (3). Наличие трансфазовой и трансовариальной по ходу метаморфоза передачи вируса обеспечивает сохранение вирусной популяции в межэпизоотический период, а три позвоночных хозяина, прокармливающих личинок (птицы наземного комплекса, главным образом врановые, мышевидные грызуны, зайцы), нимф (как у личинок), имаго (крупные млекопитающие, главным образом КРС, овцы, верблюды) обеспечивают многообразие популяционных связей с позвоночными (3,13, 15, 31, 32, 40, 49, 50, 57). В Нигерии вирус изолирован от мокрецов Culicoides in sp. (40). Ареал H.marginatum ограничен изотермой сумм эффективных температур 10 = 3000. Это, в свою очередь, ограничивает в северном направлении и ареал ККГЛ, что в южной России примерно совпадает с границей ландшафтного пояса, сухих степей (3).
Позвоночные хозяева. Из диких позвоночных вирус изолирован от ежей Atelerix spiculus в Нигерии. В ЮАР в природных очагах в циркуляцию вируса активно включаются крупные herbivores и зайцы (3, 117). Существенную роль в экологии вируса по-видимому играют зайцы и, вероятно, некоторые виды мышевидных грызунов (15, 32, 40, 49, 57). Птицы, вероятно, играют косвенную роль в экологии вируса, являясь прокормителями предимагинальных фаз развития клещей (13, 15). По материалам работы в предгорьях Чаткальского хребта в Киргизии нимфы и личинки H.marginatum доминировали в сборах клещей с птиц. Особенно высокая заклещёванность отмечена среди сизоворонок Coracias garrulus, хохлатых жаворонков Galerida cristata, полевых Воробьёв Passer montanus и сорок Pica pica (33, 34) В Астраханской области отмечена активная роль грачей в прокормлении предимагинальных фаз H.marginatum (13, 15). Птицы могут принимать участие в разносе заражённых вирусами клещей по территории во время кормовых кочёвок и сезонных миграций (39). О заражаемости вирусом домашних животных и людей даёт представление таблица 4 по данным обследования 11 676 людей, 40 711 домашних животных и 1 009 птиц (38). Очевидно, что домашние животные являются основным резервуаром вируса среди позвоночных. При экспериментальном заражении овец виремия обнаружена в течении 5-8 суток при титрах 2,6-3,7 lgLD5o/o,02 мл Это достаточно для заражения клещей. Виремия до 10 дней отмечена также у малого суслика, ушастого ежа и лесной мыши. Инфицирование клещей в эксперименте выявлено только у нимф. А поскольку зайцы, наряду с врановыми птицами, являются основными прокормителями нимфальной стадии метаморфоза нимфам H.marginatum и зайцам отводится основная роль в поддержании вирусной популяции в природе в условиях Европейской части России (3).
Методы идентификации изолятов
Идентификацию выделенных штаммов проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА) с набором иммуноглобулинов к арбовирусам, наличие которых в Астраханской области было показано: ЗН {Flaviviridae, Flavivirus, комплекс японского энцефалита), Синдбис {Togaviridae, Alfavirus, комплекс Западного энцефалита лошадей, Тягиня {Bunyaviridae, Orthobunyavirus, комплекс Калифорния), Батаи {Bunyaviridae, Orthobunyavirus, комплекс Буньямвера), Крымская-Конго геморрагическая лихорадка {Bunyaviridae, Nairovirus, комплекс ККГЛ), Бханджа {Bunyaviridae, неклассифицированный), Дхори (Orthomyxoviridae, Thogotovirus, комплекс Тогото) (36).
Для постановки использовали следующую схему внесения реагентов: специфические иммуноглобулины, затем антигены (20% сахарозо-ацетоновые из мозга новорожденных белых мышей), специфические иммуноглобулины, меченные пероксидазой хрена (конъюгаты). Опыты сопровождались необходимым контролем. Работу проводила в группе И.В.Галкиной (лаборатория экологии) (36,43).
Сыворотки людей обследовали иммуно-ферментным методом для выявления Ig М и Ig G антител к вирусам ЛЗН, ККГЛ, Дхори; в реакциях подавления гемагглютинации (РПГА) для выявления антител к вирусу Синдбис, микрометодом в клеточных линиях СПЭВ и Vero-Еб в реакции нейтрализации (РН) к вирусам ЗН, Батаи, Дхори, ККГЛ. Сыворотки животных обследовали в РПГА (скрининг) и в РН (подтверждающий тест). Работа проводилась в группах И.В.Галкиной, Т.М.Москвиной, В.А.Аристовой (лаборатория экологии) (43).
В работе использованы методы математической статистики (29,67). Расчет инфекционных титров вирусов проводился по методу Рида и Менча. Для оценки рассеяния возможных значений величины от ее среднего значения использовали среднеквадратичное отклонение, вычисляемое по формуле: где п - количество измерений, XI - значение в опыте, Хер — среднеарифметическое значение в п опытах. Для определения достоверности различий вычисляли величину Т - критерий вероятности разницы средних (критерий Стьюдента) и К - число степеней свободы варьирования. Вычисления проводили по следующим формулам: где пі и П2 - число вариант в опытной и контрольной группах; хі — средняя арифметическая в опыте; Хг- средняя арифметическая в контроле.
Различия считали минимально достоверными прир 0,05. Величину/? определяли по таблице Стьюдента.
Работу по сбору полевых материалов проводили в основном в июле-августе с 2001 по 2006 гг. включительно в природных и антропогенных биоценозах среднего и нижнего поясов дельты Волги. Число собранных и обследованных членистоногих переносчиков указано в табл. 8. Из собранных 231,3 тыс. комаров в репрезентативных количествах по поясам дельты и типу биоценозов представлены орнитофильный Cx.pipiens L. (30%) и стойловый An. messeae Fall (25%) в антропогенных и орнитофильные An. hyrcanus (35%) и Coq. richiardii Fie. (54%) в природных и антропогенных (14% и 21% соответственно) биоценозах. Относительное обилие Coq. richiardii в антропогенных биоценозах наблюдало лишь в поселке Бирючья Коса Лиманского района, находящегося на границе с природными биоценозами среднего и нижнего поясов дельты. Орнитофильных комаров Сх. modestus удалось отловить в заметном количестве лишь в среднем поясе дельты. Комары Ae.caspius и Ae.vexans с весеннее-летним периодом активности в разгар эпизоотического-эпидемического сезона (вторая половина июля-август) практического значения не имеют. Клещей H.marginatum за весь период было собрано 7,1 тыс. экземпляров (личинки, нимфы, имаго).
Материал по сборам птиц в 2001-2006гг. представлен в табл.9. Из 1563 птиц 27,5% относятся к природным биоценозам водного, 60% околоводного комплексов и 13% к наземному комплексу антропогенных биоценозов. Количество птиц, добытых в среднем и нижнем поясах дельты по годам, представляется репрезентативным по лысухам (Fulica atra), бакланам (Phalacrocorax carbo), цаплям (Nicticorax nicticorax, Ardea cinerea, A.purpurea, Egretta alba), крачкам (Sterna albifrons, S. hi rundo и др.), врановым (грачам Corvus frugilegus, воронам C.corone, сорокам Pica pica). Из позвоночных в среднем поясе дельты добыты также 20 зайцев-русаков Lepus europaeus. В 2005 году у 128 птиц из природных антропогенных биоценозов среднего и нижнего поясов дельты взята кровь для серологического обследования.
Количество сывороток крови сельскохозяйственных животных (КРС, овец, верблюдов, лошадей, свиней) собранных в 2001-2006 гг. представлено в табл.10. Обследование животных проводили в антропогенных биоценозах среднего пояса дельты Волги. Донорскую кровь собирали во второй половине августа. Для выявления заражаемости населения в те же сроки (август) проводили серологическое обследование доноров, проживающих в среднем поясе дельты: на территории Лиманского, Икрянинского (западный сектор), Камызякского (центральный сектор) и Володарского (восточный сектор) районов Астраханской области. В 2001-2006г.г. был взят биологический материал (кровь) у 970 человек, соответственно по секторам у 221, 201 и 348 человек (табл.11)
Заражённость комаров
Всего изолировано 17 штаммов вирусов ЗН (2), Синдбис (6) и неклассифицированного вируса Хурдун (9) (табл. 21).
Данные по вирусу Хундун, который не рассматривается в диссертации, приводим в качестве примера сложностей, возникающих при обследовании полевых материалов. Идентификация каждого выделенного штамма проходит комплексные исследования.
Все штаммы вируса Хурдун изолированы только от лысух Fulica a tra, за одним исключением - от малого баклана Phalacrocorax pygmaeus. Вирус назван по имени урочища Хурдун (фото 2) в Икрянинском районе среднего пояса дельты Волги, где 03 августа 2001г. был собран полевой материал, из которого (пул внутренних органов — мозг и селезёнка) выделен прототипный штамм Ast-01-5A аналогичные штаммы выделяли ежегодно методом биопроб на клеточной линии Vero-б. При обследовании 348 лысух установлена их высокая заражённость (от 2,3% до 7,8%, в среднем 6,3%). Каких-либо клинических симптомов заболевания у лысух не наблюдалось. Изолированный агент вызывал смертельное заболевание с явлениями энцефалита у 2-3-дневных белых мышей. Инкубационный период при первичном выделении достигал 5-12 дней, снижаясь при последующих пассажах до 3-6 дней. Титры вируса в мозговой ткани достигали 109lgLd5o/ooiMfl. Установлено размножение вируса с цитопатогенным действием в клеточной линии Vero-Еб, в которой на 7-8 сутки титры достигают 10"10 lg ЦПД50/іооМКл. Гемагглютинирующая активность не установлена. Разработана иммуно-ферментная (ИФА) системадля индикации антигена вируса, что использовано в варианте, «прямой сендвич» в исследованиях для его идентификации (Т.М. Москвина). Отрицательные результаты получены с вирусами, изолированными ранее в регионе Северного Прикаспия: ЗН, Синдбис, Батаи, ККГЛ, Дхори, Тягиня, Бханджа. Вирус проходит через бактериальные фильтры с размером менее 220 нм. При обработке вируссодержащей суспензии 0,2% дезоксихолатом натрия титр вирусов в культуре клеток Vero-Еб снизился до титра 3.0 lg ЦПД50 при контрольном,титре 7,0 lg ЦПД50, а при титровании на новорождённых белых мышах до 3.0 IgLDso при контрольном титровании — 8,0 lgLD5o. Эти результаты свидетельствуют о наличии у вируса оболочки. Обработка БУДР-ом (5-бром-21-дезоксиуридин) не снижает титров, тогда как у ДНК-содержашего ортопоксвируса Мурман (комплекс оспы коров) произошло снижение титров на 2 lgI-ШД so- Это даёт основание отнести вирус Хурдун к РНК-содержащим. Учитывая отрицательные результаты обследования кровососущих членистоногих (комаров, клещей) вероятно можно исключить трансмиссивную передачу вируса. Возможно, инфицирование происходит фекально-оральным путём через воду или зоопланктон. В литературе отсутствуют данные об изоляции подобных вирусов от лысух, как на территории России и стран СНГ (333, 35), так и в мире (108). На основании полученных результатов прототипный штамм Ast-01-05, оболочечного, РНК-содержащего, размером менее 220 нм неклассифицированного вируса Хурдун, широко распространённого среди лысух Fulica atra в среднем и нижнем поясах дельты Волги, депонирован в Государственную коллекцию вирусов (ГКВ № 992). Запланированное изучение генома позволит определить его таксономическое положение. В данной работе вирус далее не рассматривается.
Два штамма вируса ЗН выделены в 2001-2002г.г. от больших бакланов Ph.carbo. Все 6 штаммов вируса Синдбис изолированы в 2003г. от орнитофильных комаров An.hyrcanus (1 штамм), Coq.richiardii (5 штаммов). Один штамм вируса ЗН, три штамма вируса Синдбис депонированы в Государственную коллекцию вирусов (табл. 21, 30).
Различные виды птиц с разной степенью активности включаются в циркуляцию вируса ЗН (табл. 22, рис. 10). Среди 49 экземпляров куликов, караваек, уток и больших поганок положительные результаты вовсе не выявлены, а у крачек, лысух и цапель заражённость найдена в 4,4% ± 1,0. Резко выделяются результаты обследования больших бакланов Ph.carbo (21,2% ±4,0). У птиц этого вида методом биопроб удалось выделить 2 штамма вируса, что составляет 1,9% ± 1,3 от 104 обследованных, бакланов. Таким образом, число положительных результатов при обследовании биопробами на порядок меньше, в сравнении с данными от ОТ-ПЦР. Эти же данные свидетельствуют о высоком уровне виремии у бакланов, достаточном для изоляции вируса. Результаты исследования не дают оснований, в виду недостаточно репрезентативного материала, отрицать роль в циркуляции вируса поганок, уток, куликов и караваек, но их роль, по крайней мере, существенно меньше в сравнении с лысухами, крачками, цаплями и, особенно, бакланами (фото 8). Именно бакланов можно рекомендовать в качестве индикаторного вида при проведении мониторинга в природных биоценозах среднего пояса дельты Волги для оценки активности эпизоотического процесса, а, следовательно, и для прогноза эпидемических событий в текущем сезоне.
