Введение к работе
Актуальность проблемы
Корь и краснуха - острые вирусные заболевания, имеющие большое социальное значение.
Всемирная организация здравоохранения относит эти инфекции к тем, которые могут быть ликвидированы с помощью активной иммуншации населения уже в первое десятилетие XXI века.
Российская Федерация участвует в Региональной программе ВОЗ по ликвидации кори, краснухи и предупреждения Синдрома врожденной краснухи (СВК) (Приказ Минздрава РФ от 19.08.2002г.№270).
Поэтапная реализация программы ликвидации кори в РФ существенно изменила качественные и количественные характеристики эпидемического процесса этой инфекции. Если в довакцинальный период показатель заболеваемости корью в среднем составлял 933,2 на 100 тыс. населения, то в последние годы заболеваемость снизилась до спорадического уровня. В 2007 году показатель заболеваемости приблизился к критерию элиминации (менее 1 случая на 1 млн. населения) и составил 0,12 на 100 тыс населения (Сообщение Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 29.05.2008г. №01/5609-8-32). В 2008 году заболеваемость снизилась до 0,02 на 100 тыс. населения, за 6 мес. 2009г показатель заболеваемости корью на 100 тыс. населения составил 0,07.
Эпидемическое благополучие населения обеспечивается высоким охватом детей двукратной вакцинацией против кори, который составляет по стране более 96 %. Более, чем на 70 % территории страны корь не регистрируется, на остальной части наблюдаются единичные случаи заболевания. Молекулярно - генетическое слежение за циркуляцией штаммов вируса говорит о прекращении трансмиссии вируса кори генотипа D6, эндемичного для РФ (Тихонова Н.Т. и соавт., 2008г).
В настоящее время программа ликвидации кори близка к завершению, однако для успешного выполнения всей программы в целом необходимо наличие отечественных высококачественных диагностических препаратов для выявления антител класса IgM и IgG к вирусу кори, что необходимо для своевременной диагностики кори и осуществления серологического мониторинга за состоянием популяционного иммунитета (Зверев В.В., 2006; Цвиркун О.В. и соавт., 2003).
Краснуха до недавнего времени была неконтролируемой инфекцией. Благодаря введению иммунизации против краснухи в Национальный календарь профилактических прививок (Приказ Минздрава РФ от 18.12.97. №375) заболеваемость краснухой стала планомерно снижаться. В 2001 году в России показатель заболеваемости краснухой на 100 тыс. населения был 396,8; в 2004 году этот показатель составил 107,8. В ходе реализации Национального приоритетного проекта по ликвидации заболеваемости краснухой в 2006-2007 гг. в России было привито против этого заболевания 11,7 миллионов детей, девушек и женщин до 25 лет, в результате чего заболеваемость краснухой резко снизилась. По данным Национального научно-методического цеіпра по надзору за корью (ННМЦ) в 2006 г показатель заболеваемости еще был 92,6 на 100 тыс. населения, а в 2008 году стал 6,79 на 100 тыс. населения. За 6 месяцев 2009 г показатель заболеваемости краснухой составил 0,82.
Одним из важнейших аспектов реализации программы ликвидации кори, краснухи и предупреждения СВК в нашей стране является надзор за краснухой у беременных. Для выявления инаппарантных форм заболевания и диагностики краснушной инфекции проводят серологический скрининг беременных женщин и новорожденных дєті'й. При диагностике острой краснухи у беременных, врожденной краснушной инфекции плода и диагностике СВК сыворотки исследуются в динамике с помощью разнонаправленных иммуноферментных тест-систем (ИФТС), что дает возможность определить не только уровень IgM, но и уровень IgG специфических антител. Одним из подтверждающих тестов в серодиагностике краснухи является выявление индекса авидности антител класса IgG.
В РФ зарегистрировано более 15 отечественных и зарубежных тест-систем, определяющих весь спектр антител к вирусу краснухи. В связи с этим особое значение приобрел сравнительный анализ качества препаратов для диагностики краснухи.
Оценка диагностической эффективности ИФТС для диагностики краснухи разных производств и слежение за качеством коревой ИФТС невозможны без использования референс-материалов, а именно стандартных панелей сывороток и отраслевых стандартных образцов антител к вирусам кори и краснухи. Применение референс-материалов позволит стандартизовать тест-системы и повысить их качество.
В РФ зарегистрировано большое количество зарубежных и отечественных препаратов иммуноглобулина человека нормального (ИГЧ). Среди контролируемых показателей качества этих препаратов - содержание коревых и краснушных антител. Показатель количественного содержания антител в готовых препаратах иммуноглобулина является одним из элементов контроля правильности технологии производства данного препарата. Слежение за технологией производства иммуноглобулинов осуществляется путем определения степени концентрации антибактериальных и антивирусных антител в готовом препарате по сравнению с исходным сырьем.
Отечественные препараты иммуноглобулина более 20 лет контролируют на содержание коревых антител с помощью реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). В зарубежных препаратах ИГЧ контроль содержания коревых антител проводят с помощью реакции нейтрализации или торможения гемагглютинации. Содержание антител к вирусу краснухи контролируют в реакции торможения гемагглютинации. Однако указанные методы трудоемки, сложны для выполнения, использование визуального учета результатов значительно снижает ценность этих методов. Кроме того для РТГА требуются высокоактивные антигены, свежие эритроциты обезьян (для выявления антител к вирусу кори), голубей или человека (для выявления антител к вирусу краснухи), а также барбитурат натрия, приобретение и хранение которого сопряжено со значительными трудностями, так как соли барбитуровой кислоты входят в перечень реактивов, подлежапщх предметно-количественному учету.
Поэтому мы сочли целесообразным оценить возможность использования иммуноферментного анализа для определения содержания антител класса IgG к вирусу кори и краснухи в препаратах ИГЧ, как в отечественных, так и в тех зарубежных, которые необходимо контролировать по указанным показателям в связи с их регистрацией в РФ.
Цель работы
Целью исследования является сравнительное изучение качества коммерческих ИФТС, для выявления антител к вирусам кори и краснухи в сыворотке крови человека.
Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:
Стандартизовать средства для оценки качества ИФТС для выявления антител к вирусам кори и краснухи: разработать и аттестовать отраслевые стандартные образцы, содержащие антитела к вирусу кори и краснухи; аттестовать стандартные панели сывороток для оценки качества ИФТС, выявляющих антитела к вирусам кори и краснухи.
Оценить качество ИФТС «Kopb-IgG-ДС», разработанной для серодиагностики кори.
Провести сравнительное изучение диагностической эффективности разнонаправленных ИФТС для диагностики краснухи.
Оценить возможность использования иммуноферментного анализа для определения содержания антител класса IgG к вирусу кори и краснухи в препаратах ИГЧ.
Научная новизна работы.
Впервые разработан и аттестован отечественный Отраслевой стандартный образец, содержащий антитела к вирусу кори и к вирусу краснухи.
Впервые проведено изучение ОСО СПС, содержащих и не содержащих антитела класса IgG к вирусу кори, производства ЗАО «Медико-биологический союз», а также рабочей панели предприятия сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела класса IgG к вирусу краснухи, производства ООО «Диагностические системы».
Впервые проведено комплексное лабораторное изучение ИФТС для диагностики кори, включающее оценку соответствия показателей качества тест-системы требованиям НД, оценку аналитической чувствительности, специфичности, линейности и предела количественного определения.
Впервые проведено сравнительное изучение всех коммерческих отечественных ИФТС для выявления антител класса IgG и IgM к вирусу краснухи различных производителей.
Изучена возможность использования иммуноферментного анализа вместо устаревших РТГА, РН и РПГА для определения содержания антител класса IgG к вирусу кори и краснухи в препаратах иммуноглобулина человека нормального.
Практическая значимость
Использование разработанного и аттестованного отраслевого стандартного образца, содержащего антитела как к вирусу кори, так и к вирусу краснухи, позволяет осуществлять калибровку стандартных образцов предприятия (СОП) и контроль аналитической чувствительности коммерческих серий тест-систем, предназначенных для определения IgG антител к вирусам кори и краснухи.
Применение аттестованных панелей сывороток позволяет контролировать диагностическую эффективность тест-систем, предназначенных для определения IgG антител к вирусам кори и краснухи на современном научно-методическом уровне.
Проведенные нами исследования позволили рекомендовать Федеральной Службе Роспотребнадзора иммуноферментные тест-системы для лабораторной диагностики краснухи, что крайне важно для успешного выполнения национальных программ элиминации кори и уменьшения заболеваемости краснухой и СВК в РФ.
Проведенные нами исследования показали возможность использования ИФА для определения содержания антител класса IgG к вирусу кори и краснухи в препаратах иммуноглобулина человека нормального.
Внедрение результатов диссертационной работы в практику.
Внесены в Реестр национальных стандартов МИБП РФ:
отраслевой стандартный образец антител класса IgG к вирусу кори и краснухи -ОСО 42-28-393-07;
стандартная панель сывороток, содержащих и не содержащих антитела класса IgG к вирусу кори, -ОСО СПС 42-28-394-07.
Аттестована рабочая панель сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела класса IgG к вирусу краснухи, производства ООО «Диагностические системы».
Результаты проведенного сравнительного изучения ИФТС для выявления антител к вирусу краснухи класса IgM, IgG и оценки степени авидности антител класса IgG позволили своевременно рекомендовать в деятельность Национального центра по надзору за корью и территориальных управлений Роспотребнадзора в субъектах Российской Федерации диагностические препараты оптимального качества.
На основании комплексной оценки качества тест-системы «Kopb-IgG-ДС» производства ЗАО «Медико-биологический Союз» выявлено несоответствие этого препарата требованиям, предъявляемым к количественным тест-системам. По результатам пострегистрационного изучения качества указанной тест-системы ее применение в практике здравоохранения РФ остановлено.
Показанная нами возможность использования иммуноферментного анализа для определения содержания антител класса IgG к вирусу кори и краснухи в препаратах ИГЧ позволила рекомендовать внести метод ИФА в НД на препарат «Хумаглобин» производства фирмы «ТЕВА Фармацевтические предприятия Прайвит Ко. Лтд», Венгрия, вместо РТГА.
Апробация результатов работы
Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на Международной конференции «Теоретические и практические аспекты элиминации кори» (Москва, 15-16 декабря 2005г.); на 2-ом совещании национальной лабораторной сети Национального научно-методического центра по надзору за корью (ННМЦ) «Диагностика кори и краснухи в условиях спорадической заболеваемости корью» (Москва, 10-12 декабря 2007 г.); на Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2008. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» (11-12 ноября 2008 г.); на заседании коллегии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Роспотребнадаора (Москва, 1 декабря 2008 г).
Диссертация апробирована на заседании Ученого Совета ГИСК им. Л.А. Тарасевича 23 июня 2009 г протокол № 9.
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ.
Струюура и объем работы
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, S глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов. Диссертация изложена на 166 страницах печатного текста, иллюстрирована 55 таблицами и 20 рисунками. Список литературы включает 135 источников.
