Содержание к диссертации
Введение
I. Обзор литературы 10
1. Современные аспекты иммуномодуляции 10
1.1. Иммунотропные методы воздействия 11
1.2. Систематизация иммунотропных препаратов, виды иммунотерапии 16
1.3. Использование современных средств, воздействующих на иммунную систему 22
1.4. Биологически активные вещества в звероводстве 32
2. Особенности гематологического и иммунного статуса пушных зверей 34
3. Иммунитет при алеутской болезни норок 39
4. Использование иммуноактивных препаратов у норок при алеутской болезни 42
5. Иммунодефицитные состояния и их коррекция 44
II. Собственные исследования
1. Материалы и методы исследования 48
2. Изучение иммунного статуса здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков 53
2.1. Изучение гематологических показателей здоровых норок и инфицированных вирусом алеутской болезни, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков 53
2.2. Определение поглотительной способности нейтрофилов в периферической крови здоровых норок и инфицированных вирусом алеутской болезни, здоровых щенков норок и щенков- гипотрофиков 59
2.3. Определение розеткообразующих лимфоцитов в периферической крови здоровых норок и инфицированных возбудителем алеутской болезни, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков 62
2.4. Количество иммунных белков в сыворотке крови здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, у здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков 65
2.5. Комплементарная активность сыворотки крови у здоровых норок и при алеутской болезни, у здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков 65
3. Влияние иммуномодулятора фоспренил на иммунный статус здоровых норок и инфицированных вирусом алеутской болезни, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофико 68
3.1. Определение гематологического статуса здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков при использовании фоспренила 68
3.2. Изучение функциональной активности нейтрофилов периферической крови здоровых норок и при алеутской болезни, здоровых щенков и щенков-гипотрофиков под действием фоспренила 75
3.3. Влияние фоспренила на количество розеткообразующих лимфоцитов в периферической крови здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, здоровых щенков и щенков- гипотрофиков 78
3.4. Влияние фоспренила на количество иммунных белков в сыворотке крови здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков 81
3.5. Изучение комплементарной активности сыворотки крови здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков при использовании фоспренила 83
4. Влияние родиолы розовой на иммунный статус здоровых норок и инфицированных вирусом алеутской болезни, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков 85
4.1. Гематологические показатели здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, здоровых щенков норок и щенков- гипотрофиков при использовании родиолы розовой 85
4.2. Влияние родиолы розовой на поглотительную способность нейтрофилов периферической крови здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков 91
4.3. Количество розеткообразующих лимфоцитов в периферической крови здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, здоровых щенков норок и щенков гипотрофиков при использовании родиолы розовой 94
4.4. Влияние родиолы розовой на количество иммунных белков в сыворотке крови здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков 97
4.5. Изучение комплементарной активности сыворотки крови здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков при использовании родиолы розовой 99
III. Обсуждение результатов исследования 101
IV. Выводы 113
V. Практические предложения 116
VI. Список литературы 117
VII. Приложения 145
- Иммунотропные методы воздействия
- Изучение гематологических показателей здоровых норок и инфицированных вирусом алеутской болезни, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков
- Определение гематологического статуса здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков при использовании фоспренила
Введение к работе
Значительный урон экономике звероводства наносят алеутская болезнь норок и иммунодефицитные состояния молодняка вследствие ухудшения товарных качеств шкурковой продукции и высокого отхода животных (А.Ф. Кузнецов, В.М. Короткое, 1996; В.Г. Ощепков и др., 1996; А.В. Владимиров, 2005; И.Л. Обухов и др., 2005). Средства специфической профилактики алеутской болезни норок отсутствуют (А.А. Конопаткин, 1993; Т.А. Рыжова и др., 2002; А.И. Литвинов, Н.А. Яременко, 2005; B.C. Слугин, 2005). Профилактика инфекционных болезней молодняка при иммунодефицитах не эффективна, так как иммунная система не способна полноценно реагировать на антигенную стимуляцию (Ю.Н. Федоров, О.А. Верховский, 1996; B.C. Бузлама, 2005). В связи с этим, в звероводстве особое внимание уделяют поиску средств, позволяющих корректировать иммунный статус животных при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях с целью продления жизни зверей до формирования качественного мехового покрова. Данным требованиям отвечают биологически активные вещества растительного происхождения, способные активизировать защитные силы организма, корректировать стрессы, повышать продуктивность животных и оказывать адаптогенное действие (В.Д. Соколов, 1997). Учитывая относительно низкие затраты на выращивание и переработку сырья, их использование является перспективным способом иммунокоррекции, повышающим качество продукции звероводства (А.Г. Нарижный, А.Ч. Джамалдинов, 2003; Н.Н. Новикова и др., 2005). Это явилось основанием для изучения влияния растительных иммуномодуляторов - фоспренил и родиолы розовой - на иммунный статус норок при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях у щенков-гипотрофиков.
Цель исследования - изучение количественных показателей критериев оценки иммунного статуса здоровых норок и инфицированных вирусом алеутской болезни, а также здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков с иммунодефицитными состояниями при использовании фоспренила и
7 родиолы розовой.- Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучить гематологические показатели у здоровых норок, при
алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях под влиянием
фоспренила, родиолы розовой и без них.
Определить поглотительную способность гранулоцитов периферической крови здоровых норок, при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях с использованием биологически активных веществ и без них.
Установить количество розеткообразующих лимфоцитов периферической крови у здоровых норок и инфицированных вирусом алеутской болезни, а также у здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков при использовании фоспренила, родиолы розовой и без них.
4. Изучить влияние фоспренила и родиолы розовой на количество
иммунных белков и комплементарную активность сыворотки крови
здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, а также
здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков и сравнить с аналогичными
показателями у животных контрольных групп.
Научная новизна. Изучено влияние биологически активных веществ -фоспренила и родиолы розовой - на иммунный статус норок, разводимых в Омской области, в норме, при алеутской болезни и иммунодефицитных состояниях. Определена корригирующая роль фоспренила и родиолы розовой на количественные показатели гематологического статуса, на функциональную активность клеточных и гуморальных факторов иммунитета норок при алеутской болезни и щенков-гипотрофиков при иммунодефицитах.
Теоретическая и практическая значимость работы. В результате проведённых исследований получены количественные показатели критериев оценки иммунного статуса инфицированных и здоровых норок, а также молодняка норок в норме и с иммунодефицитными состояниями при
8 использовании биологически активных веществ и без них. Дано обоснование применения фоспренила и родиолы розовой с целью коррекции иммунного статуса у норок, инфицированных вирусом алеутской болезни, и иммунодефицитных состояний у щенков-гипотрофиков. Полученные данные могут быть использованы в качестве критериев при оценке иммунного статуса пушных зверей с инфекционной и иммунодефицитной патологией с применением различных иммуноактивных препаратов.
Внедрение результатов исследования. Материалы исследований используются в учебном процессе на факультетах ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет» и ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет». Разработаны методические рекомендации «Методы оценки иммунного статуса норок», утвержденные на заседании подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины РАСХН. Получен патент на изобретение «Способ исследования иммунокомпетентных клеток для оценки иммунного статуса норок». Получено три удостоверения на рационализаторские предложения «Устройство для фиксации норок»; «Использование цинк-сульфатного теста (ЦСТ - теста) для определения количества иммунных белков в сыворотке крови норок»; «Фиксирующее устройство для норок».
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодных научных конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ФГОУ ВПО ОмГАУ (Омск, 2005, 2006; 2007); на V Международной научно-практической конференции молодых ученых Сибирского федерального округа «Современные тенденции развития АПК в России» (Красноярск, 2007).
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано восемь статей, в том числе одна статья - в журнале, рекомендованном ВАК Минобразования РФ («Ветеринарная патология»).
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения, список литературы, приложения. Работа иллюстрирована 43 рисунками и содержит четыре таблицы. Список литературы включает 261 работу, из них 201 отечественных авторов и 60 иностранных.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Результаты гематологических исследований крови здоровых и
инфицированных вирусом алеутской болезни норок, щенков норок с
иммунодефицитными состояниями при использовании биологически
активных веществ и без них.
2. Данные о влиянии фоспренила и родиолы розовой на
функциональную активность клеточных факторов иммунитета у здоровых
норок, инфицированных вирусом алеутской болезни и с
иммунодефицитными состояниями по сравнению с аналогичными
показателями у норок контрольных групп.
3. Результаты исследования функционального состояния гуморального
звена иммунитета у здоровых норок, инфицированных вирусом алеутской
болезни и щенков-гипотрофиков с иммунодефицитными состояниями при
использовании биологически активных веществ и без них.
Иммунотропные методы воздействия
В настоящее время к иммунотропным методам воздействия относят использование фармакологических средств, ионизирующего, ультрафиолетового и лазерного облучения, удаление или трансплантацию лимфоиднои ткани, удаление иммунных комплексов путем гемосорбции или плазмафереза и другие методы.
Практическая иммунология располагает довольно широким арсеналом препаратов, корригирующих иммунный статус. При изучении влияния веществ разных фармакологических групп на иммунную систему, можно заметить, что практически все лекарственные средства обладают в какой-то мере иммунотропной активностью. Например, многие антистрессовые средства (метилурацил, дибазол, бемитил-2, этимизол и др.), стимуляторы продуктивности животных (эрготропики и кормовые добавки), витамины (ретинол, аскорбиновая кислота, витамин Е, Д, витамины группы В и др.), микроэлементы (селен, литий, железо, медь, кобальт, цинк), некоторые органические кислоты (парааминобензойная, янтарная) стимулируют иммунную систему (И.Г. Гайворонская, Р. А. Кадымов, 1984; М.Д. Машковский, 1984; В.М. Мешков, 1988; В.А. Галочкин, Г.И. Боряев, 1992; В.Д. Соколов с соавт., 1992, 1997; В.Н. Колесов и др., 1997; Е.В. Крапивина, 2001; Н.Н. Тютюнник и др., 2002; Н.Н. Новикова и др., 2004; С.Н. Преображенский, И.А. Евтинов, 2004; А.А. Сухинин, 2004; Н.А. Слесаренко, А.В. Шаврин, 2005; В.Ю. Коптев, А.В. Прокопьева, 2006; Б.Ш. Мырхазметова, 2006).
Иммуностимулирующей активностью обладают также и некоторые химиотерапевтические средства. Так, по данным З.О. Караева (1973) применение таких антибиотиков, как тетрациклин, сигмамицин, неомицин, левомицетин, способствует в ряде случаев повышению поглотительной активности фагоцитов. Левомицетин, гентамицин, стрептомицин и др. в малых дозах проявляют иммуностимулирующие свойства (И.Д. Столяров, 1999). С. De Simone et al. (1980) отмечают, что ампициллин незначительно увеличивает миграцию нейтрофилов. Однако большинство исследователей утверждают о преимущественном иммуносупрессивном влиянии антибиотиков (М. Barreiros et al., 1963; F. Mitchell et al., 1973; D. Smeling, G. Bank, 1978; V. Thong, A. Ferrante, 1980; К.П. Кашкин, З.О. Караев, 1984; Т.А.Зудова с соавт., 2000; А.В. Коробко, 2000 и др.). Направленным иммунодепрессивным действием обладают также химиотерапевтические препараты, применяемые для лечения злокачественных новообразований.
На иммунный статус организма оказывают существенное влияние даже фармакодинамические лекарственные средства с высокой избирательностью основных эффектов: холинергические, адренергические, дофаминергические и другие селективные лекарственные препараты (А.А. Новик, В.Н. Цыган и др., 2001).
Есть сведения о воздействии различных препаратов - обзидана, изадрина, мезатона, адреналина, циклофосфана, димедрола, АТФ, вольтарена, атропина, папаверина, теофиллина на фагоцитарную активность ПМЯЛ периферической крови (Л.А. Метелица, СЕ. Могилевич и др., 1996). Авторами установлено, что выраженность и направленность действия указанных лекарственных средств имеют регулирующий характер и в ряде случаев обусловлены уровнем исходной фагоцитарной активности ПМЯЛ. Так, при высокой фагоцитарной активности нейтрофилов все исследуемые препараты, за исключением мезатона, оказывают достоверное ингибирующее действие. На низкую исходную фагоцитарную активность ПМЯЛ активирующее влияние оказывают обзидан, изадрин, мезатон, вольтарен и теофиллин.
Рядом исследователей определена иммунотропная активность у заменителя гепарина - фукоидана, представляющего собой нетоксичный сульфатированный полисахарид из бурой водоросли Fucus Evanescens (Н. Shibata et al., 2000; О. Berteau et al., 2003; B. Mytar et al., 2004; T.C. Запорожец с соавт., 2006). Иммунотропные свойства обнаруживают не только у препаратов разных фармакологических групп, но и у веществ, используемых в различных сферах деятельности. Например, рядом авторов установлено стимулирующее влияние на иммунную систему каррагинов — сульфатированных полигалактанов из красных водорослей, широко применяемых в пищевой промышленности в качестве загустителей и желирующих веществ (Р.С. Quan et al., 1978; Y. Sugita-Konishi et al., 2003; Э.И. Хасина с соавт., 2007).
Несмотря на широкое разнообразие средств, обладающих иммунотропной активностью, выделяют отдельную группу препаратов с основным действием на иммунную систему - иммуномодуляторы. Их объединяют совместно с корректорами стрессов и продуктивности животных в одну фармакологическую группу лекарственных средств. Так как известно, что иммуностимуляторы способны повышать продуктивность и корректировать стрессы у животных. В тоже время многие стимуляторы продуктивности (эрготропики и кормовые добавки) и антистрессовые препараты оказывают стимулирующие влияние на иммунную систему.
Изучение гематологических показателей здоровых норок и инфицированных вирусом алеутской болезни, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков
При проведении общего анализа клеток крови установлено, что содержание эритроцитов в периферической крови здоровых норок в контроле составило 9,0±0,16 млн/мкл, гемоглобина - 173,0±4,94 г/л. У норок, инфицированных вирусом АБ, данные показатели составили 7,4±0,15 млн/мкл и 161,5±4,95 г/л, соответственно. Эритроциты периферической крови здоровых норок оседали со скоростью 2,60±0,23 мм/час, инфицированных зверей - 2,83±0,31 мм/час. Процентное соотношение эритроцитов к плазме крови у здоровых норок составило 60,5±0,79%, у инфицированных животных - 57,4±0,96%. Абсолютное количество лейкоцитов у инфицированных зверей в контрольной группе составило 8,4±0,30 тыс/мкл, что в 1,7 раза больше, чем у здоровых норок контрольной группы - 4,8±0,11 тыс/мкл. Выраженный лейкоцитоз у норок при АБ обусловлен изменением функциональной активности органов иммуногенеза под действием вирусов.
Структура лейкоцитарной формулы здоровых зверей контрольной группы имела нейтрофильный профиль. Преобладание нейтрофилов в лейкограмме указывает на важную роль фагоцитарного звена в обеспечении иммунного гомеостаза у норок. Количественный показатель гранулоцитов у них составил 65,7±0,67% (3,19±0,11 тыс/мкл), лимфоцитов - 31,6±0,64% (1,52±0,06 тыс/мкл). У инфицированных зверей в контроле количество лимфоцитов в лейкограмме преобладало над количеством нейтрофилов, и составило 60,8±1,34% (5,12±0,25 тыс/мкл) и 36,0±0,70% (3,03±0,09 тыс/мкл), соответственно.
Количество эозинофилов, базофилов и моноцитов в периферической крови здоровых норок контрольной группы существенно не отличалось от соответствующих показателей у инфицированных животных в контроле. У здоровых зверей в контроле содержание эозинофилов составило 1,2±0,20% (0,19±0,13 тыс/мкл), базофилов - 1,1±0,10% (0,05±0,01 тыс/мкл), моноцитов - 0,4±0,08% (0,02±0,004 тыс/мкл), у инфицированных зверей - 1,8±0,42% (0,15±0,03 тыс/мкл), 1,0±0,20% (0,11±0,02 тыс/мкл), 0,4±0,16% (0,04±0,01 тыс/мкл), соответственно.
Результаты исследования гематологического статуса щенков норок показали, что количественный показатель эритроцитов у здоровых щенков контрольной группы составил 7,4±0,34 млн/мкл, гемоглобина - 162,0±2,77 г/л, СОЭ - 2,69±0,28 мм/час, у щенков-гипотрофиков в контроле - 6,1±0,25 млн/мкл, 153,2±3,02 г/л и 2,80±0,23 мм/час, соответственно. Величина гематокрита составила у здоровых щенков норок 56,4±0,83%, у щенков-гипотрофиков - 50,1±0,87%. Абсолютное количество лейкоцитов составило 8,0±0,28 тыс/мкл у здоровых щенков и 5,2±0,55 тыс/мкл - у гипотрофиков.
Количество нейтрофилов у здоровых щенков норок контрольной группы составило 44,7±1,07%, в абсолютном значении - 3,57±0,08 тыс/мкл,
Определение гематологического статуса здоровых и инфицированных вирусом алеутской болезни норок, здоровых щенков норок и щенков-гипотрофиков при использовании фоспренила
Результаты исследования общего анализа клеток периферической крови показали, что использование фоспренила способствовало улучшению эритропоэза у здоровых и инфицированных вирусом АБ норок. Об этом свидетельствовало увеличение количественных показателей эритроцитов, гемоглобина и гематокрита у зверей опытных групп. Содержание эритроцитов в периферической крови здоровых норок составило 10,4±0,81 млн/мкл (Р 0,05), гемоглобина 184,7±4,51 г/л (Р 0,05), у инфицированных норок 8,5±0,16 (Р 0,001) и 173,6±2,23 (Р 0,05), соответственно. Величина гематокрита у здоровых норок первой опытной группы составила 61,1±0,85% (Р 0,05), СОЭ - 2,52±0,42 мм/час (Р 0,05). У инфицированных зверей третьей опытной группы данные показатели составили 59,1±0,53% (Р 0,05) и 2,75±0,21 мм/час (Р 0,05), соответственно.
Применение иммуномодулятора фоспренил вызвало коррекцию абсолютного содержания лейкоцитов в крови, как у здоровых, так и у инфицированных зверей. Лейкоцитов в периферической крови здоровых норок первой группы содержалось - 5,4±0,17 тыс/мкл (Р 0,005), у инфицированных норок третьей группы - 7,2±0,23 тыс/мкл (Р 0,001).
У здоровых норок первой группы количество нейтрофилов в лейкограмме преобладало над количеством лимфоцитов и составило 63,1±0,97%, Р 0,01 (3,43±0,11 тыс/мкл, Р 0,05) и 34,4±0,93%, Р 0,01 (1,87±0,09 тыс/мкл, Р 0,005), соответственно. У инфицированных животных третьей группы количественный состав клеток в лейкоцитарной формуле также имел определенные отличия в опыте от контроля. Содержание лимфоцитов в периферической крови норок третьей опытной группы ниже на 25,5%, по сравнению с данным показателем в контроле - 45,3±1,11%, Р 0,001 (3,24±0,15 тыс/мкл, Р 0,001) и 60,8±1,34% (5,12±0,25 тыс/мкл), соответственно. Уровень нейтрофилов в опыте, наоборот, выше на 43,3% в третьей группе, по сравнению с величинами контрольной группы и составил 51,6±0,96%, Р 0,001 (3,71±0,12 тыс/мкл, Р 0,001) и 36,0±0,70% (3,03±0,09 тыс/мкл), соответственно. Коррекция соотношения клеток лейкограммы у инфицированных животных отражает . восстановление функций кроветворных органов под влиянием фоспренила.
В опытных группах здоровых и инфицрованных норок количественные показатели эозинофилов, базофилов и моноцитов достоверно не отличались от контроля. Так, содержание эозинофилов у здоровых зверей в первой группе составило 1,3±0,15%, Р 0,05 (0,07±0,01 тыс/мкл, Р 0,05), базофилов - 1,1±0,14%, Р 0,05 (0,06±0,01 тыс/мкл, Р 0,05), моноцитов - 0,2±0,07%, Р 0,05 (0,01±0,003 тыс/мкл, Р 0,05). У инфицированных норок третьей группы количественные показатели этих клеток лейкограммы составили 1,3±0,33%, Р 0,05 (0,11±0,08 тыс/мкл, Р 0,05), 1,2±0Д4%, Р 0,05 (0,09±0,01 тыс/мкл, Р 0,05) и 0,6±0,18%, Р 0,05 (0,04±0,01 тыс/мкл, Р 0,05), соответственно.
У молодняка норок при использовании фоспренила установлено увеличение количества эритроцитов и гемоглобина в периферической крови, что свидетельствует о способности препарата активизировать процессы кроветворения. Так, в периферической крови здоровых щенков норок пятой группы эритроцитов содержалось 8,6±0,18 млн/мкл (Р 0,001), гемоглобина-172,7±3,15 г/л (Р 0,01), у щенков-гипотрофиков седьмой группы 7,2±0,17 млн/мкл (Р 0,001) и 160,8±2,52 г/л (Р 0,05), соответственно. Показатели СОЭ и гематокрита у зверей опытных групп существенно не отличались от контроля и составили 2,62±0,25 мм/час (Р 0,05) и 57,2±0,87% (Р 0,05) у здоровых щенков, 2,77±0,25 мм/час (Р 0,05) и 52,3±0,96% (Р 0,05) - у щенков-гипотрофиков.
