Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 6
Краткая историческая справка 6
1.1. Этиология лейкоза крупного рогатого скота 7
1.1.1. Морфологическая характеристика вируса лейкоза 7
1.1.2. Иммунологические свойства 8
1.1.3. Онкогенные свойства 9
1.2. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота 10
1.2.1. Гематологический метод 10
1.2.2. Серологический метод 11
1.2.2.1. Реакция иммунодиффузии в геле агара (РИД) 12
1.2.2.2. Иммуноферментный анализ (ИФА) 13
1.2.3. Вирусологический метод: 14
а) метод постановки биопробы
1.3. Эпизоотология 15
1.3.1. Распространение лейкозной инфекции 15
1.3.2. Источники и пути передачи вируса лейкоза 19
1.4. Лейкоз овец 25
1.4.1. Распространение лейкоза овец 25
1.4.2. Этиология лейкозной инфекции овец 26
1.4.3. Клинико-морфологическое проявление инфекции вызванной В Л 27
1.5. Диагностика лейкоза овец 28
1.6. Профилактика и меры борьбы с лейкозом крупного рогатого скота 29
1.6.1. Специфические средства профилактики . 30
1.7. Заключение 32
2. Собственные исследования 35
2.1. Материалы и методы 35
2.2. Результаты собственных исследований 37
2.2.1. Природно-климатическая и хозяйственная характеристика Ставропольского края 37
2.2.2. Распространение лейкоза в Ставропольском крае 43
2.2.2.1. Эпизоотическая ситуация по лейкозу крупного рогатого скота в хозяйствах Грачевского района 58
2.2.2.2. Распространение ВЛКРС-инфекции в индивидуальном секторе 66
2.2.3. Клинико-гематологическое проявление инфекции 68
2.2.4. Эпизоотическая ситуация по хроническим инфекциям в Ставропольском крае 74
2.3. Лейкоз овец 79
2.3.1. Спонтанная (естественная) лейкозная инфекция овец 79
2.3.2. Экспериментальная (искусственная) инфекция овец 80
2.3.3. Изучение протективных свойств рекомбинантного вируса осповакци-ны, содержащего env генВЛКРС 83
2.4. Система профилактических и оздоровительных мероприятий при лейкозе
крупного рогатого скота в Ставропольском крае 91
3. Обсуждение результатов исследования 94
4. Выводы 96
5. Практические предложения 98
6. Список литературы 99
- Распространение лейкозной инфекции
- Эпизоотическая ситуация по лейкозу крупного рогатого скота в хозяйствах Грачевского района
- Экспериментальная (искусственная) инфекция овец
Введение к работе
Энзоотический лейкоз крупного рогатого скота - хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, которая протекает бессимптомно или проявляется персистентным лимфоцитозом, образованием опухолей в кроветворных и других органах и тканях.
В последние годы болезнь доминирует и занимает одно из первых мест в структуре инфекционной патологии крупного рогатого скота. Лейкоз распространен во всех странах мира, в том числе и в Российской Федерации. Экономический ущерб от лейкоза обусловлен падежом, вынужденным убоем и выбраковкой больных животных, ограничением хозяйственной деятельности (продажа молока и племенного молодняка), затратами на оздоровительные мероприятия (Нахмансон В.М. и др., 2000).
Вирус энзоотического лейкоза, являясь экзогенным ретровирусом, чрезвычайно широко распространен среди животных, особенно в условиях индустриального ведения животноводства, характеризующегося высокой концентрацией поголовья в хозяйствах. Лейкоз коров остается крупной социально-биологической проблемой. Разработанные системы противо-лейкозных мероприятий основаны на выявлении и удалении из стада инфицированных животных. При этом их эффективность зависит от эпизоотической ситуации, экономической целесообразности и от возможности раздельного содержания в каждом конкретном хозяйстве (Гулюкин М.И. и др., 2001).
Однако в сильно пораженных хозяйствах такой подход не может быть использован по экономическим соображениям. В этом случае большую пользу в борьбе с лейкозом КРС могла бы оказать вакцинация против ВЛ КРС. Такая вакцинация привела бы к резкому снижению процента зараженных животных, с последующим освобождением стада от них с помощью традиционных подходов (Крикун В.А. и др., 2003). Современная биотехнология, основанная на методах генетической инженерии, позволяет разрабатывать вакцины нового типа. В частности, важным направлением является использование вируса осповакцины (ВОВ) и других поксви русов для создания живых рекомбинантных вакцин (Альтштейн А.Д., 1992).
В естественных условиях нельзя полностью исключить передачу вируса бычьего лейкоза другим видам животных, которые обычно содержатся вместе с крупным рогатым скотом (овцы, капибары, буйволы, зебу) (Paulsen et al., 1971; Olson and Baumgartener, 1978; Кунаков, 1980; Marin et al., 1982; Romero et al., 1982). Описано несколько случаев выделения в овцеводческих хозяйствах вируса, схожего с вирусом лейкоза коров, что позволяет рассматривать овец в качестве возможного резервуара возбудителя инфекции (Paulsen et al., 1972,1973,1978; Paulsen and Thies, 1977).
На Ставрополье лейкоз крупного рогатого скота впервые был установлен в 1948 году профессором Смирновым А.Н. на основании гистологического исследования патологического материала. До определенного времени обследование крупного рогатого скота на лейкоз проводилось клинико-гематологическим и патоморфологическим методами. При регистрации больных животных осуществляли оздоровительные мероприятия, главным содержанием которых было проведение плановых диагностических (гематологических) исследований и сдача на убой гематологически больных лейкозом животных. Эта работа была трудоемкой, малоэффективной и формальной, т.к. в хозяйствах не уделялось должного внимания этому заболеванию.
После разработки и внедрения в 1987 году серологического метода диагностики (РИД), в Ставропольском крае начали проводить исследования крупного рогатого скота на лейкоз, позволяющего выявлять скрытые, бессимптомные формы инфекции. Появились новые данные, полностью изменившие наше представление об эпизоотической обстановке.
Распространение лейкозной инфекции
Согласно статистическим данным Federal Meat Inspection Service с
1917 no 1925 гг. число случаев лимфосаркомы, выявленных на мясокомбинатах США, увеличилось с 0.4 до 0,6 голов на 10000 убитых коров; В 1938 г. оно достигало - 1,4 голов на 10000 коров. В 1950-1953 гг. отмечали снижение заболеваемости лимфосаркомой до 0,92-0,99 голов на 10000 животных. Но в 1958 г. и 1964 г. обнаруживали 1,8 и 1,7 голов соответственно (Baumgartener et al.,1985). В 1978 г. на 10000 животных выбраковывали 10 туш с лимфоид-ными опухолями (Sorensen and Beal, 1979), в 1983 г. этот показатель увели-чился до 14,45 и в абсолютных цифрах составил 10183 выбракованных туш на 7045592 убитых животных мясного и молочного направления (Thurmond et al.,1985).
По данным Thurmond et al. (1985), ежемесячно число выбракованных туш на двух мясокомбинатах штата Калифорния с июня 1979 г. по декабрь 1982 г. варьировало от 39 до 113 и в среднем составила 80 случаев на 10000 . убитых коров, что, примерно, в 20 раз превышает данные Bendixen (1973) для наиболее пораженных районов Дании. По официальной отчетности потери от выбраковки пораженных лейкозом туш в США в 1978 г. оценивались в 7,0 млн. $.
В Германии, когда противолейкозные мероприятия не проводили, на 10000 крупного рогатого скота приходилось на мясокомбинатах в городах Konigsberg и Tilsit 39 и 150 туш с опухолевыми поражениями соответственно (Bendixen, 1965). В послевоенный период лейкоз продолжая распространяться из Восточной в Западную Германию (Ritter, 1962, Rosenberger, 1964). Так, число туш с опухолями лейкозного характера, возросло в 1975 г. с 111 на 10 000 голов в 1975 г. до 248 - в 1985 г., сумма убытков за это время повысилась с 33,3 до 124 млн. марок (Abt, Marshak et al.,1976; Straub,1982). Общая сумма потерь от лейкоза, к 1987 г. составила более 1 млрд. марок при инвестициях на оздоровление 500 млн. марок в год (Straub,1988). По мнению Kautzsch и Schluter (1990) к 1998 г. количество туш с опухолями на 10 000 животных возрастет до 404, сумма ущерба будет оцениваться в 3 млрд. марок. По расчетам Mieth et al. (1979) прямые потери от лейкоза в ГДР составляли 24 млн. марок на каждые 10 000 больных коров.
В юго-восточных районах Швеции частота проявления лейкоза была самой высокой и составляла 1000 и более случаев на 100000 животных. В северных районах заболеваемость лейкозом в 1968-1971 гг. не превышала 17,5 голов на 100000 животных (Hugoson and Brattstrom, 1980). Ежегодный ущерб от лейкоза составляет 5-10 млн. шведских крон (Hugoson and Woldroell, 1983).
В Великобритании до недавнего времени отмечали только спорадический лейкоз (Markson et al., 1978). Появление в стране энзоотического лейкоза связывают с импортом племенных животных из Канады. Экономический расчет Davis et al., (1980) показал, что потери от лейкоза в течение 25 лет в Великобритании могут составить 4,8 млн. фунтов стерлингов.
Modena et al., (1983) во время карантина 40 племенных телочек, поступивших в Бразилию из Канады и США, выявили у 5 животных антитела к БЛВ, через 3 месяца в этой группе 80% животных были инфицированы вирусом лейкоза. В 11 хозяйствах, 8 районов штата Minas Gerais (Бразилия) уровень инфицированности животных БЛВ составлял 26,69%. При этом, в 8 молочных хозяйствах, содержащих 1274 коровы, было - 40,62% серопозитив-ных на лейкоз животных (Modena et al.,1984).
Из 606 опухолей крупного рогатого скота, собранных в ЮАР за 40-летний период 64 (10,6%) были лимфосаркомами, которые занимали третье место в структуре неоплазм после опухолей кожи и соединительной ткани (Bastianello, 1982).
В бывшем СССР возникновение лейкоза связано с завозом в 1940, 1945-1948 гг. в хозяйства различных регионов страны племенных животных из Германии (Нахмансон, 1987). Последующие исследования показали его повсеместное в стране распространение (Яунслейнис и Парчинский, 1967; Языкова и Бабкин, 1967; Игнатов и др., 1975; Нымм и Симоварт, 1975; Яру-шявичус и Кемежене, 1975; Яунслейнис и др., 1975; Доронин и др., 1976; Ку каин и др., 1978; Шишков и др., 1978, 1986; Гизитдинов и др. 1979; Крикун и др., 1979; Лагановский и др; 1979а, 19796, 1980; Салимов и др., 1979; Сима ков, 1979а, 19796; Бублий, 1980; Езовитов и Инюшкина, 1980; Симонян и
Бражин, 1980; Симоварт, 1982; Овчинникова и Царев, 1983; Салимов, 1984, 1986; Докукин и Зиатдинов, 1985; Колчин, 1985; Лучко и др., 1985; Печер-ская и др., 1985; Симоварт и др., 1985; Велик и Ропаев, 1986; Бочарников, 1986; Бурба и Кузьмичев, 1986; Галиулина и др., 1986, 1987; Лемеш, 1986; Москалик и др., 1986; Москалик и Мандрик, 1986; Тихонов, 1986; Шаболов и Бочарников, 1986; Храмцов, 1986; Лемеш и др., 1987; Мурватуллоев и Ша А дыбаева, 1987; Смирнова, 1987; Билль и Ежева, 1989). На долю лейкоза в структуре инфекционной патологии крупного рогатого скота приходится 2,4% (Нахмансон, 1987).
По данным боенской статистики за 1979, 1980 и 1981 гг. число туш пораженных лимфоидными опухолями составила соответственно 52,4, 56,3 и 58,0 на 100000 убитых животных. Только прямые потери от выбраковки туш на мясокомбинатах, падежа и вынужденного убоя ежегодно исчисляются / 13,6 млн. рублей. (Нахмансон, 1987).
В последние десятилетие среди хронических инфекционных болезней сельскохозяйственных животных лейкоз крупного рогатого скота уверенно занимает одно из ведущих мест, тем самым, создавая определенные ветеринарные и экономические проблемы.
Анализ ветеринарной отчетности за последние пять лет, показал, что число неблагополучных по лейкозу пунктов в целом по РФ возросло с 1910 до 3153, т.е. больше, чем в 1,5 раза. Наибольшее количество неблагополучных пунктов отмечено в Северо-Западном регионе - 578, Уральском - 444, Центральном - 378.
За это время количество больного поголовья увеличилось с 93,4 до 113,2 тысячи, а инфицированного ВЛКРС - с 1134618 до 1503279. Пало от лейкоза за год 690 голов, утилизировано туш с опухолевыми поражениями -2182. Нужно учитывать так же и то, что отчетные данные далеки от истины. Не везде проводятся поголовные гематологические и серологические исследования, не все хозяйства с установленным лейкозом попадают в отчет как неблагополучные. (Гулюкин, 2000).
Таким образом, можно сделать вывод, что лейкозами болеет крупный рогатый скот в большинстве стран мира с развитым животноводством.
Эпизоотическая ситуация по лейкозу крупного рогатого скота в хозяйствах Грачевского района
Примером сложной эпизоотической ситуации по лейкозной инфекции может служить Грачевский район Анализ таблицы показывает, что в Грачевском районе вирус лейкоза регистрируется повсеместно. Лейкоз в хозяйствах этого района принял стационарный характер, так в 2001 году уровень инфицированности поголовья составлял 33,3%, в 2002 - 46,8%, в 2003 - 42,6%. В 2001 году, для разработки системы противолейкозных мероприятий нами проведено эпизоотологическое обследование в АО "Спицевкое" схп им. Калинина, Грачевского района.
Были изучены хозяйственно-экономические, ветеринарно-санитарная характеристики хозяйства, собраны сведения о крупном рогатом скоте (породный состав стада, плотность размещения стада, принципы получения ремонтного молодняка и другие вопросы).
В схп им.Калинина, Грачевского района хозяйство занимается разведением красной степной породы. Поголовье размещено на 4-х, удаленных друг от друга фермах. Скот размещен в 4-х рядных коровниках, заполненных не полностью. Родильные отделения отсутствуют. Телки случного возраста содержатся изолированным гуртом. Молодняк находится на фермах в отдельных помещениях. Последние 10 лет в хозяйство закупок и ввоза скота не было. Пополнение стада осуществлялось за счет собственного воспроизводства. Осеменение проводилось семенем от быков англерской породы.
Для определения эпизоотической ситуации по лейкозу все поголовье крупного рогатого скота было подвергнуто клиническому контролю. Перед исследованием на лейкоз были учтены сроки проведенных вакцинаций, аллергических реакций и дегельминтизация стада. Для установления кантоминации животных вирусом лейкоза нами были проведены серологические (РИД) — 682 животных и гематологические исследования -340 животных (таблица 2.2.2.1.2.).
Полученные результаты обследования указывают на широкое распространение вируса лейкоза среди крупного рогатого скота.
Степень пораженности (превалентность) животных вирусом лейкоза в среднем составила 76,4%, что указывает на напряженную эпизоотическую ситуацию по лейкозу сложившуюся в хозяйстве.
При гематологическом исследовании серопозитивных животных выявлено 88 голов, имевших отклонения в картине крови от физиологической нормы. В их числе 34 животных имели лейкоцитоз, 36 — подозрительные по заболеванию лейкозом и 18 - гематологически больных лейкозом.
В ноябре 2002 года на мтф№1 гематологическое исследование на лейкоз проведено у 140 животных. В 7 пробах крови наблюдали незначительные отклонения от физиологической нормы. Исследования крови от животных с инвентарными №№ 3515, 6094, 5339, 6193, 5467, 5394, 6076 повторить через 1-2 месяца. У остальных животных показатели крови в пределах нормы.
На мтф№2 исследования на лейкоз у 230 животных проведены серологические (РИД) и гематологические. В РИД положительно реагировало 122 пробы, что составило 53% от числа обследованных. При гематологическом обследовании выявлено 8 животных, имеющих изменения крови характерные для лейкоза. Эти животные с инвентарными №№ 7224, 3780, 7590,4060, 7165, 2364, 3456, 2332 необходимо изолировать из стада и сдать на убой. Кровь от 30 животных (с небольшим лейкоцитозом) — инв. №№ 8232, 7596, 7591, 4477, 4239, 3197, 4228, 7543, 4100, 4474, 4473, 6297, 4021, 0749, 7513, 4443, 2343, 3332, 3789, 2379, 577, 4404, 0756, 3773, 8331, 4440, 4499, 2348, 8842, 7568 следует, через 1-2 мес. подвергнуть повторному исследованию на лейкоз, для исключения подозрения в заболевании. Результаты исследований представлены в На основании серологического обследования выделены 40,4% животных инфицированных вирусом лейкоза.
При гематологическом исследовании серопозитивных животных выявлено 96 голов, имевших отклонения в картине крови от физиологической нормы. В их числе 22 животных имели лейкоцитоз, 62 — подозрительные по заболеванию лейкозом и 12 - гематологически больных лейкозом.
В июне 2003 года, серологическим исследованиям подвергнуто 488 животных. Выявленное инфицированное вирусом лейкоза поголовье обследовано гематологическим методом. Результаты исследований представлены в таблице 2.2.2.1.5.
На основании серологического обследования выделены 11,1% животных инфицированных вирусом лейкоза. Эпизоотическая ситуация по лейкозу в хозяйстве остается сложной.
При гематологическом исследовании серопозитивных животных выявлено 6 голов, имевших отклонения в картине крови от физиологической нормы. В их числе 4 животных имели лейкоцитоз, 2 - подозрительные по заболеванию лейкозом. Гематологически больных лейкозом животных не выявлено.
Для оценки напряженности эпизоотического процесса использовали относительные интенсивные (заболеваемость, превалентность, инцидентность) и экстенсивные (динамика заболеваемости - абсолютный прирост, среднегодовой абсолютный прирост) показатели, позволяющие провести сравнительный анализ лейкозной ситуации в исследуемых хозяйствах в динамике процесса.
Показатель заболеваемости в начале исследований - 2001 году составил:
Динамику заболеваемости (носительства) при лейкозе крупного рогатого скота оценивали по следующим показателям:
Абсолютный прирост - A3 = 3[ — 3t дЗ = 10,6 — 5,1 = 5,5%, где
ЛЗ - абсолютный прирост заболеваемости;
Зі - показатель заболеваемости, зарегистрированный в первом году периода наблюдений;
3t - показатель заболеваемости, зарегистрированный в последнем году периода наблюдений
Среднегодовой абсолютный прирост - A3t= Д3{ = —г—= 2,75%,
где Д 3t - среднегодовой абсолютный прирост заболеваемости; дЗ — абсолютный прирост заболеваемости; t - период наблюдений, лет При эпизоотологическом анализе серологических исследований установлено, что превалентность составила в 2001 году 58,7%, в 2003 году 40,4%.
Последующие наши исследования подтвердили инцидентность проявления лейкозной инфекции, которая составила соответственно в 2001 году - 24,6, 2003 году — 11,1 процента.
Сравнение результатов клинического, серологического и гематологического обследования животных в хозяйстве показало, что количество выявленных серопозитивных (группа риска) коров и телок многократно превышает количество гематологически положительных (больных). Это дает основание для вывода о том, что в нашем случае среди крупного рогатого скота регистрируются животные, преимущественно в инкубационной и бессимптомной стадиях течения лейкозного процесса.
Инфекция распространяется при совместном содержании животных, давших положительные и отрицательные результаты по РИД, при проведении отелов здоровых и инфицированных ВЛ коров в одном помещении и др. Строгое соблюдение правил асептики и антисептики при зооветеринарных обработках также является существенным фактором в прерывании манифестации инфекции.
Ретроспективный анализ результатов исследований на лейкоз животных, начиная с 1997 года, данные собственных исследований в 2002 -2003 г.г. позволили сделать вывод о том, что ежегодная ротация стада не влияет на течение инфекционного процесса и в эпизоотическом процессе отсутствует стадия угасания.
Экспериментальная (искусственная) инфекция овец
Проведенный ретроспективный анализ учета эпизоотической ситуации по хроническим инфекциям крупного рогатого скота (туберкулез, бруцеллез и лейкоз) за 1996-2003годы показал, что из 26 административных районов края в 23 периодически регистрируются неблагополучные по лейкозу, туберкулезу или бруцеллезу пункты. В 21 хозяйстве края имеются животные инфицированные, как вирусом лейкоза, так и туберкулеза или бруцеллеза одновременно.
Наиболее сложная эпизоотическая обстановка сложилась в Красногвардейском, Петровском, Предгорном, Благодарненском, Туркменском, Кочубеевском, Шпаковском районах, в которых на протяжении последних лет ежегодно устанавливается неблагополучие по туберкулезу или бруцеллезу, а в отдельных пунктах по двум инфекциям сразу, на фоне роста процента инфицированных ВЛ животных.
На наш взгляд, показательным является сопоставление результатов выделения реагирующих на туберкулин и инфицированных вирусом лейкоза животных. В таблице 2.2.4.2. приведены данные по 6 хозяйствам, наиболее неблагополучным по двум инфекциям. На примере этих хозяйств можно говорить о совпадении неблагополучия стад одновременно по лейкозу и туберкулезу крупного рогатого скота, то есть, установлен факт одновременного течения инфекции у животных.
Более глубокое изучение эпизоотической ситуации по хроническим (лейкоз, туберкулез) инфекциям было проведено в Предгорном районе. В хозяйствах района, во всех популяциях скота общественного и частного сектора выделяются животные, инфицированные вирусом лейкоза. Уровень инфицированности варьирует от 3,4% (ТОО «Дружба» до 41,3% (племколхоз «Пролетарская воля). Неблагополучными по туберкулезу являются 3 хозяйства (АКФ «Родник», ТОО «Дружба», племколхоз «Пролетарская воля»). Примером сложной эпизоотической ситуации по хроническим (лейкоз, туберкулез) заболеваниям может служить племколхоз «Пролетарская воля». Нами проведено эпизоотологическое обследование трех молочно-товарных ферм хозяйства, на которых содержится 1405 голов крупного рогатого скота, помеси англерской с красной степной и голштинофризской породами, в том числе коров - 685 голов, нетелей — 157, телок до 1 года - 132, от 1 до 2 лет - 291, бычков от 1 до 2 лет - 140.
Молодняк для ремонта маточного стада выращивается на молочнотоварных фермах с момента рождения и до конца его хозяйственной эксплуатации. В хозяйстве имеется план противоэпизоотических мероприятий. При выполнении его на 3 ферме во время очередной туберкулинизации 414 голов крупного рогатого скота выявлено 37 реагирующих животных, на ферму наложены ограничения по туберкулезу. При повторной туберкулинизации обнаружено 14 реагирующих животных.
В дальнейшем проводился систематический аллергический контроль за поголовьем 3 фермы, с удалением положительно реагирующих животных. При этом на основании имеющихся документов о результатах туберкулинизации инфекционный процесс постепенно начал затухать, перестали выделяться реагирующие животные и ограничения по туберкулезу были сняты.
Анализ результатов исследования крупного рогатого скота на лейкоз показал, что еще в 1986 году в хозяйстве регистрировали больных животных. В эпизоотическом журнале имеется запись, указывающая, что 01.03.1986 года краевой ветлабораторией на основании гистологического исследования материала от 2-х убитых коров (мтф№1 и 3), поставлен диагноз -лимфолейкоз. В последующие годы при серологическом исследовании (РИД) крупного рогатого скота разных половозрастных групп инфицированность вирусом лейкоза составила до 53,4% животных к числу исследованных. По данным эпизоотологического обследования хозяйства установлено, что на всех фермах выделяется инфицированный ВЛ скот (1-23%, 2-10%, 3-41,3%). Результаты исследований показывают, что животные, положительно реагирующие на туберкулин, одновременно являлись серопозитивными к вирусу лейкоза.
Полученные данные позволяют говорить о том, что вирус лейкоза крупного рогатого скота вызывает в организме животного иммунодефицитное и иммунодепрессивное состояние. Это в свою очередь обуславливает развитие опухолевых процессов, а также способствует развитию бактериальных (в т.ч. туберкулезных) и вирусных инфекций.
