Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 8
1.1. Популяционная структура городских плотоядных
1.2. Нозологический профиль заразной патологии городских плотоядных
1.3. Хламидийная инфекция - фактор эпизоотического и эпидемического риска
1.4. Хламидия - соактант многокомпонентной инфекционной паразитарной системы
1.5. Эпизоотологическая диагностика хламидийной инфекции
1.6. Терапия хламидиоза плотоядных 31
2. Собственные исследования 35
2.1. Материалы и методы исследований 35
2.2. Результаты исследований 40
2.2.1. Нозологический профиль инфекционной патологии домашних плотоядных в г.Санкт-Петербурге
2.2.1.1. Роль и место наиболее распространенных заразных болезней в формировании общей патологии собак на городских территориях
2.2.2. Характер эпизоотического процесса при хламидийной инфекции домашних плотоядных в условиях Северо-Западного региона
2.2.2.1. Клиническая манифестация различных форм хламидийной инфекции в популяциях домашних плотоядных
2.2.2.2. Оценка эффективности клинических исследований в качестве критерия излеченности (биологического выздоровления) при хламидийной инфекции
2.2.2.2.1. Состояние гомеостаза (по биохимическим показателям) плотоядных при хламидийной инфекции
2.2.2.2.2. Диагностическая ценность оценки биохимических показателей гомеостаза организма больных хламидиозом животных в качестве критерия из-леченности (биологического выздоровления) при данной инфекционной патологии
2.2.2.2.3. Сравнительная оценка разрешающей способности различных лабораторных методов прижизненной диагностики в качестве критерия излеченности (биологического выздоровления) прихламидийной инфекции домашних плотоядных
2.2.2.2.3.1. Клиническая цитология специмента при хламидийной инфекции
2.2.2.2.3.2. Молекулярно-биологический метод диагностики как критерий излеченности (биологического выздоровления) при хламидийной инфекции собак и кошек
2.2.3. Совершенствование региональной научнообоснованной системы эпизоотологического
контроля при наиболее распространенных бактериальных болезнях плотоядных на урбанизированной территории
3. Обсуждение результатов 100
Выводы 109
Внедрение 111
Список использованной литературы 112
- Нозологический профиль заразной патологии городских плотоядных
- Характер эпизоотического процесса при хламидийной инфекции домашних плотоядных в условиях Северо-Западного региона
- Молекулярно-биологический метод диагностики как критерий излеченности (биологического выздоровления) при хламидийной инфекции собак и кошек
Нозологический профиль заразной патологии городских плотоядных
Большинство отечественных и зарубежных исследователей, изучающих проблемы ветеринарного обеспечения промышленных центров, считают, что состоянию здоровья домашних и синантропных животных, как возможным источникам возбудителей болезней человека, следует уделять особое внимание [176, 184, 193, 205]. С этой целью в ряде стран и регионов РФ организован и осуществляется эпизоотологический мониторинг за уровнем заболеваемости животных, в т.ч. и на урбанизированных территориях. Проведены исследования по унификации методических приемов определения нозологического профиля заразной патологии животных различных видов в городах и сырьевой зоне их продовольственного рынка.
Многими исследователями в этом плане особая роль отводится специалистам ведомственной ветеринарной службы. Приводятся достоверные сведения о перечне болезней домашних животных в различных регионах России [5, 28, 39, 45, 207, 208, 209, 210]. Неоднородность проявления болезней и даже перечня регистрируемых болезней подтверждают региональные особенности нозологического профиля и необходимость исследований в области эпизоотологической нозогеографии.
Имеются сообщения о том, что в ряде городов РФ отмечены вспышки природно-очаговых и особо опасных инфекций, когда источником их возбудителей явились домашние непродуктивные и синантропные животные, обитающие вблизи жилищ человека, в хозяйственно - производственных объектах и непосредственно на городских территориях [50, 53, 61, 102]. Увеличение численности домашних непродуктивных животных в условиях большого города и, как следствие, рост численности бездомных животных, способствуют усложнению эпизоотической ситуации.
Ряд исследователей [51, 62, 97, 180], изучая проблему нозологического профиля инфекционных и инвазионных болезней собак, особое внимание уделили проявлению этих болезней в условиях питомников служебного собаководства, расположенных на территориях больших городов.
В настоящее время общеизвестно, что на урбанизированных территориях чаще регистрируются чума плотоядных, лептоспироз, бруцеллез, арах-нозы, незаразные болезни метаболического, травматического и иммунодефицитного происхождения [103, 113].
Многие исследователи для унификации результатов изучения нозологического профиля предлагают стандартизировать измерения степени распространения и тяжести течения болезней животных, используя современные эпизоотологические приемы и закономерности эпизоотического проявления функционирующих инфекционных паразитарных систем в конкретных условиях места и времени [53,128].
В соответствии с последними изменениями в Международных организациях здравоохранения и аббревиатуре Международного эпизоотического бюро (ВОЗЖ) предлагается и новая международная классификация заразных болезней животных. Нозологический профиль патологии животных предлагается вести с учетом этих документов [19, 116, 117], а методической основой его изучения должен быть эпизоотологический надзор [54, 118, 154], эпизо-отологическая диагностика и современная прогностика [59, 61, 72, 114, 163, 188, 189, 215] с ее приемлемыми для эпизоотологии - фактографией, экспертными оценками и верификацией [16, 60, 67, 166, 167,182].
По их мнению, это позволяет расшифровывать экологическую нишу возбудителей, механизм их передачи на популяционном и межпопуляцион-ном уровнях, измерять границы эпизоотического проявления функционирующих паразитарных систем.
Многие исследователи в настоящее время считают целесообразным измерять границы эпизоотического процесса конкретных патологий эпизо-отологическими категориями (показатель неблагополучия, индекс эпизо-отичности, превалентность и инцидентность, годовая и многолетняя динамика и др.) с математическим их выражением [51, 176, 182,189].
По нашему мнению предложенные методы измерения границ эпизоотического процесса отдельных составляющих нозологического профиля и в целом всего нозологического профиля приемлемы не только в системе АПК, но и на урбанизированных территориях.
Все это подтверждает актуальность принятых нами решений по изучению нозологического профиля инфекционных и инвазионных болезней животных в условиях урбанизированных территорий.С целью совершенствования системы оценки эпизоотической безопасности сырьевой зоны продовольственного рынка и в частности по производству продуктов животного и растительного происхождения, поступающих по различным источникам потребителю в условиях регионального продовольственного рынка г. Лукоянова и Лукояновского района, а также для оптимизации методов оценки безопасности продуктов животноводства провели эпизо-отологический мониторинг и скрининговые исследования, как составную часть производственных эпизоотологических экспериментов.
На фактическом материале подтвердили, что методами визуальной и специальной эпизоотологической оценки качества и безопасности продуктов животноводства, поступающих из сырьевой зоны регионального рынка, при предреализационнои ветсанэкспертизе, можно давать заключение только на заведомо качественную и безопасную продукцию. При любом сомнении ветсанэксперта в безопасности и качестве экс-пертируемых продуктов испытывается необходимость в дополнительных лабораторных исследованиях. Первичный биохимический, радиометрический и микроскопический анализ проводили в условиях лабораторной вете-ринарно-санитарной экспертизы на районном (городском) рынке. Во всех случаях, требующих специальных эпизоотологических, санитарно-гигиенических исследований и решения коммерческих задач использовали методы оценки качества и безопасности пищевых продуктов и сырья, основанные на современных лабораторных методах исследования.
В ходе экспериментов подтвердили объективную необходимость проведения таких исследований. С этой целью проанализировали материалы исследований Лукояновской районной станции по борьбе с болезнями животных и Лукояновской межрайонной ветеринарной лаборатории (табл. 2.9) и установили, что применение объективных лабораторных методов оценки качества и безопасности продуктов животного и растительного происхождения значительно повышает разрешающую способность экспертных оценок этих продуктов. Так, использование лабораторных методов позволило ежегодно в 2004-2006 гг. в 30,8±1,2% случаев убеждаться в правомерности сомнений экспертов в безопасности поступившей в реализацию или на переработку говядины, а в 69,2% случаев этими методами исследований опасения были не подтверждены, и данная реализация этой продукции была разрешена в соответствии с правилами ветсанэкспертизы.
Аналогичные сомнения экспертов по качеству свинины в 90% случаев (90,0±4,1%) подтверждены лабораторными исследованиями. Сомнения экспертов при оценке конины подтверждены во всех случаях. Сомнения экспертов подтверждены и при оценке безопасности продуктов и кормов растительного происхождения (в 36,9 - 43,1%).
Полученные результаты исследований с высокой достоверностью подтверждают, что применение лабораторных (объективных) методов (бактериологических, химико-токсикологических, биохимических в сочетании с органолептическими и др.) исследований значительно повышает результативность выявления продуктов животного и растительного происхождения, скомпрометированных как по качеству, так и по ветеринарно-санитарной безопасности.
Результаты лабораторных исследований не только подтверждают опасения экспертов в опасности тех или иных продуктов животного и растительного происхождения, но и позволяют им более результативно и эффективно проводить работу по охране здоровья потребителей.
За анализируемый период по всем видам подконтрольной продукции лабораторными методами исследований в 26,4±1,3% случаев подтверждены их несоответствия по качеству и безопасности. Следует отметить, что в 10,6±0,5% случаев это обусловлено микробной контаминацией этих продуктов, а 89,6±4,3% - их плохими биохимическими показателями.
Результаты исследований использовали при разработке схем моделирования при оценке качества и безопасности продуктов животного и растительного происхождения в сырьевой зоне продовольственного рынка г. Лу-коянова и Лукояновского района (рис. 2.20 - 2.21) и объективно подтвердили, что использование методов современной прогностики и графического моделирования с использованием результатов экспертных оценок качества и безопасности продуктов животного происхождения можно четко представить вероятность изъянов и отклонений при их производстве и проведении экспертизы непосредственно в условиях сырьевой зоны продовольственного рынка, т.е. непосредственно в хозяйствах (в местах заготовки).
Характер эпизоотического процесса при хламидийной инфекции домашних плотоядных в условиях Северо-Западного региона
Изучая структурно-функциональную организацию эпизоотологическо-го надзора и контроля на изучаемой территории, проанализировали их результаты ретроспективной диагностики хламидийной инфекции, осуществляемой специалистами ветеринарных лабораторий (табл. 2.5.).
Установили, что хламидийная инфекция домашних плотоядных в условиях г.Санкт-Петербурга регистрируется круглогодично с выраженными сезонными эпизоотическими надбавками в феврале-апреле и августе-сентябре. Наиболее мощная, ежегодно повторяющаяся сезонная эпизоотическая надбавка, установленная методом математического моделирования эпизоотического процесса хламидийной инфекции, приходится на осенний и ранне-весенний периоды и со значительным поражением поголовья сочленов различных субпопуляций этого вида животных.
На основании ретроспективного анализа функционирования хлами-дийной инфекции в популяциях собак разработали линейно-радианную схему-модель развития эпизоотического процесса этой инфекции среди мелких непродуктивных животных в изучаемом регионе (рис.2.2.) и установили основные алгоритмы эпизоотического проявления этой инфекции в изучаемом регионе.
В ходе эпизоотологических экспериментов изучили характер эпизоотического проявления хламидийной инфекции среди популяций и субпопуляций собак и кошек (табл. 2.6.) и установили, что хламидийная инфекция в популяциях этих животных протекает по общим закономерностям, но с характерными особенностями развития эпизоотического процесса.
Наиболее уязвимыми оказались племенные и безнадзорные собаки (соответственно 37,93 % и 24,15 % от числа обследованных животных).
При комплексном эпизоотологическом исследовании установили, что на урбанизированной территории источником хламидийной инфекции являются зараженные животные, выделяющие хламидии из организма с истечениями, секретами и экскретами.
Многофакторным анализом экспериментальных и производственных эпизоотологических показателей установили влияние ряда неспецифических (условия содержания и кормления, разведения и т.д.) и специфических (уровень резистентности, патогенность возбудителя, сочетанность воздействия) факторов на интенсивность эпизоотического проявления хламидийной инфекции в популяциях.
Разработали и сконструировали линейно-радианную схему-модель структуры риска развития эпизоотического процесса хламидийной инфекции в субпопуляциях мелких непродуктивных животных в изучаемом регионе (рис. 2.3.) и подтвердили, что для спонтанного хламидиоза характерно соче-танное проявление с возбудителями ряда других инфекций (микоплазмами, кишечной палочкой, герпесвирусом кошек, вирусом панлейкопении, токсоплазмами). Все это подтверждает, что инфекционный процесс хламидиоза протекает как микстинфекция (табл. 2.7., 2.8.).
Установили, что наиболее частым соактантом смешанной инфекционной паразитарной системы хламидиоза у домашних плотоядных являются кишечная палочка и золотистый стафилококк.
Разработали линейно-радианную схему-модель функционирования инфекционной микстпаразитарной системы хламидиоза в популяции плотоядных в условиях г.Санкт-Петербурга. (рис. 2.4.).
Установили, что развитие инфекционного процесса микстхламидиоз-ной инфекции в популяциях домашних плотоядных обусловливает более тяжелое течение заболевания и увеличивает количество постинфекционных осложнений и уровень летальности.
Установили, что в изучаемом регионе отмечаются случаи клинической манифестации хронизированной, вялотекущей хламидийной инфекции в популяциях и субпопуляциях домашних плотоядных. Нередко латентные формы хламидийной инфекции среди взрослых домашних плотоядных при снижении естественной резистентности их организма обостряются.
Молекулярно-биологический метод диагностики как критерий излеченности (биологического выздоровления) при хламидийной инфекции собак и кошек
В ходе эпизоотологических экспериментов и в сравнительном аспекте изучили возможность использования в диагностике молекулярно - биологических методов, в том числе и как критерия излеченности ( выздоровления) при хламидиозе плотоядных в связи со способностью хламидий к персисти-рованию, и как следствие возможной низкой концентрацией инфекционного агента в исследуемых образцах.
Исследования проводили по принятым в ветеринарии молекулярно-биологическим методам в соответствии с действующими в настоящее время указаниями по их применению. Использовали метод полимеразной цепной репкции (ПЦР), в основе которого лежит выявление в исследуемых образцах фрагментов нуклеиновых кислот хламидий и многократное реплицирование специфического участка нуклеотидной последовательности, катализируемой ДНК-полимеразой.
В результате амплификации специфического ДНК-фрагмента, мы получали достаточную для визуальной детекции методом электрофореза в ага-розном геле концентрацию синтезированного фрагмента.
При диагностике возбудителя хламидийной инфекции плотоядных из диагностических образцов в качестве исходного материала для ПЦР использовали ДНК и обнаруживали фрагмент генома бактерий рода Chlamydia в 1030 пар нуклеотидов, что служило доказательством наличия в исследуемом материале возбудителя.
Пробирки с продуктами амплификации выставляли последовательно, отбирали из-под слоя масла по 10 - 15 мкл и вносили пробы в лунки геля, подключая камеру к электрическому току (оптимальное напряжение 100 -150В). После чего переносили гель на трансиллюминатор и рассматривали расположение полос ДНК в ультрафиолетовом свете. Элекрофореграммы документировались нами (фотографирование с помощью цифровой техники (фото- или видеокамеры)). Учет результатов ПЦР начинали с результатов амплификации контролен выделения ДНК и контролей ПЦР. В дорожке соответствующей положительному контролю устанавливали специфическую светящуюся полосу оранжевого цвета, соответствующую фрагменту генома бактерий рода Chlamydia в 1030 пар нуклеотидов. Положительные образцы должны содержать специфическую светящуюся полосу большей или меньшей интенсивности строго на том же уровне, что и полоса в положительном контроле.
Отрицательный контроль, как и отрицательные образцы не содержали каких-либо полос, за исключением нечетких утолщенных полос праймер-димеров, которые располагаются в нижней части геля ниже уровня 100 нуклеотидных пар.
При работе с материалом, содержащим большое количество клеток, например кровь или биоптат, в ПЦР участвует большое количество неспецифической геномной ДНК (до 5 мкг в 50 мкл амплификационной смеси), при этом в дорожках геля появляются характерные шмеры, равномерно располагающиеся от лунки до самого низа дорожки или концентрирующиеся около лунки. На фоне такого шмера в положительном образце видна специфическая полоса, а в отрицательном образце полоса отсутствует.
Изучили эффективность применения полимеразной цепной реакции при диагностике острого и латентного течения разных форм хламидийной инфекции домашних плотоядных (табл.2.16., 2.17.).
Установили, что метод полимеразной цепной реакции обладает высокой чувствительностью, но его достоверность выше при остром течении инфекционного процесса, что, по-видимому, связано с правильностью отбора специмента.
На основании полученных результатов исследований разработали линейно-графическую схему-модель эффективности молекулярно - биологических методов в диагностике хламидийной инфекции (рис. 2.18.).
Изучили возможность использования молекулярно-биологического метода (полимеразной цепной реакции) в качестве критерия излеченности (выздоровления) при хламидийной инфекции домашних плотоядных.
С этой целью были этим исследованы методом пробы от животных на хламидийную инфекцию в сроки: на момент обращения за ветеринарной помощью и через 1, 2,4 и 8 недель после начала лечения (табл.2Л 8.).
Эпизоотоло-гическая характеристика животных На момент обращения Через 1 неделюпосле начатоголечения Через 2 неделипосле начатоголечения Через 4 неделипосле начатоголечения Через 8 недель после начала лечения
В ходе исследований установили, что молекулярно-биологическая диагностика (полимеразная цепная реакция) может использоваться в качестве критерия излеченности (биологического выздоровления) при хламидийной инфекции домашних плотоядных. Ограничивающим фактором являются сроки исследования на биологическую «санацию» организма от хламидий. В зависимости от эффективности проводимого лечения сроки элиминации возбудителя из организма больных животных варьируют в пределах 3-6 недель. Установили, что сроки «санации организма» от погибших хламидий зависят от сроков обновления пораженных тканей (не менее 21 дня - срока обновления эпителиальных клеток).
Установили, что наличие погибшего возбудителя в специменте может привести к ложноположительным результатам и исследование материала в сроки, ранее 4-6 недель после проведенного лечения, являются сомнительным.
Установили целесообразность применения ПЦР в качестве критерия излеченности через 4-6 недель после начала лечения.
На основании полученных результатов исследований разработали ли-нейно-радианную схему-модель эффективности ПЦР в качестве критерия из-ле іенности при хламидийной инфекции (рис.2.19.).
Схема-модель эффективности использования ПЦР в качестве критерия излеченности хламидийной инфекции у собак и кошек в условиях изучаемого региона разработана впервые.
Установили, что окончательная постановка достоверного диагноза зависит от определения стадии и типа хламидийной инфекции, подбора высоко специфичных и высокочувствительных методов лабораторной диагностики.
В ходе проведенных исследований установили, что верификация диагноза на хламидийную инфекцию домашних плотоядных должна основываться на обнаружении хламидий как минимум двумя методами, одним из которых является ПЦР.
Установили, что при установлении критерия излеченности (биологического выздоровления) плотоядных при хламидийной инфекции также необходимо пользоваться двумя методами, одним из которых должна быть поли-меразная цепная реакция. Цитологические исследования могут применяться лишь в случае невозможности постановки диагноза другими, более чувствительными и специфичными методами.
