Содержание к диссертации
Введение
1. ВВЕДЕНИЕ 6
Актуальность темы 6
Цели и задачи исследования 8
Положения, выносимые на защиту 9
Научная новизна 10
Практическая значимость работы 10
2. Обзор литературы 12
2.1.Общие сведения 12
2.2. Культурально - морфологические1 й''биохимические свойства пастерелл20
2.4. Специфическая профилактика пастёреллеза 29
2.5. Методы оценки напряженности^ иммунитета 33
3. Материалы и методы исследований 46
3.1. Выделение возбудителей бактериальных инфекций и оценка их культурально-морфологических и биохимических свойств 46
3.2. Оптимизация питательной среды для культивирования вакцинных штаммов пастерелл 48
3.3. Влияние различных компонетов питательной среды на рост вакцинных штаммов пастерелл 49
3.4. Определение оптимального соотношения инактивированных вирулентных штаммов P.multocida в поливалентной формолвакцине, оптимальных иммунизирующих доз, иммуногенной и антигенной активности 49
4. Собственные исследования 51
4.1. Разработка и испытания пастереллезного антигенного диагностикума. 51
4.2. Мониторинг пастереллеза птиц на территории России 54
4.3. Оптимизация питательной среды для культивирования вакцинных штаммов пастерелл 57
4.4. Определение роли различных фракций ферментативных гидролизатов на
питательные потребности вакцинных штаммов пастерелл 62
4.5. Определение оптимального соотношения производственных штаммов в вакцинном препарате и оптимальной иммунизирующей дозы 64
4.6. Оценка иммуиогенной активности поливалентной формолвакцины против пастереллеза птиц при инфицировании вакцинированной птицы различными серовариантами P.multocida 73
4.7. Определение оптимальной иммунизирующей дозы при иммунизации птицы живой сухой вакциной из аттенуированного штамма P.multocida SM-1 74
4.8. Определение напряженности гуморального иммунитета у вакцинированной птицы 76
5. Результаты и обсуждение 79
6. Выводы 83
7. Практические предложения 84
Список литературы 86
ПРИЛОЖЕНИЯ 109
- Специфическая профилактика пастёреллеза
- Влияние различных компонетов питательной среды на рост вакцинных штаммов пастерелл
- Оптимизация питательной среды для культивирования вакцинных штаммов пастерелл
Введение к работе
На современном этапе птицеводство представляет собой непрерывный процесс концентрации производства с углублением его специализации, механизацией трудоемких процессов, массовым внедрением линейной и гибридной птицы, а также использованием сбалансированных комбикормов. Одним из слагаемых успешного развития птицеводства является эффективная борьба с инфекционными заболеваниями, значение которых не уменьшается, а ощутимые экономические потери заставляют обратить на них пристальное внимание и обязывают постоянно совершенствовать диагностику и профилактику.
Пастереллез, вызываемый бактериями вида P. multocida, высококонтагиозное заболевание многих видов сельскохозяйственных и диких животных, пушных зверей и птиц с высокой летальностью и тенденцией к стационарности. Пастереллез регистрируется повсеместно (А.Н. Борисенкова, 1992; D.L. Dillehay et al., 1991; В.К. Yeo et al., 1993; M.C.L. De - Alwis et al., 1993; P.J. Kelly et al, 1994; A. Voigts et al., 1997; PJ. Blackhall et al., 1998). Весьма неблагополучная обстановка, по этой инфекции, сложилась в отдельных птицеводческих хозяйствах нашей страны. При остром течении инфекции гибнет 50 - 80 % птицы, хронический пастереллез сопровождается выбраковкой 10 - 30 % птицы, существенным снижением яйценоскости и ухудшением кондиционности мяса (А.Н. Борисенкова, 1992). В общем комплексе мер, направленных на борьбу с пастереллезом, важное место занимает специфическая профилактика. В настоящее время в этих целях широко используются жидкие инактивированные вакцинные препараты, приготовленные на основе вирулентных штаммов Pasteurella multocida, также применяются живые сухие вакцины из авирулентных штаммов АВ и К Краснодарской НИВС. Ведется разработка вакцинных препаратов на основе антигенных комплексов белковой и липополисахаридной природы, обладающих высокой протективной активностью (R.B. Rimler et al., 1994; В.И. Заерко, 2000).
Жидкие инактивированные вакцины часто не обеспечивают эффективной защиты иммунизированной птицы. Живые вакцины, как правило, обладают значительной остаточной вирулентностью и реактогенностью, что также снижает возможность их применения. Опытные образцы вакцинных препаратов на основе протективных белковых и липополисахаридных антигенов подтверждают свою иммуногенную активность, но полученные данные противоречивы и до конца не изучены. Кроме того, технология их получения не стандартизирована и крайне трудоемка, что приводит к значительному их удорожанию и усложнению контроля качества. Поэтому разработка средств специфической профилактики остается актуальной задачей.
Лабораторная диагностика пастереллеза сельскохозяйственных животных и птицы довольно громоздка (срок исследования до 10 суток). Широко внедряемые в последнее время методы ГТЦР диагностики и ELISA s тесты весьма эффективны (Е. Kawamoto et al.„ 1994, В.А. Hopkins et al., 1998), но крайне дороги. Учитывая высокую контагиозность пастерелл и короткий инкубационный период, разработка дешевых средств, позволяющих подтвердить диагноз на пастереллез, а также определить степень напряженности гуморального иммунитета у вакцинированной птицы в течение нескольких часов в условиях птицеводческих хозяйств, весьма актуальная задача.
Цели и задачи исследования
Целью исследования является совершенствование диагностики и специфической профилактики пастереллеза птиц.
Для достижения цели поставлены следующие задачи:
- выделить и очистить белковую фракцию капсулы штамма P. multocida № 576;
наработать опытные серии антигенного пастереллезного эритроцитарного диагностикума, определить его специфичность и испытать в производственных и лабораторных условиях;
- провести диагностические исследования в 40 - 50 птицеводческих
хозяйствах различного направления в 20-30 регионах Российской Федерации;
- провести отбор производственных и контрольных штаммов;
- оптимизировать питательную среду для культивирования вакцинных штаммов;
- определить оптимальные соотношения инактивированных вирулентных штаммов P.multocida в формолвакцине;
- определить оптимальные дозы и разработать схему вакцинации для
птицы разных возрастных групп и видов;
- разработать нормативно-техническую документацию (технические условия, наставление по применению, инструкцию по изготовлению и контролю) на производство препаратов;
- изготовить экспериментальные и промышленные серии данных вакцинных препаратов и испытать их в неблагополучных по пастереллезу хозяйствах Российской федерации.
Положения, выносимые на защиту
1. Пастереллезный антигенный эритроцитарный диагностикум обладает высокой специфичностью и чувствительностью. Позволяет подтвердить диагноз на пастереллез, а также определить степень напряженности гуморального иммунитета у вакцинированной птицы в течение нескольких часов в условиях птицеводческих хозяйств.
2. Питательная среда для культивирования вакцинных штаммов пастерелл на основе панкреатических гидролизатов рыбной муки, казеина и крови обеспечивает стабильные результаты по накоплению бактериальной массы, не уступающие результатам, получаемым на средах из мясных переваров. 3. Формолвакцина поливалентная, а также живая сухая вакцина против пастереллеза птиц формирует специфический иммунитет необходимой напряженности к возбудителям пастереллеза птиц.
Научная новизна
Разработана диагностическая тест система, позволяющая определять антитела к возбудителю пастереллеза, а также антитела, синтезируемые иммунокомпетентными клетками в ответ на введение вакцинных препаратов, в РПГА непосредственно в сыворотке крови.
Получены данные о роли пастерелл в развитии эпизоотической ситуации, складывающейся на территории отдельно взятых хозяйств.
Из не пищевого сырья (на основе панкреатических гидролизатов крови, казеина и рыбной муки) разработана новая питательная среда для культивирования вакцинных штаммов пастерелл.
Установлены оптимальные соотношения и концентрация инактивированных вирулентных штаммов P.multocida в вакцинном препарате, обеспечивающие формирование напряженного специфического иммунитета.
Разработаны промышленная технология, методы контроля и применения формолвакцины поливалентной против пастереллеза птиц.
Получен опытный образец живой сухой вакцины против пастереллеза птиц из аттенуированного штамма P.muItocida SM-1. Предложенный вакцинный препарат отличается крайне низкой остаточной вирулентностью и высокой протективнои активностью. Практическая значимость работы Определяется серийным изготовлением в промышленных объемах и успешным применением в птицеводческих хозяйствах Российской Федерации формолвакцины поливалентной против пастереллеза птиц. Разработаны, согласованы и утверждены в установленном порядке технические условия на поливалентную формолвакцину против пастереллеза птиц (ТУ № 9384 - 006 - 00479327 - 00 от 06 марта 2000 года), наставление по применению № 13-4-2/1973 от 05 марта 2000года и инструкция по изготовлению и контролю формолвакцины поливалентной против пастереллеза птиц. Выдано регистрационное удостоверение и сертификат соответствия.
Разработана и испытана в производственных условиях живая сухая вакцина против пастереллеза птиц из аттенуированного штамма P. multocida SM-1. Данный препарат отличается крайне низкой остаточной вирулентностью и достаточно высокой иммуногенной активностью, что дает возможность его широкого применения в ветеринарной практике. На этот препарат разработаны проекты технических условий, наставления по применению и инструкции по изготовлению и контролю.
Специфическая профилактика пастёреллеза
Интерес к поверхностным антигенам бактерий тесно связан с попыткой установить корреляцию между химической структурой этих полимеров : особенностями их антигенной специфичности. Из литературных источнико совершенно очевидно, что вирулентность выделяемых от животных штаммо тесно связана с капсулообразованием (G.R.Carter, 1981). Отмечена взаимосвя:: между капсуло и токсино образованием (M.A.Suckow et al., 1991).
Капсула представляет собой внеклеточное слизистое образование, бол или менее выраженный наружный слой в составе клеточной оболочки многих грамотрицательных бактерий. Анализ большого количества штаммов позволил выявить корреляцию между толщиной капсульного слоя и серовариантной принадлежностью штамма. Замечено, что сероварианты А и Д обладают явно выраженной капсулой, соответственно 70-90 и 10-30 нанометров от внешней мембраны (R.V.S.Bain et aL, 1963; N.A.Pyliotis et al., 1981; M.Jacques et al., 1987).
Штаммы P.multocida, относящиеся к серотипу В, при определенных условиях культивирования также формируют капсулу или микрокапсулу. Ряд авторов (Г.Ф.Коломина и др., 1989; V.Boden, 1971; M.Jacques et al., 1987) отмечает зависимость процессов капсулообразования от условий и сроков культивирования бактерий.
Многими авторами подчеркивается сложность антигенного состава капсульной субстанции P.multocida с различной степенью активности отдельных компонентов. В ряде работ (А.П.Юдаев, 1975; А.Н.Борисенкова, 1978, 1984; Г.Ф.Коломина и др., 1989; B.Syuto et al., 1982; O.Kajikowa et al., 1984; M.Tsuji et al., 1988; G.Wand et al., 1994) сообщается о выделении методом гель-фильтрации из капсульных антигенов высокомолекулярных фракций обладающих выраженными антигенными свойствами. Изученш иммунохимических свойств капсул различных серологических варианте; P.multocida продемонстрировало наличие у этого вида хорошо выраженны видовых и типовых антигенных связей, субстраты которых находятся как . капсуле, так и в глубь лежащих структурах (Г.Ф.Бовкун, 1966; Г.Ф.Бовкун и ДР-, 1977).
Капсульное вещество P.multocida является полноценным антигеном и в значительной мере определяет антигенную специфичность штаммов. В ряде серологических тестов (РА, РПГА) была продемонстрирована специфичность калсульных антигенов, на основании чего штаммы P.multocida делятся на серологические варианты. В тоже время имеются работы, указывающие на заметные перекрестные реакции между всеми серовариантами пастерелл (G.H.Prince et al., 1966; S.Prodjohrjonos et al, 1974).
Учитывая сложность антигенного строения капсульной субстанции P.multocida, исследователи расходятся во мнении относительно компонентов, детерминирующих антигенную активность. В одних случаях выраженные антигенные свойства проявляли капсульные полисахариды, в других липополисахариды или белковые компоненты (G.H.Prince et al,, 1966; A.W.Confer, 1993, 1996; M.V.Marandi et al, 1995; C.G.Ruffolo et al, 1996)
Наличие в капсульной субстанции специфического антигена наглядно демонстрирует явление диссоциации. Как известно, различия в химическом составе клеточных оболочек определяют изменения антигенного составЕ клеток (Е.С.Милько и др., 1992) Выявлен конкретный антиген, ответственны! за диссоциацию с молекулярной массой 38 кДа (В.Н.Степаншина и др., 1996 Изучение капсульного материала в серологических реакциях выявил появление дополнительных антигенов у вирулентных штаммов. Капсульнь экстракты из культур, изолированных от клинически здоровых пастереллоносителей содержали 1-2 полосы в РДП, а от больных 3-4. Результаты серологических исследований коррелируют с появлением капсульного слоя у более вирулентных штаммов (Э.И.Вайсман и др., 1976; В.В.Кольчан, 1979; Г.Ф.Коломина и др., 1989; O.Kajikowa et al, 1984).
При анализе электрофоретических профилей капсульных фракций большинство исследователей отмечали в ее составе белковые компоненты с молекулярной массой 32, 35, 38, 40, 60, 75, 87, 90,100, 153, 179, 192 и 204 кДа (В.Н.Степаншина и др., 1996; B.SXove et al., 1994; R.B.Rimler et al., 1994; G.Guang et al., 1994; M.Y.Marandi et al, 1995; A.W.Confer et al 1996; Y.Luoet al., 1997; C.G.Ruffalo et al., 1996; P.E.Ryals et al, 1998)
Многие авторы (S.S.Barculis, 1960; G.R.Carter, 1981; MR.Wessels, 1991) рассматривают капсулу как фактор патогенности. Вирулентность культур P.multocida прямо коррелирует с наличием у микроорганизмов капсулы. Так, при гемосептицемии, тяжелом течении пастереллезной пневмонии у животны? были выделены штаммы пастерелл с явно выраженной капсуло.) (Е.И.Скалинский, 1959; K.L.Heddleston et al., 1964). Штаммы с ослабленно вирулентностью характеризовались отсутствием на их поверхности капсул (А.Н.Борисенкова, 1978).
Основное биологическое значение капсульных полисахаридов пастере связано с антифагоцитарной функцией, что обеспечивает протекцию про различных механизмов клеточной защиты хозяина. Работами ряда авто продемонстрировано антифагоцитарное действие капсульных штаммов Р. multocida серотипа А на фагоциты крупного рогатого скота в тестах in vitro (S.K.Maheswaran et al., 1979; F.M.Collins et al., 1983; L.C.Anderson et al., 1984; H.Ryu et al., 1984; E.Trigo et al., 1988; W.H.Truscott et al, 1988; B.G.Harmon et al., 1991). Несмотря на это, не всегда наличие капсулы коррелирует с вирулентностью штаммов P. multocida и определяет их антифагоцитарную активность.
Тем не менее, замечено, что диссоциативные изменения, связанные с нарушением синтеза капсулы, в частности капсульных полисахаридов, сопровождались снижением или полной потерей вирулентности и иммуногенной активности (В.Б.Федотов, 1981; G.R.Carter, 1957).
К факторам патогенности P. multocida относятся, по крайне мере, еще два фермента, ответственных за инвазивность, - гиалуронидаза (А.Н.Борисенкова, 1979; Т.Рождественская, 1992; G.R.Carter, 1980; M.Pruimboom et al., 1999) и нейраминидаза (V.L.Trola, 1969), а так же продуцируемые ими токсины (M.D.Ticken,1992; O.V.Crasilnicov et al., 1994)
Влияние различных компонетов питательной среды на рост вакцинных штаммов пастерелл
Для выяснения роли различных компонентов питательной среды в процессе роста клеток были проведены биохимические исследования ферментативных гидролизатов, применяемых при изготовлении питательной среды, а также культуральной жидкости посредством гель-хромотографии на колонке 1,2 х 59 см с Sephadex G-25 фирмы "Pharmacia fine chemicals". Величина наносимой пробы составляла 2 см3, а в качестве иллгоэнта использовали 0,15 М NaCL. Оптическую плотность определяли при L = 280 нм. 3.4. Определение оптимального соотношения инактивированных вирулентных штаммов P.raultocida в поливалентной форм о л вакцине, оптимальных иммунизирующих доз, иммуногенной и антигенной активности
Для диагностики пастереллеза, а также определения степени напряженности гуморального иммунитета у птиц нами был разработан пастереллезный антигенный эритроциарный диагностикум, при создании которого в качестве сенситина использовали капсульное вещество, выделенное из клеток эпизоотического штамма Pasteurella multocida № 576, изолированного от павшего от пастереллеза индюка в Ш 1С "2-я Пятилетка" Лискинского р-на Воронежской области. Диагностикум получают путем танизации формализированных эритроцитов, с последующей сенсибилизацией капсульным препаратом в реакционной среде. Оценку напряженности иммунитета проводят в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). За титр сыворотки принимают наибольшее ее разведение которое дает агглютинацию не менее чем на два креста.
Было наработано 14 опытных серии для проверки специфичности и активности в зависимости от сроков хранения. Специфичность пастереллезного антигенного эритроцитарного диагностикума определяли в РПГА с сыворотками, полученными к близкородственным микроорганизмам. Определение специфичности пастереллезного антигенного диагностикума в РПГА
Отсутствие значимой перекрестной реакции с микроорганизмами близкородственных групп свидетельствует о специфичности полученного диагностикума и позволяет использовать его для выявления пастереллезнои инфекции и определения напряженности гуморального иммунитета у птицы, вакцинированной против пастереллеза.
Для определения активности диагностикума, в зависимости от сроков хранения, были испытаны три серии в РПГА с гиперимунными сыворотками полученными от кроликов. Реакцию считали положительной на два креста
Обобщив результаты, представленные в таблице 3, можно сделать заключение, что диагностикум теряет свою активность после 6 месяцев хранения.
В период с 1996 по 2000 год была проведена работа по мониторингу инфекционных заболеваний бактериальной этиологии у птиц. Всего обследовано 41 птицеводческое хозяйство различной специализации (куры, индейки, гуси и утки) яичного и мясного направлений в 24 регионах Российской федерации. (Белгородская область - 2 хозяйства, Вологодская - 3, Воронежская — 1, Калужская -1, Костромская - 1, Липецкая - 5, Московская -9, Новгородская - 1, Нижегородская - 1, Орловская - 1, Омская - 1, Оренбургская — 1, Пермская - 1, Свердловская -1, Тверская - 1, Тульская — 1, Тамбовская - 1, Ульяновская - 1, Челябинская - 2, Краснодарский край - 1, Украина - 1, Хакасия - 1, Мордовия - 2, Марий -Эл - 1.). Было исследовано 10905 проб паренхиматозных органов от 3635 голов павшей и вынужденно убитой птицы.
Из 325 проб (что составило 3 % от числа всех исследованных) выделено 650 изолятов пастерелл, которые по культурально - морфологическим свойствам предварительно были отнесены к роду Pasteurellaceae.
Несмотря на незначительный процент выделения пастерелл, необходимо отметить, что в некоторых из обследуемых хозяйств пастереллез протекал в виде вспышек с острым течением и за 2-3 дня с момента регистрации заболевания отход достигал 15 % от численности всего поголовья. Чистую культуру пастерелл в этих хозяйствах выделяли у 90-95% павшей птицы. Купировать инфекционный процесс удавалось путем антибиотикотерапии с последующей иммунизацией.
При определении биохимических свойств выделенных штаммов пастерелл были получены результаты, которые представлены в таблице 4,
Из данных, представленных в таблице 4, следует, что практически все штаммы по биохимическим свойствам относятся к виду P.multocida. Лишь небольшой процент штаммов (от 2 до 12) проявлял вариабельность в восстановлении нитратов, образовании нитратов, росту на агаре Мак-Конки, образовании кислоты из L - рамнозы и фосфатазном тесте.
Для дальнейшей работы было отобрано 200 изолятов, которые по культурально - морфологическим и биохимическим свойствам относились к P.multocida.
Вирулентные свойства выделенных штаммов оценивали путем постановки биопробы на беспородных белых мышах массой 18-20 граммов. При подкожном введении в область спины суточной агаровой пастереллезной культуры в дозе 0,2 см3 значение LD50 колебалось от единичных клеток до 1000. При постановке аналогичных опытов на разновозрастной птице (куры, гуси, индейки) при внутримышечном введении суточной агаровой культуры в дозе 1 см3 значение LD50 колебалось от 20-50 до 10000 ж.м. клеток.
В результате проведенных исследований был отобран 1 вирулентный эпизоотический штамм серотипа "А", выделенный от павшего индюка в ГППЗ " Вторая пятилетка" Лискинского района Воронежской области, у которого значение LD50 (для белых мышей) составляло менее 10 клеток. А также штамм № 712 - предоставленный ВГНКИ.
Оптимизация питательной среды для культивирования вакцинных штаммов пастерелл
Для глубинного культивирования вакцинных штаммов в промышленных условиях с получением стабильных высоких результатов в накоплении бактериальной массы и одновременном снижении материальных затрат нами был подобран ряд питательных сред на основе следующих ферментативных гидролизатов;
- ПГК с неглубокой степенью гидролиза и содержанием аминного азота не менее 350 мг %, рН-7,8 + 0,2;
- ПГРМ с содержанием аминного азота не менее 500і мг %, рН 7,8 +0,2;
- ПГКр с содержанием аминного азота не менее 500 мг % рН 5,0-6,0, а также пептон, глюкоза, КН2Р04, Na2HP04, NaCl.
При культивировании вакцинных штаммов использовали комбинации ферментативных гидролизатов, состав которых и солевые добавки приведены в таблице 5.
Из данных, представленных в таблице 6, следует, что добавление в питательную среду двойного количества ПГК и ПГРМ не влияет на скорость роста бактериальных клеток и уровень накопления биомассы (сравнение варианта 4 с вариантами 3 и 5). Применение ПГКр в питательной среде позволило значительно увеличить прирост биомассы пастереллезного микроба в 1,5 - 2 раза (сравнение вариантов 1 и 2 с вариантами 3,4 и 5). Таким образом, наиболее оптимальной (для удовлетворения пищевых потребностей отобранных штаммов возбудителей пастереллеза птиц) была среда с ПГКр (вариант 1).
Было проведено исследование ферментативных гидролизатов, применяемых для приготовления питательных сред, а также культуральнои жидкости посредством гель-хромотографии на колонке с сефадексом G-25. На
рисунках 4, 5 и 6 представлены хромотограммы ПГРМ, ПГК, ПГКр.
Для этого в опыт было взято 60 цыплят в возрасте 30 суток, 30 из которых были предварительно проиммунизированы поливалентной формолвакциной против пастереллеза птиц двукратно, внутримышечно. Через 14 суток после введения второй дозы вакцины вся птица была инфицирована (по 10 голов иммунизированных и по 10 не иммунизированных на каждый штамм) вирулентными штаммами P.multocida № 1231 серотип А, Т-80 серотип Д, № 681 серотип В. Результаты опыта представлены в таблице Из данных, представленных; в таблице 16, следует, что исследуемый вакцинный препарат обладает ярко выраженной иммуногенной активностью и предотвращает от заболевания птицу, инфицированную штаммами пастерелл, относящихся к серотипам А, В и Д
. 1. Получен опытный образец пастереллезного антигенного эритроцитарного диагностикума, отличающийся высокой специфичностью и чувствительностью. Диагностикум позволяет контролировать напряженность гуморального иммунного ответа у вакцинированной птицы и эффективно диагностировать пастереллез в птицеводческих хозяйствах. Метод РПГА прост в исполнении и позволяет получить результаты в течение 2 часов.
2. Изучено 650 изолятов пастерелл, выделенных от павших и вынуждено убитых кур, гусей,: индеек и уток. По результатам исследований можно констатировать, что на территории Российской Федерации у птиц в развитии пастереллеза основную роль играют штаммы Pasteurella raultocida серотипа А.
3. Установлено оптимальное соотношение панкреатических гидролизатов рыбной муки, казеина, крови в питательной среде для культивирования вакцинных пастереллезных штаммов. Предложенная питательная среда в 3 раза дешевле традиционных питательных сред на основе мясных переваров и обеспечивает аналогичные выходы по накоплению бактериальной массы.
4. Определено оптимальное соотношение вакцинных штаммов в поливалентной формолвакцине против пастереллеза птиц. Установлены оптимальные иммунизирующие дозы живой и инактивированной вакцины для кур, индеек, гусей и уток разных возрастных групп. Отработаны методы контроля безвредности и иммуногенности,
5. Наработано 38 серий вакцинного препарата, которые проверенные на стерильность, безвредность и иммуногенность.
6. Проведены широкомасштабные производственные испытания в птицеводческих хозяйствах Тамбовской, Орловской и Воронежской областях. При этом проиммунизировано 103880 гусей, 50700 кур, 2508375 индеек. В результате иммунизации осложнений и прорыва иммунитета не наблюдали.
7. На поливалентную формолвакцину против пастереллеза птиц разработаны и в надлежащем порядке согласованы и утверждены технические условия 9384 - 006 - 00479327 от 07 марта 2000 года, наставление по применению от 05: марта 2000года, инструкция по изготовлению и контролю. На данный препарат выдано регистрационное удостоверение и сертификат соответствия качества.
8. На живую сухую вакцину против пастереллеза птиц разработаны проекты технических условий, наставление по применению и инструкция по изготовлению и контролю. При проведении производственных испытаний в птице совхозе \ "Птицевод" Ливенского района Орловской области проиммунизоровано 12000 кур. Прорыва иммунитета и поствакцинальных осложнений не наблюдали..
