Введение к работе
Бруцеллез - зоонозное нифекционно-хроническое заболевание животных и людей. Однако, эта болезнь может проявляться как типичная, острая инфекция с быстрым перезараженнсм поголовья и ярко выраженной" клинической картиной в форме массовых выкидышей или рождения нежизнеспособного молодняка.
Актуальность проблемы. Интересы развития народного хозяйства и охраны здоровья населения требуют от ученых разработки путей быстрейшей ликвидации инфекционных болезней и, п первую очередь, особо опасных и общих для человека и сельскохозяйственных животных. В настоящее время одной из главных проблем в области борьбы с инфекционными заболеваниями является ликвидация бруцеллеза, так как эта инфекция получила значительное распространение не только среди животных, но и среди людей.
В изучение бруцеллеза большой вклад внесли исследователи разных стран, что привело к резкому сокращению заболеваемости, а в некоторых государствах и полной ликвидации этой инфекции (П.А.Вершилоза, 1961; П.Н.Ж'ованик, 1975; И.А.Коснлов, 1975,1976; П.А.Триленко,1976; Т.С.Сайдулдин, 1981; Н.П.Иванов, 1986; А.А.Новнцкий, 1988, 1989 и т.д.). В республике Казахстан бруцеллез до сих пор имеет значительное распространение. Из общего числа имеющегося поголовья 20% являются неблагополучными по этому заболеванию.
Борьба с бруцеллезом слагается из выявления и ликвидации источника возбудителя инфекции, факторов передачи заразного начала и недопущения заболевания здоровых животных.
В этой связи важное место в комплексе протнвобруцеллезных мероприятий отводится диагностике. Существующие средства и методы обнаружения болезни не позволяют выявлять всех бруцеллоноентелей, что
сдерживает оздоровление стада. Кроме того, в разные периоды развития заболевания отмечены свои особенности его проявления, так как нередко происходит изменение антигенной структуры микроба при парази-тиросанин его в макрооргаинзме, что ведет к соответствующим сдвигам иммунного ответа. В таких случаях антитела могут приобретать иную специфичность. С учетом изложенного, совершенствование методов диагностики бруцеллеза остается актуальной проблемой.
Опыт борьбы с бруцеллезом показывает, что в зоне со значительным распространением инфекции..оздоровление животноводческих хозяйств, без применения средств специфической профилактики весьма затруднительно. В этой связи, при оздо-ровленни хозяйств в комплексе противо-бруцеллезных мероприятий для иммунизации животных применяют живые вакцины из штаммов бруцелл, в частности B.abortus 19 и 82, B.melitensis Rev-i (П.С.Уласевкч, 1966; К.П. Студенцов, 1975; КМ. Салмаков, 1977, 1981;О.Ю.Юсупов,1986; А.Л.Султанов, 1992 и т.д.). Следует отметить, что применяемые вакцинные штаммы являются несовершенными, так как они, наряду с относительной нммуногенностыо, обладают выраженными антигенными и патогенными свойствами и несут долго опасности реверсии их в полевые культуры, способные вызвать заболевание животных.
Ряд исследователей предлагают неживые иммуногеиные препараты, полученные путем выделения протективных фракций из бруцелл химическим путем (П.Л.Верцшлова с ссазт., 1974, 1982; В.М. Нифантьев, 1975; П.Е. Игнатов, 1981; Е.Л. Драновская и др., 1981, 1982). Но они не нашли практического применения в связи с недостаточными иммуно-ГС1ШММИ свойствами. В этой связи актуальными являются иссле-дования, направленные на конструирование неживых вакцин, .изыскание средств, усиливающих действие выделенных из бруцелл протективных антигенов,
а также способов их применения. В условиях передержки больного поголовья представляет большой интерес и изыскание антибактериальных препарзтоз и хнмиотерапевтнческнх средств для применения с целью санации инфицированного организма и купирования инфекции.
Все вышеизложенное побудило пас провести исследования по разработке и внедрению более совершенных методов диагностики, средств профилактики, эффек-тивных биологических и хнмиотерапевтнческнх препаратов. Работа проводилась с 1970 по 1997 гг., согласно плановым заданиям (0.51.426.С, 1971-75 гг.; 01.05.Н-2, Н-3, 1976-80 гг.; О.СХ.97.01.02.05.М2,1980-85 гг.; О.СХ.61.02.01.5Д, 1986-90 гг.; 18.01.1.6,-1991 -95 гг.; 02.01 .М, 1996-2000 гг.). Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований
являлось изыскание путей совершенствования диагностики и профилактики
бруцеллеза животных. При этом на разрешение поставлены следующие
задачи:
- оптимизировать методику постановки серологических реакции (РЛ,
РСК, РДСК) в микрообъемах при диагностике бруцеллеза;
- разработать способ приготовления фаговых и цветных антигенов для
постановки РЛ, РСК, РБП при выявлении больных бруцеллезом животных;
- изучить диагностическую ценность антигенов из культур бруцелл с
различной степенью диссоциации для выявления скрытых форм бруцеллеза
у животных;
установить сравнительную эффективность методов дифференциации животных, иммунизированных вакциной из шт. 19 и спонтанно больных бруцеллезом;
разработать метод выявления латентных форм бруцеллеза у крупного рогатого скота с помощью вакцины из штамма 82;
- разработать рецепты питательной среды для выращивания различных
биоваров бруцелл;
- изучить антигенную структуру различных биоваров бруцелл и
возможность их индикации;
изучить нммуиогенность вакцины нз штамма Рев-1 на овцах;
определить антигенные и нмунногенные свойства клеточных структур бруцелл;
- изыскать и испытать иммуностимуляторы для изготовления
протнвобруцеллезных вакцин и изучить эффективность их применения;
- изучить чувствительность бруцелл зс различным антибактериальным
препаратам при бруцеллезе;
- определить влияние некоторых стимуляторов на антибактериальную
'активность препаратов при бруцеллезе;
- изучить эффективность применения антибактериального препарата с
целью купирования заболевания л санации организма животных.
Научная iiommia работы. Изысканы пути совершенствования диагностики и специфической профилактики бруцеллеза животных на основе изучения биологических свойств бруцелл, определения антигенности и иммуногенности отдельных клеточных структур бактерий, изыскания наиболее приемлемых иммуностимуляторов и антимик-робных препаратов, установления оптимальных условий проявления действия биоло-гически активных дериватов бруцелл.
В результате проведенных исследований разработан цветной корпускулярный антиген для РЛ и РБП при исследовании сывороток крови на бруцеллез. Шучена диагностическая ценность препаратов, приготовленных из различных по степени диссоциации культур бруцелл.
Предложен оригинальный метод получения антигена для серологической диагностики бруцеллеза, который содержит бактериофаг,
способный выявляй, противобруцеллезные и антифаговые субстанции (А.с. Ка 1713652, 1991; патент№ 162,1993).
Разработав препарат для аллергической диагностики бруцеллеза (предварительный патент № 4573, 1997).
Изучены оптимальные условия сорбции окрашенных раствором конго-рот стафилококковых культур иммуноглобулина (Jg G) кролика, что позволило разработать способ получения антительного днапюстикума для обнаружения бруцелл и их антигенов в исследуемом материале ( свидетельство Васкомизобретсний Кг 0039810, і992).
Разработан оригинальный рецепт питательной средь:, применение которой увеличивает число бактериологических находок и количество бактериальной массы (А. с. № 523932,1976).
Определена целесообразность применения вакцины из штамма 82 п ' сниженной дозе с целью выявления латентных форм бруцеллеза и создания иммунитета, предотвращающего поствакцинальные аборты (свидетельство Васкомнзобрстений № 0020115, 1991).
Изучены биологические свойства выделенных от животных на территории Казахстана культур бруцелл, чувствительность нх к антибактериальным препаратам и на основе этого, создана антибактериальная композиция для купирования заболевания и санации инфицированного организма (А.с. № 1506659, 1986; свидетельство Васкомизобретсний № 00276П, І991; патент № 38, 1993; предварительный патент № 4564, 1997; Куоліх 45S, 1997).
Определена специфическая устойчивость овец к заболеванию бруцеллезом в отдаленные сроки после иммунизации их вакциной из штамма Рев-1, что позволило определить возможность повышения эффективности применения данного препарата с целью профилактики заболевания.
Изучены протективные свойства композиций, включающих антигенные комплексы бруцелл, пммуномодуляторы н пролонгаторы. В результате создана неживая протнвобруцеллезпая вакцина, индуцирующая достаточно напряженный -иммунитет у крупного и мелкого рогатого скота, верблюдов, свиней (свидетельство Васкомнзобретений № 0027612, 1991; К» 0039815, 1992; предварительный патент № 4571, 1997).
Работа по совершенствованию средств специфической профилактики позволила изыскать, с целью усиления профилактического эффекта^ряд иммуностимулирующих средств (предварительный патент Кг 4565,1997).
Результаты научных изысканий легли в основу более совершенной системы мероприятий по борьбе с бруцеллезной инфекцией с.-х. животных (КуолЬс № 254, 1995), пяти рекомендаций, двух НТД на различные препараты.
Теоретическая и практическая значимость работы. В результате проведенных исследований выявлены пути совершенствования диагностики її профилактики бруцеллеза на основе знаний биологических свойств возбудителя болезни при перазитлрооаник в организме восприимчивых животных (накопление биоваров, имеющих S-, SR-, R-, RL-, L-детерминакткые группы), антигенной н протективнок активности отдельных клеточных структур бруцелл с учетом их изменчивости, изучения возможной иммунной стимуляции микроорганизма и пролонгации раздражающего эффекта, роли фаговых частиц в развитии пато - и иммуногенеза. Полученные нами данные предусматривают:
" . -' с целью экономии дорогостоящих компонентов, повышения производительности труда и сокращения времени постановки диагноза на бруцеллез серологическими методами, использовать микротитраторы (типа «Тите'ртек»), аппараты для проведения пластинчатой реакции и применять
цветной антиген, а также антигены^содержащне фаг, приготовленные кшя согласно А.С 1713592,1991; патенте» 162,1993 г.;
- для одновременного выявления в организме больного їГрОТКВО-
бруцеллезных и антифаговых субстанций, индуцированных соответст
вующими сенелтинами, применять антигены, содержащие фаговые частицы
и корпускулы возбудителя заболевания;
выявление латентно больных и бруцеллоносителей среди иммунизированных животных путем обнаружения в РА я РСК мнкроглобулннов (JgG) или провокации малой дозой вакцины из штамма 82;
использование предложенных нами питательных сред, значительно повышающих число бактериологических находок, увеличивающих накопление бакмассы при изготовлении микробных аіггигеиоз (диагностических и вакцинных препаратов);
применение диагиостикумов, приготовленных из различных по степени диссоциации форм бруцелл, содержащих детермннантные группы, позволяющие выявлять больных животных, пораженных возбудителем болезни с S-, SR-, R- антигенным набором, что значительно (до 15%) увеличивает эффективность диагностики;
иммунизацию живопгых осуществлять разработанным нами протективным антигеном (неживой вакциной), состоящим из дериватов бруцелл, адыованта и иммуностимулятора;
- с целью санации организма больных бруцеллезом животных и снижения
остроты течения болезни использовать-антибактериальный препарат;
- оздоровление от бруцеллезной инфекции поголовья с.-х. гекзотных
проводить путем проведения комплекса мероприятий, включающего
предложенные нами новые диагностические и профилактические средства и
методы их применения.
Инедреине результатов исследований. На основании результатов исследований практике предложены:
- наставление по применению вакцины живой сухой из шт.Рев-1
Б.мелитензис. для иммунизации овец, коз против бруцеллеза и баранов
против инфекционного эпидндимита (Утверждено ГУВ Госагропрома СССР,
1986);
методические указания по постановке и применению диагностических реакииП при исследовании крупного рогатого скота после иммунизации вакциной га шт. 19 в целях дифференциации поствакцинальных реакций от реакций у больных бруцеллезом животных (Утверждены ГУВ МСХ СССР, 1975 г.);
- рекомендации по профилактике и оздоровлению от туберкулеза и
бруцеллеза крупного рогатого скота Торгайской области, 1982;
методические рекомендации «Иммунизация против бруцеллеза нетелей и половозрелых телок» (Утверждены ІТГС Госагропрома КазССР, 1989 г.);
рекомендации «Профилактике бруцеллеза у крупного рогатого скота и выявление толсрантиы?: животных и бруцеллоноентелей» (Утверждены НТС Госагропрома КазССР, 1991 г.);
- комплексный план основных мероприятий по оздоровлению животноводческих хозяйств Казахской ССР от заболеваний животных бруцеллезом л туберкулезом на 1981-1985 гг.; 1985-1990 гг.; 1991-1995 пг.
Предложенные диагностические и профилактические препараты
внедрялись в хозяйствах Длматинской, Акгюбинсхой, Восточно-
-Казахстанской, Жамбыпской, Карагандинской, Костанайской,
Талдыкорганскон и Торгайской областей.
Апяойация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практической конференции молодых ученых и специалистов КазНИВИ и АЗВИ (Алма-Ата, 1984); на заседании сотрудников лаборатории
эпизоотологии, диагностики и профилактики бруцеллеза ВИЭВ ям. Я.Р.Коваленко (1985); республиканских семинарах-совещаниях и конференциях по проблемам бруцеллеза и туберкулеза животных (Акмолинск, 1971; Алма-Ата, 1980, 1983, 1985, 1986, Ї988, 1989, 3993; Петропавловск, 1989, 1992); на заседаниях секции ветеринарии НТС Госагропрома Казахской CCPf І989, 1991); ученых Советов Казахского ЇГИВИ (ежегодно при заслушивании отчетов).
Антибактериальный препарат демонстрировался -на республиканской выставке народного хозяйства КазССР к авторы были удостоєнь? диплома I степенн.2.12.1991 г.
Основные положения, которые выносятся на защиту. Результаты изучения антигенной и протектнвной активности отдельных клеточных структур бруцелл. Способы получения антигенов для иммунологических реакций.
Результаты изучения диагностической ценности препаратов, приготовленных из различных по степени диссоциации культур бруцелл. Способ приготовления аллергена и данные определения его диагностической ценности. Результаты изысканий возможности предотвращения поствакцинальных абортов и выявления латентных форм бруцеллеза с помощью сниженных доз вакцины из штамма 82. Данные по конструированию и испытанию неживой противобруцеллезнон вакцины, включающей антигенные комплексы бруцелл, иммуномодуляторы и пролонгаторы. Результаты изыскания питательных сред, использование которых увеличивает число бактериологических неходок и количество микробной массы при изготовлении бруцеллезных биопрепаратов: Условия сорбции противобруцеллезных (Jg G) глобулинов окрашенными раствором конго-рот стафилококковыми культурами с целью приготовления антительного диагиостикума для индикации бруцелл и их дериватов.
Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 50 работ, где изложены основные положения н выводы, содержащиеся з материалах Всесоюзных и республиканских научных конференций, сборников трудов ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко, ИЭВСнДВ, Казахского НИВИ, журнала «Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана» и других научно-производственных изданиях.
Обтьем и струїступа работы. Диссертация изложена на 426 страницах машинописи, содержит 35 таблиц и 2 рисунка. Она состоит га введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, заключения, выводоз, практических предложений, списка использованной литературы, включающего 300 наименований источников отечественных и зарубежных автороз и приложений.
