Содержание к диссертации
Введение
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ И
1.1. Характеристика и распространение инфекционного гепатита собак 11
1.2. Сведения о возбудителе болезни 15
1.3. Методы диагностики инфекционного гепатита собак 17
1.4. Методы экспрессной диагностики инфекционных болезней 21
1.5. Заключение по обзору литературы 31
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 34
2.1. Материалы и методы исследований 34
2.1.1. Вирусы и вируссодержащие материалы 34
2.1.2. Животные и культуры клеток 35
2.1.3. Антисыворотки 36
2.1.4. Реактивы и препараты 37
2.1.5. Растворы химических веществ 38
2.1.6. Отбор и подготовка проб испытуемого материала 39
2.1.7. Выделение иммуноглобулинов и определение концентрации белка
2.1.8. Методы серологических исследований 41
2.1.9. Статистическая обработка результатов исследований 43
2.2. Результаты исследований 45
2.2.1. Изучение возможности применения средств и методов диагностики аденовирусной инфекции крупного рогатого скота при инфекционном гепатите собак
2 Получение иммунных сывороток при инфекционном гепатите собак, определение их серологической активности и выделение иммуноглобулиновой фракции
3. Отработка условий приготовления антительного иммуносорбента и его использования при обнаружении антигена вируса инфекционного гепатита собак
4. Выбор системы культивирования вируса инфекционного гепатита собак с целью получения диагностического антигена
5. Отработка условий приготовления антигенного иммуносорбента и его использования при обнаружении специфических антител
6. Изучение диагностической ценности разработанных методов диагностики инфекционного гепатита собак
ОБСУЖДЕНИЕ 82
ВЫВОДЫ 92
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 93
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 94
ПРИЛОЖЕНИЯ 105
- Характеристика и распространение инфекционного гепатита собак
- Отбор и подготовка проб испытуемого материала
- Изучение возможности применения средств и методов диагностики аденовирусной инфекции крупного рогатого скота при инфекционном гепатите собак
Введение к работе
К 2000 году в России и Казахстане использовалось около 700 тыс. собак служебных, охотничьих, пастушьих, приносящих 100 млн. рублей дохода. В настоящее время интенсивно развивается домашнее собаководство. При этом численность высокопородных собак, наиболее подверженных инфекционным заболеваниям, возросла по скромным оценкам до 1 млн. Это обстоятельство выдвинуло перед ветеринарной наукой и практикой ряд задач по разработке эффективных средств и методов диагностики и профилактики инфекционных заболеваний. Современная эпизоотическая ситуация остается сложной. Такие инфекционные заболевания собак, как чума плотоядных, парвовирусный энтерит и аденовирусные инфекции представляют серьезную угрозу и способны нанести ощутимый экономический ущерб звероводству (Т. Власова, 1996, В. Гаврина, 2001, С.Снигирёв, И.Гуславский, 2001).
В связи с тем, что по клиническим и патологоанатомическим признакам инфекционный гепатит собак во многом сходен с чумой и парвовирусным энтеритом, а также в связи с отсутствием в продаже коммерческих диагностических препаратов при ИГС, ветеринарные специалисты испытывают значительные затруднения в отношение диагностики этого заболевания. В результате диагноз может быть поставлен неверный и, как следствие, меры борьбы с заболеванием оказываются неэффективными (Е.Данилов, А. Майоров, В. Чижов, 1984, Ж.-П. Самэй, 1999).
Диагностика аденовирусных инфекций плотоядных затруднена из-за изменчивых и малохарактерных признаков заболеваний. В практических условиях предварительный диагноз на инфекционный гепатит ставят на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных. Окончательный диагноз ставят при получении положительного заражения собак, песцов или серебристо-черных лисиц вируссодержащим материалом от павших зверей с признаками гепатита.
Предложенные в настоящее время такие методы лабораторной диагностики инфекционного гепатита собак, как РСК, ИФА и РНГА требуют относительно длительного времени, а также особых условий постановки (Ж. Котард, 1999, А. Монаенков, 2000).
Практически единственным методом диагностики инфекционного гепатита собак, применимым в условиях ветеринарных лабораторий, является гистологический метод обнаружения специфических телец-включений в клетках печени. Однако, с внедрением в практику живых вирус вакцин против этого заболевания было установлено, что вакцинный вирус также вызывает образование аналогичных телец-включений. Дифференцировать поствакцинальные тельца-включения от постинфекционных стало практически невозможным. Кроме того, этот метод применим только для посмертной диагностики заболевания.
В связи с этим, разработка и совершенствование специфических средств и методов лабораторной диагностики инфекционного гепатита собак, применимых в ветеринарной практике, является весьма актуальной проблемой.
Цель и задачи исследования. Исходя из вышеизложенного, целью наших исследований разработка и внедрение простых, обладающих высокой специфичностью и чувствительностью методов диагностики инфекционного гепатита собак.
Для достижения намеченной цели было необходимо решить следующие задачи:
1. Усовершенствовать методы приготовления диагностических препаратов (антигенов и иммуноглобулинов) при ИГС.
2. Разработать способы изготовления антительных и антигенных диагностику мов, пригодных для обнаружения вирусного антигена в пробах патологического материала и специфических антител „ сыворотках крови больных и переболевших животных и отработать на их основе схемы постановки серологических реакций.
3. Определить диагностическую ценность разработанных средств и методов диагностики инфекционного гепатита собак.
Научная новизна. В сравнительном аспекте изучена чувствительность различных перевиваемых культур клеток к вирусу инфекционного гепатита собак. Установлено, что перевиваемая культура клеток MDCK является оптимальной при получении диагностического антигена вируса. Определены технологические аспекты приготовления культурального антигена вируса ИГС. На основе полученного антигена отработана схема приготовления диагностической сыворотки при инфекционном гепатите плотоядных и выделения из неё иммуноглобулиновой фракции.
На основе полученных диагностических препаратов разработаны реакция агглютинации латекса для прижизненной и посмертной диагностики ИГС путём обнаружения антигена вируса в пробах патологического материала и для ретроспективной диагностики
Новизна исследований подтверждена положительным решением о выдаче предварительного патента на изобретение «Способ экспресс-диагностики инфекционного гепатита плотоядных животных».
Практическая значимость работы. Разработаны схемы приготовления диагностического культурального антигена вируса инфекционного гепатита собак и диагностической сыворотки при этом заболевании.
Для прижизненной и посмертной диагностики инфекционного гепатита собак предложены экспрессные методы обнаружения антигена вируса в пробах патологического материала и антител в сыворотках крови больных и переболевших животных, которые прошли апробацию с положительным результатом в ветеринарных клиниках гг. Семипалатинска и Павлодара. Результаты проведённых исследовательских работ представляют теоретическую и практическую ценность, так как являются частью исследований, направленных на создание высокоэффективных диагностических препаратов, и в дальнейшем могут быть использованы в области биотехнологии.
Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации доложены и получили положительную оценку на заседаниях научно-технического совета НИИ прикладной биотехнологии Павлодарского университета 2002-2003 годы, Первом Международном ветеринарном конгрессе, Алматы, 2002 г., Международной научно-практической конференции «Животноводство и ветеринария в XXI веке: Действительность и перспективы развития», посвященной 50-летия образования Семипалатинского зооветинститута, Семипалатинск, 2002, III Международной Научно-практической конференции ( "Социальные и экономические аспекты развития региона: потенциал, проблемы и перспективы", Павлодар, 2003.
Публикация результатов исследований. По материалам исследований опубликовано 6 научных работ, в том числе один предварительный патент на изобретение.
Внедрение результатов исследования. По результатам проведённых исследований в Патентном ведомстве Республики Казахстан получен Предварительный патент на «Способ экспресс-диагностики инфекционного гепатита собак» (заявка № 2003/0871Л 4397/2).
Разработанные методы диагностики прошли апробацию с положительным результатом в ветеринарных клиниках гг. Семипалатинска («Лидия» от 04 ноября 2003 г., «Аида» от 22 декабря 2003 г.) и Павлодара («Сталкер» от 10 марта 2004 г.). Результаты, полученные в ходе выполнения работы используются в учебном процессе Павлодарского университета (акт №6 от 10 марта 2004 г.) Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 104 страницах компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических , предложений, списка источников и приложения. Список использованных источников включает 101 наименований, в том числе 29 авторов дальнего зарубежья.
Экспериментальные данные иллюстрированы 4 рисунками и 13 таблицами.
К диссертационной работе приложены копия предварительного патента на изобретение и акты использования разработанных методов диагностики в ветеринарных клиниках Павлодара и Семипалатинска.
Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:
чувствительность перевиваемых культур клеток к вирусу инфекционного гепатита собак;
- способы изготовления диагностических препаратов для РАЛ при инфекционном гепатите собак;
эффективность применения РАЛ для прижизненной и посмертной диагностики инфекционного гепатита собак.
Характеристика и распространение инфекционного гепатита собак
Инфекционный гепатит собак (Hepatitis infectiosa carnivoram, болезнь Рубарта, инфекционный гепатит плотоядных, эпизоотический энцефаломиелит лисиц) - острая контагиозная вирусная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, катаральным воспалением слизистой оболочки дыхательного и пищеварительного тракта, поражением печени и центральной нервной системы [15,53].
Впервые вирус энцефалита выделил Грин (1928) в США у серебристо-черных лисиц. В СССР это заболевание у лисиц и песцов описали А. П. Киур-Муратов (1933), И. Г. Левенберг (1937), И. А. Бузинов и Т. Я. Ванновский (1938). У собак инфекционный гепатит впервые изучил Рубарт (1947). Вскоре Чеддок (1948), Зиндентопф и Карлсон (1949) и др. доказали, что возбудителем энцефаломиелита лисиц и гепатита собак является один и тот же вирус. Болезнь зарегистрирована в США, Швеции, Дании, Франции, Германии, Англии, Японии, Турции и других странах [53].
Вирус инфекционного гепатита плотоядных долгое время считали патогенным только для собак. Однако в дальнейшем была установлена восприимчивость к нему ряда других животных, в частности лисиц, песцов, волков, шакалов, енотов, хорьков, кроликов, морских свинок и мышей.
По данным Жан-Поль Сомэй наиболее подвержены болезням печени немецкие доги, бассет-хаунды, коккер-спаниели [33].
Инфекционным гепатитом болеют звери всех возрастов, но наиболее восприимчивы к нему молодые животные в возрасте 3-6 месяцев. Звери более старшего возраста гепатитом болеют редко. По имеющимся литературным данным, вирус инфекционного гепатита плотоядных патогенен и для человека. tA/j Ж f- Большинство исследователей придерживаются мнения, что восприимчивые к вирусу инфекционного гепатита звери, бродячие собаки поддерживают вирус в природе и являются первоисточниками распространения болезни среди животных [71].
В Казахстане, как и в России до сих пор отсутствует статистическая база данных численности собак и их социально- биологических категорий. Единичные публикации о поголовье носят характер обобщения численности зарегистрированных животных или их учета в период проведения массовой вынужденной вакцинации против бешенства [56].
В естественных условиях гепатитом и аденовирозом собаки чаще всего заражаются оральным или назальным путем, чему во многом способствует рефлекс обнюхивания этими животными мест выделения мочи и кала. Источником инфекции чаще всего являются взрослые собаки, в организме которых вирус персистирует до 9 месяцев и присутствует в моче, каловых массах, в выделениях из дыхательных путей [63].
В естественных условиях заражения инкубационный период колеблется от 10 до 20 дней и больше, при искусственном заражении он равен 5-6 дням. В зависимости от устойчивости организма и степени вирулентности проникшего в него возбудителя различают острое, под острое и хроническое течение болезни.
Клинические признаки инфекционного гепатита чрезвычайно разнообразны. Часто невозможно поставить диагноз без лабораторных исследований. Однако при типичном течении можно выделить определенные симптомы, характерные для данной болезни.
Острое течение обычно начинается с отказа животных от корма, вялости зверя, температура тела повышается до 41,5С и выше и держится на таком уровне до самой смерти. У заболевших зверей появляется рвота, повышенная жажда. Животные болеют не менее 3-4 дней. Погибают они, находясь в глубоком коматозном состоянии, часто внезапно при отсутствии характерных признаков болезни [22,28].
Характерным при подостром течении являются быстрое исхудание животных, анемия и желтушность слизистых оболочек глаз, ротовой полости, парез и паралич задних конечностей.
Хроническое течение инфекционного гепатита встречается большей частью в стационарно неблагополучных пунктах, зверохозяйствах и реже регистрируется при свежих эпизоотиях. Клинические признаки при этом, как правило, выражены не резко и носят неопределенный характер.
При вскрытии павших зверей отмечают незначительные патологоанатомические изменения. Характерной особенностью остро протекающей инфекции является наличие кровоизлияний в различных органах, которые чаще всего встречаются на серозных оболочках грудной и брюшной полости, а также на слизистой желудочно-кишечного тракта.
При подострых случаях группы зверей имеют удовлетворительную или пониженную упитанность, видимые оболочки бледные "желтушным оттенком. Скелетная мускулатура красновато-желтоватого цвета. Подкожная клетчатка в области груди, паха и реже живота имеет студенистые инфильтраты и кровоизлияния. В грудной и брюшной полостях находят небольшое количество жидкости, окрашенной в бледно-розовый цвет с желтоватым оттенком,
Почки большей частью увеличены в размере, капсула напряжена, но снимается легко. Паренхима пронизано точечными или полосатыми кровоизлияниями. На разрезе рисунок сглажен, границы между корковым и мозговым слоями затушеваны.
Слизистая желудка покрасневшая, набухшая, часто с множественными или полосчатыми кровоизлияниями. В желудке обнаруживают дегтеобразную тягучую слизь с примесью свернувшейся крови. У отдельных зверей на вершинах складок, а иногда между ними видны язвы различной формы и величины. Слизистая оболочка кишечника утолщена, часто с наложениями густой слизи, видны единичные или множественные полосчатые кровоизлияния.
При хроническом течении инфекционного гепатита общесептические процессы сглаживаются, рельефнее выступают явления анемии и резкое исхудание животного.
Отбор и подготовка проб испытуемого материала
Для исследования в серологических реакциях по обнаружению антигена вируса инфекционного гепатита плотоядных использовали следующие материалы:
- Селезёнку, лёгкие, печень полученные от убитых больных и павших животных;
- пробы фекалий, истечений из носа и смывы с ротовой полости, полученные от больных животных;
- инфицированную культуру клеток.
При исследовании проб органотканевого материала и фекалий готовили 20% суспензии на физиологическом растворе, которые однократно замораживали и оттаивали, центрифугировали при 4000-5000 об/мин в течение 30 минут и надосадок использовали для исследования.
При исследования смывов с ротовой полости использовали . физиологический раствор, в который были погружены тампоны после взятия смыва. Для этого заранее заготавливали пробирки со стерильным физиологическим раствором в количестве 2-3 мл, в котором в последующем прополаскивали стерильный ватный тампон, которым протирали ротовую полость собаки.
Инфицированную культуру клеток при развитии ЦПД вируса (при Л поражении монослоя не менее, чем на 60-70%) снимали с сосудов, « концентрировали центрифугированием в 100 раз, замораживали и оттаивали и использовали в качестве испытуемого антигена. Контрольные нормальные культуральные антигены готовили аналогично из незаражённых клеточных культур.
Кровь для исследования от кроликов отбирали из ушных вен, от собак -из вен конечностей. Для получения проб сывороток крови отбор производили в стерильные пробирки, которые помещали в термостат при температуре (37±1)С на 3-4 часа. После отделения сыворотки её сливали в отдельные стерильные пробирки, при необходимости центрифугировали для осаждения форменных элементов крови и использовали в серологических реакциях для обнаружения антител.
Тотальное обескровливание гипериммунизированных животных проводили, забирая кровь из сонной артерии в стерильные мерные цилиндры. Отделение сыворотки проводили по описанной выше методике
Серологические реакции РСК РДП, РН применяли для определения специфической активности сывороток крови животных и выделенных из них гамма-глобулиновых фракций, а также для выявления и количественного определения специфических антигенов вируса инфекционного гепатита плотоядных в органах и тканях заражённых животных и инфицированных клеточных культур.
Постановку РСК осуществляли в серологических пробирках, с общим объёмом реагирующей смеси 0,5 мл в количественном и качественном вариантах.
При количественном варианте РСК испытуемый материал (суспензии органов и тканей в разведениях от 1:20 до 1:10240, сыворотки от 1:2 до 1:64) смешивали о соответствующими специфическим и контрольным нормальным _ диагностическими препаратами, взятыми в рабочем разведении и раствором комплемента, приготовленного исходя из учетверённого предельного титра его в гемолитической системе.
При качественном варианте РСК испытуемый материал (суспензии органов и тканей в разведении 1:20, сыворотки крови - в разведении 1:10) смешивали с равным количеством соответствующих специфических и нормальных сывороток или антигенов в рабочем разведении. Реагирующую смесь объединяли с 9 различными дозами комплемента, приготовленными исходя из увосьмерённого титра его в гемолитичеокой системе, на каждую испытуемую пробу.
После инкубации смеси при температуре (4±1)С в течение 16 -18 часов в каждую пробирку добавляли гемолитическую систему, реакцию выдерживали в термостате при температуре (37±1)С в течение 40-45 минут, после чего проводили учёт результатов реакции. За положительный результат принимали задержку гемолиза на 2 и более креста в двух и более рядом стоящих пробирках о испытуемым материалом и специфическими реагентами при отсутствии задержки гемолиза в пробирках с контрольными отрицательными компонентами реакции.
Постановку РДП осуществляли в чашках Петри с расплавленным и охлаждённым 0,8-1% агаром Дифко в лунках, вырезанных в агаре специальным пробойником в виде «звёздочки». При этом в периферические лунки вносили испытуемый материал, а в центральные - соответствующие специфические и контрольные отрицательные реагенты.
Чашки Петри помещали во влажную камеру и выдерживали при температуре (37±І)С в течение 24 часов, после чего проводили учёт результатов реакции в проходящем свете. За положительный результат принимали появление полос преципитации между лунками с испытуемым и специфическим реагентами при отсутствии таковых между лунками с испытуемым и контрольным отрицательным компонентами реакции.
Постановку РН осуществляли в культурах клеток MDCK, выращенных в пробирках. При определении титра ВН-антител в отдельных пробирках готовили разведения испытуемых сывороток крови от 1:5 до 1:1280, инактивировали их при температуре (56± 1)С в течение 30 минут и к ним добавляли в равном объёме вакцинный штамм вируса инфекционного гепатита собак в дозе 100-1000 ТЦДзо/мл. I \ .}J J
За положительный результат принимали отсутствие ЦДД вируса при его наличии в контрольных, содержащих нормальную сыворотку крови, пробирках.
Вирус инфекционного гепатита плотоядных культивировали в чувствительных культурах клеток.
Для определения инфекционной активности вирус раститровывали в пробирках с культурой клеток, а для получения масштабного количества вирусного сырья для приготовления диагностических антигенов - в однолитровых матрасах и трехлитровых круговых сосудах при роллерной системе культивирования. Заражённые культуры клеток инкубировали при температуре (37±1)С. Наблюдение за развитием ЦПД вели ежедневно путём просмотра зараженных культур клеток под световым микроскопом. Титр вируса рассчитывали по методу Рида и Менча. При развитии поражения монослоя клеток на 70-80% клетки снимали различными способами, суспензию клеток объединяли и использовали в зависимости от цели исследования.
Отсутствие контаминации полученной вирусной массы посторонними микроорганизмами проверяли путём её высева на бактериальные питательные среды.
Изучение возможности применения средств и методов диагностики аденовирусной инфекции крупного рогатого скота при инфекционном гепатите собак
Использование для диагностики любого инфекционного заболевания специфических средств и методов всегда является предпочтительнее гетерологичных. Поэтому следующим этапом наших исследований было разработка и совершенствование специфических средств и методов лабораторной диагностики инфекционного гепатита собак.
Эффективность методов диагностики во многом зависит от активности и специфичности диагностических препаратов, В связи с этим, исследования по разработке диагностических реакций при инфекционном гепатите собак были начаты с изыскания методов приготовления специфических диагностических препаратов.
Одним из важных компонентов серологических реакций являются диагностические сыворотки, в качестве которых при инфекционном гепатите собак длительное время использовали сыворотки крови животных - реконва-л ее центов. В таких сыворотках титр антител колеблется в зависимости от степени проявления клинических признаков заболевания у животных -продуцентов. Поэтому исследователи стали получать сыворотки путём гипериммунизации животных вирусом или антигенами вируса инфекционного гепатита.
По литературным данным известно, что для гипериммунизации применяют органотканевые или культуральные антигены вирусов.
Учитывая это, нами были проведены поисковые исследования с целью получения высокоактивных иммунных сывороток против вируса инфекционного гепатита собак. Объектами иммунизации служили щенки беспородных собак 2-3 месячного возраста и кролики 3-месячного возраста, которых использовали в опыте после проверки проб сывороток крови от них на отсутствие вируснейтрализующих антител против вирусов чумы и парвовирусного энтерита. За 3 недели до начала цикла гипериммунизации животных вакцинировали против инфекционного гепатита.
Для анализа динамики накопления специфических антител от продуцентов на 7, 14, 21, 28 и 35 сутки с момента начала гипериммунизации брали кровь для получения сыворотки, которую исследовали на комплементфиксирующую и преципитирующую активность.
Степень прироста уровня антител в организме гипериммунизированных щенков и кроликов в зависимости от сроков после начала цикла гипериммунизации представлена на рисунке 2.1.
Как видно из данных, представленных на рисунке 2.1., средние значения титров антител у гипериммунизированных щенков собак превосходят аналогичные показатели у кроликов. В связи с этим дальнейшие исследования проводили с сыворотками крови, полученными путём гипериммунизации щенков собак.
Титры КС- и преципитирующих антител против вируса инфекционного гепатита собак постепенно нарастают после первой иммунизации. При последующих введениях вируссодержащего материала титры антител повышаются и достигают максимума на 8-12 сутки после последней инъекции антигена. В последующем титры антител имеют тенденцию к снижению.
В процессе исследований было установлено, что серологическая активность полученных сывороток в значительной степени зависит от вида использованного для гипериммунизации вируссодержащего материала. Максимальные титры антител выявлены в сыворотках крови собак, для гипериммунизации которых использовали органотканевой материал, значения которых оказались выше титров антител в сыворотках крови животных, иммунизированных культу рал ьным антигеном, в РДП в 3-4, в РСК- в 2 раза. Для проверки полученных гипериммунных сывороток крови на специфичность осуществляли постановку РСК и РДП с набором нормальных, гомо- и гетерологичных культуральных и органотканевых антигенов. Результаты этих исследований представлены в таблице 2.4.
Как видно из данных, представленных в таблице 2.4., сыворотки, полученные путём ги пер иммунизации собак органотканевым материалом, обладают высокой степенью специфичности с гетерологичными препаратами. Только с антигенами родственных аденовирусов были получены положительные результаты.
Сыворотки крови, полученные гипериммунизацией собак культу-ральным антигеном, обладали выраженной неспецифической активностью при исследовании их в серологических реакциях с гетерологичными и нормальными антигенами культурального происхождения. По-видимому, при получении антигенов для гипериммунизации не было достигнуто полной очистки препарата от балластных клеточных белков, которые, будучи введёнными в организм собак, также, как и вирусный антиген, индуцировали , образование КС- и преципитирующих антител.
Исходя из соображений специфичности и меньшей серологической активности сывороток крови, полученных путём гипериммунизации собак культуральным антигеном, дальнейшие исследования проводились с сыворотками крови, полученными от животных путём введения им органотканевого материала,
Из литературных данных известно, что сорбенты, сенсибилизированные нативными иммунными сыворотками, обладают низкой специфической активностью. Это, по-видимому, обусловлено наличием в сыворотках крови высокой концентрации балластных белков. Предварительные исследования, проведённые нами по изучению возможности использования нативных сывороток против инфекционного гепатита собак для приготовления антительных диагностикумов, не дали чётких положительных результатов.
В связи с тем, что чувствительность и специфичность твёрдофазовых методов исследования зависят от чистоты сенситина, для приготовления антительных иммуносорбентов используют гамма-глобулины, выделенные из иммунных сывороток или иммунных асцитных жидкостей и моноклональных антител различными методами. При использовании с этой целью глобулиновых фракций достигается концентрация активных белков в единице объёма, что ведёт к повышению чувствительности диагностикума, а удаление альбумина и микроглобулинов способствует повышению его специфичности.
Похожие диссертации на Разработка и совершенствование экспресс-методов лабораторной диагностики инфекционного гепатита собак
