Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Распространение и эпизоотологические особенности эшерихиоза поросят 10
1.2. Характеристика эшерихий и их биологические свойства, определяющие патогенность 16
1.3. Клиническое и патологоанатомическое проявление эшерихиоза у новорожденных поросят 24
1.4. Традиционные лечебно-профилактические препараты и мероприятия при эшерихиозе новорожденных поросят 27
1.5. Микроэкологические принципы профилактики эшерихиоза у поросят 39
2. Собственные исследования 47
2.1. Материалы и методы исследований 47
2.2. Результаты исследований 52
2.2.1. Распространение и этиологическая структура эшерихиоза поросят в Краснодарском крае 52
2.2.1.1. Эпизоотичекая ситуация по эшерихиозу поросят 53
2.2.1.2. Этиологическия структура эшерихиоза поросят 57
2.2.2. Динамика развития и клиническое проявление эшерихиоза у новорожденных поросят 61
2.2.3. Состояние кишечного микробиоценоза и естественной резистентности у новорожденных поросят и заболеваемость их эшерихиозом 65
2.2.4. Роль свиноматок в поддержании и передачи потомству патогенных эшерихий 73
2.2.5. Изменение состояния колонизационной и общей резистентности у свиноматок и поросят под действием гидрогемола 78
2.2.5.1. Влияние гидрогемола на микробный пейзаж кишечника
у свиноматок и их общее состояние 79
2.2.5.2. Влияние гидрогемола на микроэкологические процессы
в кишечнике у новорожденных поросят и на заболеваемость их эшерихиозом 86
2.2.6. Эффективность применения гидрогемола при профилактике эшерихиоза у поросят 96
Выводы 116
Практические предложения 118
Список литературы 119
Приложения 144
- Распространение и эпизоотологические особенности эшерихиоза поросят
- Характеристика эшерихий и их биологические свойства, определяющие патогенность
- Материалы и методы исследований
Введение к работе
Актуальность темы. Несмотря на значительный спад поголовья свиней в Российской Федерации, актуальность инфекционных болезней в свиноводстве не исчезла. В ряду проблемных патологий по-прежнему остаётся эшерихиоз, на долю которого приходится 12,7% павших поросят от общего количества свиней погибших от инфекционных болезней (Байбиков Т.З. с соавт., 2003).
Чаще всего эшерихиозом поражаются поросята первых дней жизни, при этом в отдельных случаях заболеваемость может достигать 80... 100 %, а падеж - 30...50% (Терехов В.И., 2002; Щербаков А.В. с соавт., 2003; Гусев В.В. с соавт., 2004; Романова А.Я., Рубинский И.А., 2005).
В борьбе с данной патологией в настоящее время превалирует стратегия вакцинопрофилактики и антибиотикотерапии. Между тем этот принцип требует глубокого пересмотра или существенной корректировки, поскольку в основе возникновения и распространения болезни играют различные нарушения условий содержания и кормления животных. В связи с чем, эшерихиоз, относят к группе так называемых «факторных» инфекций (Шахов А.Г., 2002; Джупина СИ., 2005). Недостаточная эффективность специфических средств профилактики и антибиотиков при эшерихиозе связана с многообразием антигенного состава и факторов патогенности возбудителя; массово распространенным среди молодняка и взрослых животных иммунодефицитным состоянием; быстро приобретаемой эшерихиями лекарственной устойчивостью (Солдатенко Н.А., 1988; Фурович А.И., Зыска В., 1988; Ковалев В.Ф. с савт., 1989; Ануфриев А.И. с соавт., 2000; Терехов В.И., 2000; Гафаров Х.З. с соавт., 2002). Поэтому в решении проблем, обусловленных патогенными эшерихиями, предлагается идти по пути внедрения специальных технологий, суть которых состоит в ликвидации угрозы ранней контаминации новорожденных животных болезнетворными микроорганизмами и повышения их общей резистентности (Джупина СИ., 2002, 2005).
Перспективным направлением в этом отношении видится метод целенаправленного коррегирующего воздействия на микроэкологические процессы в пищеварительном тракте у новорожденных поросят, в ходе которого ликвидируются условия для паразитирования патогенных E.coli. С этой целью в подавляющем большинстве случаев используются или предлагаются для использования пробиотические препараты состоящие из одного или нескольких симби-онтных микроорганизмов (Ермакова Т.Н., 1994; Каврук Л.С. с соавт., 1997; Субботин В.В., Степанов И.М., 1998; Панин А.Н., 1999; Воробьев А.В. с соавт., 2001; Зинченко Е.В., 2002; Малик Н.И., 2002). Однако, несмотря на их широкое многообразие (около 90), существенных результатов до сих пор не получено, что предполагает разработку нового поколения этих средств (Самуйленко А.Я. с соавт., 2005).
Между тем применение пробиотиков в самой своей сути имеет ряд недостатков, которые сводятся к следующему (Киселев С.А. с соавт., 2004):
микроорганизмы, входящие в состав пробиотиков, не достигают толстого кишечника в достаточном для получения выраженного эффекта количестве;
они плохо приживаются в конкурентной борьбе с условно патогенными бактериями;
состав внедряемой с помощью пробиотиков микрофлоры не воспроизводит все видовое многообразие нормальной микрофлоры кишечника.
Следовательно, более целесообразным представляется не искусственное заселение кишечного тракта чужеродной микрофлорой в составе пробиотиков, а стимулирование развития собственной симбионтной микрофлоры с помощью средств, положительно влияющих на их метаболизм, а следовательно и размножение. Вещества, которые избирательно стимулируют рост или метаболическую активность одной или нескольких групп симбионтных бактерий, обитающих в толстом кишечнике названы пребиотическими или бифидогенными (Шендеров Б.А., 2001). К группе таких препаратов относится гидрогемол, представляющий собой кислотный гидролизат крови с органическими кислотами
7 (Терехов В.И., 2001). При испытании на лабораторных животных и поросятах-отъемышах у гидрогемола отмечены выраженные иммуномодулирущие, бифи-до- и лактогенные свойства, а также значительная профилактическая эффективность при колиэнтеротоксемии у поросят-отъемышей (Терехов В.И. с со-авт., 2001,2003; Тельнов С.Н., 2002).
Цель и задачи исследований. Основной целью работы являлось изучение эпизоотической ситуации по эшерихиозу поросят в Краснодарском крае, установление механизмов развития инфекции и изучение возможности использования препарата «Гидрогемол» для профилактики эшерихиоза у новорожденных поросят.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
Установить распространение, этиологический профиль и клиническое проявление эшерихиоза у новорожденных поросят в Краснодарском крае;
Выяснить взаимосвязь сроков развития колидиареи от состояния кишечного микробиоценоза и резистентности новорожденных поросят;
Определить роль свиноматок в развитии у потомства диарей эшерихиозно-го происхождения;
Изучить возможность использования гидрогемола с целью направленного регулирования микроэкологических процессов у новорожденных поросят и профилактики у них колидиареи;
Установить эффективность применения гидрогемола при профилактике эшерихиоза у новорожденных поросят.
Научная новизна. Впервые проведены обобщающие исследования, характеризующие распространение и этиологический профиль эшерихиоза поросят в Краснодарском крае. Установлена взаимосвязь между формой клинического проявления и этиологическим фактором эшерихиоза у поросят. Изучена динамика становления кишечного микробиоценоза и иммунной системы поросят в первую декаду жизни и влияние их уровня на заболеваемость колидиа-реями. Определена степень контаминации супоросных свиноматок патогенными эшерихиями и их роль в передаче возбудителей эшерихиоза потомству. В
8 научно-производственых опытах доказана возможность использования гидро-гемола для коррекции и направленного регулирования микроэкологических процессов в кишечном тракте у свиноматок и поросят с целью профилактики колидиареи.
Научная новизна работы подтверждена патентом на изобретение №2293552 от 20.02.2007 («Способ профилактики диареи у поросят»).
Практическая значимость. Установлена этиологическая значимость отдельных серологических вариантов кишечной палочки в патологии у поросят на фермах Краснодарского края. Описаны различные клинические формы проявления эшерихиоза у новорожденных поросят, установлена роль свиноматок в поддержании патогенных кишечных палочек и передачи их потомству. Разработан, испытан и предложен ветеринарной практике эффективный способ неспецифической профилактики колидиареи у новорожденных поросят.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы были доложены на третьем международном симпозиуме «Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии» (Санкт-Перербург, 2005), Сибирском международном ветеринарном конгрессе «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2005), международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных» (Москва, 2006), международной научно-практической конференции «Зоогигиена, ветеринарная санитария и экология - основы профилактики заболеваний животных» (Москва, 2006).
Публикации. По материалам исследований опубликовано 6 научных статей и получен патент РФ на изобретение.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Эшерихиоз поросят имеет широкое распространение на фермах Краснодарского края, при этом уровень заболеваемости напрямую связан с количеством поголовья, а клиническое проявление - с биологическими свойствами возбудителя.
Развитие колидиареи у новорожденных поросят следует рассматривать с позиции глубоких нарушений в кишечном тракте колонизационной резистентности и низкой иммунной защиты.
Своевременное предупреждение инфицирования патогенными эше-рихиями новорожденных поросят за счет дачи им и свиноматкам до опороса и после опороса препарата «Гидрогемол», является эффективным методом профилактики колидиареи.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 145 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводов, предложений, списка литературы и приложение. Список литературы включает 218 источников, в т.ч. 156 отечественных и 62 иностранных. Работа содержит 23 таблицы и 3 рисунка.
Распространение и эпизоотологические особенности эшерихиоза поросят
Эшерихиозом поражается молодняк свиней в возрасте от 2...3 дней до 5...6 месячного возраста и в зависимости от факторов патогенности возбудителя проявляется различной симптоматикой — септицемией, диареей, отеками (Терехов В.И. с соавт., 2006). Что касается заболевания новорожденных поросят, то чаще всего у них констатируют протекание болезни в двух формах — септической и энтеритной (Коляков Я.Е., 1974; Кабанков Ю.С., 1981; Малахов Ю.А. с соавт., 1993). В связи с чем, в методических указаниях по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных (2000) дается следующее определение болезни: «Колибактериоз (эшерихиоз, колидиарея, коли-инфекция) — остропротекающая инфекционная болезнь молодняка животных всех видов. Протекает в септической (колисептицемия) или энтеритной (колидиарея) формах».
Эшерихиоз поросят широко распространен во всем мире и является проблемой как для крупных так и мелких ферм.
Аналитические исследования, проведенные группой отечественных ученых во главе с Т.З.Байбиковым (2003) показали, что в России в среднем за последние 5 лет количество неблагополучных по эшерихиозу поросят пунктов составило 3688 в которых заболело 144399 и пало 43721 животных.
В.В.Гусевым с соавт.(2004) был осуществлен мониторинг бактериальных инфекций поросят в 11 регионах Российской Федерации за период с 2000 по 2003 г. который показал, что в 74% случаях диареи у поросят обусловлены эшерихиями, сальмонеллами, стафилококками, стрептококками, пастереллами, гемофилами и актинобациллами. В подавляющем большинстве случаев (43,1 %) причиной острых кишечных инфекций у поросят были эшерихии.
А.В.Щербаков с соавт.(2003) сообщают, что в ходе многотысячных исследований с использованием ГТЦР-диагностики проведенных за период с 1998 по 2003 г. было установлено, что ведущую роль в развитии заболеваний желудочно-кишечного тракта поросят первых дней жизни в хозяйствах Московской, Нижегородской, Владимирской, Ярославской, Новгородской, Оренбургской и Кемеровской областей играют энтеротоксигенные эшерихии, которые ими обнаруживались в патологическом материале в 90% случаях.
Л.Я.Романова и И.А.Рубинский (2005) отмечают, что колибактериоз поросят является одной из серьезнейших проблем свиноводства Свердловской области. По причине инфекции от рождения до отъема погибает 19,1% приплода, причем до 80% падежа приходится на первую неделю жизни.
А.Г. Шахов с группой сотрудников (2000) при исследовании патологического материала от больных и павших поросят-сосунов из 187 хозяйств Воронежской, Липецкой, Тамбовской, Волгоградской, Курской, Орловской, Тульской, Белгородской, Псковской и Самарской областей диагностировал колибактериоз в 23%о случаях.
О проблеме эшерихиоза поросят для хозяйств Среднего Поволжья и Северного Кавказа сообщают И.К.Тутов и Э.В.Олиферова (1997), Х.З.Гаффаров с соавт.(2002), С.Н.Золотухин с соавт.(2002), Э.П.Карева с соавт. (2002), А.В.Скориков с соавт. (2004).
Эшерихиоз новорожденных поросят является актуальным заболеванием не только для свиноводства России, но стран ближнего и дальнего зарубежья. Несмотря на высокий технологический уровень отрасли в таких странах как Германия, Польша, Австрия, Италия, Англия, Франция, Япония, Южная Корея значительный отход поросят в первые 10 дней жизни побуждает ветеринарных специалистов изучать биологию возбудителя и заниматься разработкой средств профилактики и терапии (Hoerugel К. et al., 1984; Reynaud G., 1984; Wathes CM. et al, 1985; Vallisneri A. et al., 1985; Waldmann K. H., 1988; Cieslicki M, 1989; Tarasiuk K. et al., 1993; Тейлор Д. Дж., 2000; Kim J. et al., 2001; Matayoshi M. et al. 2001; Гельвиг Э.-Г., 2003; Dacko J. et al., 2004; Uemura R. et al., 2004). О масштабах экономических потерь от эшерихиоза можно судить по информации Х.З. Гафарова с соавт. (2002), который приводит сведения о том, что в США ежегодные потери, связанные с гибелью поросят составляют 95 млн. долларов, в том числе от эшерихиоза — 48.. .71 млн.
Не лучшая обстановка по колиинфекции и у наших ближайших соседей — Украине и Белоруссии, там проблема стоит также остро как и в России о чем сообщают А. Головко, В. Ушкалов (1997), О. Кальницька (2000), Б. Стегний, Т. Верещака (2002), А.А. Гутковский с соавт. (2002, 2004), Д.В.Потапчук и К.Н.Крыжевич (2005). Данными авторами отмечается, что колибактериоз характеризуется периодическими вспышками даже в тех хозяйствах, где свиноматки вакцинируются биофабричной гидроокисьалюминевой вакциной.
Эшерихиоз новорожденных поросят протекает как типичная энзоотия, характеризуясь периодическими вспышками, предпосылками для которых являются снижение общего санитарного уровня фермы, повышенная влажность в помещении, концентрация поголовья, низкое качество кормов и особенно наличие в них микотоксинов (Липатов A.M., Липатова О.А., 2002). Поэтому заболевание чаще проявляется в период с октября-ноября по март-апрель месяц. Немаловажное значение для возникновения эшерихиоза среди подсосных поросят имеет состояние здоровья свиноматки, поскольку агалактия или низкое качество молозива снижают резистентность приплода и повышают его чувстив-тельность к заболеванию (Мисайлов В.Д., 2002; Гельвиг Э.-Г., 2003, Романова Л.Я., Рубинский И.А., 2005; Jerkovic I. et al., 1984). Кроме того, группой ученых из Германии (Hoeruegel К. et al, 1984) было установлено, что на заболеваемость новорожденных поросят эшерихиозом влияют такие факторы как живая масса при рождении и генетическая предрасположенность некоторых линий. Ими было установлено, что при живой массе 0,8...0,99 кг заболеваемость колебалась от 10 до 30%, при живой массе 1,2...1,39 кг— 10...21%, а при живой массе 2 и более кг — от 4 до 9 %. В группе поросят родившихся от хряка с генотипом 01 заболело 8,2 % животных, с генотипом 11 — 18,7 %, а с генотипом 250 — 13,4%. О значении генетического фактора, как предрасполагающего к заболеванию поросят эшерихиозом, указывают также Panciroli и Giraldello (1985). На восприимчивость новорожденных поросят к кишечным инфекциям, в том числе и эшерихиозу сказывается и такая их физиологическая особенность как ахлогидрия и низкая протеолитическая активность пепсина. Свободная соляная кислота появляется в содержимом желудка поросят только в 25-дневном возрасте, а активность пепсина достигает максимальной величины лишь к 60 дню жизни (Сорокалетова В.М., 2004).
Х.З. Гафаров с соавт. (2002) отмечают, что эшерихиоз регистрируется в любое время года, при этом на небольших фермах чаще всего заболевают поросята со 2...3 недели жизни, а на крупных фермах и комплексах болезнь приобретает стационарный характер, где болезнь проявляется уже в первую неделю жизни поросят.
Между тем, возраст поросят, когда они становятся чувствительными к возбудителю инфекции, достаточно динамичный критерий, поскольку он зависит от таких параметров как молочность свиноматки, температура, влажность, газовый состав и санитарное состояние помещения, длительность регистрации болезни, пути, сроки и доза заражения, а также вирулентность возбудителя (Pancirollo G., Girardello G., 1985; Waldmann К.-Н., 1988).
Проведя многочисленные опыты и наблюдения Wathes et al. (1985, 1988) установил, что колибактериоз новорожденных поросят чаще возникает при относительно низкой температуре (15 С) и высокой (более 30 %) влажности. Заражение происходит через носовую и ротовую полости, а также при контакте ануса с инфицированной поверхностью. На тех фермах, где эшерихиоз имеет стационарный характер заболевание, как правило, проявляется с 1...5-дневного возраста, причем до отъема от свиноматок поросята могут переболеть дважды (Прудников СИ. с соавт., 1985; Табаков Г.П., 1988; Ковальчук Н.М. с соавт., 2000).
Заражение происходит преимущественно алиментарным путем. Для новорожденных поросят основным источником возбудителя являются свиноматки, которые интенсивно выделяют эшерихий во внешнюю среду с испражнениями, при этом контаминируется не только пол, стены станка, но и кожные покровы самой матки, через которые и происходит заражение. В.В. Никольский с соавт. (1978) приводит данные о том, что 96,9 % холостых и 45 % глубокосупоросных свиноматок постоянно являлись выделителями энтеропатогенных типов кишечных палочек. В таких условиях из фекалий приплода энтеропато-генные эшерихии выделяются уже в первые дни жизни.
Источником возбудителей эшерихиозов у поросят могут быть не только их матери, но и больные и переболевшие поросята (особенно при растянутости туров), а также другие животные, например телята (Бурдейный В.В. с соавт., 1986). Ю.Г. Степаншин с соавт. (2005) отмечают, что поросята могут быть носителями возбудителей колидиареи новорожденных поросят, колидиареи поросят послеотъемного периода (0157:К88+; LT+; 0157:F18+), отечной болезни поросят (0157:F18+).
При наличии внутриутробного пути заражения заболевание у поросят клинически проявляется уже через несколько часов (Никольский В.В. с соавт., 1978; Тугаринов О.А., 1987; Беднягин В.Е, 2000). При этом возбудители эшери-хиоза могут быть причиной абортов, недоразвития плодов и рождения поросят с различными физическими аномалиями (Беднягин В.Е., 2000).
Эпизоотолоический мониторинг за эшерихиозом осуществляется за счет таких маркеров как О-антигенная принадлежность и наличие специфических факторов адгезии. Как показывают данные литературы в различных регионах России и других странах этиологический состав болезни неодинаков. Это связано с большим количеством серотипов и серовариантов эшерихии. Тем не менее по данным А.Г. Шахова (2002) при обследовании 10 регионов было установлено, что чаще всего эшерихиоз у поросят вызывают такие серотипы E.coli как 01, 02, 04, 08, 015, 026, 078, О103, 0119, 0126, 0137, 0138, 0139, 0141, 0142, 0147, 0149, а также А20, К99, К88, 987Р, F41. Исследования В.В.Гусева с соавт. (2004), проведенные на базе 11 регионов страны, также показали широкий набор эшерихии участвующих в развитии диарей у поросят. Наиболее часто выделялись следующие E.coli: 01, 04, 08, 015, О20, 026, 035, 055, 078, 086, 0103,0111, 0115, 0117, 0119, 0127, 0137, 0139, 0149, а также K88, K99, 987P,F41,F18.
Изучение антигенной структуры возбудителей эшерихиозов в отдельных регионах страны показали, что в Ростовской области превалируют эшерихии серогрупп 08, 09, 035, 078, 0115, 0117, 0119, 0137, 0138, 0139, 0142, 0147, 0149 с пилевыми антигенами К88, К99 и А20 (Кареева Э.П. с соавт., 2003); в Воронежской области — 0139 и 0141 с пилевыми антигенами К88 и А20 (Шум-ский Н.И. с соавт., 2000); в Липецкой области - 08, 09, 0119, 0139, 0149 с пилевыми антигенами К88 и К99 (Жуков И.К., Холев С.А., 2001); в Ставропольском крае — 026, 08, 09 (Тутов И.К., Олиферова Э.В., 1997); в Красноярском крае — К99 и К88 (Ковальчук Н.М. с соавт., 2000); Республике Татарстан - 987Р и F41 (Спиридонов Т.Н. с соавт., 2001).
За рубежом из сведений представленных Ciosek (1983), Jayappa (1984), Greenwood (1986), Tsiloyiannis (2001), Awad-Masalmeh (1983, 1987), Renault (1985), Петков (1986) чаще всего регистрируются E.coli следующих вариантов и типов: в Польше - 0149:К91:К88, 0139:К82, 08:К87:К88, 0141:К85:К88 и 064:К?; США - К88, К99 и 987Р; Австралии - К88ав, К88ас, К99 и 987Р; Греции - 0139.-К12 и 0141:К85ас; Австрии - 0149, 0139, 0138, 0116, 0115, 064, 0141, 0119 и 0149; Франции-0149:К91:К88ас, 0141:К88ас; Болгарии-0147, 08, 0157, 0149, 09 и 045.
Характеристика эшерихий и их биологические свойства, определяющие патогенность
Escherichia coli - типичный представитель рода Escherichia семейства Епerobacteriaceae. Она представляет собой прямые палочковидные бактерии размерами 1,1...1,5 х 2,0...6,0 мкм, в мазках располагается одиночно или парами, по Граму красится отрицательно. У большинства штаммов имеются капсулы или микрокапсулы. Бактерия подвижна (имеются и неподвижные штаммы), аэроб или факультативный анаэроб, температурный оптимум для роста 37С. Ферментирует глюкозу с образованием кислоты и газа. По способности утилизировать лактозу выделяются ферментирующие и неферментирующие эшерихий, они различаются по антигенным свойствам, подвижности, антибиотико-чувствительности. Е. coli оксидаза отрицательна, каталаза положительна, дает отрицательную реакцию Фогес - Проскауэра, не образует H2S, не проявляет уреазную и липазную активность, восстанавливает нитраты, желатину не гид-ролизует, молоко створаживает без пептонизации, часто редуцирует красители. На плотных средах кишечная палочка образует плосковыпуклые опалово-мутные S-колонии 0,3...0,5 см в диаметре с ровными или слегка волнистыми краями либо сухие плоские R-колонии с неровными краями. В проходящем свете S-колонии иногда выглядят зернистыми, колонии патогенных штаммов более мутные. Иногда образуются слизистые М-колонии. На жидких средах растут диффузно, вызывая помутнение и образование осадка либо пленки или пристеночного кольца. Какие-либо морфологические или культуральные особенности между патогенными и непатогенными Е. coli не обнаружены. Их дифференцировка основана на различиях в структуре поверхностных антигенов, среди которых выделяют полисахаридные (О), жгутиковые (Н) и капсульные (К) антигены, обозначаемые арабскими цифрами. В настоящее время выделено 173 О-, 56 Н- и 80 К-серотипов (Энтеробактерии, 1985; Определитель бактерий Берджи, 1997; Медицинская микробиология, 1999).
Согласно современным знаниям, эшерихии, выделяемые при кишечных и септических болезнях человека и животных, подразделяются на энтеропатоген-ные, энтеротоксигенные, энтероинвазивные, энтерогеморрагические и септические (Урбан В.П., Найманов И.Л., 1984; Зароза В.Г., 1991; Улиско И.Н. с соавт., 1996; Ратинер Ю.А. с соавт., 1998; Медицинская микробиология, 1999; Said A.M. et al., 1994). Данная классификация основана на наличии у кишечной палочки определенных факторов патогенности и достаточно условна, т.к. один и тот же штамм может одновременно обладать рядом патогенных свойств.
К энтеропатогенным видам относят эшерихии продуцирующие клеточно связанный протеиновый токсин и энтероадгезивный фактор (Petkov М., 1980; KirchnerA., 1981).
Энтеротоксигенные варианты продуцируют адгезивные антигены и экзотоксины двух типов - термастобильный и термолабильный, именно с ними связывают чаще всего диареи у новорожденных животных (Клеганов В.К., 1982; Романенкова Н.И., 1985; Полякова О.А. с соавт., 1986; Бондаренко В.М. с соавт., 1998; Gaastra W., de Graaf F. К., 1982; Acres S. D., 1985).
Кишечные палочки, способные внедрятся в эпителиальные клетки слизистой оболочки кишечника и размножаться там с последующим проникновением в кровяное русло, называются энтероинвазивными (Полоцкий Ю.Е. с соавт., 1992; Orshov F., Orskov J., 1978).
Энтерогеморрагические клоны Е. coli вырабатывают веро- или шига-подобный токсин, который обуславливает дизентериеподобную диарею и отечную болезнь у поросят (Ратинер Ю.А. с соавт., 1998; Gadleberg О. V., Orskov J., 1984; Shewen P. E., 1988; Smith H. R., et al., 1988; Osek J., 2000; Matayoshi M. et al., 2001; Souza da Silva A. et al., 2001; Dacko J., Osek J., 2004).
Септические E.coli способны не только проникать в кровоток, но и размножаться там, вызывая патологический процесс. Установлено, что кишечная палочка у новорожденных животных может вызывать септический процесс только в случае значительного поступления в кровяное русло, что возможно в естественных условиях при внутриутробном заражении, инфицировании до потребления молозива, когда открыт кишечный гемопоэтический барьер и низком уровне защитно-приспособительных способностей. Патогенность септических эшерихий обусловлена наличием у них эндоксина, плазмид, капсулы и гемолизинов (Senf W., 1978; Runnels P. Z., Moon H. W., 1984; Smith H. W., Huggins M. В., 1985; Contrepois M. et. al., 1986).
Между тем развитие острой кишечной колибактериозной инфекции связывают с наличием 3 групп факторов патогенности (Хмелевская Д.В. с соавт., 1990). Первая группа определяет адгезию и колонизацию, вторая - сообщает устойчивость бактерий к фагоцитам и гуморальным факторам защиты хозяина, третья - обуславливает диарейный и токсический компоненты кишечного заболевания (Петровская В.Г. 1984). Кроме того, В.М. Бондаренко (1999) отмечает, что начальный этап инфекционного процесса включает преодоление естественных барьеров организма хозяина: механического (движение ресничек эпителия, перестальтика кишечника), химического (бактерицидное действие желудочного сока, желчных кислот, лизоцима, секреторных антител) и экологического (антагонической активности нормальной кишечной микрофлоры).
В прикреплении эшерихий и колонизации организма принимают участие фимбриальные структуры, которые являются поверхностными придатками бактерий. В настоящее время у Е. coli, вызывающих диарейные заболевания, выявлено две разновидности адгезивных антигенов - общие и специфические.
Материалы и методы исследований
Работа выполнялась на кафедре эпизоотологии и вирусологии Кубанского госагроуниверситета и хозяйствах Гулькевичского района Краснодарского края с 2003 по 2006 г.г. в рамках общефакультетской темы «Усовершенствование методов снижения заболеваемости, профилактики, лечения и технологии воспроизводства животных» (№ госрегисрегистрации 01200113464). Отдельные этапы исследований осуществлялись на базе Кропоткинской зональной лаборатории и Краснодарской межобластной ветеринарной лаборатории. Статистический материал по эпизоотологии и этиологии эшерихиоза был получен при анализе данных управления ветеринарии Краснодарского края и бактериологического отдела Краснодарской межобластной ветеринарной лаборатории за период с 1993 по 2005 год, а также собственных исследований.
Объектом исследования служили новорожденные поросята и свиноматки крупной белой породы за 2.. .3 дня до и после опороса.
Для изучения степени контаминированности свиноматок патогенными эшерихиями у них отбирали пробы кала из прямой кишки, мазки с 1 см2 поверхности влагалища и сосков вымени. У поросят изучение становления кишечного микробиоценоза проводили при исследовании содержимого тонкого и толстого отдела кишечника через 1, 2, 3, 5 и 10 дней после рождения, в эти же дни изучали показатели морфологического состава крови и иммунного статуса.
Возможность регулирования микроэкологическими процессами в кишечном тракте у свиноматок и новорожденных поросят с помощью пребиотического препарата «Гидрогемол» устанавливали, проведя 3 серии опытов.
В первой серии опытов устанавливали влияние дачи гидрогемола свиноматкам на состояние у них кишечного микробиоценоза и обменных процессов. Препарат давали индивидуально каждому животному прямо в корм находящийся в кормушке за 7 дней до опороса и 3 дня после него 2 раза в день по 200 мл. Перед дачей препарата у 3 животных из контрольной группы и 3 животных из опытной группы, а также за 1...2 дня до опороса и 3 дня после опороса у всех 6 наблюдаемых животных провели микробиологические исследования фекалий взятых непосредственно из прямой кишки. У этих же свиноматок после опороса исследовалась сыворотка крови на химический состав. Критерием оценки положительного влияния гидрогемола на организм свиноматок служило повышение сохранности приплода и увеличение молочности.
Во второй серии опытов изучали прямое и опосредованное влияние гидрогемола на заболеваемость новорожденных поросят колидиареей и их рост и развитие. Для чего было сформировано 3 группы, каждая из которых включала в себя 8 гнезд (станков) при этом в 1 группе было 86 поросят, во второй -91, третьей - 90.:
1 группа - гидрогемол давали и свиноматкам (по ранее описанной схеме) и поросятам, последним препарат вводили в рот из шприца, начиная с первого дня после рождения в течение 3 дней подряд 1 раз в сутки в дозе 3...5 мл;
2 группа - гидрогемол получали только свиноматки;
3 группа - ни свиноматки, ни поросята гидрогемол не получали.
Все группы находились в одном корпусе при одинаковых условиях кормления и содержания, одном и том же обслуживающем персонале. Во время опыта осуществлялись все предусмотренные технологией манипуляции и ветеринарные обработки. С целью изучения состояния колонизационной и общей резистентности у 5 поросят из каждой группы на 5 и 21 сутки отбирали пробы фекалий и кровь для микробиологических и имунногематологических исследований, а кроме того сразу после рождения и на 21 сутки проводили взвешивание всех поросят для выяснения молочности свиноматок и интенсивности роста поросят. В третьей серии опытов были проведены производственные испытания по изучению эффективности метода направленного регулирования микроэкологических процессов в пищеварительном тракте с использованием гидрогемола для профилактики эшерихиоза у новорожденных поросят. Опыты проводились на 269 свиноматках и 2955 поросятах в течение 10 месяцев на базе ОПХ «Кубань» и СПК «Отрадо-Кубанский» Гулькевичского района. Критериями оценки эффективности применения гидрогемола служили показатели заболеваемости, сохранности, продуктивности поросят и окупаемость препарата.
Всего в ходе решения поставленных задач было проведено 197 бактериологических, 55 гематологических, 55 иммунологических и 16 биохимических исследований. Изучены биологические свойства и чувствительность к антибиотикам у 160 штаммов кишечной палочки. В научно-производственных опытах было использовано 560 свиноматок и 6272 поросенка.
Бактериологические исследования по постановке диагноза на эшерихиоз проводили общепринятыми методами согласно «Методическим рекомендациям по бактериологической диагностике колибактериоза животных и птицы» (Москва, 2000). Изучение аутофлоры свиноматок и поросят проводили по упрощенной методике, предложенной И.А. Бочковым с соавт. (1989) с использованием схемы А.З. Смолянской с соавт. (1985). Серологический профиль выделенных Е. соП устанавливали с помощью типоспецифических О-агглютинирующих колисывороток (Армавирская биофабрика) и адгезивных колисывороток (ВНИИ прикладной микробиологии, г. Оболенск). Патогенность выделенных изолятов Е. соП определяли при внутрибрюшинном заражении белых мышей взвесью суточных агаровых культур в дозе 500 млн бактериальных клеток. Способность продуцировать гемолизины выявляли на 5% кровяном агаре. Чувствительность к антибиотикам определяли методом диффузии в агар с помощью дисков (НИИЦ, СПб). Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывали в камере с сеткой Горяева, а лейкоформулу в окрашенных по Романовскому-Гимза мазках крови, концентрацию гемоглобина устанавливали гемоглобинцианидным методом
Оценку иммунного статуса животных осуществляли на основании определения относительного и абсолютного количества лимфоцитов, их популяционного состава, фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов и содержания в сыворотке крови IgM и IgG. Т- и В-клеточные популяции и субпопуляции Т-лимфоцитов определяли в реакции розеткообразования с эритроцитами барана. Субпопуляции Т-лимфоцитов различали по способности образовывать розетки в присутствии теофилина (Т-хелперы не чувствительны к теофилину и в его присутствии образуют розетки, Т-супрессоры чувствительны к теофилину и в его присутствии не образуют розетки), а активные формы этих клеток (ЕА-РОК) - по способности образовывать розетки без дополнительной инкубации. Юные В-лимфоциты дифференцировали по способности образовывать розетки с эритроцитами мыши. Функциональные способности нейтрофильных гранулоцитов оценивали по их фагоцитарной активности (ФАН), фагоцитарному числу (ФЧ) и % переваривания. В качестве объекта фагоцитоза использовалась суточная агаровая культа S.aureus 209Р. Концентрацию иммуноглобулинов определяли иммунодиффузным методом по Манчини, при этом применяли антисыворотки к соответствующим классам Ig предоставленные Всероссийским институтом экспериментальной ветеринарии (г.Москва).
