Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Общие сведения о проблеме иммунопробиотического гомео-стаза. Концепция применения пробиотических препаратов
1.1. Введение 10-12
1.2. Естественная микрофлора желудочно-кишечного тракта жвачных животных 12-18
1.3. Естественная микрофлора желудочно-кишечного тракта свиней 18-22
1.4. Факторы, индуцирующие изменение кишечной микрофлоры 22-27
1.5. Механизмы действия пробиотиков 27-41
1.6. Теоретические основы разработки иммунопробиотических препаратов для ветеринарии 41-47
1.7. Иммунный ответ и механизмы патогенеза при вирусных заболеваниях 47-52
1.8. Иммунная система слизистых оболочек и регуляция иммунного ответа 52-63
1.9. Реакции организма хозяина на кишечную микрофлору 63-68
1.10. Последствия воздействия иммунных реакций на кишечную микрофлору 68-69
1.11. Стимуляция иммунной системы пробиотиками 69-75
1.12. Иммунопробиотические препараты в ветеринарии 75-78
Глава 2 Разработка иммунопробиотических препаратов для ветеринарии
Материалы 79-87
Методы исследования 87-102
3. Результаты исследований
Изучение свойств гибридного белка Т-ФНО-Т 103-115
Изучение свойств препарата неотим 115-135
Результаты изучения пробиотического препарата лактобифид 135-156
Изучение иммунобиологических свойств препарата иммунобак 156-179
Изучение препарата лактоферон 180-222
Характеристика иммунопробиотического препарата бактонеотим 222-233
4. Обсуждение результатов 234-269
5. Выводы 269-270
6. Практическое использование результатов 271
7. Рекомендации в производство 272
8. Список использованной литературы 272-309
Приложение 1 Методические рекомендации по проведению лабораторных и производственных испытаний цитокинов животных 310-318
- Естественная микрофлора желудочно-кишечного тракта свиней
- Изучение свойств гибридного белка Т-ФНО-Т
- Изучение иммунобиологических свойств препарата иммунобак
- Характеристика иммунопробиотического препарата бактонеотим
Естественная микрофлора желудочно-кишечного тракта свиней
Свиньи являются моногастральными животными, в желудке которых происходит в основном ферментативное расщепление пищевых компонентов. Основными местами обитания микрофлоры у свиней является нижний отдел тонкого кишечника, слепая кишка и верхний отдел толстого кишечника. В тонком отделе кишечника происходит симбионтное расщепление крахмала, моно- и дисахаров, в слепой и толстой кишке - бактериальное переваривание целлюлозы и гемицеллюлозы (86). На количественный и качественный состав нормальной микрофлоры кишечника свиней оказывают влияние следующие факторы:
Градиент рН.
В желудке и двенадцатиперстной кишке рН содержимого равен примерно 3,0; вдоль тонкого кишечника рН увеличивается до 7,0 и падает до 6,5 в толстой кишке. В зависимости от толерантности к кислоте популяции микроорганизмов распределяются в кишечном тракте как по численности, так и по составу и количеству видов (292).
Перистальтика.
В разных отделах кишечного тракта наблюдается различная скорость продвижения пищи, связанная с работой мощных слоев гладких мышечных волокон. Желудок животных постоянно наполняется и опорожняется, пища в нем находится довольно длительное время. Затем образовавшаяся масса быстро проходят через двенадцатиперстную и тощую кишку, значительно убыстряясь в тонком отделе кишечника. Слепая кишка свиней постоянно заполнена полупереваренной массой, которая поступает туда и затем выталкивается мощными перистальтическими движениями кишечной мускулатуры. В толстой кишке происходит допереваривание пищевых масс, которое более однообразно, чем в тонком отделе кишечника, эвакуация непереваренных пищевых остатков происходит довольно медленно. Состав микрофлоры в связи с этим меняется довольно значительно. В желудке и верхней части тонкого кишечника количество микрофлоры незначительно, видовой состав беден. В нижних отделах тонкого кишечника и особенно в слепой кишке микрофлора представлена значительно разнообразней. В основном это анаэробные и аэротолерантные бактерии, обладающие способностью к адгезии или высокой скоростью размножения, стрептококки и лактобациллы. Видовой состав микрофлоры и ее количество в слепой кишке свиней близок к таковому в рубце жвачных животных и кишечнике человека. В толстом кишечнике сосредоточено большое количество микроорганизмов, но видовой состав их менее разнообразен. Здесь обнаруживаются в основном бифидобактерии (4).
Селекция кислородом.
Некоторое количество кислорода проникает через стенку тонкого отдела желудочно-кишечного тракта и утилизируется прикрепленными бактериями. Здесь присутствует в основном аэротолерантная микрофлора. Содержание кислорода в содержимом подвздошной, слепой и толстой кишке очень мало. Количество строгих анаэробов увеличивается в кишечнике пропорционально уменьшению кислородного давления (292).
Наличие питательного субстрата.
Желудок животных содержит в основном полуобработанный мацерированный влажный пищевой фарш. В нем, в двенадцатиперстной кишке и верхнем отделе тонкого кишечника ферментативно перевариваются протеины, лекгоусваиваемые карбогидраты и жиры. Дальше недопереваренные продукты, состоящие из отшелушенных эпителиальных клеток, живых и мертвых бактерий, интактных растительных клеток и клеточных стенок растений, проходят через илеоцелакальный объем и. Здесь происходит их анаэробное бактериальное переваривание, которое завершается в толстой и слепой кишке (383). В соответствии с наличием питательного субстрата и пищевыми потребностями распределяются и микроорганизмы.
Нормальная микрофлора взрослых здоровых свиней, размножающаяся в верхней части тонкого кишечника и прикрепляющаяся к эпителиальным поверхностям, яв-ляегся преобладающе факультативно аэробной или нестрого анаэробной, растет при низких рН и существует в довольно низких концентрациях. Количество микроорганизмов последовательно увеличивается от 106КОЕ/мл в верхних отделах тонкого кишечника до 1010 5 КОЕ/мл в толстом кишечнике и до 2х10п/мл в слепой кишке. Функции микрофлоры толстой и слепой кишки подобны таковой в рубце жвачных животных (318). Применение специальной микробиологической технологии для изучения бактерий, связанных со слизистой толстой и слепой кишки здоровых поросят позволило дифференцировать микрофлору, указанную в таблице 3.
Таким образом, очевидно, что микрофлора желудочно-кишечного тракта поросят подобна рубцовой у новорожденных телят. Преобладающими являются молочнокислые бактерии - лактобациллы и стрептококки, вырабатывающие молочную и уксусную кислоты, размножающиеся при низких рН, прикрепляющиеся к несекреторной части желудка, к криптам и ворсинкам двенадцатиперстной, тощей, подвздошной и слепой кишок. Доминирующими видами бактерий являются Lactobacillus amylophitus, Lactobacillus fermenti, Megasphaera elsdenii, Selenomonas ruminantum (345).
Микрофлора пищеварительного тракта птицы соответствует особенностям его строения. Зоб птиц выполняет роль, подобную роли рубца у жвачных животных. Эпителий зоба имеет специфическое чешуйчатое строение, к которому адгезивны особые биотипы лактобацилл, обладающих высокой амилазной активностью. Их наличием определяется протективность против патогенных бактерий. Например, при истощении популяции лактобацилл зоба антибиотиками, здесь увеличивается количество коли-форм (2). Железистый желудок птицы имеет мощные мышечные стенки и примечателен расположением донных желез в системе кармашков, что создает видимость сложных желез. При кормлении зерном и зернопродуктами в тонком кишечнике преобладает микрофлора с амилолитической активностью. В толстом кишечнике птицы преобладают бифидобактерии и неспорообразующие грам-положительные бактерии.
В фекалиях здоровых индюков преобладают кокки Str. faecalis, Str. equinus, бифидобактерии и L. acidiphilus (343, 185).
У пчел основным представителем молочнокислых бактерий является Str. faecium. Видовой и количественный состав молочнокислых бактерий в кишечном тракте рабочих пчел Apis melliiera подтвержден значительным изменениям в зависимости от времени года. Так, в 1 г содержимого кишечника пчел, находившихся в зимовнике до первого вылета, обнаруживается всего сотни клеток стрептококков, к середине мая - десятки тысяч, к началу цветения медоносов их количество увеличивается до десятков миллионов. С начала июля количество молочнокислых бактерий вновь начинает уменьшаться. Видовой состав также значительно меняется. В период зимовки преобладают Str. faecium и L. plantarum, затем преобладает энтерококк, к августу вновь появляется L. plantarum (370).
У лошадей подобно другим видам животных эшерихии и стрептококки встречаются от двенадцатиперстной киши до подвздошной. Lactobacillus spp. являются доминирующими в двенадцатиперстной кишке и на протяжении всего тонкого кишечника. В толстом кишечнике преобладают облигатные анаэробы, бифидобактерии, стрептококки, энтерококки, лактобациллы. Один грамм нормальных фекалии лошадей содержит 105 КОЕ Lactobacillus, 103 КОЕ Clostridia, от 10б до 108 КОЕ Enterococcus, от 105 до 10 КОЕ Enterobacteria и от 103 до 105 КОЕ анаэробных бацилл. На представителей Acinetobacter spp., Staphylococcus spp., коринеморфных бактерий приходится 10 КОЕ (329, 173).
Стрептококки и лактобациллы преобладают в микрофлоре кишечника взрослых здоровых собак, причем количество их возрастает от верхних к нижним отделам пищеварительного тракта. По своему составу микрофлора желудочно-кишечного тракта у собак близка к таковой у человека, отличаясь лишь более высоким содержанием стрептококков и споровых анаэробных бактерий и более низким - неспорообразующих (32). Таким образом, молочнокислые бактерии являются наиболее важными микроорганизмами желудочно-кишечного тракта у всех экономически значимых групп сельскохозяйственных животных и насекомых. Виды лактобацилл, в большей или меньшей степени характерные для кишечного тракта большинства животных и человека - L. acidophilus, L. fermenti и L. salivarus. Другие виды, такие как L. casei и L. plantarum встречаются реже (72).
Изучение свойств гибридного белка Т-ФНО-Т
Гибридный белок является производным природного цитокина - фактора некроза опухолей альфа, трансформированного по N и С концам тимозииом al. Получен методом генной инженерии, кодируется плазмидой pThy325 и представляет собой полипептид с молекулярной массой 23,78 кДа. Белок сконструирован для использования в клинической практике с целью устранения токсических свойств исходного цитокина - фактора некроза опухолей.
Гибридный белок имеет следующую аминокислотную последовательность (рис.2)
Число аминокислот остатков - 216, из них 19 Ale, 8 Arg, 8 Asn, 13 Asp, 2 Cys, 10 Gin, 22 Glu, 11 Gly, 3 His, 11 He, 20 Leu, 14 Lys, 2 Met, 4 Phe, 11 Pro, 19 Ser, 12 Thr, 2 Trp, 7 Tyr, 18 Val. Расчетная изоэлектрическая точка pl=4,46. Благодаря наличию большого количества ароматических аминокислот белок имеет гидрофобные свойства.
Синтез его в микробной клетке происходит с формированием телец включения, растворимых в 6М мочевине.
Хроматографическая очистка гибридного белка Т-ФНО-Т.
Эксперименты проводили с ионообменной группировкой ДЕАЕ, привитой на агарозе, силикагеле и сфероните (латексный носитель, НИИОЧБ). Агароза является гидрофильным носителем, силикагель имеет сильные гидрофобные свойства, сферо-нит обладает слабой гидрофобностью (46). Установлено, что связывание гибридного белка с ДЕАЕ-агарозой происходит в интервале рН 5,0-5,3 (Na-ацетатный буфер), белок при этом должен быть растворен в 6М мочевине. Элюция белка происходит ступенчато при концентрации соли NaCl 100 мМ, 150 мМ и 250 мМ. При этом наблюдалась различная степень чистоты целевого белка по примесям белкового и липополиса-харидного характера. Так, при концентрации NaCl 100 мМ белок получался 70 % чистоты по белкам и 30 % чистоты по липополисахаридам. При концентрации NaCl 150 мМ чистота по белкам составляла 70 %, по ЛПС -70 %. При концентрации NaCl 250 мМ чистота по белкам составляла 80 % по ЛПС 80 %.
Таким образом, использование ДЕАЕ-агарозы в качестве хроматографического носителя не позволяет добиться нужной чистоты и гомогенности гибридного белка.
Использование в качестве носителя ДЕАЕ-диасорба (БиоХимМак, МГУ) на основе силикагеля было продиктовано попыткой использовать гидрофобные взаимодействия белка с матрицей. Обнаружено, что увеличение концентрации соли NaCl до 300 мМ и уменьшение концентрации мочевины до 3,5 М не влияет на адсорбцию белка. Фактором, влияющим на условия связывания и элюции, в данном случае был рН раствора. Установлено, что связывание с носителем происходило при рН 6,0-6,2, элюция-рН 7,2-7,5 с сохранением исходных концентраций солей и мочевины. Целевой белок элюировался в этих условиях одним пиком, однако, степень чистоты по белкам и ЛПС составляла 80 %.
С целью устранения выхода белка в нескольких пиках и достижения степени чистоты 95% нами был исследован носитель ДЕАЕ-сферонит ОН". Условия посадки белка на нем резко отличались от двух предыдущих. Так, полное связывание происходит только при рН 8,0 в 20 мМ ТрисНСІ буфере, содержащем 3,5 М мочевины и 100 мМ NaCl. Элюция белка 95 % чистоты по белковым и липополисахаридным примесям происходила в одну стадию после промывки колонки тремя объемами исходного буфера при повышении концентрации мочевины до 6 М и соли NaCl до 250 мМ.
Таким образом, условия очистки белка свидетельствуют о его высокой гидро-фобности и влиянии степени растворимости на взаимодействие с хроматографическим носителем. Оптимальной концентрацией соли, способствующей возникновению слабых гидрофобных связей с латексной матрицей, является 100 мМ, растворимость белка для этого носителя оптимальна при концентрации мочевины 3,5 М. При этих условиях целевой белок связывается с ионообменной группировкой ДЕАЕ и слабыми гидрофобными связями с матрицей. Примесные белки и липополисахариды элюируются с колонки со свободным объемом. Повышение концентрации соли до 250 мМ без увеличения растворимости белка (в 3,5 М мочевине) не приводит к элюции. Только при соблюдении двух требований: уменьшении ионного взаимодействия путем повышения концентрации соли и повышении растворимости белка увеличением концентрации мочевины происходит элюция белка одним пиком, содержащим целевой продукт 95 % чистоты.
Влияние состава защитной среды, температуры и сроков хранения препарата на сохранение мономерной формы и иммунобиологических свойств белка.
Полученные данные приведены в таблице 13.
Данные, представленные в таблице 13, показывают, что лиофилизированная форма белка с добавками 1% полиглюкина или желатиноля стабильно сохраняет его активность и иммуномодулирующие свойства при хранении в течение 2-х лет при температуре 5±2С. Установлено, что образцы, содержащие полиглюкин или желатиноль и хранившиеся при 4-6 С или комнатной температуре, имели одинаковый электро-форетический профиль и содержали одну белковую полосу, соответствующую молекулярной массе 26 кДа. Препарат с глюкозой содержал дополнительный протеолитиче-ский фрагмент размером 17 кДа (около 10%). В препаратах, хранившихся при 25 С такой фрагмент присутствовал в больших количествах (15-20 %).
В препаратах, хранившихся при 25 С, и в содержащих глюкозу отмечено изменение внешнего вида: разрыхление или карамелизация, белый цвет изменился на желтый. Подобных явлений в препаратах, содержащих полиглюкин или желатиноль, не отмечалось. Наиболее стабильной можно считать лиофилизированную форму белка, исходно содержащую в растворе 150 мМ хлористого натрия и 10 мМ натрий-фосфатного буфера с рН 7,2 - 7,4. При лиофилизации из раствора гибридного белка с концентрацией около 1 мг/см" стабилизирующих добавок не требуется; при более низкой концентрации белка для приготовления стабильной формы необходимо добавлять до 1% фармакопейного полиглюкина.
Другим важным выводом является то, что при утрате мономерной формы от 90±7 до 5±4 %, т.е. при полной деградации гибридного белка, индекс стимуляции ан-тителопродукции падает от 2,0±0,3 до 1,2±0,1, то есть на 40 %. Это может быть связано с тем, что утрата нативной формы приводит к формированию пептидов с молекулярным весом 2-3 кДа, не обнаруживаемых методом электрофореза в ПААГ-ДСН, но обладающих иммунорегуляторными свойствами цитомединов (И2). Подобное наблюдение может служить обоснованием перорального применения препарата, при котором происходит кислотное расщепление исходного белка, но, вероятно, остается регуляторная способность продуктов расщепления.
Изучение иммунобиологических свойств препарата иммунобак
Препарат разработан автором в соавторстве с Зинченко В.Б., Паниным А.Н., Сандиным М.М., Черепановым П.А., Груздевым К.Н. Патент 2146935 от 27 марта 2000 г.
Характеристика иммунопробиотического препарата иммунобак для птицеводст-ва
Иммунобак - иммунопробиотический препарат, содержащий комплекс интерферонов и бактерий-эубиотиков (бифидобактерии, лактобациллы, стрептококки), а также вспомогательные компоненты.
Препарат представляет собой однородный сыпучий порошок белого, светлосерого или бежевого цвета, при разведении с водой образует стойкую гомогенную суспензию.
Препарат выпускается расфасованным в запаянные полиэтиленовые пакеты, в пакеты из комбинированных материалов или полиэтиленовые банки для пищевых продуктов в количестве единиц фасовки по согласованию с заказчиком. В 1 г порошка содержится 100 доз препарата.
Хранят иммунобак в заводской упаковке, в сухом, защищенном от света месте, при температуре от 0до 10С. Допускается хранение препарата не более 10 суток при температуре до 25 С.
Срок.годности препарата при соблюдении условий хранения - 1 год со дня изготовления.
Входящие в состав иммунобака активные компоненты обладают иммуномоду-лирующими, противовирусными и пробиотическими и свойствами, активизируют систему местного иммунитета лимфоидной ткани кишечника, способствуют повышению резистентности и иммунологической устойчивости птицы к инфекционным и инвазионным заболеваниям, нормализации микрофлоры желудочно-кишечного тракта и обмена веществ, подавлению развития условно-патогенной и гнилостной микрофлоры, предотвращению септических осложнений, восстанавливают кишечный микробиоценоз птицы после антибиотикотерапии, при стрессовых состояниях, при смене корма, стимулируют рост и развитие птицы, повышает ее общую резистентность.
Иммунобак в качестве иммунобиотического средства назначают для кур, уток, индюшек
- для лечения диарей и дисбиозов микробного и протозойного происхождения;
- для предотвращения возникновения секундарных инфекций при вирусных заболеваниях;
- для профилактики вирусных заболеваний (инфекционный ларинготрахеит, инфекционный бронхит, болезнь Ньюкасла, болезнь Марека);
- для стимуляции роста, развития и повышения устойчивости к заболеваниям;
- при плановых вакцинациях с целью создания напряженного иммунитета у всего поголовья птицы;
- для восстановления кишечного микробиоценоза птицы после антибиотикотерапии, при стрессовых состояниях, при смене корма.
Иммунобак применяют внутрь с водой или кормом.
Для цыплят, утят в возрасте до 10 дней профилактический курс дачи препарата 5-7 дней по. 1 дозе в сутки. Индюшатам рекомендуется 2 дозы при том же курсе дачи препарата.
Для молодняка кур, уток проводится трехкратный профилактический курс дачи препарата (в 10, 30-40 и 60-70 дневном возрасте) в течение 5-7 дней из расчета по дозам:
- до 10 дневного возраста - по 0,5 дозы
- до 30-40 дневного возраста - по 1 дозе
- до 60-70 дневного возраста -по 3-2 дозы через день
Индюшкам рекомендуется удваивать дозу препарата при том же курсе дачи.
Для более равномерного распределения препарата в кормосмеси необходимо его смешивание проводить дробно. Для этого берут расчетное количество препарата, соответствующее количеству голов птицы, смешивают с 10-кратным количеством корма и тщательно перемешивают. Затем полученный объем смеси вновь перемешивают с кормом в соотношении 1 : 10 и вводят в конечный объем кормосмеси. При смешивании с кормом не допускать увлажнения препарата.
С лечебной целью молодняку птицы препарат применяют в указанных выше дозировках по 2 раза в сутки до исчезновения клинических признаков заболевания (не более 10 дней подряд). При необходимости через 2 недели курс лечения повторяют.
С лечебной целью взрослой птице препарат рекомендуются давать 2 раза в сутки в следующих дозах
для кур - 3 дозы
для уток - 4 дозы
для индюшек - 5 доз
Побочных явлений и осложнений при применении препарата иммунобак в соответствии с Наставлением по применению не наблюдается. Противопоказаний для применения препарата не установлено.
Убой птицы после обработки препаратом производится без ограничений.
Доклинические исследования препарата иммунобак
Исследования препарата проводили на курах породы белый леггорн в возрасте 8 недель со средней массой 572+10 г. Препарат вводили однократно через рот резиновым зондом из расчета 5 и 10 доз на голову. Для оценки острой токсичности регистрацию показателей проводили через 2 и 24 часа после введения препарата. Для оценки хронической токсичности показатели регистрировали через 14 дней после введения препарата.
Для патоморфологической оценки острой токсичности птицы вскрывали и проводили микроскопическое исследование тканей легких, печени, селезенки, почек, сердца, семенников или яичников. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином.
Влияние препарата иммунобак на сердечно - сосудистую систему.
Для оценки влияния препарата на сердечно-сосудистую систему определяли изменения пульса (число ударов в минуту) и число дыхательных движений. Результаты приведены в таблице 54.
Влияние препарата на массу тела птицы.
Цыплят контрольной и опытной групп взвешивали через день в течение 14 дней. Отмечено достоверное увеличение прироста веса в опытной группе на 20±5 г по сравнению с цыплятами контрольной группы.
Влияние препарата иммунобак на температуру тела птицы.
Ректальная температура птицы контрольной и опытной группы в течение 14 дней наблюдения находилась в пределах 40,5+ 1,2 С.
Влияние препарата на поведенческие реакции птицы.
Применение препарата в указанных дозировках не приводило к угнетению поведенческих реакций птицы, активность поедания кормов и снижению ориентировочных реакций.
Влияние препарата на биохимические показатели сыворотки крови.
Показатели измеряли через 24 часа после введения препарата и через 14 дней. В качестве контроля брали цыплят, получавших аналогичное количество физиологического раствора. Результаты приведены в таблице 55 и 56.
Характеристика иммунопробиотического препарата бактонеотим
Препарат разработан автором в соавторстве с Паниным А.Н., Зинченко В.Б., Шмелевым В.А., Кузиной СМ.
Бактонеотим - иммунопробиотический препарат, содержащий иммуномодуля-тор неотим, комплекс бактерий-эубиотиков (бифидобактерии, лактобациллы, стрептококки), а также вспомогательные компоненты.
Выпускают бактонеотим расфасованным по 10 таблеток в контурные ячейковые упаковки из поливинилхлоридной пленки и фольги алюминиевой лакированной и по 10, 20 таблеток во флаконы для лекарственных средств, упакованные в картонные коробки. Каждую упаковку маркируют согласно нормативной документации и снабжают наставлением по применению препарата.
Допускаются другие виды фасовки по согласованию в установленном порядке. Хранят бактонеотим в заводской упаковке, в сухом, защищенном от света месте, при температуре от 0 до 10С. Допускается хранение препарата не более 10 суток при температуре до 25С.
Срок годности бактонеотима при соблюдении условий хранения - 1 год со дня изготовления.
Входящие в состав бактонеотима активные компоненты обладают противовоспалительными и иммуномодулирующими свойствами, активизируют систему местного иммунитета лимфоидной ткани, выделение секреторных антител, способствуют повышению резистентности и иммунологической устойчивости животных к инфекционным и инвазионным заболеваниям, нормализации микрофлоры желудочно-кишечного тракта, подавлению условно патогенной и гнилостной микрофлоры, ускорению вое 223 становительных процессов в послеоперационный и посттравматический периоды, предотвращению септических осложнений, стимуляции роста и развития животных.
Бактонеотим относиться к мало токсичным для теплокровных животных препаратам, не обладает кумулятивными, эмбриотиксическими, тератогенными и аллергенными свойствами, совместим с химиотерапевтическими и биологическими препаратами.
Бактонеотим в качестве иммунопробиотического средства назначают собакам и кошкам:
- с целью профилактики инфекционных заболеваний (контакт с больными живот ными, неблагоприятная эпизоотическая обстановка), при стрессах, вызванных дли тельными перевозками и т.п.
- при инвазионных заболеваниях (гельминтозы, демодекоз, саркоптоидозы), заболеваниях кожи и подкожной клетчатки (фолликулы, абсцессы, экземы, дерматофитозы) в комплексе со специфическими и симптоматическими средствами терапии;
- в целях предотвращения гнойных и септических осложнений, ускорения восстановительных процессов в послеоперационный и посттравматический периоды;
- при аллергических реакциях (алопеции, астматические явления, пищевые аллергии);
- для создания адекватного напряженного поствакцинального иммунитета у щенков и предотвращения побочных явлений и осложнений при вакцинации;
Бактонеотим назначают животным внутрь за 30-40 минут до кормления в разовой дозе 1 таблетки на 10 кг массы животного (не более 5 таблеток на животное).
С целью профилактики инфекционных заболеваний при стрессах, вызванных длительными перевозками, подготовкой и участием в выставках, бактонеотим применяют один раз в сутки на протяжении 3 дней.
При гельминтозах бактонеотим назначают однократно в комплексе с антигель-минтными препаратами в дозеї таблетка на 10 кг массы.
При лечении кожных инвазионных заболеваний (демодекоз, саркоптоидозы) бактонеотим назначают в комплексе с химиотерапевтическими средствами два раза в сутки в течение 3-5 дней в дозе 1 таблетка на 190 кг массы.
При инфекционных заболеваниях кожи и подкожной клетчатки (стрепто- и стафилодермия, фолликулез, дерматофитозы) бактонеотим назначают в комплексе с химиотерапевтическими и симптоматическими средствами в дозе, указанной в п. 3.2. один раз в день в течение 3-5 дней. Курс лечения повторяют два-три раза с интервалом 7 дней.
При лечении пищевых аллергических реакций, алопеции, себореи бактонеотим применяют один раз в день в течение 3-5 дней в дозе, указанной выше. Курс лечения повторяют два-три раза с интервалом 7 дней.
В восстановительный послеоперационный и посттравматический периоды с целью профилактики гнойных и септических осложнений бактонеотим применяют два раза в сутки в течение 1-2 дней после операции или травмы.
При вакцинации щенков против вирусных заболеваний бактонеотим применяют два раза в сутки в течение 3 дней до вакцинации в дозе, указанной выше. Повышение температуры при даче препарата свидетельствует о наличии инфекционного процесса и требует тщательного обследования щенка перед вакцинацией.
Биологическая активность препарата бактонеотим
Лечение кожных заболеваний собак и кошек с применением иммунопробиоти-ческого препарата бактонеотим
В патогенезе большинства наиболее распространенных клинических форм кожных заболеваний определенное значение имеет функциональное состояние гипофизар-но-надпочечниковой системы, гипоталамуса и ретикулярной формации ствола головного мозга, процессов микроциркуляции, кининоген-кининовой системы, глюкокорти-коидной функции и щитовидной железы. Важна также роль сосудистой патологии, иммунологической реактивности и явлений стресса. Подтверждено значение функционального состояния печени и поджелудочной железы, желудка, кишечника, почек и верхних мочевыводящих путей. Сюда же следует отнести изменения обмена стероидных гормонов, электролитов, аминокислот, иммуноглобулинов, липидов, биогенных аминов, ряда гликолитических ферментов. Отмечена взаимосвязь аллергических заболеваний кожи с наличием микотической инфекции, стрепто-стафилококковой патологии.
В связи с изложенным об участии ферментов в патогенезе аллергических заболеваний кожи мы провели сравнительное исследование активности уропепсина, плазмо пепсиногена, амилазы мочи, энтерокиназы кала у собак и кошек с клиническими признаками аллергических реакций. Исследования проводились в контрольной группе здоровых животных, в опытной группе больных животных в процессе лечения гормональными средствами и в группе животных, которым наряду с традиционной терапией назначали иммунопробиотик бактонеотим.
Исследование уропепсина у животных с инфекционными дерматитами.
Инфекции, паразиты, нарушения в питании, травмы, стрессы чаще всего являются причинами экзогенных алопеции. Одним из критериев выздоровления является интенсивность очищения организма от продуктов белкового и клеточного распада, которая коррелирует с активностью уропепсина.
В контрольной группе (норма) было исследовано 24 собаки и 12 кошек различных пород. В опытной группе было исследовано 98 животных с инфекционными дерматитами (33 кошки, 65 собак), чаще в возрасте 3-10 лет. У 30 из них патологический процесс был распространенным, у 48 - локальным, у 20 длительность заболевания превышала год.
Нормальная активность уропепсина у контрольных собак была 13,6±2,0 ед/ч; у кошек - 11,9±3,3 ед/час. Исключение составила контрольная группа бесшерстных кошек, у которых показатель нормального уровня уропепсина был 13,8±1,4 ед/час.
При первичном обследовании животных с клиническими признаками дерматита показатели уропепсина в моче у собак оказались сниженными и составили 9,1 ±2,8 ед/ч; у кошек 8,2±1,2. Особенно пониженное содержание уропепсина было у собак возраста 8-Ю лет с длительностью заболевания свыше 1 года (7,8±1,2 ед/ч), у кошек этот показатель при тех же условиях был выше (8,2±2,1 ед/ч).
В первой группе больных животных лечили традиционными методами. Для длительного лечения и контроля зуда применяли 0,5-1% гидрокортизон или препараты преднизалона (0,5%). В качестве дезинфицирующих средств применяли бактерицидную мазь вединол (на основе хвойных спиртов), хлоргексидин, поливидон-йод и др. В случае дерматитов, осложненных наличием возбудителей демодекоза или саркоптоидоза, применяли комбинированную мазь вединол-плюс с противовоспалительным, дезинфицирующим и акарицидным действием.
Исследование уровня уропепсина в моче животных этой группы показало, что его рост практически совпадает с началом проявления признаков улучшения общего состояния. При этом отмечен рост уровня уропепсина на 5-10%. Однако, даже при клинической картине практически полного очищения покровов животного показатель уропепсиногена не поднимался до уровня нормы.
В опытной группе лечение проводили с включением в указанную схему имму-нопробиотика бактонеотим. Отмечено, что рост уровня уропепсина начинался до проявления клинических признаков выздоровления, повышение его уровня на 30-40% коррелировало с клинической картиной выздоровления. Нормального уровня уропеп-син достигал через 1-1,5 недели после полного внешнего излечения.
Исследование плазмопепсиногена в крови у животных с эндокринными кожными заболеваниями.
Эндокринные кожные заболевания вызываются избыточным или недостаточным производством какого-либо гормона. Эти заболевания носят хронический характер, для них характерно симметричное расположение алопеции и гиперемированных участков кожи. Прогноз течения заболевания может быть сделан на основе изучения активности ферментов, отвечающих за очищение организма от продуктов распада, одним из которых является плазмопепсиноген.
Исследование активности плазмопепсиногена проведено у 41 животного с эндокринными кожными заболеваниями (15 кошек, 26 собак). У 12 из них длительность заболевания превышала год. В контрольной группе исследовали уровень плазмопепсиногена у здоровых собак и кошек различных пород.
