Содержание к диссертации
Введение
I Обзор литературы 6
2. 1. Морфологические и биологические особенности возбудителя 6
2. 2. Эпизоотология демодекоза 9
2.3. Патогенез демодекоза 18
2. 4. Иммунитет. Иммунодефицит, обусловленный демодекозом 24
2.5. Клинические формы демодекоза 27
2. 6. Диагностика демодекоза 34
2.7. Лечение демодекоза 37
2. 8. Профилактика демодекоза 50
III. Собственные исследования 51
3.1. Материалы и методы исследований 51
3.2. Ход эксперимента 53
3.2. 1. Гематологические исследования 56
3.2.2. Неспецифические факторы резистентности 59
3.2.3. Клинико - лабораторный анализ мочи 67
3. . Клинико -лабораторный анализ кала 68
3.3. Особенности гематологических данных и показателей естественной резистентности
собак больных демодекозом 85
3.4. Схемы лечения демодекоза 91
3.5. Гематологические данные и показатели естественной резистентности собак, больных демодекозом после лечения 96
3.6. Изменения показателей анализа мочи и кала 103
3.7. Изменение показателей естественно резистентности после примененияй различных иммуностимуляторов при лечении демодекоза собак 108
3.8. Эффективность лечения демодекоза собак в зависимости от клинической формы заболевания 114
3.9. Наследственная предрасположенность собак к заболеванию демодекозом 120
IV. Обсуждение результатов 128
V. Заключение 131
VI. Выводы 135
VII. Предложения 137
VIII. Список использованной литератеры 139
Введение к работе
1.1. АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ
Разведения и содержание домашних животных в различных регионах России в настоящее время вызывает необходимость углубления знаний по многим вопросам в этой сфере и разработки выдвижении новых подходов к лечению, казалось бы, давно известных патологий, а также недавно открытых и еще малоизученных болезней.
В последние несколько десятилетий популяции собак, в особенности из числа тех, которые обитают в городе, подвергаются все более и более интенсивному воздействию "повреждающих" факторов; среди них обилие стрессов, постоянно ухудшающаяся экологическая обстановка, злоупотребление сухими и другими концентрированными кормами, бесконтрольное разведение и т.д. Причины многих, в особенности хронических заболеваний, происходят именно из вышеуказанных факторов.
Возможно, что и такое, давно известное и, казалось, хорошо изученное заболевание как демодекоз следует рассматривать с несколько иных позиций, чем просто хроническое паразитарное заболевание.
Демодекоз собак (демодекозная часотка, фолликулярная чесотка, демодецийная или красная чесотка, паразитарная чесотка, паразитарные угри /акне/ или угревые железницы) является одним из распространеных кожных болезней животных и человека. Из этих возбудителей в настоящее время описано 134 вида клещей Demodex (Ф.И. Василевич, 1998).
Необходимо также отметить, что в связи с увеличением в последнее время темпов и объема разведения различных пород собак, зачастую абсолютно бесконтрольного, сопряженного с ввозом из-за рубежа производителей сомнительного качества, а также просто представителей новых пород собак, ситуация с демодекозом резко обострилась.
Изучению эпизоотологии, патогенеза, лечения, диагностики и профилактики демодекоза посвящены работы многих исследователей. Наиболее значительные работы опубликованы Ф.И. Василевичем (1993, 1998), Ф.И. Василевичем , М.В. Розовенко (1993), Ф.И. Василевичем , М.В. Розовенко (1994), А.А. Лисициной и др. (1997), СВ. Ларионовым (1980, 1990, 1991, 1993, 1996), М.В. Шустровой (1995, 2001), М.В. Шустровой, А.И. Лесниковым (1999), Г.В. Делюда (2002), PedroJ.Ginel (1996), S.D. Folz (1983 -1984), F. Beugnet (1993) и другими.
На широкое распространение демодекоза собак в России (до 34,3 -67,4 %) указывают работы СВ. Ларионова (1991), М.В. Шустровой (1996).
Общеизвестно, что поиски эффективных способов и средств лечения демодекоза ведутся уже длительное время. Не так давно применение акарицидов контактного и системного действия на основе ХОС, ФОС, пиретроидов, авермектинов и др. сулило, наконец - таки успех в лечении данного заболевания. Но, увы, оставалось, и остается, по сей день огромное количество случаев демодекоза, где применение вышеперечисленных средств оказалось безрезультатным; и еще большее количество тех животных, у которых после, казалось бы невероятно быстрого выздоровления и восстановления экстерьерных данных, возникал столь же стремительный рецидив, не говоря уже о том , что применение практически всех акарицидных препаратов далеко небезразлично для животного организма, а некоторые из них представляют из себя крайне токсичные (в особенности для печени и почек) соединения. (В.А. Кирилловских, 1998).
Именно поэтому в своей работе мы попытались найти альтернативную классическому подходу схему лечения демодекоза, за основу которой была взята естественная способность любого живого организма противостоять как экзо-, так и эндогенным болезнетворным воздействиям, а именно естественная резистентность животного.
С практической точки зрения данное исследование интересно не только принципиально новым подходом к лечению демодекоза, основанного на уверенности в том, что данное заболевание не является сугубо паразитарным, но и тем, что оно должно рассматриваться как иммуносупрессии, сопряженной с нарушением гомеостаза организма. В этом отклонении генерализованный демодекоз собак представляет собой тяжелую болезнь, сопровождаемой иммуносупрессией. Функции Т-клеток как показывают результаты исследований бласттрансформации лимфоцитов под действием митогенов in vitro и реакция гиперчувствительности замедленного типа А резко снижены. (Ф. Бенье, 1997, 1998).
Особый интерес вызывает также попытка определения норм показателей естественной резистентности (лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови) для собак различных пород. Для реализации такого подхода в нашем исследовании основное внимание уделялось трем породам собак: немецкая овчарка, кавказская овчарка и шар-пей.
Не последнее место по значимости занимает также и изучение влияния наследственного фактора на развитие демодекоза у потомков больных производителей, степень выраженности наследования и то звено в иммунной системе организма собаки, которое играет решающую роль в развитии патогенеза.
Цель и задачи исследования. Целью работы явилось изыскание принципиально нового подхода к лечению демодекоза, основанного на предварительном определении иммунного статуса организма гематологической диагностике и определении показателей неспецифической резистентности с последующей иммунокоррегирующей терапией, определении норм показателей естественной резистентности для некоторых пород собак и изучении влияния наследственного фактора на развитие демодекоза у потомков. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи.
1. Изучить гематологические показатели собак, больных демодекозом, до и после разработанной новой концепции лечения.
Изучить факторы неспецифической резистентности (лизоцимной и бактерицидной активности) у собак, больных демодекозом, до и после терапии.
Сравнить показатели неспецифической резистентности некоторых пород собак (немецкая и кавказская овчарка и шар-пей) с целью оценки влияния наследственного фактора на возникновение заболевания.
Определить подходы к использованию иммунокоррегирующей терапии в зависимости от факторов естественной резистентности.
Научная новизна. Научная новизна работы заключается в концепции новых данных относительно роли факторов неспецифической резистентности и иммунодефиците при демодекозе собак, разработке на этой основе иммунокоррегирующей терапии в сочетании с патогенетической, уточнении некоторых вопросов патогенеза болезни, выяснении роли наследственности в развитии демодекозной патологии.
Практическая значимость работы. Использование результатов исследований позволило повысить эффективность лечебных мероприятий при демодекозе собак. Полученные данные способствуют объективной оценке роли факторов естественной резистентности при указанной патологии животных. Большое клиническое значение имеет выявление наследственного фактора в возникновении демодекоза собак. Материалы исследований используются при проведении лекционных и практических занятий по специальности Ветеринария в Российском университете дружбы народов.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Роль факторов естественной резистентности собак при демодекозе.
2.Новые схемы иммунокоррегирующей и патогенетической терапии демодекоза собак.
Апробация работы. Материалы были доложены на 8, 9 и 11 Московских международных ветеринарных конгрессах по проблемам болезней мелких домашних животных (1999 - 2003), на Научно-практической конференции «Животные в городе», МСХА им. К.А. Тимирязева (2000), Blood and immunological parameters in dogs after treatment for demodecosis with immune-therapy. 6th International Veterinary Immunology Symposium. July 15-20, 2001, Uppsala, Sweden.
Публикации. По теме опубликовано 5 печатных работ.
Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 152 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, выводов, обсуждения и практических предложений. Материалы иллюстрированы 18 таблицами, 3 схемами и 28 диаграммами.
Список литературы включает 154 источника, в том числе 114 отечественных. Полученные данные обработаны методом вариационной статистики и трехфакторного дисперсионного анализа. При этом определялись средние арифметические показатели, средняя ошибка, коэффициент корреляции и др.
Патогенез демодекоза
Клещи D. canis, проникнув с поверхности кожи в волосяной канал фолликула, по пути следования уничтожают эпителиальные клетки внутреннего и наружного корневых влагалищ волоса, а на дне волосяного фолликула - эпителиальные клетки волосяного сосочка. В результате внутреннее волосяное влагалище больше не восстанавливается и развивается очаговое воспаление, сопровождающееся выпадением волос, образованием пустул и везикул. Собаки облизывают пораженные места, проглатывая при этом клещей. Патоморфологические изменения кожи характеризуются поражением волосяных фолликул - очаговыми дистрофическими, некробиотическими и некротическими процессами с дальнейшими осложнениями секундарной микрофлорой (чаще стафилококками), развиваются абсцессы волосяных фолликул и сальных желез. Близлежащие волосяные комплексы кожи атрофируются. Сальные железы, как правило, вовлекаются в воспалительный процесс вторично и при этом частично или полностью разрушаются. Клещей в них не находят, хотя по данным СВ. Ларионова (1991), их наличие может быть. Эпидермис над колониями некротизируется; в дерме - нарушение гемодинамики, стазы и отеки, отмечаются мукоидное и фибринозное перерождение соединительной ткани, в собственной коже -диффузное и гранулематозное скопление эпителиоидных, лимфатических, плазматических и гигантских клеток. Одновременно в организме накапливаются метаболиты жизнедеятельности клещей. (W.D. Scott, 1993, Ф.И. Василевич, А.А. Лисицина, 1996).
Питаясь в сальной железе или на дне волосяного фолликула, клещ Demodex «распахивает» его эпителиальный слой. Причем в этот же фолликул проникают и другие особи возбудителя. Размножаясь в нем, они формируют колонию клещей, где присутствуют разнополые особи всех стадий биологического цикла (личинки, нимфы и имаго). Разрушая эпителиальные клетки имаго клещей не только питаются сами, но и позволяют питаться остатками их содержимого личинкам и нимфам, которые имеют недоразвитый ротовой аппарат. В результате преимагинальные стадии паразита, как бы, находятся в питательном субстрате из разрушенных клеток. Не последнюю роль играет наличие гноеродной микрофлоры и, прежде всего, стафилококков, которых в огромном количестве обнаруживают в пораженных местах. С помощью электронной микроскопии было показано, что клещ из очагов поражения буквально весь покрыт этими микроорганизмами. (Koutz F. R., 1995). Описанные выше кожные повреждения, вызываемые демодексами у собак, во многих случаях приводят к возникновению зуда, развитию эритемы и пиодермии. Все эти явления развиваются как следствие гиперчувствительной реакции на присутствие клещей и токсического действия продуктов их жизнедеятельности (А.А. Лисицина, Ф.И. Василевич, 1996). Болезнь приобретает чешуйчатую или пустулезную форму (обычно они развиваются одновременно). Некротизирующие при этом ткани кожи и отделяющиеся продукты ее воспаления часто подвергаются гнилостному распаду с образованием специфического неприятного запаха. В результате наступает общая интоксикация организма, истощение и гибель животного.
При генерализованном пиодемодекозе обнаруживали демодексов в корковом веществе лимфатических узлов и паренхиме печени. На месте их внедрения развивается гранулематозное воспаление с наличием гигантских многоядерных клеток. В почках устанавливали гемоциркуляторные нарушения, выражающиеся неравномерным полнокровием корковой и мозговой зон, расширением, отеками и фиброзом стенок сосудов юкстамедуллярной зоны. В канальцах мозгового слоя обнаруживают многочисленные обызвествлеиные цилиндры.
По данным Ф.И. Василевича, (1998), клещи могут проникать в (просвет кровеносных сосудов и занесены во внутренние органы, при этом возникает местное нарушение кровообращения и гранулематозное воспаление с формированием не казеозных, гранулем туберкулоидного типа. Не разрушенные клещи, а также клещи вне гранулем во внутренних органах не обнаруживали.
Одновременно с исследованиями - изменений уровня, различных фракций белков крови при демодекозе, у собак изучали, биохимические изменения в печени этих животных (См. табл. 1.)
Изменения биохимических; показателей не имели выраженной, специфичности, но было выявлено увеличение активности трансфераз, что свидетельствовало о наличии цитолитического синдрома в гепатоцитах. Гипоуремии и гипергликемии не отмечали, содержание общего белка увеличивалось в зависимости от тяжести заболевания, снижение альбумина было характерно для собак с генерализованной формой заболевания.
Как известно, при дерматитах, экземах и прочих кожных поражениях различной этиологии, отмечают изменения функции печени, что видно из нижеприведенной таблице.
В результате проведенных опытов А.А. Лисицина и Ф.И. Василевич, М.В. Розовенко, А.Г. Малахов (1997) сделали вывод, что изменения биохимических показателей функционального состояния печения собак при демодекозе связаны с индивидуальными особенностями их организма, условиями кормления и содержания и в меньшей мере обусловлены влиянием паразитов и продуктов распада кожи.
При генерализованной форме демодекоза также отмечается гиперпротеинемия, гиперглобулинемия и снижение коэффициента альбумин/глобулин.
Таким образом, можно сделать вывод, что развитие демодекоза является возможным лишь при наличии некоторых предрасполагающих факторов, так или иначе связанных с ослаблением общей резистентности организма животного. Повреждающее воздействие клеща на организм не ограничивается только кожными покровами и некоторыми органами, но и существенно изменяет функцию иммунной системы, что ведет к нарушению гомеостаза в целом.
Неспецифические факторы резистентности
Исследование проводилось на 55 собаках, преимущественно таких пород как немецкая, кавказская овчарка, шарпей принадлежащих пушкинскому кинологическому питомнику "Щит Топаза", пациентов Центра экстренной ветеринарной помощи, а также животных, принадлежащих частным лицам.
Сведения собирались в течение 1999 - 2002 годов.
Диагноз на демодекоз ставился с учетом клинических и лабораторных данных и подтверждался микроскопией глубокого соскоба, взятого с места поражения.
Для оценки гематологических показателей и показателей неспецифической резистентности у собак производился забор периферической крови для проведения общего анализа (количество эритроцитов, лейкоцитов, уровень гемоглобина, выведение лейкоформулы), а также сыворотка крови для определения уровня лизоцима в крови и ее бактерицидной активности. По возможности отбирались, и пробы кала и мочи от данных животных для исключения глистной инвазии, дисбактериоза и с целью получения дополнительных лабораторных данных для более четкой клинической картины заболевания.
Для взятия крови использовались стерильные пробирки с добавлением нескольких капель антикоагулянта (гепарин 25000 ед/5мл или 10% трилон В). Взятие крови производилось из подкожной вены предплечья (vena cephalica) или из подкожной вены стопы и голени (vena saphena lateralis). Место вкола иглы предварительно выстригалось и протиралось ватным тампоном с 96% спиртом, после чего производилось взятие крови в количестве 5 мл.
Для анализа собиралась утренняя моча в чистую емкость и в течении двух последующих часов или непосредственно после взятия производился ее анализ. Анализ производился при помощи тест-полосок, где определялись следующие показатели: рН, белок, нитриты, осмолярнорсть, глюкоза, уробилиноген, билирубин, кетоны, кровь (эритроциты и гемоглобин).
У некоторых собак отбирались пробы кала для проведения анализа с целью исключения глистной инвазии методом Фюллеборна, а также для проведения химического и микроскопического исследования кала и выявления нарушения переваривания пищи, ее усвояемости и различных дисфункций желез желудочно-кишечного тракта.
Все лабораторные исследования проводились на базе аграрного факультета РУДН.
В группу № 1 вошли клинически здоровые животные, причем, не только в отношении наличия у них Demodex canis.
В группу № 2 были отобраны собаки, от которых было получено неблагополучное по демодекозу потомство демодекозом, то есть была сформирована так называемая «группа риска». В нее вошли собаки без клинических признаков демодекоза, у некоторых из которых в пробах шерсти и соскобах демодексы выявлялись порой в огромных количествах и, в то же время, эти собаки оставались клинически здоровыми на протяжении всей жизни, но в их пометах обнаруживались болеющие демодекозом потомки. Среди них были и те производители, у которых не было не только клинических признаков заболевания, но и не обнаруживались демодексы в пробах шерсти и соскобах кожи, однако они также давали неблагополучное по демодекозу потомство.
Группа № 3 была целиком сформирована из клинически больных демодекозом собак и разбита на подгруппы согласно формам проявления заболевания:
За - по до демодекоз,
36 - локализованная (чешуйчатая) форма,
Зв - генерализованная форма демодекоза,
Зг- генерализованная форма демодекоза, осложненная саркоптозом.
Первые две группы были нами использованы для сравнения гематологических и других лабораторных показателей с таковыми у клинически больных демодекозом собак, а также показатели собак, выделенных нами в группу № 2, так называемую «группу риска», использовались для выявления основополагающего в наследовании предрасположенности к данному заболеванию фактора. В связи с этим основное внимание уделялось показателям неспецифической резистентности (бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови), как одному из возможных патогенетических звеньев развития демодекоза у потомков таких собак.
Собакам с клиническими проявлениями демодекоза и положительными результатами микроскопии соскоба назначалось лечение, основанное на стимуляции естественной резистентности организма собаки. Для сравнения было предложено несколько схем лечения: в нескольких из них использовались комбинации иммуностимуляторов различной природы или же применялся какой-либо один иммунокорректор в сочетании с общеукрепляющими и нормализующими обмен препаратами. Была также предложена схема лечения демодекоза с использованием акарицида контактного действия без назначения иммуностимулирующей терапии.
Гематологические и другие клинико-лабораторные показатели собак контролировались нами до и после проводимого лечения, причем, во второй раз забор крови, мочи, кала и соскобов производилось через 3-4 недели после окончания курса лечения. Таким образом, за этот период времени в организме происходила некоторая "стабилизация" гомеостаза, что, по нашему мнению, способствовало получению наиболее точных данных при проведении исследования.
Состояние больных демодекозом собак контролировалось нами длительное время с момента получения положительного результата лечения. Результативность лечения оценивалась в основном не по наличию или отсутствию демодексов в соско бе кожи (так как он является нормальным резидентом кожных покровов у многих собак с хорошим иммунным статусом организма), а по изменению экстерьерных данных и общего состояния собаки с учетом и показателей лабораторных анализов. Большинство собак наблюдалось нами на протяжении длительного времени после выздоровления (более одного года) с целью выявления наличия или отсутствия рецедивов заболевания после проводимой экспериментальной терапии.
Изменения показателей анализа мочи и кала
При исследовании гематологических показателей нами производился подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов, определялся уровень гемоглобина в крови, и выводилась лейкоформула. Из данных резистентости нами определялись показатели бактерицидной (%) и лизоцимной (ед/мл) активности сыворотки крови, таблицы 5,6, 7.
Согласно схеме нашего опыта все клинически больные демодекозом животные были разделены на четыре подгруппы (За, Зб,3в, Зг), поэтому и вариирование гематологических показателей и показателей естественной резистентности целесообразно рассматривать имеенно в связи с клинической формой заболевания у того или иного животного.
Таким образом, в подгруппу За вошли собаки больные пододемодекозом, то есть с преимущественным поражением конечностей. У этих собак наблюдалось снижения уровня гемоглобина в крови, что можно связывать с длительностью протекания заболевания, либо же учитывать и погрешности в кормлении и содержании. В любом случае, наибольшее внимание мы обращали на изменение количества лейкоцитов и на сдвиги в лейкоформуле. Так, в данном случае наблюдался лейкоцитоз, а также незначительная базофилия и лимфоцитоз в двух случаях, в последнем случае, напротив, была выявлена лимфоцитопения, что почтим всегда наблюдалось нами при часто рецедивирующем и длительно протекающем демодекозе, независимо от его клинической формы.
В группе 36, (сюда вошли собаки с чешуйчатой локализованной формой демодекоза) наблюдался выраженный в различной степени лейкоцитоз, а также незначительные базофилия и лимфоцитоз.
В группе Зв, куда были отнесены собаки с генерализованной формой демодекоза, гематологические показатели вариировали в зависимости от стадии протекания заболевания, так, на пике болезни наблюдался выраженный лейкоцитоз, а в период затухания симптомов или перехода болезни в хроническую форму - лейкоцитопения или же количество лимфоцитов приближалось к норме. В подавляющем большинстве случаев в лейкоформуле выявлялась базофилия и лимфоцитоз.
В группе Зг, куда вошли собаки с генерализованной формой демодекоза, которая, сопровождалась суперинвазией саркоптесов наиболее характерными гематологическми изменениями, были лейкоцитоз, эозинофилия и лимфоцитоз, причем эти изменения выявлялись нами независимо от длительности протекания заболевания и его стадии. осложненной вторичной микрофлорой. Фактически теже наблюдения относятся и к лейкоцитозу в общем. Эозинофилия на начальных стадиях заболевания, возможно, возникает вследствии гиперчувствительности замедленного типа, хотя при обнаружении в соскобах кожи саркоптесов, которые всегда являются причиной сильнейших расчесов и зуда, можно предположить, что клещи данного рода способны выделять специфические раздражающие вещества или аллегены. Возможно, что именно продукты распада кожи хозяина являются специфическими раздражающими факторами, так как именно при инвазии осложненной наличием в глубоких слоях кожи саркоптесов нами наблюдалась выраженная эозинофилия во всех случаях.
В большинстве хронических случаев, в особенности протекающих уже более нескольких месяцев наблюдалось снижение некоторых гематологических показателей ниже нормы, что, как мы предполагаем, происходило за счет истощения систем организма, в частности красного костного мозга и повреждающего действия продуктов распада кожи хозяина и жизнедеятельности самого клеща на печень, хотя возможно, что в некоторых случаях гепатодистрофия была первичной и лишь усугублялась с течением заболевания.
Необходимо также отметить столь интересный факт, как пониженное содержание гемоглобина в крови у собак породы шарпей. Мы столкнулись с этим явлением в процессе наших исследований, принимая вначале такой уровень гемоглобина в крови за патологию, но как ни странно этот показатель был стабилен у всех обследованных нами представителей этой породы до и после лечения. Этот вопрос еще нуждается в дополнительном изучении, но в нашем опыте у всех собак породы шарпей уровень гемоглобина в крови не превышал 10 г%.
