Введение к работе
Актуальность темы. Изучение лейкоз-саркомных болезней
тиц является одной из актуальных проблем в блоке онкогенных
ассоциирующихся с ними болезней, которые отягощают течение
тих инфекций, усложняют эпизоотическую ситуацию и способству-
т образованию новых высокопатогенных эпизоотических штаммов. В
вязи с отим на первое место выдвигается задача дальнейшего со-
ершенствования методов и средств диагностики лейкоз-саркомных
олозней птиц. Необходимы высокочувствительные и специфические
етоды лабораторной диагностики, позволяющие выделять более
олное, если не абсолютное, количество носителей онковирусов и
нтител к ним. ;
Используемые сейчас метода диагностики лейкоз-саркомных олезней птиц - РСК, КоФАЛ-тест, реакция нейтрализации в куль-уре фибробластов эмбрионов кур - недостаточно чувствительны я рудоемки при исполнении, особенно реакция нейтрализации ин вит-
іО.
В зарубежной и отечественной литературе имеются сообще-ия о все возрастающей роли в диагностике инфекционных болезней ототных иммуно.{іермеіртного метода, обладающего высокой специ-іичнос'ью, чувствительностью и лишенного недостатков, отмеченное при названных вше методах. Более перспективен в этом на-іравлении ^нердофазннй иммуноферментный анализ /ГФ ИФА/«
Приданая важное значение данному вопрооу Государственный (омитет СССР по науке и технике в 1S83 году принял постаиовле-іие і." б "О расширении научно-исследовательских работ в области издания диагностических препаратов и оборудования для ишуно-|>ермвнтного анализа и их применения в медицине, сельсчом хозяйстве, промышленности и научных исследованиях".
Цель и, задачи исследования. Основная цель исследования заключается в разработке, изучении и апробации в экспериментальных и практических условиях метода диагностики лейчоз-сар-комных болезней птиц на оонове твердофазного иммуноферментного анализа /ТФ Ш/.
В задачи исследования входило:
экспериментально найти активный антиген из группы вирусов лейкоза-саркомы для конструирования ИФА тес-снотемы при определении антител к названным вирусам;
получить высокоактивную гипериммунную сыворотку к вирусу саркомы Рауса;
установить оптимальные иммунохимические и физико-химические параметры режима постановки твердофазного ЙФА при определе нии антител к вирусам лейкоза-саркомы;
оценить чувствительность, специфичность и диагностическую эффективность твердофазного Шк в сравнении с реакцией нейтрализации в культуре фибробластов эмбрионов кур;
апробировать и оценить целевое назначение непрямого варианта ИФА для лабораторного контроля птиц на наличие антител к лейкоз-оаркомным вирусам.
Научно-исследовательская работа по *еме диссертации проведена в 1986-1390 годы при выполнении плановой государственной и межведомственной программ по решению научно-технических проблем 0.69.05 и 0.51,09.
Научная новизна. Экспериментально обоснована целесообразность использования в ИФА тест-системе при оирпдолении антител к 4-м серологическим подгруппам вирусов лейкоа-спркомиой группы очищенного вируса миелоблаотоза п*иц - iruMw amy, осис-
іанная на группоспецифической общности антигенов указанного ви-іуса с антигенами вирусов леакоэ-саркомной группы и вырабатыва->мих в организме птиц антител.
Научно обоснованы и разработаны критерии, обеспечивающие юлучеиие высокоактивной специфической гипериммунной сыворотки « вирусу саркомы Рауса штаммы ВН-ЯЗУ{йПР-1) и BH-RSV(HAV-2).
Установлены оптимальные параметры постановки твердофазного варианта ИФА для определения антител.
Разработанная и внедренная а лабораторну» практику ИФА тест-система при создании пород и линий кур» устойчивых к лейкозу, и при контроле СПФ-отад кур и перепелов на стабильность статуса СО» в отношении ойкогенных лейкоз-саркомных вирусов превосходит ло чувствительности реакцию нейтрализации ия витро я позволяет о особой надежностью, обеспечивать стабильность статуса СПФ при увеличенных интервалах взятая крови от птицы для ио-следования по сравнению о контролем птицы реакцией нейтрализации ин ви^ро.
Полученные нами данные позволяют рассматривать разработанную ИМ ^ест-систему в качестве универсального метода контроля чур и перепелов на наличие антител к вирусам лейкоза-саркомы.
Практическая ценность работы и внедрение результатов исследования,. Практическая ценность работы заключается в разработке оптимальных параметров твердофазного ИФА для определения антител при исследования птицы на контаминацию вирусам* лвйкоз-сар"* комной группы.
Использование разработанной нами Шк теот-йшотемы позволяет осуществлять з-рівк^ивішй прижизненный лабораторный контроль п^иць на наличие или отсутствие антител к вирусам лейкова-сар-
_ 6 -
комн. Этот контроль проводят в стадах кур, селекционируемых на устойчивость к лейкозу, при отборе кур, петухов и перепелов для COfr-стад и изучений эпизоотической обстановки в птицеводческих хозяйствах промышлеиного типа на онкогенные болезни птицы.
Результаты проведенных исследований включены в методические рекомендация "Создание устойчивых к неоплазмам линий и пород птицы" /одобрены ГУВ Госагропрома СССР 13.08.1986 г./, "Методические рекомендации по отбору, контролю и эксплуатации СПФ-птицы" /рекомендованы ГУВ Госагропрома СССР 13.08.1986 г./ и "Ветеринарно-санитарные требования ч перепелиным СІЙ-фермам, продающим биопредприятиям инкубационное яйцо" /согласованы с Управлением ветеринарии Госагропрома Эстонской ССР и упюрвдены зам. председателя Госагропрома Эстонской ССР 22.12.1987 г./.
Основные научные положения диссертационной работы вошли в "Методические рекомендации по определению методом шлиунофермент-ного анализа антител к вирусам лейкоз-саркомной группы птиц", одобренные Ученым Советом Всесоюзного научно-иеследоватольско-го ветеринарного института птицеводства 4.07.1989 г.
Основные додожения, выносимые яа зашиту:
- результаты получения и испытания специфических компонентов
для ША: концентрированного антигена вируса миолобластоза птиц
и специфической гипериммунной сыворотки и установленные при этом оптимальные параметры поотановчи твердоЫмного иммуноферментно-го анализа /ГФ Ш>А/;
- анализ разработанной твердофазной Иі>А тоот-оиотомы, тер-
щей высокую чувствительность, ирввшиатщун чувствительность РН II
1Ш-1Ш раз, специфичность У7 % и воспроизводимость с чо:»і>1>ици-
ентом вариации, не превышающим 3 %.
— 7 -
- результаты апробация ИМ тест-системы, как ценного диагностического теста при селекции птицы на устойчивость к лейкоз-саркомншл болезням птиц, создании и контроле СВД-стад кур и перелелов и при выяснении эпизоотической, обстановки а хозяйствах по ончовирусным болезням птиц, имеющим общий гс-антиген.
Апробация работц. Материалы работы доложены на методических советах отделов вирусных и опухолевых болезней птиц /1988, 1389, 1990/ и ученом совете Всесоюзного научно-исследоватвль-зкого ветеринарного института птицеводства /1990/, 2-ой научной шнференции молодых ученых Ленинградского ветеринарного ияети-ута /1988/, 9-ой научко-яраятической конференции молодых сяе-даалистов Ленинградского ордена Трудового Красного Знамени на-'чно-исслодовательского института эпидемиологии и микробиологи». м. Пастера /1988/, респус^икаиокой конференции "Достижения вв-еринарной науки и практики по повышении продуктивности сел*-кохозяйстиенннх животных* /г» Тарту,,1988/, Всесоюзной кояфв-енции "Актуальные вопросы диагностики заболеваний система кро-и" /г* Сухуми, 198ЯД Всесоюзной научйочироиэводственной кои-ерёнции "Комплексная система ветеринарных мероприятий в втицв-одстве - резерв повышения эффективности производства* /г. Ле-инград, 1V89/.
Публикации: По материалам диссертации опубликованы 2 рабо-u и 2 работы находятся в печати.
Объем и структура работы? Диссертаций изложена на 168 границах машинописного текста и состоит и* введения, об»ора ртдратуры /глава 1/, собственных исследований /главы 2-6/, об~ даения результатов, ві/водов, практических предложений, пряло-шяй и сокрагаений, пг йнятих в дисоертацнй.
