Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 8
1.1. Классификация итоксономия цирковирусов 8
1.2. Биологические свойства вирусов семейства Circoviridae 10
1.3. Методы выделения и культивирования ЦВС- 2 15
1.4. Сравнительная патология и патогенность ЦВС-2 17
1.5. Болезни, обусловленные ЦВС-2 (цирковирусные болезни) 20
1.6. Иммуносупрессия и сопутствующие инфекции как элементы цирковирусных инфекций 33
1.7. Роль иммунной активации в патогенезе СПМИС 36
1.8. Экспериментальное заражение поросят вирусом ЦВС-2 39
2. Собственные исследования 48
2.1. Материалы, методы и объемы исследований 48
2.2. Результаты исследования эпизоотологическои ситуации по болезням свиней в Ростовской области 52
2.3. Сопутствующие инфекции при синдроме мультисистемного истощения свиней 64
2.4. Особенности клинического течения цирковирусной инфекции у свиней 67
2.5. Морфологические исследования крови у свиней с синдромом послеотъемного мультисистемного истощения 69
2.5.1. Показатели красной крови у свиней с синдромом послеотъемного мультисистемного истощения 69
2.5.2. Показатели белой крови у свиней с синдромом послеотъемного мультисистемного истощения 74
2.5.3. Биохимические исследования крови у свиней с синдромом послеотъемного мультисистемного истощения 82
2.6. Результаты изучения иммунологического статуса у поросят с СПМИС 90
2.7. Морфофункциональная характеристика лимфатических узлов свиней при цирковирусной инфекции 102
3. Обсуждение полученных результатов 119
4. Выводы 126
5. Практические предложения 128
6. Список литературы 129
Приложение 156
- Биологические свойства вирусов семейства Circoviridae
- Методы выделения и культивирования ЦВС-
- Результаты исследования эпизоотологическои ситуации по болезням свиней в Ростовской области
- Морфофункциональная характеристика лимфатических узлов свиней при цирковирусной инфекции
Введение к работе
Актуальность темы. Эмерджентные болезни являются одной из наиболее актуальных проблем современного животноводства. В инфекционной патологии свиней важная роль принадлежит недавно получившим широкое распространение болезням, ассоциированным с цирковирусами.
У свиней идентифицированы два вида цирковирусов. Цирковирус свиней типа 1 (ЦВС-1) был обнаружен в 1974 году как нецитопатогенный контаминант перевиваемой культуры клеток почек поросят РК-15 и считается непатогенным вирусом, так как не вызывает каких-либо клинических признаков у инфицированных животных.
Цирковирус свиней второго типа (ЦВС-2) является возбудителем болезни поросят, впервые зарегистрированной в Канаде в 1991 году, и в связи с поражением различных систем организма назван «синдромом послеотьёмного мультисистемного истощения» (СПМИС). Болезнь характеризуется проявлением комплекса клинических признаков, включающих потерю веса, отставание в росте, одышку, диарею, желтуху и пневмонию. В естественных условиях СПМИС чаще отмечают у поросят 6-15 недельного возраста, у которых регистрируют наибольший отход, при этом пик заболеваемости приходится на 10-ти недельный возраст. У инфицированных животных вирус обнаружен в клетках лимфоидной системы (макрофагах, дендритных клетках, Т- и В- лимфоцитах), являющихся клетками-мишенями для ЦВС-2 (Б.Г. Орлянкин с соавт., 2002; E.G. Clark, G.M.; 1997 Allan et al., 1998; A. Mankertz et al., 2000; B. O'Connor et al., 2001 и др.). Интенсивное размножение вируса в клетках иммунной системы приводит к их гибели и развитию иммунодефицитного состояния. У таких животных создаются условия для возникновения вторичных инфекций, вызываемых условно-патогенными микробами (J. Segales et al., 2001). Вместе с тем, исследований лимфоидных тканей свиней при цирковирусной инфекции свиней недостаточно, нет данных по распределению Т- и В-лимфоцитов в лимфатических узлах свиней при разной тяжести заболевания, что и определило цель нашего исследования.
Цели и задачи исследования. Выяснить эпизоотическую ситуацию по цирковирусной инфекции свиней в Ростовской области, изучить иммунный статус и морфологические изменения в лимфатических узлах у свиней, инфицированных ЦВС-2 при разной выраженности синдрома послеогьемного мультисистемного истощения.
Для решения данной цели были поставлены следующие задачи:
Выяснить эпизоотическую ситуацию по цирковирусной инфекции свиней в хозяйствах Ростовской области.
Выяснить ко-инфицирующие факторы при цирковирусной инфекции у свиней.
Изучить клинико-эпизоотологические проявления при разной степени тяжести цирковирусной инфекции у свиней.
Изучить иммунный статус свиней больных синдромом послеотьёмного мультисистемного истощения разной степени тяжести.
5. Изучить морфофункциональные изменения в лимфоидных органах при разной выраженности синдрома послеотьемного мультисистемного истощения.
Научная новизна. Выяснена эпизоотическая ситуация по инфекционным болезням свиней в т.ч. по цирковирусной инфекции свиней в хозяйствах Ростовской области. Изучены клинико-эпизоотологические особенности проявления цирковирусной инфекции свиней. Впервые изучено влияние цирковирсной инфекции на морфологические показатели крови, гистологические структуры в лимфатических узлах в зависимости от течения при спонтанной цирковирусной инфекции свиней. Изучена динамика иммунного статуса свиней больных цирковирусной инфекцией, выявлена динамика распределения Т- и В- лимфоцитов в различных лимфатических узлах свиней по мере развития цирковирусной инфекции.
Теоретическая и практическая значимость работы. Представленные результаты эпизоотологического обследования неблагополучных по цирковирозу свиноводческих хозяйств могут быть использованы при разработке планов противоэпизоотических мероприятий. Морфометрические данные исследований лимфатических узлов свиней при цирковирусной инфекции могут быть использованы для комплексной диагностики синдрома послеотьемного мультисистемного истощения свиней. Полученные данные по иммунологическому статусу свиней при цирковирусной инфекции и распределения Т- и В- лимфоцитов в лимфатических узлах больных животных могут использоваться в учебном процессе по специальностям «Биология», «Ветеринария» и «Зоотехния», написании учебных пособий и практических рекомендаций.
Диссертационное исследование проведено в соответствии с темой научных исследований Государственного научного учреждения «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» Россельхозакадемии - "Разработать методы ранней диагностики, эффективные средства и способы профилактики и лечения массовых заболеваний у молодняка высокопродуктивных животных" государственная регистрация №15070.3666026906.06.8.001.2.
Реализация результатов исследований. Результаты исследований используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по эпизоотологии и патанатомиии в ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», в работе Ростовской областной ветеринарной лаборатории, СББЖ г. Новочеркасск, ветеринарная клиника «ВитаВет» г. Шахты, внедрены в ЗАО «Батайское» Азовского района и ОАО Совхоз «Южный» Сальского района, Ростовской области.
Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных научно-практических конференциях ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», ГНУ «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» в 2006-2008 гг.
и на 3 всероссийских и международной научно-практических конференциях гг. Ростове, Воронеже, Краснодаре, Новочеркасске.
Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 10 научных работ, из них 3 - в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы. Работа изложена на 156 страницах компьютерного текста, содержит 25 таблиц, 39 рисунков. Библиографический список включает 248 источников, в том числе 194 зарубежных.
Биологические свойства вирусов семейства Circoviridae
Вирионы цирковируса представляют собой икосаэдрические частицы диаметром 16,8-20,7 нм, с плавучей плотностью в CsCl 1,33-1,37 г/см и коэффициентом седиментации 57S. Капсид вирионов состоит из 32 капсомеров. Липиды и углеводы в составе вирионов не обнаружены. Вирусы устойчивы к воздействию кислой среды (рН=3,0), хлороформу, растворителям липидов и высоким температурам (56 и 70С). Вирионы остаются стабильными при 60С в течение 30 мин и при 76С - 15 мин. Цирковирусьт свиней устойчивы к различным детергентам и дезинфицирующим средствам (Е.В. Гусева, 2002; I. Tischer et al., 1982; G.M. Allan, K.V. Phenix et al., 1994; G.M. Allan, F. McNeilly et al., 1994; G.M. Allan, 1996; J.A. Ellis, G.M. Allan, 2000; G.W. Stevenson et al., 1999; G.M. Allan, 2000; G.M. Allan, F. McNeilly et al., 2000;). Структура генома ЦВС-2. Полный геном ЦВС-2, представленный одноцепочечной кольцевой ко-валентно-замкнутой минус-ДНК молекулой, длиной 1768 нуклеотидов. Геном был клонирован и секвенирован (H.J. Buhk et al., 1985; I. Tischer et al., 1988; P.D. Lukert et al., 1995; G.M. Allan, 1996; P. Blanchard et al., 2003a; B.M. Meehan et al., 1997; F.D. Niagro et al., 1998; G.M. Allan et al., 2000). Репликация цирковирусов, предположительно, происходит через двухцепочечную репли кативную форму РНК по типу «катящегося кольца» (D. Todd et al., 1996; J. Mankertz et al., 1997; B.M. Meehan et al., 1997). Показано, что обе эти цепочки кодируют информационную РНК и белки (I. Tischer, H.J. Buhk, 1988; J. Mankertz et al., 1997). Геномная кольцевая ДНК имеет две основные открытые рамки считывания (ORF) - ORF1 и ORF2. Определена точка начала репликации ЦВС и идентифицирован белок Rep (J. Mankertz et al., 1997; A. Mankertz et al., 1998). Транскрипционный анализ методом нозерн-блоттинга выявил существование трех м-РНК. Две м-РНК кодируются вирусной плюс цепью и одна - вирусной минус цепью. Транскрипт, кодированный плюс цепью, состоящий из 990 нуклеотидов, соответствует открытой рамке считывания 1 (ORF1). Исходная точка транс крипта находится в позиции 1238. Транскрипт содержит нетранслируемую «лидерную» последовательность длинной 119 нуклеотидов (позиции 1238-1120), которая соединена с экзоном 2 транскрипта ORF1 в позиции 737. Определены транскрипционные регуляторные элементы, расположенные внутри фрагмента в 258 парах оснований (J. Mankertz etal., 1998). Вирусные белки.
У генома ЦВС-2 отсутствуют межгенные области. В геноме вируса определены четыре, по данным одних исследователей (H.J. Buhk et al., 1988; G.M. Allan, 1996; J. Mankertz et al., 1997; B. Huedepohl, B. Thacker, 1998), no данным других исследователей (B.M. Meehan et al., 1997; L. Changming et al., 2004) - пять минорных, частично перекрывающихся ORF, с потенциалом кодирования белков крупнее 5 кД. Наибольшая рассчитанная ORF1 ЦВС-2 содержит 942 нуклеотида и кодирует белок из 314 аминокислот (36 кД), гомологичный белкам Rep цирко-вирусов растений и геминовирусов (A. Mankertz et al., 1998). Подобная ORF была идентифицирована в геноме вируса болезни клюва и перьев попугаев. Белок имеет три мотива, характерных для белков, участвующих в репликации ДНК по типу «катящегося кольца», а также консенсусную последовательность. Экспериментально подтверждено, что ORF1 кодирует белок, участвующий в репликации ЦВС (A. Mankertz et al., 1998). Продукт клонированного гена ORF1 катализирует репликацию плазмиды рор-11, которая имеет область начала репликации ДНК цирковируса свиней, но сама не реплицируется в незаралсенных клетках почки поросенка. Очевидно, что этот белок играет существенную роль в репликации ЦВС (A. Mankertz et al., 1998). Была картирована область ДНК, которая определяет начало репликации ЦВС - это фрагмент длиной 111 пар оснований. Идентифицирован нона-нуклеотид (TAGTATTAC), гомологичный нона-нуклеотидам геминивируса (например, вирус саркомы мышей), растительным цирковирусам, а также вирусу анемии цыплят (CAV). Мутация в этом фрагменте блокирует репликацию (J. Mankertz et al., 1997; В.М. Meehan et al., 1997; С. Choi, С. Chae, 2000). Эти данные указывают на то, что ЦВС является уникальным вирусом, поскольку заполняет «пробел» между цирковирусами животных и растений. A.L. Hamel et al. (1998) в своей работе рассчитали для ЦВС-2 11 потенциальных ORF с предполагаемым размером белков, кодируемых отдельными ORF, от 2 до 36 кД. Однако в других исследованиях (В.М. Meehan et al., 1998; I. Morozov et al., 1998) в геноме ЦВС-2 было идентифицировано только 6 потенциальных ORF. ORP2 цирковируса свиней второго типа имеет длину 600 нуклеотидов и кодирует капсидный белок из 233 аминокислот (P. Nawagitgul et al., 2002). Предполагается, что ORF2 кодирует главный капсидый белок и содер-лсит консервативную последовательность основных аминокислот на N-конце, сходную с последовательностью основного структурного белка вируса анемии цыплят. На данный момент, не все структурные белки ЦВС-2 идентифицированы.
Методы выделения и культивирования ЦВС-
ЦВС-2 был выделен из тканей поросят, больных СПМИС, в свободной от ЦВС-1 перевиваемой культуре клеток РК-15. Кроме того, ЦВС-2 был выделен из тканей абортированных плодов и почек поросят с дерматитом и синдромом нефропатии (СДНП) (В.М. Meehan et al, 2001; В. O Connor et al., 2001; K.W. West et al., 1999; J. Choi et al., 2002). Размножаясь в культуре клеток, ЦВС не развивает ЦПД в титре 4.3-5.5 lg ТЦД5олш- Инфицированные клетки обнаруживаются РИФ и иммунопероксидазным окрашиванием (G.M. Allan et al., 1999; S. Krakowka et al., 2000). Репликация вирусной ДНК ЦВС происходит в ядре и, так как вирус не имеет своей полимеразы, репликация зависит от ферментов клетки хозяина, синтезированных в S-фазе клеточного цикла (М. Goryo et al., 1987; I. Tischer et al., 1987; M. Gassmann et al., 1988).
Были проведены испытания других культур клеток для выделения и культивирования цирковирусов. В работе, проведенной Центральной ветеринарной лабораторией Великобритании (S. Edwards, J.J. Sands, 1994), было испытано 12 клеточных культур (к/к): РК-15 (перевиваемая к/к почки поросенка, Дания), LLC-PK (почка поросенка, Англия), SK-6 (Kasza почка, Англия), РЕК (почка эмбриона поросенка, Англия), ESK (почка эмбриона поросенка, Япония), SK-L (почка поросенка L-, Япония), SK-H (почка поросенка Н, Япония), СРК (клональная линия почки поросенка, производное от SK-H, Япония), STE (линия клеток семенников, Германия) и др. В тестах ИФА на присутствие ЦВС, положительные результаты были получены на 4 культурах клеток: РЕК, SK-H, СРК и ESK. В культуре клеток РК-15 в этих исследованиях вирус не был обнаружен, хотя по данным других исследователей (D. Todd et al., 1991; G.M. Allan et al., 1994), в этой культуре клеток вирус успешно реплицировался (I. Tischer et al., 1987). Возможно, в проведенных исследованиях был использован другой штамм клеток РК-15.
В работе других исследователей (G.M. Allan et al., 1994; R. Larochelle et al., 2003; J.C. Harding et al., 2004) сообщалось, что для культивирования ЦВС было использовано 14 культур клеток разных видов животных: первичная к/к почки поросенка, к/к легкого свиньи, к/к семенников хряка, к/к РК-15, первичная к/к почки КРС, к/к семенников КРС, первичная к/к почки ягненка, к/к печени кур, клетки Vero, HEP и HELA. Репликация вируса в культуре клеток оценивалась по наличию антигена в ядрах и наработке вируса при последующих пассажах клеток первично зараженной культуры. Оценку проводили с помощью непрямой реакции иммунофлюоресценции. Результаты проведенных исследований показали, что только культуры тканей поросят и культура клеток Vero чувствительны к инфицированию цирковирусом.
При изучении характера репликации ЦВС-2, I. Tischer et al. (1987), инкубировали зараженные вирусом клетки почки поросенка РК-15, с d-глюкозамином-НС1 в дозе 300 мМ в течение 1 часа при 37С. Установлено, что глюкозамин стимулирует увеличение числа клеток, содержащих вирусный антиген, примерно в 50 раз, по сравнению с контролем, а также - репликацию ДЕК вируса.
В период репликации вируса в синхронизированной культуре клеток, инфицированной в разные периоды клеточного цикла, как уже упоминалось, синтез ДНК зависит от клеточных энзимов, эскспрессированных в S-фазе роста, то есть, репликация ДНК начинается только при условии прохождения клетками митоза. В клетках, обработанных глюкозамином, после Go или Gi фазы, начало репликации ЦВС происходило в первой S-фазе после стимуляции. В контрольной культуре латентный период продолжался до второй S-фазы. Однако, необходимость митоза для начала репликации отпадала, если клетки подвергались трансфекции с помощью ДНК цирковируса в присутствии ДЕАЕ-декстрана или в случаях, когда клетки заражали и в последующем обрабатывали глюкозамином до того, как они вошли в S-фазу после стимуляции (D.F. Gilpin et al., 2003). Таким образом, глюкозамин проявляет наибольший эффект только после инфицирования клеток и после трансфекции. Глюкозамин и ДЕАЕ-декстран индуцируют репликацию цирковируса, способствуют проникновению его генома в ядро клетки, что в необработанной культуре происходит только путем включения генома вируса в дочернее ядро в конце митоза. Обработку глюкозамином рекомендуется проводить для увеличения урожая вируса.
Таким образом, принимая во внимание необходимость прохождения зараженной клеткой стадии митоза для последующего активного размножения вируса, становится понятным развитие СПМИС преимущественно у поросят-отъёмышей и отсутствие таковой у взрослых свиней, лимфоидные клетки которых отличаются низкой митотической активностью (D.F. Gilpin et al., 2003).
Результаты исследования эпизоотологическои ситуации по болезням свиней в Ростовской области
Биогеохимическая обстановка в Ростовской области такова, что наблюдается нехватка некоторых микро- и макроэлементов, таких как медь, цинк, кобальт, фосфор, йод и других, а человек весьма активно трансформирует экологические системы. В результате нарушается обмен веществ организмов, снижается их защитная реакция, все чаще возникают ситуации, когда, казалось бы, без видимых причин возникает заболевание, и процесс его ликвидации оказывается сложен и требует больших материальных и трудовых затрат. Хозяйственно-экономические предпосылки возникновения эпизоотического процесса инфекционных болезней обусловливаются в первую очередь экономической ситуацией в целом по стране и в Ростовской области в частности. Известно, что в результате реформирования сельского хозяйства за период с 1995 по 2008 год в свиноводстве как в отрасли произошли значительные перемены, которые кардинально изменили ранее существовавшую систему хозяйствования. Как видно из таблицы 2 в первую очередь, было резко сокращено поголовье свиней в хозяйствах Ростовской области. Таким образом, в 2008 году поголовье свиней в Ростовской области составило 713,4 тысяч. Уменьшение численности животных предопределило снижение производства продукции. К настоящему времени в 54 районах РО насчитывается 384 свиноводческих хозяйств, поголовье в которых имеет тенденцию к сокращению. Одним из факторов сдерживающих развитие свиноводства, являются инфекционные болезни. По результатам наших исследований нозопрофиль инфекционной патологии свиней в Ростовской области к настоящему времени представлен 20 нозологическими единицами (таблица 3): цирковирусная инфекция, микоплазомз, актинобацилярная плевропневмония, сальмонеллез, короновирусный гастроэнтерит, колибактериоз, дизентерия, пастереллез, лептоспироз, ротовирусный энтерит, репродуктивно-респираторный синдром, гемофилезный полисерозит, диплококкоз, хламидиоз, парвовирусная инфекция, болезнь
Ауески, листериоз, рожа, стрептококкоз, классическая чума. Цирковирусная инфекция свиней в 2006 г регистрировалась в 5 - ти, в 2007 г в 8, в 2008 г в 12-ти неблагополучных пунктах (таблица 3). Заболеваемость и смертность от цирковирусной инфекции свиней соответственно были 5,5 ± 0,18 (Р 0,02) и 0,69 ± 0,07 (Р 0,1) (таблицы 4,5). В среднем за 3 года летальность находилась на уровне 12,62 ± 0,97%, (Р 0,01). По микоплазмозу количество неблагополучных пунктов достигало максимума в 2008 г. (до 19) и минимума в 2007 г. (17). Заболеваемость колебалась в пределах от 34,41 до 37,87 и в среднем была 36,2 ± 3,25 (Р 0,02) (см.табл.4). Показатель смертности в среднем находился на уровне 9,5 ± 0,39 (Р 0,05) (см.табл.5). Высокая летальность от микоплазмоза до 28,01 % отмечалась в 2008 г. В среднем летальность за 3 года составила 26,29 ± 2,0 % (Р 0,002) (см.табл.6). Актинобацилярная плевропневмония наблюдалась с 2006 по 2008 г. в 9-ти неблагополучных пунктах, заболеваемость соответственно была 17,74; 9,68; 6,47 (таблицы 4) летальность достигала в 2006 г до 26,42 %, в среднем за 3 года составил 23,19 ± 15,24 %, (Р 0,25). Неблагополучных пунктов по сальмонеллезу в 2006г. было 21, а в остальные годы идет увеличение, в 2008 г оставалось 9 неблагополучных пунктов. Летальность при сальмонеллез свиней имеет перемежающую тенденцию, так, если в 2006 г бьшо 16,17%, в 2007 г 15,5%, а в 2008 г 16,55 % (16,07 ±4,21 %,Р 0,001). Эпизоотические вспышки короновирусного гастроэнтерита наблюдались в 2006 г в 9-й, в 2007 г в 11-й и 2008 г в 12-и неблагополучных пунктах. Заболеваемость и смертность были, соответственно, 14,45 ±3,13 (Р 0,001) и 10,62 ± 2,69 (Р 0,02), а максимальная летальность достигала до в 2006 г, за 3 года средний уровень летальности составил 73,1 ± 2,97 % (Р 0,001). Колибактериоз в 2006 г отмечался в 21- м, в 2007 г в 32-х, в 2008 г в 39-и неблагополучных пунктах.
Морфофункциональная характеристика лимфатических узлов свиней при цирковирусной инфекции
Для морфологического исследования были отобраны однородная группа поросят в возрасте 5 месяцев, с дефицитом массы тела от 21 до 40%. И подтвержденным методом ПЦР диагнозом цирковирусная инфекция. При патологоанатомическом исследовании больные поросята истощены, как правило, присутствуют признаки острого воспаления или дегенерации в почках, легких, печени и лимфоидной ткани. При микроскопии в тканях обнаруживают изменения, характерные для этих состояний, но поставить диагноз на цирковирус возможно только в лабораторных условиях. Заболевание обладает высокой контагиозностью. В стаде, где циркулирует вирус, заболевание клинически проявляется у 1-5% животных. При вспышке заболевания болезнь может проявиться у 50% поросят, при этом отмечают повышение смертности поросят. Известно, что при цирковирусной инфекции происходит поражение иммунной системы. В доступной литературе мы не нашли данных о структурно-клеточных преобразованиях в лимфатических узлах, и это послужило отправным моментом нашего исследования. Нами были проведены патоморфологическое исследование поверхностных шейных, краниальных грудинных, наружных подвздошных, брыжеечных и лимфатических узлов прямой кишки. Все животных были в возрасте 5 месяцев. При макроскопическом исследовании установили, что все лимфатические узлы увеличены, особенно наружные подвздошные, прямокишечные и чревные (рис.22). При поверхностном осмотре лимфатические узлы шеи и грудной клетки достигают в диаметре 0,8-1,2см, капсула лимфатического узла умеренно напряжена, лимфатические узлы грудной клетки с поверхности имеют красно-коричневую окраску. Наружные подвздошные и прямокишечные лимфатические узлы достигают 2-2,5x0,7-1,2см, имеют бугристую поверхность красно-коричневого цвета. Брыжеечные лимфоузлы удлиненной формы, поперек имеют диаметр 0,5-0,7см, поверхность бледно-оранжевого цвета (рис.22). На разрезе все лимфатические узлы сочные, паренхима выступает над капсулой, с одной стороны или по всей окружности поверхность лимфоузлов окрашена в красно-коричневый цвет, к центру лимфатические узлы приобретают саловидный вид и бледно-розовую окраску. Нами была проведена обзорная светооптическая микроскопия, морфометрия структурных компонентов и клеточного состава по методу Г.Г. Автандилова. При увеличении микроскопа в 38,5 раз определяли площади коркового и мозгового вещества, первичных и вторичных лимфоидных узелков, коркового плато, паракортикальной зоны, мозговых тяжей, мозговых синусов, промежуточных корковых синусов, краевого синуса, капсулы и трабекул. Цитоархитектонику структурно-функциональных зон лимфатических узлов проводили при увеличении микроскопа в 990 раз. Подсчитывали абсолютное количество клеток на стандартной площади. Дифференцировали бласты, средние и малые лимфоциты, плазматические клетки, макрофаги, ретикулярные клетки, нейтрофильные и эозинофильные гранул оциты, митотически делящиеся клетки, дегенерирующие клетки (с пикнотическим ядром). Наружные подвздошные и прямокишечные лимфатические узлы достигают 2-2,5 0,7-1,2см, имеют бугристую поверхность красно-кирпичного цвета. Чревные лимфоузлы удлиненной формы, на поперечном размере имеют диаметр 0,5-0,7см, поверхность бледно-оранжевого цвета (рис.22-27). При макроскопическом исследовании установили, что все лимфатические узлы увеличены, особенно наружные подвздошные, прямокишечные и брыжеечные. При поверхностном осмотре лимфатические узлы шеи и грудной клетки достигают в диаметре 0,8-1,2см, капсула лимфатического узла напряжена, лимфатические узлы грудной клетки с поверхности имеют кирпичную окраску. На разрезе все лимфатические узлы сочные, поверхность несколько выступает над капсулой, с одной стороны или по всей окружности поверхность лимфоузлов окрашена в кирпичный цвет, к центру лимфатические узлы приобретают саловидный вид и бледно-розовую окраску. У животных 5 мес. возраста и старше, отмечается пролиферация в зонах ответственных за гуморальный иммунитет и резкое ее снижение в зонах ответственных за клеточный иммунитет (рис.28-33).
