Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 8
1.1. Этиология, эпизоотология и диагностика пастереллеза 8
1.2. Клинические симптомы заболевания 18
1.3. Гематологические и биохимические изменения 24
1.4. Патологоанатомические изменения 27
2. Собственные исследования 30
2.1. Материалы и схема исследований 30
2.2. Экспериментальные животные 30
2.3. Методы, среды и использованные реактивы
2.3.1. Гематологические исследования 33
2.3.2. Клинические и патологоанатомические исследования 37
2.3.3. Статистическая обработка результатов исследований 39
3. Результаты исследований 41
3.1. Кролики, заразившиеся пастереллезом естественным путем
3.1.1. Клинические исследования. 41
3.1.2. Гематологические исследования 43
3.1.3. Патологоанатомические изменения... 61
3.2. Кролики, зараженные пастереллезом искусственным путем
3.2.1. Клинические исследования 63
3.2.2. Гематологические исследования 66
3.2.3. Патологоанатомические исследования
4. Обсуждение 90
5. Выводы 96
6. Практические предложения 98
Литература 99
- Клинические симптомы заболевания
- Патологоанатомические изменения
- Гематологические исследования
- Кролики, зараженные пастереллезом искусственным путем
Клинические симптомы заболевания
О пастереллезе известно почти все. Тем не менее, это заболевание продолжает оставаться распространенным, опасным и трудно диагностируемым во всех отраслях животноводства. Об этом наиболее обширная информация дана в публикациях Э.А. Шегедевича (62) и А.А. Раевского (47), М.Я. Ярцева, В.И. Белоусова с соавторами (66) и других исследователей (11, 16). Об опасности пастереллеза в скотоводстве, особенно на крупных фермах, информируют М.А. Максимов и Э.П. Федорова (41), в птицеводстве - А.Н. Бо-рисенкова (7), а также И.С. Дубров, Г.Д. Ищенко (25), Р.В. Дунгук (26), в свиноводстве - И.А. Лынсим и В.А. Кузнецов (39), В.И. Геведзе (15), в коневодстве - B.C. Федосеев и др. (58), В.И. Геведзе (14), в овцеводстве - Е.А. Маринин (42), в пантовом оленеводстве - В.Г. Луницын (37, 38) и ряд других исследователей (8, 65, 95).
Однако пастереллез особо опасен в кролиководстве, поскольку его симптомы сходны с симптомами многих других болезней не только кроликов, но и зверей, сельскохозяйственных животных и птицы (36, 65, 95). Симптомы пастереллеза сходны с признаками сибирской язвы, эмкара, пироплазмоза, стафилококковых и стрептококковых инфекций, сальмонеллеза, колибакте-риоза, респираторных вирусных инфекций (у крупного рогатого скота), чумы, рожи, сальмонеллеза (у свиней), сибирской язвы, пироплазмидозов, клостридиозов, стрептококкоза (у овец), ньюкаслской болезни, инфекционного ларинготрахеита (у птиц), у кроликов - ринита, бронхиальной пневмонии, перикардита, перитонита и ряда других заболеваний (68, 76, 114, 135). Поэтому для диагностики пастереллеза необходимо исключать все эти заболевания, что является делом не только кропотливым и длительным, но и дорогостоящим. Описаны случаи, когда заболевание кроликов пастереллезом не проявляется в клинической форме. При этом животные становятся скрытыми бактерионосителями, заражающими другое поголовье (87, 125).
Сложности, связанные с диагностикой пастереллеза, особо отчетливо проявляются в кролиководстве и птицеводстве. Здесь пастереллез встречается чаще, чем в других отраслях животноводства.
Из-за быстроты распространения пастереллеза, а также значительных материальных затрат на ликвидацию заболевания, заболевших кроликов и птицу многие исследователи предлагают не лечить, а убивать, трупы утилизировать, остальное стадо фермы или хозяйства подвергать поголовной профилактической вакцинации, помещения дезинфицировать (36).
Вместе с тем, ряд видных отечественных ученых - М.Я. Ярцев, В.И. Белоусов (65) и другие (12, 29, 45, 49, 61) высказывают мнение, что пастереллез, в т.ч. и кроликов, излечим, но для этого необходимо создавать специальные штаммы для производства противопастерелезных биопрепаратов. Некоторые иностранные исследователи предлагают для лечения пастереллеза кроликов использовать антибиотики, в частности стрептомицин (130).
По сообщению А.Я. Самуйленко (51) в последние годы разработано новое поколение лекарственных средств, которые успешно используются для лечения многих болезней, ранее считавшихся трудно излечимыми, включая пастереллез всех видов животных, зверей и птицы.
Пастереллез кроликов - острое инфекционное заболевание, вызываемое микроорганизмом P.multocida - одним из шести микроорганизмов из рода Pasteurella#). Некоторые авторы (36) полагают, что P.haemolitica также вызывает пастереллез у кроликов. Однако академик И.А. Бакулов (3), И.В. Доморадский (23) установили, что идентификация видов рода Pasteurella методом ДНК-ДНК гибридизации позволяет поставить под сомнение
ДНК-ДНК гибридизации позволяет поставить прд сомнение принадлежность бактерий P.multocida и P.haemolitica к бактериям одного рода. Пастереллез у кроликов характеризуется проявлением таких симптомов, как лихорадка, общая интоксикация, огрубление волосяного покрова, риниты, чихание, затрудненное дыхание. В некоторых случаях возможно поражение нервной системы с такими симптомами, как выпячивание передних конечностей, тремор, кривошея. Некоторые исследователи выделяют хроническую форму пастереллеза (4,36, 49).
Ряд исследователей (35, 59) полагают, что пастереллез относится к зоо-нозным заболеваниям. Ю.В. Лобзин и др. (49) сообщают, что до 1955 года в СССР было описано 95 случаев заболеваний пастерелезом человека, с 1955 по 1963 г - зарегистрировали еще 21 случай, а в последние годы в России регистрируют от 1 до 5 заболеваний ежегодно. В тоже время некоторые авторы (7, 13, 48) утверждают, что пастереллез для человека не опасен.
Зарубежные исследователи, в частности СЕ. Chrisp и N.T. Foged установили, что пастереллез могут вызывать не только сами бактерии P.multocida, но и их токсины, которые обнаруживают даже там, где вирулентных бактерий уже нет (79).
По мнению P. Mercier (130) заболевание пастереллезом -основная причина серьезных экономических убытков в первую очередь в кролиководстве, и во всем мире считается одной из наиболее опасных болезней этих животных. С этим согласны многие отечественные специалисты и ученые (3, 36, 45, 65).
Столь широкий диапазон мнений ученых о пастереллезе, в т.ч. и кроликов, в значительной степени, связан с большим разнообразием микроорганизмов рода Pateurella K этому роду относят шесть видов микроорганизмов, включая P.multocida, которая, по сообщению И.А. Бакулова, Д.А. Васильева и Д.И. Козлова обитает в пищеварительном или респираторном тракте многих видов диких и домашних животных и птицы. Наиболее чувствительными к P.multocida являются кролики (3).
Патологоанатомические изменения
Для изучения измененицй, происходящих в организме кроликов, погиб-ших от пастереллеза при заболевании их естественным путем, были проведены макроскопические и микроскопические исследования ряда важных внутренних органов животных (трахея, "легкие печень, почки, селезенка, кишечник, головной мозг).
При макроскопических исследованиях погибших или умертвленных больных животных были установлены очаговые области уплотнений, очаговые или диффузные гиперемии. При этом в легких двух животных наблюдали небольшие абсцессы с уплотнениями в их верхушечных долях. У большинства кроликов трахея была гиперемирована и содержала кровяные пенообразо-вания в полости. Почки всех животных имели или не характерный палевый цвет или же были гиперемированы (7 случаев). У всех животных была гиперемирована селезенка. У некоторых кроликов в тонком отделе кишечника отмечали поражения, характерные для энтерита. Головной мозг у всех 18 животных оставался в норме.
Данные результатов микроскопических исследований важнейших внутренних органов кроликов, погибших от пастереллеза (п=12) ВнутреніІЄ їорганьї кро- \ ликов
Данные, установленные микроскопическими исследованиями. Подострый и хронический катаральный трахеит (п=6). Подслизистая обо Трахея лочка инфильтрована лимфоцитами, плазменными клетками, нейгрофи Легкие лами. В остальных случаях (п=6) - только гиперемия слизистой оболочки. Пневмония в легкой или средней форме (легкие были покрыты уплотнениями внутриальвеолярной септы). Выраженные очаги воспаления и эмфизема (п=5). Некротическая фибринозно-гнойная бронхопневмония с Печень большим количеством абсцессных образований и плевритом (п=4). Инфильтрация и гидропическая дегенерация (п=10), хронический холан гит с фиброзом (п-5), очаговый некротический гепатит (п-2). Гиперемия (п-2), дегенеративные изменения и гиалиновые образования (п=7). Нефрит, фиброз, некроз (п=3), атрофия почечных тканей (п=4). Обеднение лимфоидных фолликулов (п=3), легкий септический спленит (n Y Катаральный энтерит в легкой форме (п=6)
Макроскопические исследования внутренних органов погибших от пастереллеза кроликов не всегда улавливают изменения, происходящие в организме в процессе болезни. Так, при макроскопических исследованиях в почках установили лишь изменения их цвета. Микроскопические исследования (табл. 6) не только подтвердили данные миакроскопических исследований, но и позволили установить изменения внутренних органов по значительно большему количеству показателей. Это согласуется с данными, полученными учеными Малайзии (66) и Греции (146) с использованием современных электронно-микроскопических систем.
Одним из малоизученных как в отечественной, так и в зарубежной науке, остается вопрос о заражаемости кроликов пастереллезом и характера заболевания в зависимости от количества попадающих в их организм P.multocida. С целью изучения этой проблемы был проведен опыт, в котором 5 кроликов были подвергнуты экспериментальному заражению 1 мл раствора с различной концентрацией в нем живых микроорганизмов P.multocida. Полученные результаты представлены в табл. 7.
Из табл. 7 следует, что заражаемость и острота течения пастереллеза у кроликов непосредственно зависят от количества попадающих в их организм P.multocida. Чем больше бактерий попадает в организм, тем более острую форму имеет пастереллез. Так, при численности P.multocida 1 мл инноку-лированного раствора 1x108, продолжительность жизни зараженных кроликов составила 19 часов, при 8x107 - 20 часов, с дальнейшим снижением концентрации P.multocida продолжительность жизни кроликов увеличилось [до 22 и 25 часов, а при концентрации 1x10 - она составила 48 часов.
Поэтому концентрация 1x107 была определена в качестве оптимальной для экспериментального заражения и дальнейших исследований, т.к. эта концентрация представляла больше времени для наблюдений и анализов.
Течение болезни и клинические симптомы
Данные по течению пастереллеза у экспериментально зараженных кроликов приведены в табл. 8.
Данные табл. 8 подтверждают, что острота течения пастереллеза, его симптомы зависят от количества бактерий P.multocida, попадающих в организм заболевших животных. При высокой дозе заражающего начала (1 и 2 опытные группы), пастереллез протекает в острой форме и все животные погибают в течение первых двух суток (от 19 до 49 часов после инокуляции P.multocida).
При невысоких дозах (3 группа, 0?1х10 1 мл) болезнь имеет вяло текущие симптомы. Здесь гибель первых двух зараженных кроликов произошла в течение второй недели после начала заболевания, три кролика к концу третьей недели не имели клинических признаков пастереллеза. Тем не менее они были убиты для аутопсии. Все это позволило сделать заключение, что в данном случае (3-я опытная группа) болезнь носила хронический характер. Таблица 8 Течение и исход заболевания у экспериментально зараженных кроликов (п=5 в каждой группе). Опытная группа Доза введенного раствора Исход заболевания Характер и клинические особенности течения болезни Контрольная Ни один кролик не проявил признаков заболевания, не установлены патологические изменения после убоя и аутопсии.
Особый интерес представляют данные, полученные по 4-ой опытной группе, кроликам которой был введен раствор аналогичной концентрации, как и в 3-ей группе, но с добавлением в него токсинов P.multocida. В этой группе заболели и погибли все кролики, и болезнь протекала более остро, чем у их аналогов из 3-ей группы. Характер и клиника заболевания у 4-ой группы носила промежуточный характер между острым и хроническим течением, что позволяет считать эту форму заболевания - подострой. 3.2.2. Гематологические исследования
Данные, полученные в результате исследований красных кровяных телец в крови кроликов, искусственно зараженных пастереллезом, показаны в табл. 9.
Данные табл. 9 показывают, что заражение кроликов большими дозами Р.тшг.осіс1а,(первая и вторая группа) в первые же дни привела к некоторому снижению по сравнению с контролем в их крови количества эритроцитов, уменьшению концентрации гемоглобина и гематокрита.
Во всех группах наблюдали тромбоцитоз (рис. 28), который сохранялся весь экспериментальный период. Hawkey (114) и Jain (119) полагают, что увеличение числа тромбоцитов является не только индикатором заболевания «роликов пастереллезом, но и выполняет положительную функцию - тромбоциты связывают эндотоксины и способствуют удалению из организма ядовитых веществ, вырабатываемых P.muitocida.
Аналогичные изменения в эритрограмме, однако в менее выраженной форме, произошли в крови кроликов, получивших меньшие дозы P.muitocida (3 группа).
Поскольку эти данные согласуются с данными эритрограммы кроликов, заразившихся естественным путем (табл. 2), то это позволяет сделать вывод о том, что увеличение в крови количества тромбоцитов и незначительное снижение эритроцитов в сочетании со снижением концентрации гемоглобина и показателя гематокрита, являются первыми признаками начала заболевания кроликов пастереллезом.
Гематологические исследования
Кролики, по сообщению многих исследователей (3, 43, 82, 95), более восприимчивы к пастереллезу, чем другие виды лабораторных и сельскохозяйственных животных. Учитывая значение кролиководства в производстве мяса и пушнины, а также потребности в кроликах ветеринарной, биологической и биотехнологической наук, во многих странах мира со второй половины 90-х годов XX века возобновлены исследования по проблемам этого заболевания.
Использование современных технических средств исследований позволило уточнить механизм поражения отдельных органов и тканей у заболевших пастереллезом кроликов, в частности нервной системы, которые проявлялись в форме вывихов передних конечностей, кривошеи и дрожания (92, 97,124,153).
У заболевших кроликов мы, как и другие исследователи (71, 107, 141) наблюдали тромбоцитоз, который сохранялся до двух недель течения болезни: Кролики, зараженные невысокой дозой P.multocida, выживали гораздо дольше, у них наблюдали тромбоцитоз в более выраженной форме. Hawkey (114), Jain (119) полагают, что тромбоцитоз не только индикатор заболевания дсроликов пастереллезом, но и выполняют положительную функцию - тромбоциты связывают эндотоксины и способствуют удалению из организма ядовитых веществ, вырабатываемых P.multocida.
В наших исследованиях мы наблюдали у заболевших животных значительное увеличение общего числа лейкоцитов, которое достигает пика на третий день заболевания, и с десятого дня начинает быстро снижаться. Процент общего числа моноцитов также увеличивается в первые дни, процентное содержание базофилов в начале болезни, наоборот, снижается и к концу третьей недели восстанавливается до показателей крови здоровых животных. Эти данные согласуются с результатами, полученными рядом зарубежных исследователей (67, 114, 144), а также с данными по физиологическим нормам этих показателей у кроликов. Об этом сообщают Б.В. Уша и И.М. Беляков (57).
Мы, как и ряд других зарубежных исследователей (67, 148, 160) при изучении функции печени у заболевших животных наблюдали повышение ACT и АЛТ с первого дня заражения кроликов как естественным, так и искусственным путем. Причем, некоторые исследователи (122) полагают, что изменение активности аланинаминотрансферазы является более важным показателем при повреждении печени, чем ACT.
Однако содержание в крови ACT и АЛТ, как и многих других ферментов, подверждено значительным колебаниям (в несколько раз) под влиянием внешних и внутренних факторов (физиологическое состояние животных, состав кормов, время взятия крови, стрессовые ситуации и многие другие). Поэтому к использованию показателей изменения содержания в сыворотке крови АЛТ и ACT при диагностике следует подходить с большой осторожностью и использовать для диагностики пастереллеза показатели изменения аминотрансфёраз только в комплексе с другими показателями сыворотки крови. Это согласуется с мнением ряда зарубежных (82, 95) и отечественных исследователей (20).
Мы, как и некоторые другие исследователи (119, 122), наблюдали повышение общего и прямого билирубина, что могло быть вызвано внутрипече-ночной непроходимостью желчных протоков и заболеванием печеночных клеток. , Гипогликемия, отмеченная в настоящей работе, могла быть вызвана понижением гликогена в печени, из-за повреждения печеночных клеток (80, 148).
Понижение общего содержания белка и значительное снижение альбумина указывает на повреждение печени, поскольку печень ответственна за производство значительной части белка плазмы крови. При изучении функции почек наблюдалось повышение мочевины, моче-вой кислоты и креатинина. Это может быть следствием влиянием микроорганизмов P.multicida или его токсинов на почки. Наши данные согласуются с результатами, полученными Randa Hassan (МО), Amany A.M. Abdalla (70) и Fatma M.A.Y (95), которые после заражения P.multocida кур, обнаружили в их крови увеличение мочевой кислоты и креатинина. Это также согласуется с данными Coles (80), который сообщает о повышении креатинина и мочевой кислоты при почечных заболеваниях у многих животных.
Гипокальцемия, отмеченная в настоящей работе, возможно, явилась следствием понижения кальциевой реабсорбции поврежденных почечных канальцев. Аналогичного мнения придерживаются некоторые зарубежные исследователи (80).
Наблюдавшееся нами увеличение содержания фосфора, также могло возникнуть из-за почечных заболеваний. В организме метаболизм кальция и фосфора тесно связан друг с другом и гипокальцемия всегда сопровождается гиперфосфатемией (80, 122).
В результате макро- и микроскопических исследований трахеи у кроликов, заражённых естественным путем, в 6 случаях установили подострый и хронический катаральный трахеит, в остальных случаях - гиперемию слизистой оболочки. В легочной ткани основные изменения вызывала вялотекущая интерстициальная (внутритканевая) пневмония. В некоторых случаях наблюдали очаговую геморрагическую эмфизему. В легких некоторых животных отмечались некротизирующая фибринозно-гнойная бронхопневмония с множественными абсцессами и плевритом. Эти результаты аналогичны с теми, о которых сообщают некоторые зарубежные исследователи (137, 162).
Кролики, зараженные пастереллезом искусственным путем
Для изучения измененицй, происходящих в организме кроликов, погиб-ших от пастереллеза при заболевании их естественным путем, были проведены макроскопические и микроскопические исследования ряда важных внутренних органов животных (трахея, "легкие печень, почки, селезенка, кишечник, головной мозг).
При макроскопических исследованиях погибших или умертвленных больных животных были установлены очаговые области уплотнений, очаговые или диффузные гиперемии. При этом в легких двух животных наблюдали небольшие абсцессы с уплотнениями в их верхушечных долях. У большинства кроликов трахея была гиперемирована и содержала кровяные пенообразо-вания в полости. Почки всех животных имели или не характерный палевый цвет или же были гиперемированы (7 случаев). У всех животных была гиперемирована селезенка. У некоторых кроликов в тонком отделе кишечника отмечали поражения, характерные для энтерита. Головной мозг у всех 18 животных оставался в норме.
Результаты микроскопических исследований пораженных органов приведены в табл. 6. Таблица 6
Данные результатов микроскопических исследований важнейших внутренних органов кроликов, погибших от пастереллеза (п=12)
Данные, установленные микроскопическими исследованиями. Подострый и хронический катаральный трахеит (п=6). Подслизистая обо Трахея лочка инфильтрована лимфоцитами, плазменными клетками, нейгрофи Легкие лами. В остальных случаях (п=6) - только гиперемия слизистой оболочки. Пневмония в легкой или средней форме (легкие были покрыты уплотнениями внутриальвеолярной септы). Выраженные очаги воспаления и эмфизема (п=5). Некротическая фибринозно-гнойная бронхопневмония с Печень большим количеством абсцессных образований и плевритом (п=4). Инфильтрация и гидропическая дегенерация (п=10), хронический холан гит с фиброзом (п-5), очаговый некротический гепатит (п-2). Гиперемия (п-2), дегенеративные изменения и гиалиновые образования (п=7). Нефрит, фиброз, некроз (п=3), атрофия почечных тканей (п=4). Обеднение лимфоидных фолликулов (п=3), легкий септический спленит (n Y Катаральный энтерит в легкой форме (п=6)
Макроскопические исследования внутренних органов погибших от пастереллеза кроликов не всегда улавливают изменения, происходящие в организме в процессе болезни. Так, при макроскопических исследованиях в почках установили лишь изменения их цвета. Микроскопические исследования (табл. 6) не только подтвердили данные миакроскопических исследований, но и позволили установить изменения внутренних органов по значительно большему количеству показателей. Это согласуется с данными, полученными учеными Малайзии (66) и Греции (146) с использованием современных электронно-микроскопических систем.
Одним из малоизученных как в отечественной, так и в зарубежной науке, остается вопрос о заражаемости кроликов пастереллезом и характера заболевания в зависимости от количества попадающих в их организм P.multocida. С целью изучения этой проблемы был проведен опыт, в котором 5 кроликов были подвергнуты экспериментальному заражению 1 мл раствора с различной концентрацией в нем живых микроорганизмов P.multocida. Полученные результаты представлены в табл. 7.
Из табл. 7 следует, что заражаемость и острота течения пастереллеза у кроликов непосредственно зависят от количества попадающих в их организм P.multocida. Чем больше бактерий попадает в организм, тем более острую форму имеет пастереллез. Так, при численности P.multocida 1 мл инноку-лированного раствора 1x108, продолжительность жизни зараженных кроликов составила 19 часов, при 8x107 - 20 часов, с дальнейшим снижением концентрации P.multocida продолжительность жизни кроликов увеличилось [до 22 и 25 часов, а при концентрации 1x10 - она составила 48 часов.
Поэтому концентрация 1x107 была определена в качестве оптимальной для экспериментального заражения и дальнейших исследований, т.к. эта концентрация представляла больше времени для наблюдений и анализов. Течение болезни и клинические симптомы Данные по течению пастереллеза у экспериментально зараженных кроликов приведены в табл. 8.
Данные табл. 8 подтверждают, что острота течения пастереллеза, его симптомы зависят от количества бактерий P.multocida, попадающих в организм заболевших животных. При высокой дозе заражающего начала (1 и 2 опытные группы), пастереллез протекает в острой форме и все животные погибают в течение первых двух суток (от 19 до 49 часов после инокуляции P.multocida).
При невысоких дозах (3 группа, 0?1х10 1 мл) болезнь имеет вяло текущие симптомы. Здесь гибель первых двух зараженных кроликов произошла в течение второй недели после начала заболевания, три кролика к концу третьей недели не имели клинических признаков пастереллеза. Тем не менее они были убиты для аутопсии. Все это позволило сделать заключение, что в данном случае (3-я опытная группа) болезнь носила хронический характер. Течение и исход заболевания у экспериментально зараженных кроликов (п=5 в каждой группе). Опытная группа Доза введенного раствора Исход заболевания
