Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1 Ветеринарно-санитарное состояние сырья, комбикормов, комбикормовых предприятий 12
1.2 Методы ветеринарно-санитарного контроля токсичности, стафилококков 40
1.3 Способы улучшения ветеринарно-санитарного качества сырья и комбикормов 58
Задачи исследований 68
ГЛАВА 2. Собственные исследования 73
2.1 Материал и методы исследований 73
2.2 Результаты исследований 102
2.2.1 Изучение ветеринарно-санитарного состояния сырья, комбикормов и объектов комбикормовых предприятий 102
2.2.1.1 Общая бактериальная обсемененность и обсемененность кишечной палочкой сырья и комбикормов 102
Зерновое сырье 102
Незерновое сырье 106
Комбикорма , 109
2.2.1.2 Обсемененность стафилококками сырья и комбикормов 112
2.2.1.3 Микологическая и токсикологическая характеристика сырья и комбикормов 117
Кукуруза 117
Пшеница 119
Ячмень 121
Овес 122
Зерносмесь, горох, рожь. Сорго 125
Отруби 127
Рыбная мука 127
Мясокостная мука 128
Молоко сухое 131
Жмыхи и шроты 132
Дрожжи 132
Травяная мука 133
Премиксы 133
Комбикорма 134
2.2.1.4 Токсикологическая оценка микофлоры, выделенной из сырья и комбикормов 140
2.2.1.5 Ветеринарно-санитарная характеристика технологического оборудования, складских помещений, транспортных средств и других объектов комбикормового завода 142
2.2.1.6 Ветеринарно-санитарное состояние импортного сырья 148
Кукуруза 148
Ячмень 149
Другие виды сырья (пшеница, овес, сорго, рис, тапиока, шроты).. 153
2.2.2 Исследования по изысканию способов улучшения ветеринарно-санитарного качества сырья и комбикормов 154
2.2.2.1 Влияние ИК-излучения на микофлору зернового сырья и комбикормов 158
2.2.2.2 Влияние УФ-излучения на микофлору зернового сырья 163
2.2.2.3 Влияние на микофлору зернового сырья и комбикормов экструдирования 165
2.2.2.4 Влияние на микофлору зернового сырья и комбикормов гранулирования 166
2.2.2.5 Влияние на микофлору зернового сырья и комбикормов поджаривания и пропаривания 167
2.2.2.6 Влияние на микофлору зернового сырья сушки 171
2.2.2.7 Влияние на микофлору ячменя линии тепловой обработки фирмы Джи-э-Джи 173
2.2.2.8 Обезвреживание сырья и комбикормов 173
2.2.2.8.1 Изучение токсигенных свойств грибов, выделенных из комбикормов и сырья 174
2.2.2.8.2 Исследование естественно обсемененных сырья и комбикормов на наличие микотоксинов... 175
2.2.2.8.3 Влияние ИК-,УФ-излучений, пропаривания, поджаривания и поджаривания с предварительным пропариванием на содержание афлатоксина В1 и токсичность пшеницы, искусственно зараженной Aspergillus flaws NRR.L №2999 176
2.2.2.9 Влияние ИК-, УФ-излучений на общую бактериальную обсемененность, кишечную палочку и стафилококки сырья и комбикормов 180
2.2.2.10 Влияние тепловой обработки на общую бактериальную обсемененность сырья и комбикормов ..184
2.2.2.11 Влияние экструдирования и гранулирования на общую бактериальную, стафилококковую обсемененность, обсемененность кишечной палочкой сырья и комбикормов 185
2.2.2.12 Влияние сушки зернового сырья и отрубей на общую бактериальную обсемененность 189
2.2.2.13 Влияние очистки и шелушения зернового сырья на общую бактериальную обсемененность 192
2.2.2.14 Производственная проверка обеззараживания сырья и комбикормов способами экструдирования и гранулирования 193
2.2.2.15 Изучение возможности использования электромагнитного поля сверхвысокой частоты (СВЧ) для улучшения ветеринарно-санитарного качества сырья и комбикормов 197
2.2.3 Исследование обеззараживающей способности химических средств на объекты комбикормовых предприятий 201
2.2.4 Разработка и совершенствование методов контроля ветеринарно-санитарного качества сырья и комбикормов 206
2.2.4.1 Разработка методики определения стафилококков в сырье, БВД и комбикормах 206
2.2.4.2 Исследования по совершенствованию методики определения токсичности белкового сырья животного происхождения 222
2.2.4.2.1 Оценка существующих методов определения токсичности белкового сырья животного и растительного происхождения 223
2.2.4.2.1.1 Оценка экстрагентов в существующих методах определения токсичности белкового сырья животного и растительного происхождения 224
2.2.4.2.1.2 Исследование влияния качества жировой, белковой фракций, общей бактериальной обсемененности, пестицидов на формирование токсических свойств рыбной и мясокостной муки 228
2.2.4.2.2 Изучение эффективности экстрагирования токсических соединений из белкового сырья животного происхождения различными растворителями 234
2.2.4.2.3 Определение оптимальных условий экстрагирования токсических соединений из мясокостной и рыбной муки 238
2.2.4.2.4 Определение оптимального соотношения навески и экстрагента..242
2.2.4.2.5 Оценка эффективности извлечения токсических соединений лучшими экстрагентами на белых мышах 246
2.2.4.2.6 Испытание различных биологических тест объектов при определении токсичности белкового сырья животного происхождения 252
2.2.4.2.7 Исследования чувствительности белых мышей к токсическим соединениям белкового сырья животного происхождения в зависимости от их массы 255
2.2.4.2.8 Производственная проверка методики определения общей токсичности муки кормовой животного происхождения, муки кормовой из рыбы, морских млекопитающих и ракообразных на белых мышах 257
2.2.4.3 Исследования по разработке методики определения токсичности травяной муки .257
2.2.4.4 Экспериментальные исследования по усовершенствованию методики определения токсичности комбикормов на белых мышах 260
2.2.4.5 Экспериментальные исследования по усовершенствованию методики определения токсичности зернового сырья, продуктов его переработки на белых мышах и результаты производственной проверки 264
3. Расчет экономической эффективности 270
ГЛАВА 3. Обсуждение результатов 274
Выводы 315
Предложения для практики 323
Список литературы 326
Приложения 366
- Способы улучшения ветеринарно-санитарного качества сырья и комбикормов
- Влияние ИК-излучения на микофлору зернового сырья и комбикормов
- Влияние экструдирования и гранулирования на общую бактериальную, стафилококковую обсемененность, обсемененность кишечной палочкой сырья и комбикормов
- Оценка эффективности извлечения токсических соединений лучшими экстрагентами на белых мышах
Способы улучшения ветеринарно-санитарного качества сырья и комбикормов
Исходя из теоретических предпосылок о возможности распространения возбудителей заболеваний с/х животных через корма и большого фактического материала, подкрепляющего такую возможность, всерьёз встал вопрос об улучшении ветеринарно-санитарного качества всех видов кормовых средств.
Ухудшение ветеринарно-санитарного качества кормов возможно за счёт интенсивного развития разнообразных микроорганизмов (бактерий, микроскопических грибов), способных вызвать соответствующую инфекцию или токсикоз. Говоря об экологических проблемах микотоксикозов, А.В. Кушнарёв (1996) считает, что они вышли за рамки интересов отдельных лабораторий, научных центров и даже государств и превратились в международную проблему, находясь в центре внимания таких международных организаций как ВОЗ, ФАО, ЮНЕП (Программа ООН по окружающей среде), МАИР (Международное агентство по исследованию рака), ИЮПАК (Международный союз чистой и прикладной химии) и др. О том, что используемые в животноводстве корма более чем на 70% содержат токсины биологической природы, указывает А.Г.Шахов (2000). Вопросы ветеринарно-санитарного качества кормов подробно изложены в подразделе 1.1.
Решение этой проблемы шло и продолжает развиваться в направлении использования химических, физических и биологических факторов. Вместе с тем, помимо выполнения поставленной задачи - инактивации микроорганизмов и продуктов их жизнедеятельности, любой из предлагаемых способов не должен снижать питательную ценность кормов и не оставлять в них вредных веществ.
К химическим способам следует отнести, прежде всего, использование органических кислот - пропионовой, уксусной, муравьиной, молочной и др. и их смесей в различных соотношениях.
Исследования по изучению консервирующего действия пропионовой, сорбиновой кислот, пиросульфита натрия на зерновом сырье, сырье животного происхождения и комбикорме, выполненные в Грузинском филиале ВНИИКП В. Нанобашвили (1979), показали, что лучшие результаты получены при внесении пропионовой кислоты и пиросульфита натрия в количестве 0,3-0,9% от массы продукта. Об эффективности использования пропионовой кислоты и пиросульфита натрия сообщают Е.М, Кострова, Ф.Д. Братерский (1980).
Пропионовая кислота, введённая в сырье и комбикорм в количестве 0,5 и 0,7% к их массе, приостанавливает порчу жира. В контрольных образцах комбикорма после двух месяцев хранения перекисное число жира равнялось 1,59% J2,a в образцах, обработанных пропионовой кислотой (0,5 и 0,7%) -соответственно 0,7-0,8% Т2.(Э. Пирцхалишвили, В. Нанобашвили, 1979).
Для снижения общей бактериальной обсеменённости и инактивации сальмонелл в комбикормах Н. Tiefenbacher (1981) предлагает вводить в них пропионовую кислоту в количестве 0,3%. Использование такого комбикорма не оказало отрицательного влияния на животных. Обеззараживание сальмонелл в рыбной муке пропионовой кислотой и водой рекомендуют проводить V. Reeisse, A. Hafke (1979).
А.П. Вайцекавичюс (1970) предложил метод обеззараживания и обезвреживания кормов, поражённых аспергиллами, пиросульфитом натрия.Комбикорм обеззараживался спустя 35 суток после добавления 1,5% пиросульфита натрия. Остаток его в комбикорме после этого срока составил 0,19-0,38% от первоначального уровня. Обработка кормов данным веществом не оказывает существенного влияния на их химический состав.
По данным Н.А. Спесивцевой, Б.Н. Хмелевского (1975) пропионовая кислота обеззараживает зерно в дозе 0,02% на 12 тонн при влажности его 18% и 0,023% на 24 тонны с влажностью 30%. Пиросульфит натрия в количестве 0,4-0,5% к масбе зерна губителен для грибов.
Е. Hanssen, G.Hagedorn (1969) отмечают, что афлатоксины растворимы во многих органических растворителях: бензоле, этаноле, хлороформе. Для выведения афлатоксинов может использоваться тройная азеотропная смесь: гексан- ацетон- вода и 80%-ный изопропанол при 60С. Но эти вещества извлекают и жиры, поэтому исключается их использование для удаления афлатоксинов из жиросодержащих продуктов. Кроме того, они влияют на вкус, аромат и их трудно вывести из продукта. Авторами испытаны и другие химические реагенты с обнадёживающими результатами: 6,0%-ный раствор перекиси водорода, 10,0%-ная соляная и уксусная кислоты, хлор, окись пропилена, хлористый кальций. Следует отметить, что после обработки газообразным хлором продукт приобретает чужеродный запах и становится несъедобным.
Godfrey, Т. Mann, К. Homer, Gardner et al (1971) эффективно использовали аммиак и метиламин для разрушения афлатоксинов в хлопковом шроте и семенах. Н.К. Gardner et al (1971) сообщают о детоксикации арахисового и хлопкового шротов с помощью газообразного аммиака, имеющего чистоту 99,99%, под давлением 114 фунтов/ кв. дюйм при t 21С. K.R. Natarajan et aJ (1975) достигли разрушения афлатоксинов в изолятах арахисовых белков гипохлоритом натрия, который добавлялся в количестве 0,05-0,30%.
О разрушении афлатоксинов ( Вь В2. Gb G2) с помощью перманганата калия и гипохлорита натрия сообщают W. Trager, L. Stoloff (1967).
Для снижения содержания афлатоксинов в арахисовой муке до безопасного предела ( 30 мг/кг) её обрабатывают при нагревании щёлочью, аммиаком, озоном или смесью ацетон : вода (90:10). После обработки арахисовую муку сушат 24 часа при комнатной температуре и 1 час при 55С (F.G. Dollear, G.E. Mann et al, 1968).
И.А. Курманов (1963) сообщает о различных способах воздействия на зерно, заражённое грибами Fus.sporotrichioides, - автоклавированием, кипячением,, вымачиванием с последующим автоклавированием, а также испытана обработка зерна окисью этилена, формалином, растворами соляной кислоты, нашатырным спиртом. Наилучшие результаты выявлены при вымачивании зерна в течение 48 часов с 4-х кратной сменой воды и последующим автоклавированием в течение 1 часа.
Проведя исследования с препаратом аллвита фирмы АО «Пайонер Интернейшнл Групп» США, А.В. Кушнарёв, В.В. Иванцев, В.Г. Иванов (1997) рекомендуют его в качестве консерванта, бактерио- и фунгиостатика из расчёта 0,5-1,0 кг/т зерна при влажности 12-20% и 5,0-10 кг/т - для инактивации патогенных микроорганизмов. Испытано влияние аллвита на E.coli, S. typhi murium, Asp.flavus, Penicillium, Fusarium.
Влияние ИК-излучения на микофлору зернового сырья и комбикормов
Вместе с изучением культуральных и биохимических свойств при различных условиях выращивания такой же интерес представляет влияние этих условий на количественное накопление стафилококков. Результаты опытов представлены в таблице 85.
Анализ полученных результатов позволяет сделать заключение о том, что условия культивирования определенных образом влияют на интенсивность роста и развития стафилококков. Так, через 24 часа культивирования при 30С колонии стафилококков были в виде чуть заметных точек, без пигмента и проявления лецитовителлазной активности. При 37С они были уже крупнее, хотя также без пигмента и проявления ЛВА. При 40Сколонии стафилококков через сутки были 0,7-1,0 мм в диаметре с хорошо выраженным цветом пигмента и четким проявлением ЛВА.
Более продолжительное культивирование в течение 41-42 ч. при 30 С сказалось тем, что колонии стафилококков достигли 0,5-0,7 мм в диаметре, обозначился цвет пигмента, а зона ЛВА составила около 1 мм.
Культивирование посевов при 37С в течение 41-42 ч. способствовало более интенсивному росту и развитию стафилококков. Колонии были 0,7-0,9 мм в диаметре, желтого цвета, а зона ЛВА достигла 1,5 мм. Наблюдения за ростом и развитием стафилококков в течение 41-42 ч. при 40С выявили, что колонии достигли 1,5 мм в диаметре, пигмент был ярко желтого цвета, зона ЛВА составила 2 мм.
Следует отметить, что при 24 ч. культивировании и 30 С количественный подсчет произвести нельзя, а повышение температуры до 40С позволило выявить 6817,0±1164,0 тыс/г. При 37С культивирования подсчет микроорганизмов было вести трудно из-за незначительности их величины. Количественное содержание стафилококков после 41-42 ч. культивирования при 30, 37 т 40С было различным, но эти различия статистически недостоверны.
Вместе с тем, как нами уже частично отмечалось, для более быстрой предварительной оценки проб сырья и комбикормов на наличие стафилококков, выявления их некоторых культуральных и биохимических свойств целесообразно посевы культивировать при температуре 40С. В этих условиях из посевов старых культур уже через 24 часа вырастают достаточно крупные колонии с хорошо выраженным пигментом и четким проявлением лецитовителлазной активности.
Как известно из литературных источников (A.M.Смирнова, 1977; Н.С.Королева, В.Ф.Семенихина, 1980) и наших исследований, ни одна из известных селективных сред и модифицированная нами - Мод.ЖСА не дает роста чистой культуры коагулазоположительных стафилококков, им сопутствуют непатогенные стафилококки и микрококки. По морфологии колонии этих культур, как правило, неразличимы. В связи с этим возникает необходимость проведения дифференциации выращенных культур.
Для дифференциации рода Staphylococcus от рода Micrococcus учитывают вид колоний, цвет пигмента, подвижность, расположение клеток, окраску по Граму, а также способность последнего ферментировать в анаэробных условиях глюкозу и глицерин.
Выявление культуральных, морфологических и биохимических свойств выделенных кокковых культур показало, что из изученных 693 штаммов выпуклые колонии были у 144, слегка приподнятые - у 549; имели золотистый цвет пигмента - 14, желтый - 7, кремовый - 60 и белый - 612 культур (табл.86). Подвижностью обладали 98 культур, а остальные 595 были неподвижны. Микроскопированием окрашенных по Граму препаратов выявлено: грамотрицательных - 75 культур, грамположительных - 618; расположение клеток неправильными кучками, тетрадами, пакетами - 144 культуры; виноградными гроздьями, одиночными парами - 549. Все штаммы микроорганизмов образовывали каталазу. Глюкозу и глицерин в анаэробных условиях ферментировали 441 и 525 культур, а не ферментировали - 252 и 168 соответственно. Отнесено к роду Staphylococcus - 549 штаммов и 144 штамма -к роду Micrococcus и Planococcus.
Таким образом, результаты проведенных исследований указывают на то, что для дифференциации рода Staphylococcus от рода Micrococcus необходимо учитывать культуральные, морфологические и биохимические свойства, представленные в таблице 86.
Для отнесения культур рода Staphylococcus к одному из трех видов необходимо учитывать их биохимические свойства.
Биохимические свойства стафилококков, выделенных из сырья и комбикормов (табл.87), показывают, что из 549 изученных штаммов имели лецитовителлазную активность 12 (2,2%), положительную реакцию плазмокоагуляции - 60 (10,9%), ДНК-азную активность - 141 (25,7%), фосфатазную активность - 310 (56,5%). Гемолиз эритроцитов вызывали 82 штамма (14„9%), разжижали желатин - 101 (18,4%), лизоцимной активностью обладали 87 (15,8%) и ферментировали маннит в анаэробных условиях 89 (16,2%), глюкозу - 441 (80,3%), глицерин- 525 (95,6%) культур стафилококков.
Исходя из результатов изучения биохимических свойств и данных литературы (А.К.Акатов и М.Л.Хатеневер, 1976; А.М.Смирнова и др., 1977; Л.Б.Борисов, 1979; К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин, 1980; Ф.К.Черкес, 1980; М.О.Биргер, 1982) для определения видового состава нами взяты следующие показатели: реакция плазмокоагуляции (РПК); децитовителлазная активность (ЛБА); ДНК-азная и фосфатазная активность; ферментация маннита в анаэробных условиях.
Влияние экструдирования и гранулирования на общую бактериальную, стафилококковую обсемененность, обсемененность кишечной палочкой сырья и комбикормов
Величину навески определяли, исходя из количества концентрированных кормов, предусмотренных рационом кормления для лабораторных мышей в пределах 10,0 г. В связи с этим для 5 голов, которые использованы в опыте, брали навеску сырья, равную 50,0 г.
Результаты исследований по определению оптимального соотношения навески и экстрагента, представленные в таблице 95, показывают, что масса экстракта из 50,0 г мясокостной муки с использованием различных растворителей (хлороформ-этанол 2:1, эфир-этанол 2:1, ацетон) колебалась от 4,60 до 7,89 г, а из 50,0 г рыбной муки составляла 3,82-7,80 г. Получаемое количество экстракта достаточно для перорального введения 5 мышам.
Результаты опытов по выяснению влияния соотношения экстрагента к массе навески на степень извлечения токсических соединений из белкового сырья животного происхождения представлены в таблице 95.
Анализ результатов показывает, что в экстракте мясокостной муки (проба 43) свободных жирных кислот обнаружено 52%, а ДДТ - 39% по сравнению с контролем при экстрагировании смесью эфир-этанол (2:1), а соотношение экстрагента к массе навески составляло 3:1.
При соотношении экстрагента к массе навески 4:1 в экстракте мясокостной муки (проба 46), полученном той же смесью растворителей, свободных жирных кислот обнаружено на 30%, а ДДТ - на 16% больше, чем при соотношении 3:1.
Такая же закономерность выявлена и при извлечении токсических соединений из проб рыбной муки. Так, в экстракте (проба 44), полученном экстрагентом эфир-этанол (2:1) при соотношении его к массе навески З.Т свободных жирных кислот обнаружено 64%, ДДТ - 59% по отношению к контролю. При увеличении соотношения экстрагента к массе навески до 4:1 (проба 45) количество обнаруженных свободных жирных кислот увеличилось на 20%, а ДДТ - на 4%.
При исследовании экстрактов мясокостной и рыбной муки, полученных смесью хлороформ-этанол (2:1) при соотношении к массе навески 3:1 и 4:1 установлено следующее: в экстракте из мясокостной муки (проба 87) при соотношении экстрагента к массе навески 3:1 обнаружено свободных жирных кислот 60%, а ДДТ - 58%, тогда как в экстракте, полученном при соотношении 4:1, выявлено свободных жирных кислот больше на 22%, а ДДТ - на 19% по отношению к количеству этих соединений в экстрактах из навесок при соотношению их к экстрагенту 3:1.
Такая же закономерность отмечается и в экстрактах, полученных из рыбной муки (проба 88) этим же экстрагентом. Содержание свободных жирных кислот увеличилось на 15%, а ДДТ - на 34% и составило соответственно 79% и 95% по отношению к контролю.
Что касается ацетона как экстрагенга, то наши исследования показали: увеличение соотношения экстрагенга к массе навески с 3:1 до 4:1 не способствует большему извлечению свободных жирных кислот из проб мясокостной и рыбной муки (пробы 43, 46, 44, 45), тогда как извлечение пестицида ДДТ повысилось на 20% с увеличением количества растворителя.
Полученные результаты позволяют заключить, что наибольшее количество токсических соединений (свободных жирных кислот и ДДТ) извлекаются при соотношении экстрагенга к навеске 4:1. Дальнейшее увеличение экстрагента нецелесообразно, т.к. увеличивается расход растворителя и увеличивается время выпаривания его.
Лучшими растворителями являются смеси хлороформ-этанол и эфир-этанол в соЪтношении 2:1. Первая смесь извлекает из мясокостной муки 82% свободных жирных кислот, 77% ДДТ, а из рыбной муки соответственно 79 и 95%. Вторая смесь извлекает из мясокостной муки свободных жирных кислот 82%, ДДТ - 55%, из рыбной муки соответственно 84 и 63%.
В опытах по оценке эффективности извлечения токсических соединений из мясокостной и рыбной муки были испытаны (как лучшие) две смеси хлороформ-этанол и эфир-этанол в соотношении 2:1. Для этого полученные экстракты перорально вводили белым мышам.
Результаты исследований, представленные в таблице 96, показывают, что из изученных 16 проб мясокостной муки при использовании к качестве экстрагента смеси хлороформ-этанол токсичных проб было выявлено на 56,7% больше, чем в опытах с использованием эфир-этанола. Все 16 экстрактов из проб мясокостной муки при использовании смеси хлороформ-этанол были разной степени токсичности, а в опытах, где токсические соединения извлекались эфир-этанолом, лишь 7 экстрактов выявлены токсичными, что составляет 43,3% по отношению к первой смеси.
Аналогичная закономерность прослеживается и в опытах с рыбной мукой. При использовании в качестве экстрагента смеси хлороформ-этанол токсичных проб выявлено на 28,3% больше, чем в опытах с эфир-этанолом. Следовательно, наиболее эффективным экстрагентом для извлечения токсических соединений из мясокостной и рыбной муки является смесь хлороформ-этанол.
Оценка эффективности извлечения токсических соединений лучшими экстрагентами на белых мышах
Анализ результатов показывает, что во всех случаях использовавшиеся для подкожных инъекций экстракты были стерильньми, т.к. посевы на питательные среды не выявили роста микроорганизмов. Следовательно, обработка навески комбикорма ацетоном и хлороформом обеспечивает полную инактивацию всех микроорганизмов. Такая закономерность характерна для всех исследованных проб. В связи с этим можно сделать вывод, что возникновение воспалительного процесса в месте инъекции является следствием действия токсических веществ, содержащихся в экстракте.
Одновременно с рассмотренным фактором изучено влияние температурных условий среды на результаты определения степени токсичности. Для проб комбикорма, зараженного A.flavus и комбикорма, контами-нированного Penicillium, независимо от температуры окружающей среды во всех повторностях получен идентичный результат. Все пробы комбикорма определены как слаботоксичные.
Исследуя комбикорм, зараженный F.sporotrichioides-63, при 20-25С в двух случаях определили его как токсичный, а в одном - как слаботоксичный. При повышении температуры до 30С нами были получены аналогичные результаты. Подобный результат получен в опытах № 25-30 для комбикорма, зараженного смесью микроскопических грибов. Комбикорм, зараженный F.graminearum-62 независимо от температуры окружающей среды, в двух случаях оценен как слаботоксичный, а в одном - как токсичный.
Подобные явления можно объяснить особенностями индивидуальной реакции жийотных на токсические вещества.
Все испытанные пробы комбикормов нами были проанализированы на содержание в них отдельных микотоксинов. Так, в комбикорме, зараженном A.flavus, обнаружены афлатоксин Ві в количестве 168 мкг/кг и аф-латоксин В2. Зеараленон в количестве 25 мг/кг обнаружен в пробе комбикорма, зараженного F.graminearum-62. Токсин-2 выявлен в пробах комбикорма, зараженного F.sporotrichioides-63. Различные штаммы Penicillium синтезируют такие микотоксины, как патулин, цитринин, охратоксин А, пе-ницилловую кислоту, лютеоскирин, цитреовиридин, рокфортин и другие. Анализируя пробы комбикорма, зараженного Penicillium, нами не выявлено в них охратоксина А, патулина, пеницилловой кислоты. Отсутствие свидетелей и методик обнаружения не позволило выявить другие микотоксины.
Для выделения токсигенных штаммов микроскопических грибов нами проводился отбор проб комбикормов на Воронежском экспериментальном комбикормовом заводе.
Из 207 исследованных штаммов грибов 36 (17,4%) были токсичными для парамеций. Токсические свойства характерны для отдельных штаммов всех исследованных родов грибов. Однако, степень токсичности и количество штаммов грибов, продуцирующих токсины, были неодинаковы. Больше всего токсичных штаммов выделено из рода РепісіШшп (36,2%), меньше - из рода Fusarium (4,6%). Несмотря на то, что грибы A.flavus, Fusarium проявляли токсичность в 8,3% и 4,6% случаев соответственно, они использовались в опытах, так как наиболее распространены в комбикормах и обнаружены во всех пробах.
Методика определения токсичности комбикормов на белых мышах разработана совместно с ВНИИ ветеринарной медициньї, согласована с Главным управлением ветеринарии и включена в ГОСТ 13496.7-87. Первоначально нами были проведены исследования по выделению микроскопических грибов из зернового сырья, отрубей и осуществлена оценка их токсических свойств. Выделение микроскопических грибов проводили из проб зернового сырья (кукуруза, пшеница, ячмень, сорго) и отрубей, поступавших на Воронежский экспериментальный комбикормовый завод.
Результаты токсикологического анализа, представленные в таблице 102, позволяют отметить, что токсигенные свойства проявляют все исследованные роды. Так, из 70 штаммов микроскопических грибов рода Aspergillus токсигенными свойствами обладали 5,7%, из 68 штаммов рода Peni-cillium - 5,9% и из 45 штаммов рода Fusarium - 6,7%. Из всех 187 исследованных штаммов микроскопических грибов 11 (5,8%) были токсичными для парамеций.
Опытные партии зернового сырья и отрубей готовили путем заражения токсигенными штаммами микроскопических грибов предварительно простерилизованных - кукурузы, пшеницы, ячменя, отрубей. После заражения пробы зернового сырья и отрубей помещали в оптимальные условия для токсинообразования.
В последующем эти пробы зернового сырья и отрубей, содержащие продукты жизнедеятельности микроскопических грибов, мы использовали для проведения исследований на белых мышах. Снижение потенциала токсичности искусственно зараженных проб зернового сырья и отрубей проводили добавлением к ним доброкачественного сырья. Все опытные партии зернового сырья и отрубей исследовали на токсичность с учетом температуры окружающей среды и состояния стерильности.
