Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы 6
2.1. Современное состояние антибактериальной терапии 6
2.1.1. Новые химиотерапевтические средства в ветеринарии 6
2.1.2.Основные направления предотвращения антибактериальной резистентности 11
2.1.3. Комбинированная фармакотерапия 15
2.2. Перспективы использования производных триазола 17
2.3. Применение четвертичных аммониевых соединений (ЧАС) в ветеринарии 32
Материал и методы исследования 44
Собственные исследования 49
4.1. Состав и физико-химические свойства препарата лозеваль 49
4.2. Специфическая активность 50
4.2.1. Антимикробная активность лозеваля 50
4.2.2. Противовирусная активность 58
4.2.3. Антигрибное действие лозеваля 62
4.3. Лечебно-профилактическая эффективность лозеваля при заболеваниях птиц 64
4.3.1. Разработка оптимальных параметров применения 64
4.3.2. Эффективность лозеваля при желудочно-кишечных заболеваниях птиц 71
4.3.3. Эффективностьлозеваля при других болезнях птицы 80
4.3.4. Результаты широких производственных испытаний лозеваля в птицеводстве 90
4.4. Фармако-токсикологические свойства лозеваля 102
4.4.1. Влияние лозеваля на организм птиц 102
4.4.2. Изучение аллергизирующего, эмбриотоксического и тератогенного действитя лозеваля
4.4.3. Ветеринарно-санитарная оценка мяса при применении лозеваля 121
4.4.4. Фармакокинетика лозеваля 126
4.4.5. Фармакодинамика лозеваля 128
Заключение 140
Выводы 147
Предложения производству 150
Список литературы 151
- Новые химиотерапевтические средства в ветеринарии
- Перспективы использования производных триазола
- Антимикробная активность лозеваля
- Разработка оптимальных параметров применения
Введение к работе
Актуальность темы. Мировой опыт борьбы с заболеваниями животных и птицы показал, что основная роль в этом отводится лекарственной терапии. В этих целях используют различные фармакологические средства, наибольшее распространение из которых получили антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны. Однако их эффективность в последнее время значительно снизалась из-за изменения биологических свойств микроорганизмов, проявления множественной резистентности и усиления их вирулентных свойств. Устойчивые формы возбудителей, циркулируя в при-роде инфицируют организм, существенно затрудняют их терапию. Поэтому в условиях интенсификации производства возрастает роль и значение новых инфекций со сложной этиологией, обусловленной повышением вирулент-ности условно-патогенных микроорганизмов грибов и вирусов. Болезни чаще приобретают характер смешанных бактериально-вирусных инфекций, отличающихся от классических форм, осложненным течением.
Все это требует поиска и разработки новых химиотерапевтических средств с разным механизмом антимикробного действия, обладающих и противовирусной, и противогрибной активностью.
Учитывая перспективность химиотерапевтического направления в проблеме лечения и профилактики таких заболеваний, целесообразно создание препаратов из различных классов соединений, а также средств сочетанной фармакодинамики, обладающих одновременно противовирусным, антибактериальным и противовоспалительным действиями.
Наиболее перспективными оказались производные триазола (Л.В. Лозюк, Ф.Д. Онищук, 1997), и, в частности, новый препарат лозеваль, в состав которого входит морфолиний (3-метил-1,2,4-триазолил-5 тиоацетат), обладающий высокой антивирусной и антимикробной активностью (И. А. Мазур и др., 1986; Ф.Д. Онищук, 2001).
Цель и задачи исследования. Основной целью настоящего исследования является токсикологическое и санитарно-гигиеническое изучение, химиотерапевтического препарата лозеваль, эффективного для лечения и профилактики ряда заболеваний сельскохозяйственной птицы. Для реализации этой цели были поставлены задачи:
1. Изучить специфическую активность лозеваля в отношении возбудителей отдельных заболеваний птицы;
2. разработать показания к применению лозеваля в птицеводстве и лечебно-профилактические рекомендации при заболеваниях птиц;
3. Определить основные токсикологические и фармакологические свойства препарата;
4. Исследовать основные санитарно-гигиенические свойства лозеваля с целью разработки нормативно-технической документации по контролю и его применению в птицеводстве.
Научная новизна. В результате проведенных исследований предложен препарат, являющийся представителем новой группы химиотерапевт-ических средств - производных триазола - морфолиний (3-метил-1,2,4-триазолил-5-тиоацетат), изучены его биологическая активность и, в частности, анти-микробная, и антигрибная; в соответствии с требованиями Ветфарм-биокомиссии Департамента ветеринарии МСХ РФ, определены его основные токсикологические характеристики; отработаны оптимальные схемы и дозы при лечении и профилактике наиболее распространенных заболеваний птицы, ветеринарно-санитарные аспекты использования продуктов птицеводства после назначения препарата птице.
Практическая значимость. Для практической ветеринарии предложен новый оригинальный препарат лозеваль, обладающий высокой лечебной и профилактической эффективностью при ряде заболеваний птицы.
Практическая ценность лозеваля подтверждается положительными результатами широких производственных испытаний и Наставлением по применению лозеваля в ветеринарии, одобренным Ветфармбиокомиссией и утвержденным Департаментом ветеринарии в установленном порядке.
Установлены сроки использования продуктов питания, полученные от птицы получавшей препарат.
Внедрение результатов исследований. Производство лекарственной формы лозеваль освоено ОАО «Биостим» (г. Сочи). В условиях птицеводческих хозяйств Краснодарского края Северного Кавказа обеспечено его применение в качестве высокоэффективного лечебно-профилактического средства.
Полученные результаты вошли в нормативные документы утвержденные в установленном порядке на препарат.
Апробация работы. Материалы диссертации были доложены:
На заседании Ветфармбиокомиссии Департамента ветеринарии МСХ РФ.
На заседаниях Ученого Совета Краснодарской НИВИ по итогам научно-исследовательской работы за 1998-2003 гг.
На производственных совещаниях ветеринарных птицеводческих хозяйств специалистов Краснодарского края и других регионов в 1998-2003г.
На защиту выносятся:
- результаты исследований биологической активности препарата лозеваль;
- результаты его фармако-токсикологических исследований;
- результаты лечебно - профилактической эффективности лозеваля при различных заболеваниях птицы;
- санитарно - гигиенические аспекты применения лозеваля в птицеводстве.
Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 5 научных статьях.
Новые химиотерапевтические средства в ветеринарии
Необходимость совершенствования средств профилактики и лечения заболеваний животных остается актуальной задачей для биологической и ветеринарной науки. При этом большое значение приобретает фармакотерапия и профилактика наиболее распространенных патологий с использованием новых химиотерапевтических средств. Ассортимент таких лекарств постоянно растет. Необходимо констатировать, что наиболее применяемой группой медикаментов на сегодня по-прежнему остаются антибиотики (П.П. Голышенков, 1983; B.J. Bywater, 1983).
Современная номенклатура антибиотиков значительно расширилась за счет внедрения в лечебную практику новых пенициллинов и цефало-споринов беталактамов (имипенем, азтреонам), аминогликозидов (тобрами-цин, амикацин, метилмицин), тетрациклинов (доксициклин), макролидов и др.
В бывшем СССР выпуск антибиотиков составлял 10% мирового. Их ассортимент практически соответствовал списку обязательных групп, рекомендуемых ВОЗ, за исключением цефалоспоринов (Э.И. Веремей, М.А. Жолнерович, 1999). Так, выпускались все группы пенициллинов широкого спектра действия (ампиокс, ампициллин, карбеннициллин), а также новый пенициллин с антипсевдомонадным действием - азлоциллин. Группа аминогликозидов включала практически все применяемые за рубежом антибиотики данной структуры: стрептомицин, канамицин, гентамицин, сизомицин, тобрамицин, амикацин, а также рифампицин, полусинтетический тетрациклин с пролонгированным действием - доксициклин. В настоящее время во многих странах мира пенициллины в монотерапии и в сочетании с аминогликозидами широко применяют при инфекциях, вызываемых стрептококками и чувствительными к их действию стафилококками. Бензилпенициллин и ампициллин остаются эффективными средствами при многих болезнях, вызываемых грамположительными бактериями, а бензилпенициллин в сочетании со стрептомицином или гентамицином - грамположительными и грамотрицательными микроорганизмами. Тетрациклины применяют преимущественно при болезнях мочеполовой и дыхательной систем. На долю "новых" (в основном цефалоспо-ринов) приходится 10-20% всех назначаемых антибиотиков.
По механизму антимикробного действия химиопрепараты являются ингибиторами синтеза клеточной стенки (пенициллины, цефалоспорины), ингибиторами синтеза белка и нуклеиновых кислот (аминогликозиды, макролиды, фторхинолоны), деформаторами структуры и целостности клеточной стенки бактерий (полимиксины) и т.д. (СМ. Навашин, И.П.Фомина,1982).
В течение последних 10 лет наблюдается повышение интереса исследователей и клиницистов к антибиотикам макролидного ряда, среди которых наиболее известны эритромицин, олеандомицин, спирамицин. В настоящее время известно более 20 антибиотиков этой группы, получившие название макролиды нового поколения (Jnt.Conf., Venice, 1994). До середины 80-х годов они применялись довольно ограничено из-за низкой биодоступности, быстрой элиминации из организма и широкого распространения устойчивых к ним микроорганизмов, особенно среди стафилококков. Однако открытие новых заболеваний и новых возбудителей, (легионеллез, Campylobacter и др.) и увеличение частоты выделения атипичных внутриклеточно локализованных микроорганизмов (микоплазм, хламидий и др.) вызвали повышенный интерес к получению ряда макроли-дов высокоактивных и безопасных природных и полусинтетических ф производных с улучшенными фармакокинетическими свойствами (А.В. Караулов, 1997; СВ. Яковлев, 1997; Ю.О. Сазыкин и др., 1998С. Agen, R. Danesi, Blandizzic et al, 1993; F.Bryskier, C. Agouridans, I.F. Chantor, 1993; M.B. Carlier, С Zenebergh, R.H. Tulkens, 1987).
Макролиды продемонстрировали высокую антибактериальную активность против группы внутриклеточных возбудителей, таких как хламидии, микоплазмы, легионеллы (так называемые возбудители атипичных инфекций), листерии, а также против микобактерий туберкулеза, возбудителей лепры, ряда паразитарных заболеваний (токсоплазмоз и др.) и даже незначитеьную антигрибковую активность.
Макролиды, способны накапливаться в тканях ретикулогистиоцитар-ной системы организма, оказывая отчетливое воздействие на функции микро- и макрофагов. В результате чего рассматриваются возможности длительной терапии малыми дозами хронических заболеваний респираторной системы - при диффузных панбронхитах и муковисцидозе, бронхиальной астме, хронических синуситах и хронических секреторных отитах (S. Kudoh, 1997), при хронических формах инфекций, вызванных внутриклеточ-ными возбудителями - хламидиями, микоплазмами, токсоплазмами, некото-рыми видами микобактерий и другими (Int. Conf., New York, 1993; Int. Conf., Venice, 1994).
Новой группой являются цефалоспорины - антибиотики широкого спектра действия. Они действуют бактерицидно на Грам+ и Грам бактерии и, в частности, стрептококки, сальмонеллы, шигеллы (М.Д. Машковский, 1993). К антибиотикам, показанным в основном при дизентирии, относят тилозин и виргиниамицин (P. Janetschke, P. Kielstein, 1976; Z. Olson, 1976). Широкий антибактериальный спектр действия позволяет их использовать и при многих других заболеваниях (В. Nook, 1973, J. Fryc, 1975). Высокой антибактериальной активностью обладают нитрофураны, имея более широкий спектр действия, чем антибиотики и сульфаниламиды. Они широко применяются при наиболее распространенных заболеваниях (B.C. Хоменко, Н.Г. Хоменко, 1985). В последнее время отечественной химической промышленностью освоено производство новых нитрофуранов - фуракрилина и фурозонала (В.А. Антипов, В.И. Моргунов, 1996).
Вместе с тем за рубежом ведется интенсивный поиск новых высокоэффективных терапевтических средств из других классов соединений. Производными пиримидина являются триметоприм (2,4 диаминопи-риметамин), который обладает широким спектром антимикробного действия, обус-ловленный ингибированием активности бактериального фермента дигидрофоль - редуктазы, расщепляющего дигидрофолевую кислоту бактерий (Glawischning, 1972). Синергистами триметоприма являются сульфаниламиды (L. Mazcurazak, 1975) на основе которых разработано большое количество различных комбинаций.
Широко применяют и производные нитромедазола: диметронидазол, ронидазол, ипронидазол. Их назначают для лечения энтеритов, диарей, вызванных простейшими, дизентерии. Диметронидазол (1,2-диметил-5 нитроимидазол) эффективен против специфических микробных форм, некоторых видов вирусов, спирохет (R. Griffin, 1972). Выпускается он под коммерческим названием эмтрил. При применении с кормом в течение 6 дней в дозе 25-30 мг/кг был достигнут высокий лечебный эффект (В. Сатра etal, 1973).
Перспективы использования производных триазола
В течение ряда лет сотрудниками кафедр Запорожского государственного медицинского университета проводился целенаправленный поиск биологически активных веществ среди вновь синтезированных азотистых гетероциклических соединений (А.Д.Визир и др., 1997). Для скринин-гового поиска были избраны соединения ряда 1,2,4-триазолов, аминохина-золинов и ксантина, синтезированных на кафедрах, руководимых проф. Мазуром И.А. и проф. Прийменко Б.А.. Среди них были обнаружены вещества, обладающие выраженной антигипоксической и антиоксидантной активностью, противоишемическим, гепатопротекторным и ранозаживля-ющим свойствами. Большинство исследованных соединений относятся к классу малотоксичных. Высокий уровень биологической активности и низкая токсичность определяются с родством этих соединений к предшественникам синтеза гуанилатов - триазолы и адениалтов - ксантины, играющих ключевую роль в регуляции обменных процессов (И.М. Белый и др, 1997).
Наиболее перспективным себя зарекомендовал морфолиний 3-метил-1,2,4-триазолил-5-тиоацетат, проявляющий гепатозащитную, ранозажив-ляющую и противовирусную активность (И.А. Мазур и др. А.С. СССР № 1410482).
Он представляет собой белый или с кремоватым оттенком кристалл-лический порошок, растворимый в воде и этаноле, но не растворимый в диэтиловом эфире и бензоле. Молекулярная масса 260, 325. Массовая доля АДВ 98%, температура плавления 148-151. При изучении его гепатопро-текторных свойств установлено, что соединение обладает выражнной гепа-тозащитной активностью и может быть субстанцией для создания синтетического гепатозащитного препарата.
Морфолиний также показал лучшее ранозаживляющее действие, увеличивая прочность послеоперационного рубца на 121% по сравнению с нелеченными животными. Метилурацил увеличивал прочность рубца только на 71% при эффективной дозе 100 мг/кг. Исследование вирусингибирующей активности соединения проводили на культуре клеток куриных фибробластов в отношении вируса гриппа типа Айв развивающихся куриных эмбрионах, инфицированных вирусом типа А и А2. Инфекционная активность при этом составляла 6 Lg ТЦЦ5о для клеток куриных фибробластов и 6-7 Lg ЭИД5о (эмбрион инфицирующая доза) для клеток эмбрионов кур. Препарат в концентрациях 1/4-1/10 от максимально переносимых (250,0-100,0 мкг/мл) вносили в исследуемую систему через 30-60 мин после заражения вирусом в дозах, вызывающих 100%-ный эффект инфицирования указанных моделей. Кроме того, проведено испытание защитного действия при гриппозной пневмонии, вызванной вирусом гриппа, адаптированным к легочной ткани мышей.
Вирусингибирующее действие соединения в системе клеточной культуры выражалось снижением выхода вируса гриппа A (WSN) на 3,3 lg, а репродукция вируса штамм А (Англия) 42/72 ингибировалась на 4 lg. В опытах на развивающихся куриных эмбрионах отмечены некоторые различия в вирусостатическом эффекте сравниваемых агентов: соединение в адекватных концентрациях выгодно отличается по активности, превосходя показатели ремантадина, взятого в качестве контроля.
Сравнительное изучение соединения на фоне противооспенного и антигерпетического препаратов показывает, что оно выгодно отличается от сравниваемых агентов. Критериями эффективности (при соблюдении соответствующих контролей) служили процент снижения инфицирован-ности биосистемы или отсутствие бляшек на хорионаллантоисной оболочке эмбрионов кур (ХАО).
Таким образом, морфолиний обладает низкой токсичностью, выраженным гепатотропным, ранозаживляющим и противовирусным действием и может быть использовано для создания лекарственного вещества, эффективного при токсических и вирусных поражениях печени. (П. Украины 1988, опубл. 20.12.94, М.Кл4 С07В 413/12, А61К 31/41, А61К 31/535)
Химическая структура соединения обеспечивает стимуляцию синтеза в организме анаболиков. В свою очередь, анаболики способствуют синтезу белка в организме и специфических и неспецифических факторов естествен-ной резистенции. Усиление процесса синтеза белка в организме способствует внутриклеточной регенерации, ускоряет репаративные процессы в эпителиальной и кроветворной тканях. Установлено, что тиотриазолин оказывает выраженное влияние на антиоксидантную систему и ПОЛ, препятствуя угнетению активности супероксиддисмутазы, каталазы, глютатионпероксидазы, сохранял запасы а-токоферола. Механизм действия тиотриазолина складывается из активации антиоксидантных ферментов, защитного действия в отношении окислительных процессов с сохранением фонда АТФ, а также мощного анаболизирующего действия (И.М.Белый и др, 1997). Тиотриазолин увеличивал содержание митохондриального белка, стимулировал адаптивный протеинсинтез о чем свидетельствовали коэффициенты, характеризующие соотношение катаболических и белковорепаративных процессов. Интенсивность включения ЗН-глицина в белки цитозоля ишемизированного миокарда превышало по силе рибоксин.
Тиотриазолин обладает антиатеросклеротическим и антиоксидантным действием, не уступающим эталонным средствам: никотиновой кислоте и а-токоферола ацетату. Очевидно за счет торможения свободнорадикальных процессов преимущественно за счет активации антиоксидантной системы и угнетения начальных продуктов ПОЛ - диеновых и триеновых конъюгатов. Угнетая свободнорадикальное окисление липидов, тиотриазолин создает благоприятные условия для снижения общего числа свободных жирных кислот в печени и угнетения биосинтеза Р-липопротеидов, а также в значительной мере ускорения катаболизма холестерина.
Была предложена наружная лекарственная форма димексида с тиотриазолином, репаративные свойства которой изучены в условиях травматологической клиники (Р.В. Носаченко, 1996; А.И. Чемирис, Р.В. Носаченко и др., 1995; Чемирис и др, 1996; К.О. Мурапов, 1987). Курсовые аппликации ее в первые часы после перелома значительно уменьшали развитие болевого синдрома и его негативное воздействие на нервную систему (снижение тахикардии и гипертензии). Важным моментом терапевтического эффекта был ее антиоксидантний эффект, усиливающий репаративную регенерацию костной ткани. Наравне с этим препарат обладал анальгетическими и противовоспалительными свойствами, особенно, в первые часы после перелома.
В отношении органов иммунной системы он оказывает выраженное иммунностимулирующее воздействие, обладая характерным специфическим иммунным воздействием, которое следует рассматривать как активацию иммунного гомеостаза. Наиболее выраженным иммуностимулирующим эффектом обладает калиевая и натриевая соли триазола, увеличивая количество Т-активных лимфоцитов в 1,5-1,8 раза уже к третьим суткам послеоперационного периода у больных, получавших тиотриазолин (33,8±1,1 -29,3+1,3)- У больных, не получавших препарат, отмечено снижение количества Т-активных лимфоцитов в 1,3-1,7 раза (17,6±0,-16,9+0,2) до 7-9 суток. Затем в опыте к 12-14 суткам уровень количества Т-активных лимфоцитов достигал нужного уровня (32,9+1,1), а в контроле с 7-10 дня послеоперационного периода только начиналось постепенное увеличение количества Т-активных лимфоцитов, достигая нормы к концу 3 недели.
В 1993 году по инициативе Фармакологического комитета МЗ Украины была проведена монотематическая конференция "Перспективы создания синтетических гепатопротекторов в Украине", посвященная тиотриазолину. Опыт его использования в клинике на протяжении последних двух лет показал, что при развитии воспаления, гипоксии клеток, тканей, их гибели, применение тиотриазолина, обладающего противо-ишемическим, антиоксидантным, противовоспалительным, мембраностаби-лизирующим и другими действиями, эффективно в лечении разнообразной патологии внутренних органов и органов чувств в офтальмологии, хирургии брюшной полости, травматологии, геронтологии, урологии и других областях медицины.
Антимикробная активность лозеваля
Антибактериальные свойства препарата in vitro изучены на штаммах 15 видов бактерий полевых и музейных штаммов. Антибактериальную активность определяли методом серийных разведений в бульоне Хоттингера. Для этого препарат растворяли до заданной концентрации питательным бульоном. Из основного разведения по 2 мл раствора вносили в пробирку с 2 мл бульона (1 пробирка) и из нее 2 мл раствора вносили во 2-ю пробирку и так далее до 9 пробирки, из которой после внесения 2 мл бульона с препаратом 2 мл отбрасывали. Одна пробирка (10мл) служила контролем, в которую препарат не вносился. В каждую пробирку после серийного разведения лозеваля вводили 12-20 часовую агаровую культуру исследуемого вида бактерий из расчета 105-106 клеток на 1 мл среды. Пробирки инкубировали при 37С в течение 18-24 час. Учет вели по наличию или отсутствию роста в среде, содержащей разведенный препарат. Последняя пробирка с задержкой роста (прозрачный бульон) соответствует МПК препарата в отношении испытуемого штамма и указывает на степень его чувствительности.
Антибактериальную активность лозеваля в условиях in vivo оценивали по химиотерапевтической эффективности (ЕД50) при экспериментальных стафилококковой и эшерихиозной септицемиях белых мышей. Препарат вводили перорально сразу после внутрибрюшинного заражения мышей летальными дозами золотистого стафилококка и кишечной палочки. Статистическая обработка полученных данных с выведением значения ЕД5о проводилась по методу Першина. Характер влияния препарата на динамику развития инфекционного процесса и процесса освобождения организма от введенных бактерий осуществляли по бактериальному индексу селезенки. С этой целью белым мышам в сублетальной концентрации (0,2 ДПМ) внутрибрюшинно вводили культуры золотистого стафилококка (200 млн клеток) и кишечной палочки (20 млн. клеток) после чего их обрабатывали препаратом в дозах соответствующих ЕД5о для каждой инфекции. По прошествии 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10 суток убивали по 2 мыши, у животных стерильно извлекали селезенку и растирали с 10 мл стерильного физиологического раствора. Из исходного разведения готовили 10 кратных разведений, затем производили посевы на селективные среды Эндо и желточно-солевой агар.
У альными особенностями животных и случайными ошибками эксперимента, методом пробит анализа производили расчет ошибки средней ЕД50. Данный метод заключается в исследовании зависимости между логарифмами доз и пробитами, соответствующими наблюдаемым в опыте эффектом.
На основании полученных данных строили пробитный график: на оси абсцисс откладывали пробиты, а на оси координат - доза эффекта (мг/кг) находили связывающие их точки в системе координат и проводили через их прямую линию. Из таблицы 3 видно, что при введении лозеваляв в дозе 440 мг/кг и фуразолидона ПО мг/кг, удается получить 100%-ное выживание инфицированных стафилококками мышей. При этом минимальными дозами, способствующими выживанию животных, в случае применения лозеваля является 120, в случае фуразолидона - 30 мг/кг. ЕД5о препаратов при оральном методе введения в случае заражения белых мышей летальной дозой золотистого стафилококка составляет для лозеваля 275±3,92, фуразолидона - 56,0+3,48 мг/кг.
На кишечную палочку в условиях (табл. 4) in vivo лозеваль и фуразолидон действовали менее эффективно, чем на стафилококк. Минимальные дозы, способствующие выживанию мышей, составили в случае применения лозеваля - 200,0, фуразолидона - 50 мг/кг, 100%-ную терапевтическую эффективность регистрировали при введении опытного препарата в дозе 520,0 и контрольного - 130 мг/кг.
Контроль негативный (препарат не давали) - 10 10 - 100 Кроме того, было изучено влияние препаратов (лозеваль и фуразолидон) на динамику развития инфекционного процесса и процесса освобождения организма от бактерий. Данные исследований показали, что обработка инфицированных животных лозевалем и фуразолидоном не дала полного стерилизующего эффекта. Однако у тех животных, которым давали лозеваль и фуразолидон процесс освобождения организма от микробных клеток происходил в более короткие сроки.
Количество живых бактерий выделенных из селезенки через 24 часа после заражения мышей и введения им препаратов составило от 103 до 106, а у интактных мышей - 10 -10 . Полное освобождение организма опытных мышей происходило в течение 8-9 суток, в то время как у контрольных животных бактерий выделялись даже спустя 10 дней.
Сравнивая динамику выделения бактерий из селезенки опытных животных, обработанных лозевалем и фуразолидоном можно отметить, что у тех мышей которые получали препарат селезеночный индекс был ниже, чем у мышей обработанных фуразолидоном. К 24 часам после введения препаратов у первых из селезенки выделялось 105 клеток стафилококков и кишечных палочек. Прекращение выделения бактерий из селезенки у мышей, обработанных лозевалем и фуразолидоном наблюдалось к 8-9 суткам.
Анализируя данные по активности лозеваля в условиях in vivo можно сделать заключение, что при экспериментальных стафилококковой и эшери-хиозной септицемиях его химиотерапевтический эффект проявляется примерно в одинаковых количества, а освобождение организма от патогенных бактерий происходит в короткий период времени.
Разработка оптимальных параметров применения
Предварительными опытами были отработаны оптимальные терапевтические дозы и схемы применения лозеваля для профилактики и лечения заболеваний птицы. Для этого на 50 больных гастроэнтеритом цыплятах-бройлерах десятидневного возраста, разделенных на пять равных групп, препарат был испытан в дозах 0,035; 0,05; 0,1; 0,15; 0,2 мл/кг массы, который вводили внутрь за 1 час до кормления в виде водного раствора на кипяченой воде трехкратно в день, ежедневно в течение 5 дней. При этом обращали внимание на общее состояние птицы, течение заболевания, дефекацию и характер фекалий.
В результате отработки дозировок установлено, что многократные введения препарата лозеваль в дозе 0,035 и 0,05 мл/кг массы тела оказались недостаточно эффективными. Расстройства функции желудочно-кишечного тракта у большинства птицы продолжалось в течение 10 дней. Дозы 0,1 и 0,15 мл/кг массы тела обеспечивали выздоровление в течение 3-5 дней. Заметного токсического эффекта от этих доз не регистрировали. Поэтому для дальнейшего испытания и с учетом экономических соображений в качестве терапевтической дозы была отобрана 0,15-0,2 мл, а в качестве профилактической 0,1 мл/кг массы тела. Далее были отработаны оптимальные терапевтические дозы и схемы применения препарата лозеваль при лечении полиэтиологичных гастроэнтеритов, инфекционного ларинготра-хеита у кур при назначении его с водой, с кормом и аэрозольным методом.
С целью определения оптимальных доз и схем применения лозеваля с кормом, водой и аэрозольно, было проведено 6 серий опытов. В первой серии опытов препарат назначали с водой. Для этого в 5 группах по 100 голов кур, препарат 1 раз в день, в утреннее поение, после 1,5-2 часового отсутствия воды в поилках, задавали в дозах: 0,05 мл; 0,1 мл; 0,2 мл; 0,25 мл и 0,3 мл на 1 кг живой массы птицы соответственно. Препарат применяли в течении 5 дней подряд. Во второй серии опытов, также в 5 группах по 100 голов кур препарат назначали с кормом, в тех же дозах, в те же сроки. В третьей серии опытов лозеваль на 5 группах кур по 100 голов в каждой применили аэрозольно в дозах: 0,5 мл; 1 мл; 1,5 мл; 2 мл; 3 мл, на 1 куб.м. помещения. Аэрозоль получали при помощи САГов при экспозиции 40 мин, однократно в день - 5 дней подряд.
В результате проведенных исследований в первой серии опытов установлено, что при назначении его с водой в дозе 0,05 мл на 1 кг живой массы, после первого назначения, в течение 1-х суток наблюдения куры оставались угнетенными, малоподвижными, корма поедали не полностью. Клиническая картина заболевания осложнялась диареей, помет жидкий, зловонный, с зелеными и белыми хлопьями. В помете обнаруживались не переваренные остатки корма. В первые сутки пало 5 голов. При повторной даче препарата в той же дозе, куры оставались угнетенными, оперение тусклое, взъерошенное, в области клоаки загрязненное, понос продолжался, птица теряла массу и худела. Улучшения в течении клиники заболевания не наблюдалось. На вторые сутки пало 9 голов.
На 3-й день применения препарата в той же дозе. Среди птиц продолжался падеж, пало 10 голов. У части птиц, наблюдалось некоторое улучшение общего состояния. Они начали поедать корм, проявлять активность, но большая часть птицы остается угнетенной и малоподвижной. На 4-й день, при той же дозировке лозеваля, клиника проявления заболевания оставалась прежней, дополнительно стали регистрироваться хромота и шаткость походки, у некоторых особей серозные конъюнктивиты. Падеж продолжался и составил 10 голов. На 5-й день при применении той же дозы видимого улучшения клинического состояния у большинства оставшейся птицы не было. У третьей части птиц, проявляются симптомы самовыздоровления. Падеж продолжался, к 6 суткам составил 38%. Дальнейшее назначение препарата в этой группе, в этой дозе было прекращено, из-за явной неэффективности. Для сохранения оставшегося птицепоголовья, была применена традиционная терапия.
Ежедневно проводилось патологоанатомическое вскрытие павшей птицы, при этом регистрировали катаральный гастроэнтерит, с очагами некроза слизистой оболочки, гепатитом с точечными мелкими очагами некроза, холицистит с переполнением желчного пузыря. Патологоанатоми-ческий диагноз - гастроэнтерит.
Во второй группе из 100 голов кур препарат лозеваль применяли в дозе 0,1 мл на кг живой массы птицы, так же с водой. Заметное улучшение клинического течения заболевания наблюдалось после 3-4-х кратного назначения, на 3-4 сутки. При этом у кур появлялся нормальный аппетит, а явления диареи проходили, пищеварение восстанавливалось, что подтверждалось нормализацией консистенции и цвета помета, в нем при исследовании не обнаруживались, не переваренные остатки корма. Назначение и применение препарата продолжали до 5 дней. За 5 дней проведения опыта во второй группе пало 21 голова кур, соответственно 8 в 1-й, 7 во 2-й и 6 на 3-й день. В дальнейшем наступало выздоровление.
В третьей группе из 100 голов кур, при применении препарата в дозе 0,2 мл на 1 кг живой массы птицы, на 2-3 сутки, у большинства больной птицы наблюдалось значительное улучшение общего состояния, габитуса, двигательной активности и аппетита. Внешний вид помета нормализовался, был естественно оформлен, характерного цвета, запаха и консистенции. За 5 дней опыта в этой группе пало 13 кур. Причем основной отход пришелся на 1-е сутки — 9 голов и незначительный 3 и 1 голова на 2 и 3 сутки соответственно. В дальнейшем падежа не наблюдали и наступало выздоровление. В 4 группе при ежедневном, однократном назначении дозы препарата 0,25 мл на 1 кг живой массы, у птицы на 2-3 сутки наступало заметное улучшение общего состояния, восстанавливался аппетит. Понос прекращался. Помет становился нормальной консистенции. Клинические признаки гастроэнтерита не проявлялись. За 5 дней опыта пало 10 голов. В 5 группе птиц доза лозеваля составляля 0,3 мл на 1 кг живого веса кур. Клинические проявления заболевания в этой группе птиц проходили так же на 2-3 сутки. Всего пало в этой группе за 5 дней опыта 10 голов кур. Таким образом, существенной разницы в выздоровлении птицы в 3, 4 и 5 группах не регистрировали. Исходя из терапевтической эффективности и экономической целесообразности дозу лозеваля 0,2 мл на 1 кг живой массы кур, при назначении ее с водой, 1 раз в сутки в течение 5 дней подряд, следует считать оптимальной. Во второй серии опытов, при определении лечебного действия лозеваля при назначении его с кормом, установлено, что препарат в дозах 0,05 мл на кг живой массы не вызывает заметного улучшения состояния и выздоровления у больной птицы на протяжении всего срока назначения препарата. Клинические признаки заболевания гастроэнтеритом у кур сохранялся. Отход птицы составил 43% на 5 сутки. Течение заболевания было сходным описанию в предыдущем опыте, при применении в той же дозе.
