Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 9
2.1. Современное состояние антибактериальной фармакотерапии 9
2.1.1. Новые химиотерапевтическис средства в ветеринарии 9
2.1.2. Распространение феномена антибиотикорезистентности 17
2.1.3. Происхождение, механизмы и клиническое значение антибиотикорезистентности 23
2.1.4. Перспективные направления предотвращения антибактериальной резистентности 28
2.1.5.:Комбинированная фармакотерапия 32
2.2. Актуальные направления химиотерапии, наиболее распространенных заболеваний животных , 36
2.2.1. Перспективы использования производных тиосеми-карбазонов 36
2.2.2. Перспективы использования производных триазола 45
2.2.3. Четвертичные аммониевые соединения для ветеринарии
3. Материал и методы исследования 74
4. Собственные исслед0вания
4.1. Характеристика препаратов 82
4.2. Специфическая активность препаратов
4.2.1. Антимикробное действие препаратов 83
4.2.2. Формирование резистентности микроорганизмов к препаратам 94
4.2.3. Химиотерапевтическое действие препаратов
4.3. Антимикотическсзе действие препаратов 104
4.4. Противовирусная активность препаратов
4.4.1. Параметры антивирусной активности препаратов 107
4.4.2. Селективные механизмы противовирусного действия 122
4.4.3. Влияние препаратов на пролиферативную активность и метаболизм клеток 132
4.5. Токсикология препаратов 143
4.5.1. Токсические свойства лозеваля 143
4.5.2. Токсические свойства изатония 166
4.5.3. Токсические свойства этонпя 199
4.5.4. Токсические свойства растворителя 202
4.6. Фармакология препаратов 205
4.6.1. Фармакокинетика препаратов 205
4.6.2. Фармакодинамика препаратов 209
4.7. Разработка показаний к применению и лечебно профилактическая эффективность препаратов 229
4.7.1. Отработка оптимальных параметров применения препаратов 229
4.7.2. Профилактическая и лечебная эффективность лозеваля 230
4.7.3. Профилактическая и лечебная эффективность изатония 279
4.8. Результаты производственных испытаний и внедрения препаратов 302
4.8.1. Результаты производственных испытаний лозеваля 302
4.8.2. Результаты производственных испытаний изатония 332
4.8.3. Внедрение препаратов в промышленное и сельско-хозяйственное производство
3 5. Заключение 350
6. Выводы 362
7. Приложения 366
8. Список литературы
- Новые химиотерапевтическис средства в ветеринарии
- Актуальные направления химиотерапии, наиболее распространенных заболеваний животных
- Антимикробное действие препаратов
- Разработка показаний к применению и лечебно профилактическая эффективность препаратов
Введение к работе
Актуальность темы. Высокая заболеваемость и гибель сельскохозяйст-шнных животных, особенно молодняка, в значительной степени препятству-:т росту отечественного производства животноводческой продукции. Поэтому улучшение ветеринарного обслуживания животноводства, разработка бо-іее эффективных методов и средств профилактики и лечения широко рас-іространенньїх заболеваний, является актуальной задачей для ветеринарной і биологической пауки и практики (Андреев Е.В., Драгомир А.Б., 1978; Анд-юсов В.А., 1978; Бородой ГЛ., 1981; Данилевский В.М., 1974; 1985; Дегтярева И.Н. и др., 1981).
В условиях интенсификации животноводства и перевода его па иро-шшленнуго основу возрастает роль и значение новых инфекций со сложной тиологией, обусловленной повышением вирулентности условно-патогенных шкроорганизмов, вирусов и грибов. Болезни чаще имеют общую симтома-ику поражения респираторных путей и желудочно-кишечного тракта, приобретают характер смешанных бактериально-вирусных и грибных инфекций, тличающихся от классических форм проявления той или иной болезни с ос-ожненным течением. Все это требует поиска и разработки новых химиоте-апевтических средств с разным механизмом антимикробного действия, об-адающих также противовирусной и антимикотнческой активностью (Нава-шн СМ., Фомина И.П., 1982).
Учитывая перспективность химиотерапевтического направления в про-леме лечения и профилактики таких заболеваний, целесообразно создание репаратов на основе высокоэффективных компонентов из различных клас-ов соединений, а также средств сочеташюй фармакодинамики, обладающих дновремепно противовирусным, антибактериальным и противовоспали-сльным действиями (Кузнецова СМ., 1983).
Интенсивный поиск таких лекарственных препаратов ведется среди рганических соединений триазола, тиосемикарбазона, неприродных
нуклеозидов, производных бсшимидазола, циклических аминов, карбониль ных полиоксисоединений и других (Потопальский А.И., Лозюк Л.В. и др. 1991).
Наиболее перспективными оказались производные триазола и р* - тио семикарбазона конденсированных гетероциклов (Лозюк Л.В., Онищук Ф.Д. 1997), и, в частности, новый препарат лозеваль, в состав которого входи-морфолиний (3-метил-1,2,4-триазолил-5 тиоацетат), обладающий высоко! антивирусной активностью (Мазур И.А. и др., 1986), а также изатоний, ос новное действующее вещество которого метисазон (N-метил-изатин тиосеми-карбазон) (Rao R.A. et al, 1966).
Цель и задачи исследования. Основной целью настоящего исследова ния является разработка, изучение и внедрение в практику ветеринарии но вых химиотерапевтических препаратов лозеваля и изатония для лечения і профилактики ряда заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы Эти лекарства являются новыми препаративными формами соответственш морфолиния и метисазона. Для реализации этой цели были поставлены зада чи:
Разработать состав и изучить биологическую активность лозеваля і изатония в отношении возбудителей отдельных заболеваний животных і птицы;
Определить токсикологические и фармакологические свойства прс паратов;
Разработать показания к применению лозеваля и изатония, устано вить их лечебно - профилактическую эффективность при отдельных заболеваниях животных и птицы.
Разработать нормативно-техническую документацию на их приме нсние в целях внедрения в практику ветеринарии и животноводства.
Научная новизна. В результате проведенных исследований предложены два новых препарата, являющихся представителями производны>
риазола и тиосемикарбазона, изучена их антибактериальная, антимикотиче-кая и противовирусная активность в соответствии с требованиями Ветфарм-іиокомиссин Департамента ветеринарии МС и П РФ, определены основные зармако-токсикологические характеристики; отработаны показания к приме-[ению, оптимальные схемы и дозы при лечении и профилактике наиболее іаспространенньїх заболеваний пищеварительного и дыхательного тракта швотных и птицы. Научная новизна проведенных исследований подтвер-<дена положительными решениями о выдачи патентов № 99116456/13 017454) от 29.07.99 г., № 99116458/13 (017452) от 29.07.99 г.
Практическая значимость. Для практической ветеринарии предложены овые оригинальные препараты лозеваль и изатопий, обладающие высокой счебной и профилактической эффективностью при ряде заболеваний сель-кохозяйственных животных и птицы.
Практическая ценность лозеваля и изатония подтверждается положи-сльными результатами широких производственных испытаний и Наставле-ием по применению лозеваля и изатония в ветеринарии № 13-5-2/1089 от 4.11.97 г., одобренным Ветфармбиокомиссией и утвержденным Департа-:ентом ветеринарии в установленном порядке и ТУ по их контролю № 9337-01-10132104-98.
Внедрение результатов исследований. Производство новых отечест-гнных препаратов лозеваль и изатоний освоено АО «Биостим» (г. Сочи). В азличпых хозяйствах и сельскохозяйственных предприятиях Северного авказа обеспечено их применение в качестве высокоэффективных лечебно-рофилактических средств.
Апробация работы. Материалы диссертации были доложены: На заседании Ветфармбиокомиссии Департамента ветеринарии МСХ и П РФ, 1997.
На научно-практических конференциях г. Новочеркасск 1998, 1999, г. Москва, 1996; і-. Махачкала, 1998; г. Краснодар, 1999; г. Воронеж, 2000.
На заседаниях Ученого Совета Краснодарской НИВС по итогам научно-исследовательской работы за 1997-1999 гг.
На производственных совещаниях ветеринарных специалистов Краснодарского, Ставропольского, Приморского краев, Ростовской, Волгоградской обл. и других регионов РФ в 1995-2000 г.
Основные положения выносимые на защиту:
результаты исследований биологической активности препаратов ло-зеваль и изатоний;
результаты их фармако-токсикологических исследований;
результаты разработки показаний к применению и изучение лечебно -профилактической эффективности лозеваля и изатония при различных заболеваниях сельскохозяйственных животных и птицы;
практические предложения по применению и внедрению лозеваля и изатония в ветеринарии.
Публикации результатов исследований. Основные материалы диссертации опубликованы в 45 научных статьях, 3 методических рекомендациях и 3 монографиях.
Объем и структура диссертации: Диссертация изложена па 400 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, предложений для практики, библиографического списка, включающего 403 источника, из них 258 отечественных авторов. Работа иллюстрирована 140 таблицами, имеет приложения.
Новые химиотерапевтическис средства в ветеринарии
Необходимость совсршенствования средств профилактики и лечения заболеваний животных остается актуальной задачей для биологической и ветеринарной науки. При этом большое значение приобретает фармакотерапия и профилактика наиболее распространенных патологии с использованием новых химиотерапевгических средсгв. Лссоргимент таких лекарств постояппо растет. Приводя общую характеристику новых аитибактернальных средств, необходимо констатировать, что наиболее применяемой группой медикаментов по-прежнему остаются антибиотики.
Антибиотики - это соединения, обладающие сильным антимикробным действием и наименьшей токсичностью по сравнению с другими антибактериальными препаратами, что обеспечивает им высокую терапевтическую эффективность (П.П. Голышенков. 1983). Их используют как в чистом виде. так и в комбинации с другими средствами с учетом их совмсстимости, потенцирования и синергизма (R.J. Bywater, 1983).
Современная номенклатура антибиотиков значительно расширилась за счет внедрения в лечебную практику новых неннциллинов и цефалоспорннов бега-лакгамов (имииеием. азіреонам), амшюгликозидов (юбрамицин. ами-кацнп, метплмнции), тетрацнклниов (доксициклин), макролидов и др.
В последние годы в бывшем СССР выпуск антибиотиков составлял 10% мирового. Их ассоргимснг практически соогветствовал списку обязательных групп, рекомендуемых ВОЗ. за исключением цефалоспоринов (Э.И. Версмей, М.А. Жолперович, 1999). Так, выпускались все группы природных и полуснптстичсскнх псішціїлліиюс широкого спектра действия (амннокс. ампиииллин. карбеннициллин), а также Новый пенициллин с ан-шпеевдомонадным дейсгвисм - азлоциллин. Группа амшкллнкозидов включала практически все применяемые за рубежом антибиотики данной структуры: стрептомицин, канамицин, гентамицин, сизомищин. тобрамищш, ами-кации, а также рифамшщин. полусинтетический тетрациклин с пролонгированным действием - доксициклин.
Во всех странах мира псшщнллнны в NLпотерашH и в сочетании с аминогликозидами широко применяют при инфекциях, вызываемых стрептококками п чувтвптельными к их действию стафилококками. Бензилпени-циллин и ампициллин остаются эффектнвными средствами при многих болезнях, вызываемых грамположигельиымн оакгериями. а беизилиеницшишн в сочетании со cтретo ицнном или гептамицииом - грамполoжитeльиыми и гpамотpицaтeльными микроорганизмами. Тетрациклины применяют преимущественно при болезнях мочеполовой и дыхательной систем. На долю "новых" (в основном цефалоспоринов) приходится 10-20 о всех назначаемых антибиотиков.
В последние годы сформулированы положения о роли антибиотиков как полифункциональных регуляторов биологической реактивности организма, оказывающих иммуиомодулирующсс и противовоспалительное действие. По механизму антимикробного действия химиопрепараты являются ингибиторами синтеза клеточной стенки (псницнллниы, цефалоспорины), ингибиторами синтеза белка и нуклеиновых кислот (алишоглнкозиды. мак-ролиды, рифамицииы. фгорхинолоны). деформаюрами сіруктурьі и целое г-пости сточНой стенки бактерий (полимиксииы) и т.д. (СМ. Навашип. И.П.Фомина, І 982).
Все химиопрепараты по степени их проникновения в клeтку макроорганизма условно делятся на препараты с низкой, средней и высокой степенью внутриклеточного транспорта. К препаратам, слабо проникающим в клетку il (отпошепис шіугри- и снеклеточпой копцсптрации меньше 1), относится большинство беталактамных антибиотиков (пенициллины. цефалоспорины. имнненем), стрептомицин., снсктомицин, а гакже изонназид, мегронидазол и др. Вторую группу составляют препараты, для которых отношение внутриклеточной и внеклеточной концентрации составляет от 1 до 10. К ним относятся тетрацпклины, гентамицин, рифампіщіш. линкомицин. хлорамфени-кол, полимиксин В. ваикомицин. фосфомицин. ряд фторшшолонов. В третью группу входят препараты с весьма высокой степенью проникновения в клетку. Для них отношение вн триклеточной концентрации к внеклеточной превышает 10. Это - все макролидныс антибиотики (эритромицин, кларитроми-цин. диритромицин). препараты группы азалндов (азитромнцин). клнндами-цин, фюрхшюлоиы.
Весьма существенным для внутриклеточпой локализации антибиотиков является механизм так называемого рН-зависимого распределения, который связан с тем, что по своим физнко-химическим свойствам многие антибиотики могут существовать как в виде нейтральных соединений, способных участвовать в гидрофобных взaимодeйcтБияx с компонентами клеточных мембран, так и прис\тствовать в ионизированном впде в виде слабых кислот или оснований. Антибиотики в форме слабых кислот лучше ионизируются в среде с повышенными значениями рН, а в виде слабых оснований сотвстст-венно - в более кислой среде.
В течение последних 10 лет наблюдается повышение интереса исследователей и клиницистов к антибиотикам макролидного ряда, среди которых наиболее известно эригромицин. олеандомицин. снирамицин. В настоящее время известно более 20 аптибиотиков этой группы, полечившие пазвапие макролиды нового поколения (Venice. 1994). До середины ЯО-х годов они применялись довольно ограничено из-за низкой биодостуиносш, быстрой элиминации из организма и широкого распространения устойчивых к ним микроорганизмов, особенно среди стафилококков. Однако открытие новых заболеваний и новых возб дителей (легионеллез, Campylobacter и др.) и увеличение частоты выделения атипичных внутриклеточно локализованных микроорганизмов (микоплазм, хламидий и др.) вызвали повышенный интерес к получению ряда макролидов высокоактивных и безопасных природных и полисинтетических производных с ул чшенными фармакокинетическими свойствами {А.В. Караулов.. 1997; СВ. Яковлев, 1997; С. Agen, R. Danesi, Blandizzic et al, 1993; F.Biyskier, С Agouridans, I.F. Chantor, 1993; M.B. earlier, С Zenebergh, R.H. Tulkens, 1987; Ю.О. Сазыкип и др., 1998).
Расширение использования макролидов связано со следующими доводами.
Во-первых, достаточно высокая и неуклонно возрастающая клиническая эффективность новых генераций макролидов, обусловленная прежде всего расширяющимся спектром антимикробной активности.
Во-вторых, наличие ряда характеристик (хорошее проникновение в ткани, низкие дозировки и малая кратность введения, прекрасная клиническая и биологическая переносимость), выгодно отличающих их от предшественников и антибиотиков других групп.
В-третьих, способность оказывать не только бактериостатическое, но и бактерицидное действие в отношении ряда микроорганизмов, что обусловлено уникальной способностью макролидов накапливаться в тканях внутриклеточно, в концентрациях в несколько раз превышающих их концентрацию в крови.
Актуальные направления химиотерапии, наиболее распространенных заболеваний животных
В течение ряда лет сотрудниками кафедр Запорожского государственного медицинского университета проводился целенаправленный поиск биологически активных веществ среди вновь синтезированных азотистых гетероциклических соединений (А.Д.Визир и др.. 1997). Для скринингового поиска были избраны сосдинения ряда 1,2,4-триазолов, амшюхиназолинов и ксантина, синтезированных на кафедрах, руководимых проф. Мазуром И.А. п проф. Прийменко Б.А. Среди них были обнаружены вещества, обладающие выряженной антигипокснческой и антиоксидантної! активностью, противо-шиемическим. геиаюпрогекюрным и раиозаживляющим свойствами. Большинство исследованных соединений относятся к классу малотоксичных. Высокий уровень биологической активности и низкая Tоксичностb определяются сродством этик соединений к предшссгвенникам синтеза 1уанилагов -триазолы и адениалтов - ксантины, играющих ключевую роль в регуляции обменных процессов (П.М. Белый и др, 1997).
Наиболее перспективным себя зарекомендовал морфолшний 3-мстил-1.2,4-триазолил-5-тиоацетат. проявляющий гепатозащитную. ранозажив-лмющую и нрошвовир\сн\ю активносгь (И.А. Мазур и др. А.С. СССР № 1410482).
Он представляет собой белый или с кремоватым оттенком кристаллический порошок, растворимый в воде и этаноле и не растворимый в диэтило-вом эфире и бензоле. Молекулярная масса 260. 325. Массовая доля АДВ 98"о, тсмпсратура плавления 148-151 .
При изучении его гепатопротекторных свойств установлено, что соединение обладает выражнной гепатозащитной активностью и может быть субстанцией для создания синтетического гепатозащитного препарата.
Морфолиний гакже показал лучшее рапозаживляющее действие, увеличивая прочность послеоперационного рубца па 121 о по сравнению с пелеченными животными. Метилурацил увеличивал прочность рубца только на 71% при эффективной дозе 100 мг/кг.
Исследование вирусингибирующей активности соединения проводили на культуре клеток куриных фибробластов в отношении вируса гриппа типа А и в развивающихся куриных эмбрионах, инфицированных вирусом типа А и Аз- Инфекционная активность при этом составляла б Lg ТЦД30 для клеток куриных фибробластов и 6-7 Lg ЭИД50 (эмбрион инфицнрующая доза) для клеток эмбрионов кур. Препарат в концентрациях 1/4-1/10 от максимально переносимых (250,0-100,0 мкг/мл) вносили в исследуемую систему через 30-60 мин после заражения вирусом в дозах. вызывающих 100Ь-ный эффект инфицирования указанных моделей. Кроме гого, проведено исныгание защитного действия при грпппозной пневмонии, вызванной вирусом гриппа, адаптированным к легочной ткани мышей.
Вирусингибирующее действие соединения в системе клеточной культуры выражалось снижением выхода вируса гриппа А (WSN) на 3,3 lg, а репродукция вируса штамм А (Англия) 42/72 ннгибировалась на 4 lg. В опытах па развивающихся к ртгых эмбрионаx отмечены некоторые различия в вирусостатическом эффекте сравниваемых агентов: соединение в адекватных концентрациях выгодно огличаегся но активности, превосходя показатели ремантадина, взятого в качестве контроля.
Сравнительное изучение соединения на фоне противооспенного и антигерпетического препаратов показывает, что оно выгодно отличается от сравниваемых агентов. Критериями эффективности (при соблюдении соотвстствующих контролен) служили процент снижения инфицированности биосистемы или отсутствие бляшек на хорионаллантоисной оболочке эмбрионов кур (ХАО).
Таким образом, морфолиний обладает низкой токсичностью, выраженным гепатотроппым. рапозажнвляющим и противовирусным действием и может быть использовано для создания лекарственного вещества, эффективного при токсических и вирусных поражениях печени. (П. Украины № 1988, приоритет от 22,12,86, опубл. 20.12.94, М.Юц С07В 413/12, А61.К 31/41, А61К 31/535)
Химическая структура соединения обеспечивает стимуляцию синтеза в организме анаболиков. В свою очередь, анаболики способствуют синтезу белка в организме и специфических и неспетдифических факторов естественноЙ резистенции. Усиление процесса сиитеза белка в организме способствует также внутриклеточной регенерации, ускоряет репаративные процессы в эпителиальной и кроветворной тканях.
Самой высокой активностью среди S-зямещенных производных триа-зола обладают соединения, содержащие в этом положении уксусную кислотy (Е 8252). В частности, тиотриазолпн.
Установлено, что тиотриазолин оказывает выраженное влияние на ангиоксидантпую сисгему и ПОЛ, пренягствуя угнетению активности суиерок-сиддисмутазы, каталазы, глютатионпероксидазы. сохранял запасы а-токоферола. Механизм действия тиотриазолина складывается из активации антиоксидантных ферментов, защитного действия в отношении окислительных процессов с сохранением фонда АТФ, а также мощного анаболизирую-щсго действия (И.М.Белый и др, 1997). Тиотриазолин увеличивал содержание митохондриального белка, стимулировал адаптивный протеинсинтез о чем свидетельствовали коэффициенты, характеризующие соотношение ката-болнческих и бежоворепаративных процессов. Интенсивность включения ЗН-глицина в белки цитозоля ишемизированного миокарда превышало по силе рибоксин.
Тиотриазолин обладает антиатеросклеротическим и антиоксидантным действием, не уступающим эталонным средствам: никотиновой кислоте и а-токоферола ацетату. Очевидно за счет торможения свободнорадикальных процессов преимущественно за счет активации антиоксидантной системы и угнетения начальных продуктов ПОЛ - диеновых и триеновых конъюгатов. Угнетая свободнорадикальное окисление липидов, тиотриазолин создает благоприятные условия для снижения общего пула свободных жирных кислот в печени и угнетения биосинтеза р-липопротеидов, а также в значительной мере ускорения катаболизма холестерина
Была предложена наружная лекарственная форма димексида с тиот-риазолином, репаративные свойства которой изучены в условиях травматологической клиники (Р.В. Носаченко, 1996; А.И. Чемирис, Р.В. Носаченко и др., 1995; Чемирис и др, 1996; К.О. Мурапов, 1987). Курсовые аппликации ее в первые часы после перелома значительно уменьшали развитие болевого синдрома и его негативное воздействие на нервную систему (снижение тахикардии и гипертензии).
Важным моментом терапевтического эффекта был ее антиоксидантный эффект, усиливающий репаративную регенерацию костной ткани. Наравне с этим препарат обладал анальгетическими и противовоспалительными свойствами, особенно, в первые часы после перелома.
Антимикробное действие препаратов
Гистологическому исследованию были подвергнуты печень, желудок, толстый и тонкий кишечники, сердечная мышца и селезенка, зафиксированные в 10 0 растворе нейтрального формалина. Гистосрезы готовили на замораживающем микротоме, а в отдельных случаях и из материала залитого в парафин. Окраску их производили гематоксилин-эозином.
Изучение влияния лозеваля на функциональное состояние печени было проведено на телятах месячного возраста. После применения препарата у животных брали кровь, в которой исследовали протеиносинтетическую. пигмент- и ферментобразовательную функцию печени. Протеиносинтетическую функцию определяли коллоидно - осадочной пробой Таката-Ара, тимоловой пробой и с люголевским раствором. О влиянии препарата на пигментобразо-вателъную функцию судили по содержапию билирубина, KoTорый определяли по Эндрашику, а о ферментообразовательной функции судили по каталитической активности аланинтрансферазы (АлАТ) и аспартаттрансферазы (АсАТ), которую исследовали с помощью биохимического набора «Лахема».
Функциональное состояние почек под влиянием препарата оценивали по физико-химическим показателям мочи телят общепринятыми методами, При этом исследовали цвет, консистенцию, запах, удельный вес. концентра цию водородные понов при помощи рН метра, содержание белка и альбуминов (проба Роча). наличие и количество углеводов (проба Гпйнеса), желчные пигменты (проба Родина), желчные кислоты (проба Гея). ге моглобииЧбеизидииовая проба Адлер-Цитрона), красящие вещества (проба Флоренса).
Влияние лозеваля на активное гь иищеварительной системы изучали но результатам исследования физико-химических свойств фекалий телят на цвет, запах, консистенцию, концентрацию водородных ионов (лакмусовой
бумагой), содержание белка (проба Роча), содержание углеводов (по Гайне-су), гемоглобина (бензидиновая проба), желчных пигментов (проба Тар-квея), жира и крахмала (микроскопически, общепринятыми мегодами).
Влияние препарата на эмбриональное развитие и генеративную функцию животных проводили на белых крысах п тем вычислення процента пред- и постимплаташонной гибели эмбрионов, обнаружение аномалий и уродств во внутренних органах и костной системе, а также изучение влияния препарата на постнатальное развитие щенят.
Изучение аллергезирующего действия лозеваля проводили путем воспроизведения местной аллергической реакции - скарификационного теста, а также анофилактического шока.
При изучении фармакодинамиси препарата исследовали его влияние на течение воспалительного процесса. В этих целях были поставлены эксперименты по антифлогистатическому действию препаратов и изучению его действия на развитие воспалительного отека и нa пролиферативные процессы при воспалении и проницаемость сосудов.
Лечебно-профилактическое действие препаратов изучали при заболеваниях желудочно-кишечного тракта (диспепсии, гастроэнтериты, колибак-териозы телят, дезинтерин поросят, салмонеллез цыплят, смешанные инфекции пушных зверей, бронхопневмония и парагрипп-3 телят, мастит н эндометрит крупного рогатого скота, парвавирусный энтерит собак). Заключение о ПОЛОжиТСльном действии препарата делали на основании комплексных специфических клинических, биохимических гематологических. и иммунологических методов исследований. Лечебно-профилактическую эффективность определяли в сравнении с широкоприменяемыми в данных показаниях препаратами и отрицательным контролем. Отдельные испытания были проведены комиссиопно с участием ветспециалистов и животноводов хозяйств. Способ применения препаратов был в основном аэрозольным, поэтому были в основном использованы следующие расчеты.
Емкость легких у кур составляет 13-14 мл (у уток = 20-21 мл), а вместе с воздухоносными мешками общая емкость дыхательных органов у кур равна примерно 169 мл (у уток = 315 мл).
Подсчитано, что за один вдох взрослая курица потребляет приблизительно 45 мл воздуха. Это значит, что при средней частоте дыхания 30-35 движений в минуту курица забирает около 1500-1600 мл воздуха за это же время. Для определения минутного объема дыхания в зависиомсти от живого веса птицы.
Минутный объем дыхания = (0,78 х X) -16 : 1000 где мин тный объем дыхания в литрах, X - вес птицы, в граммах 16-константа Кона, 0,78 - коэффициент пересчета. У птиц оседает в легких и всасывается не больше 1/5 (20 процентов) аэрозоля, поступающего в дыхательные органы. Учитывая приведенные данные, предлагается определять приблизительное количество аэрозоля, которое остается и всасывается в легких птиц, при помощи следующей формулы: У=1/5хрх1хСмг/мин где У - количество оставшегося аэрозоля; 1/5 - коэффициент, указывающий какая часть общего объема ингалиро-ванного аэрозоля остается в легких; Р - объем возд\ха, поступающий за один вдох, литры; 1 - частота дыхания в минуту; С - концентрация аэрозоля, мг/л воздуха. При помощи этой фор{улы определяют примерное количество рсзор-бированных лекарственных средств при ингаляции аэрозоля в течение 1 минуты. Мин объем 40 дневных цыплят 0.257 л (вес приблиз. 300 г) 60-"- 0,413 л (- - 450 г) 150-"-кур 1.5-1.6 л (-"- 1.8-2,0 кг) 1 м3 = 1000 дм = 1000 л = 1.000.000 см (1 л = 1 дм3). Опыты по профилактике (1 серии) проведены в хозяйствах ряда районов на 600 цыплятах, 260 поросятах 118 телятах, а при лечении лозеваль использовали в 19 сериях опытов на 935 цыплятах, 1099 поросятах, 1006 телятах. 29980 норках, 1040 нутриях. 127 собаках в 10 хозяйствах района. Предварительно была отработана оптимальная лекарственная форма и доза препаратов. Проведен экономический расчет эффективности при применении препарата в тех или иных показаниях. Расчеты проводили по П.Н. Никитину с учетом «Методики определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ» (Колос. М. 1988). Полученный в результате материал обработан методами вариационной статистики по И.А. Ойвину (1980) и М.Л. Беленькому (1963).
Разработка показаний к применению и лечебно профилактическая эффективность препаратов
Проведено изучение свойств изатония на модсли вакцинного процесса при оспе у кроликов, гриппозной пневмонии у мышей, а также влияния на ряд функций организма..
Антивирусную активность изучали на модель экспериментaльнoгo вакцинного процесса при оспе на 165 кроликах весом 1-2 кг в различных условиях опыта. Исследования проводили с вирусом осповакцины (Strongy-loplasma vacciniae variolae sicci) производства завода бактерийных препаратов Одесского научно-исследовательского инститлта вирусологии и эпидемиологии им. И.И. Мечникова, серия 146. Заражали животных вирусосодер-жащей жидкостью в разведении 1:10. На скарифицированную повсрхность кожи наносили инокулят в объеме 0,2 мл (на участок 10 см кв.). который втирали стеклянной палочкой. Критериями оценки антивирусного действия препарата служили степень развития клинических прявлений болезни, длительность сохранения специфических поражений кожи, время обратного развития инфекции, выявление вируса в крови по цитопатическому действию в культуре клеток почки обезьян и реакции гемадсорбации, выявление антигена с помощью иммунофлуоресцентного метода. Кроме того, исследовали периферическую кровь животных в динамике. Состав крови изучали общепринятыми методами, а также с помощью аппаратов для количественного подсчета форменных элементов крови типа Picoscale.
Перед заражением, в период развития болезни и при клиническом выздоровлении у животных оценивали общее состояние, измен1ния со стороны кожи, массы, а также регулярно измеряли температуру тела ректально с помощью электротермометра гипа "ТПМ2М-1". Наряду с эгим проводили исследование показателей реактивности организма под воздействием инфекции и препарата. В качестве показателей реактивности использованы канцероли-гичсские свойства сыворотки крови и фагоцитарная активность лейкоцитов.
В качестве микробной культуры служнла однос\точная культура золотистого стафилококка-209. Показатели реактивности определяли до заражения и на б и 8 день после заражения.
С целью изучения влияния испытуемых препаратов на вирус гриппа на экспериментальной модели гриппозной пнсвмонии мышей проведены опыты на животных массой 10-12 г с экcперимеитaльнoй гриппозной инфекцией. Для заражения использовали штаммы вируса гриппа А/Англия/42/72 H3N2 и A/Bethesda/12/2 ЮЩ адаптированные к мышам. Штаммы получены-из Всесоюзного научно-исследовательского института гриппа. После предварительного пасснрвоання п проверки вируса в РГА, становлсно его ЛДюо- Инфицирование проводили интраназально paзличными разведениями вируса. Препараты вводили интраназально и подкожно на протяжении 5 дней в дозе, равной 1/5 ЛД50- За подопытными животными наблюдали в течение 14 дней, после чего всех выживших вскрывали и регистрировали (макроскопически) патологоанатомические изменения в легких. Химиотерапевтическую активность препаратов оценивали следующими показателями: выживаемость, средняя продолжительность жизни и степень специфического поражен1я легких.
В результате опыта установлено отсутствие побочных явлений при парентеральном введении препарата. Пероральное применение сопровождалось отказом от пиши в первые часы после кормления препаратом.
Лечебный эффект, был более выражен у животных получавшпх препарат парентерально. У этих кроликов на сутки позднее появилась гиперемия скарифицированной кожи, пусгулы образовались лишь у грех животных из 13. На 7-й день после заражения они подсыхали, образовавшиеся корочки отпадали на 10-й день у всех животных. Характерные проявления болезни были в контрольной группе: на 3-й день после заражения у них развилась гиперемия кожи, появились пустулы сохранявшиеся до 12 дней. В группе животных получавших препарат через рот, гиперемия и пустулы появились одноврсменно с контрольными, по подсыхание их и отпадение образовавшихся корочек началось на сутки раньше чем у контрольных.
В периферической крови огмечено увеличение количесгва лейкоцигов, уменьшение количества эритроцитов и гемоглобина, что особенно заметно при употреблении препарата per os. После исчезновения основных проявлений болезни происходит нормализация показателей крови, за исключением повышения количества лейкоцитов, которое сохраняется более стойко. Отмечено также, что независимо от способа применения препарат вызывает характерные изменения лейкоцитарной формулы крови. При парентеральном ведении увеличивается число юных и сегментоядерных нейтрофилов, уменьшается количество эозинофилов и лимфоцитов. При энтеральном применении препарата происходит уменьшение юных форм, эозинофилов, моноцитов, остальные изменения аналогичны описанным, за исрлючением лимфоцитов, которые соответствуют данным контрольной группы.
Изменений цитолитических свойств сыворотки крови и фагоцитарной активности лейкоцитов под влиянием препарата не наблюдали. Результаты вирусологических исследований, проведенных на культуре клеток почек обезьян (МА) и выявления антигена с помощью меченых флуоресцирующих антител также подтверждали слабо выраженное лечебное действие изатония при введении его через 72 ч. после заражения. При ипфицировании клеток суспензий крови, взятой от контрольных животных, наблюдались хорошо выраженные реакции гемадсорбции и цитопатическос действие вируса оспо-вакцины, причем эти тесты были положительными при исследовании материала в динамике. У животных, получавших изатоний инграперитониальио, ЦПД выражено умеренно при отрицательной реакции гемадсорбции.
