Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 9
2.1. Электрохимическая активация воды 9
2.2. Использование активированной воды в различных областях сельского хозяйства и медицине 14
2.3. Натрия гипохлорит и способы его получения 21
2.4. Сферы применения натрия гипохлорита 46
3. Материалы и методы исследований 58
4. Собственные исследования 70
4.1. Получение и контроль качества натрия гипохлорита 70
4.2. Биологическое действие натрия гипохлорита 77
4.3. Токсикологические свойства натрия гипохлорита 91
4.3.1. Определение параметров острой токсичности 91
4.3.2. Токсичность натрия гипохлорита при длительном назначении 96
4.3.3. Изучение местнораздражающего действия 104
4.3.4. Влияние натрия гипохлорита на пищеварение 105
4.3.5. Влияние на мочеотделение 106
4.3.6. Изучение аллергизирующего действия натрия гипохлорита 108
4.3.7. Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия ПО
4.3.8. Патоморфология после применения натрия гипохлорита 112
4.3.9. Ветеринарно-санитарная оценка мяса после применения натрия гипохлорита 113
4.4. Фармакологические свойства натрия гипохлорита 116
4.4.1. Фармакокинетика натрия гипохлорита 116
4.4.2. Влияние на функциональную активность пищеварительного тракта 116
4.4.3. Антиокислительные свойства натрия гипохлорита 121
4.4.4. Влияние на иммунологические показатели организма 132
4.4.5. Влияние на микросомальную окислительную систему печени 139
4.4.6. Механизм антимикробного действия натрия гипохлорита 141
Применение натрия гипохлорита в ветеринарии и животноводстве 148
4.5.1. Эффективность натрия гипохлорита при желудочно-кишечных заболеваниях животных и птиц 148
4.5.2. Эффективность при респираторных заболеваниях животных 166
4.5.3. Эффективность при акушерско-гинекологических заболеваниях (эндометриты, маститы) 172
4.5.4. Эффективность при хирургической патологии (раны, инфицированные раны, актиномикоз, дерматиты заживление швов) 176
4.5.5. Эффективность натрия гипохлорита при патологии печени (гепатоз, кетоз) 188
4.5.6. Применение препарата для детоксикации организма животных и птиц (токсемия, сепсис, микотоксикозы) 200
4.5.7. Применение натрия гипохлорита в качестве дезинфектанта и антисептика 210
4.5.8. Применение натрия гипохлорита в качестве консерванта (консервация мяса, силосование кормов) 219
4.5.9. Применение натрия гипохлорита при псевдомонозе свиней 224
5. Заключение 227
6. Выводы 251
7. Предложения производству 257
8. Список литературы
- Использование активированной воды в различных областях сельского хозяйства и медицине
- Биологическое действие натрия гипохлорита
- Изучение аллергизирующего действия натрия гипохлорита
- Эффективность натрия гипохлорита при желудочно-кишечных заболеваниях животных и птиц
Введение к работе
Улучшение ветеринарного обслуживания животноводства, разработка наиболее эффективных методов и средств профилактики и лечения заболеваний сельскохозяйственных животных является актуальной задачей ветеринарной науки.
В указанных целях широко используют различные фармакологические средства, обладающие антимикробными свойствами. Однако их эффективность в последнее время значительно снизилась из-за изменения биологических свойств микроорганизмов и проявления у них множественной резистентности после многократного пассажирования через организм больных животных и повышения вирулентных свойств. Устойчивые к известным препаратам серотипы возбудителей, как новая биологическая популяция, циркулируют в природе и, инфицируя животных, резко усугубляют течение патологического процесса, существенно затрудняя терапию заболевших.
Все это требует поиска и разработки новых средств с различными механизмами антимикробного действия. С рассматриваемых позиций значительный интерес представляет отечественный препарат натрия гипохлорит, получаемый путем активизации воды электрохимическим способом с помощью электролизеров различной конструкции, в том числе, ЭДО-3, выпускаемых Региональным центром научно-технических исследований (г. Москвы) и «Ключ» (НПО Петролайзер).
Получаемые растворы представляют собой бесцветную прозрачную жидкость, 1 л которой содержит от 300 до 1000 мг/л активного вещества натрия гипохлорита.
Электроактивированная вода получила достаточно широкое применение в медицине в самых различных показаниях (Е.Егоров, 1992; Т. Абрамова, 1995). В последние десятилетие проведены два Международных симпозиума в Киеве в 1990 и в Москве в 1994 году, а также Всероссийская научно-
6 практическая конференция (Москва, 1992 г.) по применению электроактивированной воды в различных областях здравохранения.
В ветеринарной практике не разработаны четкие показания к применению электроактивированной воды на сельскохозяйственных животных, не определены ее основные фармако-токсикологические свойства (В.И. Дорофеев, 1997).
В данной работе предусматривалось проведение исследований по разработке показаний и определению оптимальных параметров применения препарата при различных болезнях животных в соответствии с установленными требованиями, изучению специфической активности и основных токсикологических и фармакологических свойств.
Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является изучение, разработка и внедрение в практику ветеринарии и животноводства раствора активного натрия гипохлорита для лечения и профилактики ряда заболеваний животных и птицы. Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:
дать обоснование для разработки и внедрения раствора активированного натрия гипохлорита в практику ветеринарии и животноводства;
изучить биологическую активность препарата в отношении возбудителей отдельных болезней животных;
определить основные фармацевтические, токсикологические, фармакологические свойства препарата и разработать методы его контроля;
- разработать показания к его применению, установить лечебно-
профилактическую эффективность при ряде заболеваний животных и птиц;
- разработать необходимую нормативную документацию на его приме
нение в целях внедрения в практику ветеринарии и животноводства.
Научная новизна. В результате проведенных исследований предложен натрия гипохлорит, изучены его биологическая, антимикробная, антигрибная, антигельминтная активность; в соответствии с установленными требованиями, определены основные фармако-токсикологические характеристики и
методы контроля; отработаны показания к применению, оптимальные схемы и дозы при лечении и профилактике наиболее распространенных заболеваний животных и птицы.
Практическая значимость. Для практической ветеринарии предложен препарат натрия гипохлорита, обладающий высокой лечебной и профилактической эффективностью при ряде желудочно-кишечных, респираторных, акушерско-гинекологических и хирургических болезней, а также применяемый в качестве дезинфектанта и антисептика.
Практическая ценность препарата подтверждается положительными результатами широких производственных испытаний и Наставлением по применению в ветеринарии, одобренным Ветфармбиокомиссией и утвержденным Департаментом ветеринарии в установленном порядке.
Внедрение результатов исследований. Производство натрия гипохлорита освоено АО «Регнатис» г. Москва, «Петролайзер» г.Санкт-Петербург. В соответствии с разработанной документацией в условиях животноводческих хозяйств страны обеспечено его применение в качестве высокоэффективного лечебно-профилактического, дезинфицирующего и консевирующего средства.
Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на:
заседании Ветфармбиокомиссии Департамента ветеринарии МСХ и Продовольствия.
научно-практических конференциях (Новочеркасск, 1999; Краснодар, 1999-2004; Москва, 2004; Чебоксары, 2004; Казань, 2005}
производственных совещаниях ветеринарных специалистов Краснодарского края 1998-2004 г.
На защиту выносятся:
обоснование разработки натрия гипохлорита;
результаты исследований биологической активности препарата;
результаты его фармако-токсикологических исследований;
результаты разработки показаний к применению и изучения лечебно-профилактической эффективности препарата при различных заболеваниях животных и птицы;
практические предложения по применению и внедрению препарата активного натрия гипохлорита в ветеринарии.
Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 33 научных статьях.
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1. Электрохимическая активация воды
Вода различных источников значительно отличается по вкусу, жесткости, количественному и качественному составу растворенных минеральных и органических веществ и другим показателям (А.К. Гумак, 1966; Н.А. Данилова, 1971; Л.Н. Марей, А.С. Зыкова, 1980; В.Ф. Протасов, А.В. Молчанов, 1995; М. Frolkin, Е. Srorz, 1962; Т. Fucuda, 1965; Е.Р. Odum, 1971).
У.Ахметов и А. Бильдюкевич (циг.по Б.В. Фрадкину, 1983) установили, что при переходе льда в воду количественное соотношение орто- и парасо-стояния изменяется в сторону увеличения парамолекул при омагничивании, электролизе, дегазировании, а также в целебных минеральных водах.
Известно, что дистиллированная вода практически не проводит электрический ток. Вода становится электролитом при наличии в ней достаточного количества ионных примесей. Количественный и качественный состав водопроводной воды обеспечивает ей высокие электролитные свойства. В ее состав входят катионы щелочных и щелочноземельных элементов; Na+, Са"*", К+, Mg^, анионы HC03z", CL", S042' и другие. Кроме электролитных примесей питьевая вода содержит газы: 02, С12) С02. Дополнительная минерализация водопроводной воды, значительно увеличивает ее электропроводность (Э.Е. Евсеев, 1982; О.Н. Самойлов, 1987).
О.Н. Самойлов 1987), Р.И. Грабовский (1964), Б.В. Некрасов (1989), И.В. Васильев 1986), J.S. Kell (1974), S.A. Riss, M.I Sceats (1981), Q.L. Bevoridge (1982), R. Herpziger (1985), ГЛ. Стародубцева, Г.М. Федорищенко, 1997 и другие показали, что электромагнитные силы, удерживающими атомы водорода и кислорода в молекуле воды, обусловлены расположением и уплотнением электронных облаков, связями и углом наклона этих атомов в пространстве, силой взаимного их притяжения и отталкивания, синхронностью вращения протонов водорода в молекуле воды, количественным отношением молекул орто- и парасостояния.
Известно несколько видов активации воды и некоторых других жидких сред: механической, магнитной, термической, баратермической, ультразвуковой, электрической, электрохимической и др. Активацией преследуется цель придать жидкости необходимую реакционную способность в том или ином технологическом процессе. Другими словами, активированная жидкость используется как реагент или среда для протекания физико-химических реакций (Ю.П. Беличенко, М.М. Швецов, 1979; И.Н. Баденко, А.И. Горшков, 1990; С.А.Бардер, 1980).
Активированным можно назвать вещество, внутренний запас энергии которого в результате внешних воздействий временно соответствует термодинамическим равновесным значениям (В.И. Классен, 1978).
Электролиз - электрохимический процесс, протекающий в растворах солей и других химических элементов под воздействием постоянного электрического тока. При электролизе на аноде ионы и молекулы электролита или материала электрода отдают электроны (окисляются), а на катоде принимают электроны, то есть восстанавливаются. С целью получения определенных продуктов электролиз проводят в специальных аппаратах - электролизерах, электролитических ваннах, ячейках. В качестве электролитов используют минеральные или органические кислоты, соли и их смеси. В ряде случаев электролит служит исходным веществом для получения требуемого продукта (Ю. Генин, 1956; В.Г. Бардов, СП. Казарян, 1990).
Впервые количественные соотношения между электрической энергией и химическими'превращениями, связанными с ней, были установлены Фарадеєм (1833-1834 гг.), который сформулировал основные законы электролиза:
Количества веществ, выделенных или растворенных на электродах, прямо пропорциональны их химическим эквивалентам, а также количеству электричества, прошедшего через электролит;
Для выделения грамм-эквивалента любого вещества всегда требуется одно и то же количество электричества, равное 9,650 к.
Классическая теория электролитической диссоциации (распад веществ на ионы при растворении) была создана С, Аррениусом и В. Оствальдом в 80-х годах 19 столетия. Она основана на предположении о неполной диссоциации растворенного вещества, характеризуемой степенью диссоциации.
Применение электролиза стало возможным после появления с 70-х годах 19 столетия мощных генераторов постоянного тока. В промышленности электролиз используют для получения из расплавов руд алюминия, магния, титана, циркония, урана, а также получения хлора, хлоратов, перхлоратов, персульфатов, водорода, кислорода, фтора.
Для исключения взаимодействия продуктов электролиза, образующихся на электродах, электролизер делят на две (и более) части пористой диафрагмой из асбеста, керамики, ионообменных мембран, проницаемых только для ионов электролита. В этом случае раствор в анодном пространстве называют анолитом, в катодном - католитом.
В результате электролиза на нерастворимых анодах, изготовленных из платины, иридия, графита, чаще всего отмечают разряд анионов: 2СГ + 2е > С12
При электролизе концентрированных растворов поваренной соли на аноде концентрируются анионы хлора, атомарный кислород, а в зоне катода-гидроксильные ионы и водород. В результате химической рекомбинации в электролитической ванне образуется натрия гипохлорит с высокой концентрацией активного хлора.
В литературе достаточно подробно освещены работы по механической активации воды в результате воздействия ударной нагрузки (Ф,А. Летников и др., 1976; Хинт И., 1979 и др.); после нагревания охлаждения воды (Ф.А. Летников, 1976; В.И. Классен, 1969); наиболее подробно изучены свойства омагниченной воды (В.И. Классен, 1973, 1978). Известно, что био-цидные свойства воды существенно изменяются под влиянием импульсивных электрических разрядов и гидравлического воздействия.
В последние годы исследователи и практические работники особое внимание уделяют новому научно-техническому направлению - униполярной электрохимической активации воды и некоторых других жидкостей.
Основу электрохимической активации сред составляют процессы электролиза, однако, техника и технология проведения униполярной электрообработки жидкостей в значительной степени отличаются от традиционных техники и технологии, используемых в электрохимических (электролизных) производствах.
В отличие от существующих методов электрического превращения веществ, то есть электролиза и электродиализа, электрохимическая активация жидкостей не является законченным технологическим процессом (В.М. Ба-хир, А.Г. Лиакумович, П.А, Кирпичников, 1983).
Использование активированной воды в различных областях сельского хозяйства и медицине
Издавна было замечено положительное влияние электричества на растения, когда они, обработанные слабым электрическим током, приобретали более сильный и стойкий запах, а плоды фруктовых деревьев при этом улучшали вкусовые качества. Вместе с тем было показано и негативное влияние отрицательного электрического заряда на растения, в частности, на воду, со 15 держуюся в них, что было подтверждено позже опытами современных ученых Н.О.Ароновича (1932), З.М. Хасановой (1992) и др. На Всесоюзной научно-технической сессии ВАСХНИЛ по вопросам применения электроэнергии в растениеводстве в 1949 году академиком М.Г. Евреиновым (1951) было предложено начать систематические исследования по изучению влияния электрического тока, магнитного поля, в том числе и активированных водных систем, на растения.
По сообщению Ю.Егорова (1982) при поливе растений активированной кислой водой последние гибнут, а щелочной фракцией-бурно растут.
Было установлено, что поение кроликов омагниченной водой повышает среднесуточные привесы животных на 10%, а живая масса поросят, которым в течение месяца выпаивали такую воду была на 2,5-3 кг выше массы контрольных животных. В опытах по выпаиванию омагниченной воды 120 тысяч курам установлено, что эта птица лучше росла, у ней были значительно выше сохранность и яйценоскость, на 8% получено больше живой массы по сравнению с контролем (Ю.М.Сокольский, 1990).
В аналогичных экспериментах на крупном рогатом скоте отмечено повышение надоя на фуражную корову и улучшение качества мяса. Магнитная обработка спермы племенных быков и баранов перед осеменением увеличивала выход молодняка, улучшала рост и развитие животных (В.И.Дорофеев, 1995).
Об успешном применении активированной воды в животноводстве и ветеринарии сообщили М.Ф.Васильев, Г.А.Дугин, И.В.Никишина (1986); В.И.Дорофеев (1987); М.ГЛабаев, Ю.А.Максимов, И.С.Исмаилов (1990); В.Г. Тогубицкий (1975); АТорячева (1991); М.Карлов (1992), В.АЛронь, А.В.Жихарев, М.ГЛабаев (1996) и другие. Положительные результаты, в частности, были получены при откорме скота и птицы, консервировании зеленой массы на корм, при лечении различных инфекционных и незаразных болезней животных (Т.Абрамова, 1995; М.ГЛабаев, И.С.Исмаилов, П.Ю.Крючков, 1996).
Разработаны рекомендации по использованию электроактивированных растворов при вирусном гепатите «А» и «Б», при лечении сальмонеллеза, различных кожных и грибковых заболеваний. О положительных результатах использования электро активированных растворов в птицеводстве сообщил профессор В.И.Филоненко (ТАбрамова, 1995).
Активированная вода успешно применяется при лечении ран, ожогов и дерматитов у животных, Он обладает выраженным бактерицидным действием и используется для обработки рук хирургов и хирургического инструментария (МБ.Сабиров и др., 1991).
Скармливание силоса, приготовленного с добавлением активированной воды, бычкам на откорме не оказывало отрицательного действия на животных и способствовало увеличению среднесуточного прироста их живой массы на 10,9%, улучшению качества мяса и высокому экономическому эффекту от применения. При этом показано, что сохранность во всех группах составила 100%, а достоверных различий в результатах клинических, гематологических и биохимических исследований не установлено. Длительное применение активированной кислой воды лишь достоверно снижало фагоцитарное число с 9,88±0,24 в контроле до 6,5±0,45 ... б,77±0,34 в опыте (МБ.Сабиров, СИ. Агаджанян, 1991).
Механизм действия на организм омагниченной, талой, дегазированной, серебряной электроактивированной воды, по мнению И.Д.Зелепухина, В.Д.Зелепухина (1987); ЛАЛСульского (1987); Ф.Татарского (1990); А.Е.Васина (1981); В.Журба (1994) является идентичным.
Биологическое действие натрия гипохлорита
Антимикробное действие раствора натрия гипохлорита изучали в трех сериях опытов: в первой серии по определению бактерицидного действия, по методу В.В, Титова (1968), во-второй - бактериостатического - по методу серийных разведений и третьей - химиотерапевтического эффекта на модели эшерихиозной септицимии белых мышей. В качестве тест-культур использованы возбудители наиболее распространенных заболеваний животных, в том числе колибактериоза, сальмонеллеза, стафилококкоза и др, В экспериментах пользовались как музейными, так и полевыми штаммами микроорганизмов (Esch. coli 072, Esch. coli 04, Salm.cholerae suis, Salm.thyphymurium, Staph.aureus, Past, multocida, Ps.auroginosa, Strept.pneumonia, Pr.vulgaris) схожими по своим морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам. В исследованиях применяли натрия гипохлорита в концентрации 600 мг/л.
При изучении бактерицидных свойств кусочки плотных питательных сред с культурой микроорганизмов погружали в чистый раствор натрия гипохлорита на 60, 40, 30, 25, 20, 15, 10, 5, 3 и 1 мин. По истечении заданной экспозиции их извлекали, промывали в дистиллированной воде трехкратно, после чего раскладывали на поверхность питательных сред в чашки Петри на 1-3 суток. Посевы выдерживали в течение суток в термостате при температуре 37С, после чего производили учет роста культур. Заключение о бактерицидном действии препарата делали по отсутствию роста микроорганизмов на средах. Полученные результаты представлены в таблице 2.
Из приведенных данных видно, что все исследованные штаммы микроорганизмов проявляли к натрия гипохлориту высокую чувствительность. Повышенной чувствительностью к натрия гипохлориту обладали Staphilococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, которые погибали после контакта с раствором через 15-20 мин. Pasterella mulltocida не давала роста через 10 минут после контакта с раствором натрия гипохлорита. Различные штаммы кишечной палочки и сальмонелл сохраняли свою жизнеспособность в течение 20-30 минут.
Бактериостатическую активность препарата изучали методом серийных разведений на жидких питательных средах в отношении штаммов зшерихии и сальмонелл. Для этого раствор натрия гипохлорита растворяли в жидкой питательной среде до 0,1% концентрации. Об антимикробном действии судили по росту тест-культур после I и 2-х суточной инкубации при температуре 37С в термостате (таблица № 2).
В результате эксперимента установлено, что изучаемый препарат не обладает выраженным антимикробным действием в отношении исследованных штаммов микроорганизмов. При этом отмечалось лишь некоторая задержка роста культур по времени и несмотря на значительную кон 79 центрацию препарата, регистрировали рост исследованных тест-культур, аналогичных контролю. Очевидно, это объясняется блокированием активного хлора и атомарного кислорода питательной средой.
Бактерицидное действие натрия гипохлорита изучали методом серийных разведений. Растворы препарата готовили в пробирках методом последовательных серийных разведений на дистиллированной воде. Для посева использовали 16-18 часовые агаровые культуры Е. coli О20, S. aureus, P.aeruginosa. Концентрацию микробных клеток в 1 мл, определяли по стандарту мутности 1 млрд. м.к. в мл, затем методом последовательных разведений получали концентрации 100 млн., 10 млн., 1 млн. м. к. в мл, из которых высевали в каждую пробирку ряда с препаратом и контроль (для чистоты культуры и опыта) по 0,02 мл. Через 30 мин. экспозиции, производили посев из каждого разведения и контроля на плотные питательные среды (МП А). После 18-24 часов инкубации при 37оС визуально учитывали рост бактериальных культур.
При определении спектра действия препарата установили, что натрия гипохлорит при бактериальной нагрузке 1,0 млн/мл действует бактерицидно в концентрации 0,32% на Е, coli О20 и 0,08%- S. aureus, P.aeruginosa соответственно (таблица № 3).
Бактерицидный эффект натрия гипохлорита, гипобромита и гипойодита натрия для изучаемых штаммов при 5 мин экспозиции представлен в табл.5. Из таблицы видно, что максимальный бактерицидный эффект по отношению к различным возбудителям гнойной хирургической инфекции наблюдался у натрия гипохлорита, максимальная бактерицидная концентрация (МБК), которого в неорганической среде находилась в пределах 6,25-25 мкг/мл. В то же время, наименее выраженными бактерицидными свойствами обладал гипойодит, МБК которого находилась е пределах 165-440 мкг/мл. Промежуточное положение по антимикробной активности занимает гипобромит. Надо отметить, что антимикробная активность натрия гипохлорита возрастает с увеличением времени экспозиции, что приводит к снижению МБК, которая при 120 мин экспозиции находится в пределах уже 1,12-1,56 мкг/мл. Это свойство отсутствует у гипойодита, у которого максимальный антимикробный эффект наблюдается уже на 5 минуте, а при дальнейшем увеличении экспозиции гипойодита не изменяется. У ги-побромита максимальный антимикробный эффект наступает через 25-30 мин, при этом МБК составляет 75-100 мкг/мл. Дальнейшее увеличение экспозиции также не сопровождается изменением МБК гипобромита.
Одним из испытанных способов повышения эффективности антибактериальной терапии гнойно-воспалительных и септических процессов, предупреждения формирования антибиотикорезистентности и развития токсических реакций является метод сочетанного применения антибиотиков с другими средствами, при этом синергизм действия комбинируемых препаратов может достигаться различными путями.
Изучение аллергизирующего действия натрия гипохлорита
Функциональное состояние почек под влиянием препарата оценивали по физико-химическим показателям мочи поросят (5 голов), получавшим натрия гипохлорит в дозе 150 мл ежедневно 2 раза в день в течение 10 дней. Результаты сравнивали с показателями мочи от контрольных поросят (5 голов), не получавших препарат. Мочу собирали на протяжении всего опыта с интервалом 3-х суток (3,6,9 дни). Последние взятие было на 12-ый день.
Установлено, что в течение всего эксперимента акты мочеиспускания у поросят опытной и контрольной групп были регулярными, произвольными, безболезненными, в естественной позе. Моча светло-желтого цвета, прозрачная (без примеси слизи и крови), водянистой консистенции, удельным весом от 1,018 до 1,022. При химическом исследовании содержание белка, альбу-моз, желчных пигментов(билирубина), углеводов и гемоглобина не обнаружено (таблица 22).
Таким образом, длительное назначение натрия гипохлорита не влияет отрицательно на функцию почек. Изучение аллергизирующего действия натрия гипохлорита проводили путем воспроизведения местных аллергических реакций (феномена Артюса-Сахарова, скарификационного теста) и анафилактического шока).
Для воспроизведения феномена Артюса-Сахарова было подобрано 2 группы кроликов-альбиносов по три в каждой с массой тела 1,8-2 кг. Всем кроликам в области спины выстригали небольшие участки шерсти.
В первой группе в подкожную клетчатку выстриженных участков вводили натрия гапохлорит в концентрации 600 мг/л в дозе 1 мл/кг, во второй (контрольной) группе - сыворотку крови лошади в той же дозе.
Препараты вводили шестикратно с интервалом шесть дней. Наблюдение за животными вели ежедневно, в течение всего срока назначения препаратов и 6 дней после его окончания, учитывая воспалительную реакцию в местах инъекции.
Во второй серии опытов аллергизирующее действие изучали с помощью «скарификационного метода». Для проведения этого опыта было сформировано 2 группы кроликов по три кролика в каждой. В первой группе животным натрия гапохлорит назначали внутрь в дозе 10 мл/кг массы ежедневно в течение 10 дней. Вторая группа получала дистиллированную воду. На 10 день кроликам наждачной бумагой провели скарификацию, предварительно выстриженных участков кожи и в эти участки втирали натрия гапохлорит. Животным контрольной группы втирали сыворотку крови лошади. За последующей воспалительной реакцией вели наблюдение в течение 3-х дней.
В третьей серии опытов аллергизирующее действие исследуемого препарата изучено путем воспроизведения анафилактического шока. Для этого было сформировано 2 группы кроликов, массой тела 1,5-2 кг, по три кролика в каждой группе. Животным 1-ой группы в целях сенсибилизации подкожного инъецировали натрия гипохлорит в объеме 1 мл на животное трехкратно с интервалом в 2 дня, во 2-ой группе аналогично инъекцировали 1 мл сыворотки крови лошадей. Инъекции проводили в область спины. Через 14 дней после последнего введения опытным и контрольным кроликам были введены разрешающие дозы препаратов, после чего осуществляли клиническое наблюдение за животными.
Опытами первой серии установлено, что натрия гипохлорит не вызывает феномен Артюса-Сахарова. У всех опытных животных после шестикратного введения препарата на месте инъекций не отмечалось характерных для геморрагичного воспаления признаков (отеки, уплотнения). Сразу после инъ-екцирования в местах укола образовывались небольшие инфильтраты, размером с маленькую горошину и отек, вызванные травматическим повреждением кожи, которые рассасывались в течение 3-24 часов.
У контрольных кроликов после 3-5-ти инъекций регистрировали картину воспалительных реакций в виде отечно-инфильтративной, инфильтра-тивно-геморрагической и геморрагическо-некротической форм, характерных для феномена. На фоне воспаления в дальнейшем наблюдали образование язв и артритов.
Результаты второй серии опытов показали, что у кроликов опытной группы в местах скарификации в течение трех суток не было отмечено признаков, характерных для аллергического воспаления. Во всех случаях наблюдали кратковременную гиперимию в течение 3-х часов, вызванную механическим повреждением кожи. В контрольной группе воспалительных реакций также не отмечали. Следовательно, натрия гипохлорит не проявляет местного аллергизирующего действия.
В третьей серии опытов при введении натрия гипохлорита ни у одного из опытных животных не удалось вызвать картину анафилактического шока. Клинических признаков, характерных для шока, не отмечалось, было отме чено лишь слабовыраженное (в течение 2-х часов) угнетение кроликов. В контроле регистрировали ярко выраженный анафилактический шок - беспокойство, цианоз ушей, судороги разгибателей. Один кролик пал. При вскрытии павшего кролика отмечали застойные явления внутренних органов. Таким образом, натрия гипохлорит не обладает и общим аллергизи-рующим действием.
Эффективность натрия гипохлорита при желудочно-кишечных заболеваниях животных и птиц
Проведенные исследования дают основание предполагать, что подавление активности дегидрогеназ натрия гипохлоритом играет определенную роль в механизме проявления данными микроорганизмами своих патогенных свойств.
Необходимыми условиями для эффективного лечения гнойной хирургической инфекции являются чувствительность возбудителей к применяемым средствам и индивидуальный подход к их назначению. Последнее особенно важно, так как в макроорганизме активность используемых препаратов может существенно изменяться.
Для суждения об активности препарата in vivo наиболее подходящей средой исследования является человеческая сыворотка - среда, в которой антибактериальный препарат проявляет свою функцию. Принимая во внимание зачастую тяжелое течение гнойно-септических процессов, при которых, как правило, выделяются штаммы с высоким уровнем устойчивости к сыворотке крови, мы проводили предварительную обработку микрофлоры натрия гипохлоритом с последующим изучением бактерицидной активности сыворотки, В работе использовались чувствительный к сыворотке музейный штамм Е. соН "С" и клинический штамм Е. coli 018-ас, резистентный к бактерицидному действию сыворотки крови.
Данные литературы свидетельствуют о том, что штаммы кишечной палочки, принадлежащие к различным сероварам, по-разному относятся к бактерицидному действию сыворотки крови. Изучение влияния натрия гапохлорита на чувствительность клеток кишечной палочки к бактерицидной активности сыворотки крови показало, что последовательная обработка клеток Е. coli "С" натрия гипохлоритом, а затем 50% сывороткой кролика вызвала гибель всех 5x106 кл/мл, в то время как раздельная обработка клеток натрия гипохлоритом и 50% сывороткой приводит к гибели только 102 кл/мл в каждом случае. Однако подобного эффекта не удалось достичь при окислении натрия гипохлоритом клеток Е. coli 018-ас, устойчивых к бактерицидному действию сыворотки крови. Отсутствие в данном случае потенцирующего действия сыворотки на клетки Е. coli 018-ас, по-видимому, связано с неспособностью натрия гапохлорита изменить структуру липополисахарида наружной мембраны.
Эти результаты показали перспективность дальнейшего исследования механизма действия непрямого электрохимического окисления в борьбе с гнойной хирургической инфекцией.
Влияние натрия гапохлорита на проницаемость микробной стенки определяется устойчивостью или чувствительностью микроорганизмов к антибиотикам. Важное значение при этом имеют особенности химического состава внешней оболочки бактериальной клетки и структура антибиотика (Л.Н. Шошиев и др. ,1980; Л.Н. Шошиев, И.И. Поляков, 1980; Д. Ланчини, Ф. Паренти, 1985). Изменение доступности антибиотика к его мишени в клетке является одним из основных факторов антибиотикорезиетентности у микроорганизмов (В. К Плакунов, К.Сумро, 1977).
В связи с этим применение веществ, влияющих на организацию и проницаемость клеточной стенки, представляется заманчивым для повышения эффективности антибиотиков.
Изучая влияние натрия гапохлорита на К+-ионную проницаемость, нами выявлен различный механизм его действия на грамположительные и гра 147 мотрицательные микроорганизмы. Показано, что при внесении микробных клеток в среду и стабилизации выхода ионов К+ добавление натрия гипохлорита индуцирует выход ионов К+ как из грамположительных, так и из гра-мотрицательных микроорганизмов.
Утечка ионов К+ более интенсивно происходит в начальный момент воздействия гипохлорита на клетки и имеет дозозависимый характер для клеток Е. coli К12 и Staph.aureus 209Р. При сравнении результатов обработки клеток Staph.aureus 209Р и Е. coli К12 натрия гипохлоритом имеет место низкая скорость утечки ионов К+ из клеток золотистого стафилококка ( небольшой тангенс угла наклона начального участка кривой возрастания К+ ионной проницаемости), по сравнению со скоростью утечки ионов К+ из клеток кишечной палочки (большой тангенс угла наклона начального участка кривой возрастания К+ -ионной проницаемости). Меньшую скорость утечки ионов К+ из клеток Staph.aureus 209Р под действием натрия гипохлорита можно объяснить тем, что тейхоевые и тейхуроновые кислоты имеют выраженный анионный характер, благодаря чему они заметно влияют на скорость проникновения в клетку ионизированных молекул. Это говорит о том, что клетки золотистого стафилококка более устойчивы к действию натрия гипохлорита, чем кишечной палочки.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о существовании двух возможных механизмов действия натрия гипохлорита на бактериальную клетку, один из которых связан с увеличением К+-ИОНН0Й проницаемости за счет нарушения целостности поверхностных структур вследствие перекисно-го окисления липидов, а другой - с нарушением липидно-белкового взаимодействия.
