Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 8
1.1. Проблема дефицита белка 8
1.2. Современные представления о роли белка при создании комбинированных пищевых продуктов 12
1.3. Пищевая ценность белковых продуктов 18
1.4. Химический состав соевых семян и продуктов их переработки 26
1.5. Функциональные свойства белка и их роль в формировании потребительских качеств пищевых продуктов 32
1.5.1. Растворимость белков 36
1.5.2. Эмульсионные свойства белков 36
1.5.3. Гелеобразующие свойства белков 37
1.6. Соевые белковые препараты и их использование при производстве комбинированных мясных продуктов 39
1.6.1. Использование соевых белков в технологии мясных продуктов.. 39
1.7. Состояние вопроса о рынке растительного сырья, произведенного биотехнологическими методами 43
1.7.1. Механизмы формирования безопасности и качества новых видов растительного сырья 52
1.7.2. Стратегии оценки безопасности продуктов питания, произведенных с помощью биотехнологий 55
1.8. Заключение и задачи исследований 67
Глава II. Экспериментальная часть 70
2.1. Объекты исследования и схема проведения эксперимента 70
2.2. Методы исследования 73
2.2.1. Качественное и количественное определение генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения 73
2.2.2. Определение фракционного состава препаратов суммарных соевых белков 75
2.2.3. Микрокалориметрические исследования 75
2.2.4. Количественное определение содержания аминокислот 76
2.2.5. Анализ жирнокислотного состава соевого масла 80
2.2.6. Определение доли растворимого белка в белковых препаратах . 80
2.2.7. Определение рН 5%-ной белковой суспензии 81
2.2.8. Приготовление исходной суспензии белкового препарата 81
2.2.9. Определение критической концентрации гелеобразования 81
2.2.10. Определение водоудерживающей способности 82
2.2.11. Определение жироудерживающей способности 83
2.2.12. Определение эмульсионной стабильности 83
2.2.13. Методы определения общего химического состава 84
2.2.14. Органолептическая оценка 86
2.2.15. Определение водосвязывающей способности 86
2.2.16. Определение переваримости белков ферментами желудочно-кишечного тракта "in vitro" 87
2.2.17. Определение выхода и потерь массы готовых колбасных изделий 88
2.2.18. Определение структурно-механических показателей с помощью универсальной машины "Инстрон-1140" 88
2.2.19. Оценка качественных характеристик вареных колбас 90
2.2.20.Обработка экспериментальных результатов 91
Глава III. Результаты исследований 92
3.1. Получение и обезжиривание соевых шротов 92
3.2. Получение соевого масла 92
3.3. Получение препаратов соевых белков 92
3.4. Качественный и количественный анализ соевых белковых концентратов, в том числе генетически модифицированных 93
3.5. Исследование состава белкового и жирового компонентов генетически модифицированной сои 106
3.5.1. Фракционный состав соевого белка 106
3.5.2. Температура денатурации основных компонентов глобулиновой фракции белка 107
3.5.3. Аминокислотный состав соевого белка 109
3.5.4. Жирнокислотный состав соевого масла ПО
3.6. Функциональные свойства соевых белковых концентратов 111
3.6.1. Растворимость соевых белковых концентратов, в том числе генетически модифицированных 112
3.6.2. Водоудерживающая способность соевых белковых концентратов, в том числе генетически модифицированных 112
3.6.3. Эмульсионные и жироудерживающие свойства соевых белковых концентратов, в том числе генетически модифицированных 113
3.6.4. Гелеобразующие свойства соевых белковых концентратов, в том числе генетически модифицированных 113
3.7. Исследование потребительских свойств и влагосвязывающей способности опытных образцов.
Выбор приемлемой рецептуры вареной колбасы с
содержанием суспензии генетически модифицированного соевого концентрата 115
3.7.1. Структурно-механические свойства сырых фаршевых систем, в том числе с различным содержанием суспензий генетически модифицированного соевого концентрата 115
3.7.2. Влагосвязывающая способность сырых фаршевых систем, в том числе с различным содержанием суспензий генетически модифицированного соевого концентрата 116
3.7.3. Органолептические показатели вареных колбас, в том числе с различным содержанием суспензий генетически модифицированного соевого концентрата 118
3.8. Определение качественных характеристик сырых фаршей и
вареных колбас 121
3.8.1. Влагосвязывающая способность и напряжение стандартной пенетрации сырых фаршевых систем 121
3.8.2. Химический состав вареных колбас 121
3.8.3. Аминокислотный состав вареных колбас 123
3.8.4. Изучение переваримости "in vitro" исследуемых образцов 124
3.8.5. Органолептическая оценка вареных колбас 125
3.8.6. Потери массы и выход готовых изделий 126
3.8.7. Водоудерживающая способность (ВУС) вареных колбас 128
3.8.8. Структурно-механические характеристики вареных колбас 129
3.8.9. Качественные характеристики вареных колбас в соответствии с СанПиН 2.3.2.1078-01 130
Заключение 131
Выводы и предложения 133
Список литературы
- Современные представления о роли белка при создании комбинированных пищевых продуктов
- Функциональные свойства белка и их роль в формировании потребительских качеств пищевых продуктов
- Объекты исследования и схема проведения эксперимента
- Получение и обезжиривание соевых шротов
Введение к работе
В последние годы все большее влияние на здоровье населения планеты оказывает качество и структура питания. Как следствие сложившейся структуры питания на первый план выходят следующие нарушения пищевого статуса:
дефицит животных белков, достигающий 15-20% от рекомендуемых величин;
- выраженный дефицит большинства витаминов, выявляющийся повсеместно у более половины населения;
проблема недостаточности макро- и микроэлементов, таких как кальций, железо, фтор, селен, цинк.
Сложившаяся в мире ситуация с мясным сырьем приводит к дефициту животного белка в рационе питания населения [7, 8].
Поэтому в технологии производства пищевых продуктов весьма актуально комбинирование белков животного и растительного происхождения, которые экономично сочетают в себе высокую пищевую ценность и обеспечивают производство готовой продукции в соответствии с требованиями потребителя к ее качеству [31, 84].
Создание комбинированных вареных колбасных изделий с использованием функциональных растительных белков не противоречит рекомендациям Комиссии «Кодекс Алиментариус» ФАО/ВОЗ, в которых, в частности, декларируется их количество, как заменителей мяса, не более 50%. По технологическим, органолептическим и физико-химическим показателям такие изделия должны быть адекватны группе традиционных вареных колбасных изделий [114].
В международном научном сообществе существует четкое понимание того, что в связи с ростом народонаселения Земли, которое по прогнозам ученых должно достичь к 2050 году 9-11 млрд. человек, необходимо удвоение или даже утроение мирового производства сельскохозяйственной продукции, что невозможно без применения трансгенных растений, создание которых многократно ускоряет процесс селекции культурных растений, увеличивает урожайность, удешевляет
продукты питания, а также позволяет получить растения с такими свойствами, которые не могут быть получены традиционными методами [51,77,79].
У российских технологов наибольшим спросом пользуются продукты переработки сои, в частности, концентраты соевых белков, из-за их высоких функциональных свойств, а также сравнительно низкой стоимости. В условиях постоянного роста цен на мясное сырье, выявление объективных показателей для углубленного изучения особенностей поведения ГМ соевых белковых препаратов в реальных многокомпонентных пищевых системах, унификация методов их технологической оценки и формирование, на основе полученных результатов, объективной методической базы для экспертизы качества ГМИ и продуктов с их использованием, актуальность выбранного направления очевидна [80, 92].
Успехи агробиотехнологии, рост площадей, занятых генетически модифицированными важными сельскохозяйственными культурами, с одной стороны, и крайне настороженное отношение общественности к применению ГМИ при производстве продуктов питания обусловили необходимость контроля за применением ГМИ, в первую очередь, в пищевой промышленности [110].
Доминирующими трансгенными культурами, используемыми в качестве продовольственного сырья, являются соя, рапс и кукуруза. Но именно белки сои занимают лидирующее положение в этом ряду, благодаря широкому спектру функциональных свойств (ФС), пищевой ценности и низкой себестоимости [108, 113].
На протяжении нескольких последних десятилетий, как отечественными, так и зарубежными учеными (Рогов И.А., Бражников A.M., Толстогузов В.Б., Дианова В.Т., Журавская Н.К., Липатов Н.Н., Титов Е.И., Токаев Э.С., Жаринов А.И., Гурова Н.В., Кроха Н.Г., Антипова Л.В., Горлов И.Ф., Rivas H.J., Tarrant P.V. и др.) доказана актуальность комплексного использования белков животного и растительного происхождения, перспективность пищевых продуктов
комбинированного состава, установлена роль функциональных свойств (ФС) белковых препаратов при разработке новых технологий мясных изделий, сформулированы принципы направленного регулирования ключевых ФС, ответственных за формирование качественных характеристик готовой продукции [100].
В связи с этим использование растительных сырьевых источников, в частности бобовых, может решить проблему обеспечения населения ценным, высококачественным белком [7].
В настоящее время среди продуктов переработки ГМ сои, наиболее
часто используемых в производстве мясных изделий, лидирующее
положение занимают соевые белковые концентраты. Активное
применение в технологиях мясопродуктов ГМ соевых белковых
концентратов (ГМСК) обусловлено, прежде всего, их технологической и
экономической целесообразностью. Очевидно, что при таком
широкомасштабном распространении ГМСК необходима
гармонизированная с европейскими стандартами система экспертизы генетически модифицированных источников [80, 87].
В связи с этим актуальность работы обусловлена необходимостью выявления объективных показателей для изучения особенностей поведения ГМИ в реальных многокомпонентных пищевых системах и формирования на их основе единой методической базы для оценки качества ГМИ и продуктов с их использованием.
Современные представления о роли белка при создании комбинированных пищевых продуктов
С 1919 г. долгое время питательность белков определяли как коэффициент белковой эффективности, или КБЭ (Protein Efficiency Ratio, PER). Показатель считался стандартным в индустрии питания. Анализ проводили на растущих крысах, у которых определяли увеличение массы на грамм потребляемого белка.
После работ W. Rose пищевую ценность белков стали определять методом расчета (скоринга) на основании содержания незаменимых аминокислот. Расчет скора при этом заключается в количественном определении незаменимых аминокислот в белке и нахождении отношения каждой из них к содержанию в эталонном образце или модельной смеси: АКПр 100/АКст, где: АК пр - содержание незаменимой аминокислоты в 1 г исследуемого белка, мг; АКст - содержание той же аминокислоты в 1 г стан дартного белка, мг; 100 - коэффициент пересчета, в %.
За скор принимается величина минимального отношения, т.е. отношения для лимитирующей аминокислоты (доклады ВОЗ, 1966). Обычно скор рассчитывают для трех наиболее дефицитных аминокислот: лизина, триптофана и суммы серосодержащих аминокислот. В качестве эталонных были приняты белки куриных яиц, женского молока и гусиных яиц [107]. Модельные смеси, определяемые международными организациями ФАО/ВОЗ (FАО/WHO), из года в год уточняются.
В дальнейшем для расчета питательности белков были рекомендованы несколько моделей потребности человека в аминокислотах для разных возрастных групп, поскольку потребность человека в аминокислотах в течение жизни изменяется: максимальна для младенцев и с возрастом снижается [табл. 2 Рекомендуемые модели потребностей человека в аминокислотах (по ФАО/ВОЗ), мг/г сырого белка.] [150].
В 1989 г. был предложен метод скоринга аминокислот, который включает три основных положения, для оценки качества белка и продуктов питания: профиль незаменимых аминокислот; усвояемость белка; способность белка поставлять незаменимые аминокислоты в количествах, требуемых человеку.
С 1993 г. был принят расчет корректированного скоринга аминокислотного состава протеина Protein Digestibility - Corrected Amino Acid Scoring, (PDCAAS), т.е. расчет скора с коррекцией на расщепляемость белка (продукта).
Для коррекции скора, при нахождении PDCAAS, полученную величину умножают на усвояемость (расщепляемость) белка. Все белки, у которых PDCAAS 1, считаются полноценными, высококачественными белками.
Как известно, полноценность белков в продуктах и рационах определяется не только наличием незаменимых аминокислот, но и их соотношением в связи с тем, что не только дефицит, но и избыток той или иной аминокислоты в рационе приводит к плохому усвоению организмом других аминокислот, т.е. к снижению КПД белка, его перерасходу [150, 151]. Так, для наиболее быстрого и полного усвоения организмом белка соотношение триптофана, лизина и метионина должно быть соответственно 1:3-5: 2-4 [7].
При избытке или норме белка в рационе, но недостаточном количестве углеводов и жиров белок идет на покрытие энергетических затрат организма, т.е. расходуется нерационально. При этом образуются повышенные количества вредных для организма продуктов расщепления белка. При повышенном содержании белка в пищевом рационе происходит также снижение усвояемости его организмом [8, 40].
При ограниченном количестве белка, поступающего с пищей, в организме начинается процесс дезаминирования, переаминирования и синтеза, вследствие чего организм человека ослабляется, снижается его работоспособность, память и устойчивость к заболеваниям [114]. Рядом исследователей также установлено, что дефицит белка в пище вызывает значительные изменения в клетках костного мозга, осложняет развитие эндемического зоба, ослабляет процессы торможения и возбуждения в коре головного мозга.
Трудности, связанные с удовлетворением потребности в белках, и недостаточность белков животного происхождения в мире выдвинули необходимость изучения возможности комплексного использования белков растительного и животного происхождения.
Уже в конце 50-х годов была сформулирована и реализована стратегия прямой переработки растительного белка в пищевые продукты, соответствующие по свои органолептическим и технологическим свойствам привычным для человека продуктам животноводства. Указанное технологическое направление оказалось весьма плодотворным и привело к созданию крупнотоннажного производства концентратов и изолятов пищевых белков, а также разнообразных продуктов на их основе. Абсолютное большинство выпускаемой продукции составляли соевые белковые препараты [4, 84].
Функциональные свойства белка и их роль в формировании потребительских качеств пищевых продуктов
До недавнего времени оценка ресурсов пищевого белка зачастую проводилась с учетом лишь продуктивности тех или иных источников белка, биологической ценности последнего и в лучшем случае стоимости его производства. Однако, как известно, белок не является пищей, а служит лишь ее компонентом, и поэтому биологическая ценность белка и его стоимость не являются достаточными аргументами для потребления белка человеком. Ориентация на максимальную биологическую ценность и минимальную стоимость обычно не приводит к успеху при сбыте [167].
Возможность и стоимость переработки данного вида белкового сырья в продукты питания определяются сложным комплексом физико-химических характеристик этого сырья, охватываемых понятием "функциональные свойства" [132].
Под функциональными свойствами обычно понимают характеристики белка, определяющие его поведение при переработке и хранении. К ним относятся растворимость в воде, в солевых, щелочных и кислых средах, гетерогенность, совместимость с другими компонентами пищи, способность стабилизировать суспензии, эмульсии, пены, образовывать студни при нагреве растворов и дисперсий, адгезионные свойства и другие характеристики, а также обусловленные примесями цвет, вкус и запах продукта. Высокими функциональными свойствами характеризуются белки, хорошо растворимые в водных средах, способные образовывать высококонцентрированные, вязкие растворы и прочные студни, обычно возникающие при нагреве растворов, эффективно стабилизирующие пены, эмульсии и суспензии других пищевых веществ в водных средах, лишенные специфического запаха, вкуса, окраски, практически не содержащие липидов и не изменяющие своих свойств при продолжительном хранении в обычных условиях. Напротив, белки с низкими функциональными свойствами, как правило, нерастворимы или частично растворимы в водных средах, не образуют прочных студней при нагреве растворов или дисперсий, окрашены, обладают специфическим запахом и вкусом в сухом состоянии, в водных средах или же приобретают их при нагреве, имеют нестандартные характеристики, изменяющиеся при хранении [6, 96, 167].
Вместе с тем, понятия функциональные и органолептические свойства тесно связаны, поскольку вкус, запах и цвет продукта, а также возможности регулирования его состава тесно связаны с его структурой и физико-химическими свойствами [90, 30]. Так вкусовые ощущения, возникающие при приеме пищи, находятся в зависимости от ее механических свойств, смачивания слюной, набухания, поведения при температуре полости рта (температура размягчения или плавления) и т.д. Упругость паров ароматических веществ над пищевым продуктом в значительной степени определяется сорбцией этих веществ в объеме липидной и водной фаз, а также на внутренних и внешних поверхностях раздела, их солюбелизацией белками и тому подобное. Возможность обогащения готового продукта зависит от скорости диффузии добавляемых веществ в продукт, их способности удерживаться в нем в результате сорбции, а также вызывать десорбцию ароматических, вкусовых и окрашиваемых веществ [41].
Вопрос рассмотрения функционально-технологических свойств неразрывно связан с проблемами [88]: - оценки технологических функций и потенциальных возможностей использования сырья; - выбора вида, соотношений и условий совместимости компонентов рецептуры; - обоснования условий и параметров обработки сырья, что особенно существенно при изготовлении мясных эмульсий и осуществлении термообработки; -направленного регулирования свойств отдельных видов используемого сырья и мясных систем в целом; - прогнозирования характера изменения свойств мясных систем на различных этапах технологической обработки; - рационального использования белоксодержащих компонентов; - получения продуктов гарантированного качества.
Физико-химическая основа функциональности белков вытекает, прежде всего, из свойств самих белков, а также других компонентов системы (углеводородов, липидов и т.п.) и из условий производства (температуры, рН, ионизирующей способности) и др. Поведение белка определяется его аминокислотным составом, размером молекул, конформацией молекулы белка, расположением зарядов молекулы, степенью меж- и внутримолекулярных взаимодействий. Конформация молекулы белка является решающим фактором, влияющим на функциональные свойства в пищевых системах [88, 13]. В большинстве случаев, в сферических молекулах белка противоположнозаряженные аминокислоты ориентированы в направлении поверхности [14]. Последнее способствует хорошей растворимости. Развернутая удлиненная конформация молекулы способствует процессам гелеобразования, устойчивости пены и сплетению волокон.
Белки играют в эмульгированных мясопродуктах двоякую роль -структурообразующую и пищевую (как добавки, заменяющие часть мясного сырья). Структурообразующая функция белка характеризуется его функциональными свойствами, под которыми понимают физико-химические характеристики, определяющие поведение белка при переработке в пищевые продукты, а также обеспечивающие желаемую структуру, технологические и потребительские свойства готовых пищевых продуктов.
К наиболее важным функциональным свойствам белка относят набухание, растворимость, способность стабилизировать дисперсные системы (пены, эмульсии, суспензии), образовывать гели, адгезионные и реологические свойства белковых систем.
Обладающими высокими функциональными свойствами считаются белки, хорошо растворимые в водных средах, способные образовывать высококонцентрированные растворы, суспензии и гели, а также эффективно стабилизирующие эмульсии и пены [88, 30].
Требования к функциональным свойствам белка различаются в зависимости от технологии переработки белка в пищевые продукты. Следовательно, данные о функциональных свойствах белка позволяют выбрать и оптимизировать процессы переработки реальных белоксодержащих пищевых систем. При этом возникает вопрос, какие функциональные свойства белка имеют ключевое значение и должны оцениваться в тех или других случаях [32].
Объекты исследования и схема проведения эксперимента
На первом этапе экспериментальных исследований представлялось целесообразным провести сравнительную оценку параметров компонентного состава семян сои, произведенных по традиционной технологии и образцов, подвергнутых генетической модификации.
На втором этапе были изучены функциональные свойства образцов ГМ соевых белковых концентратов и их изогенных аналогов.
На третьем этапе исследовали качественные характеристики сырых фаршей и вареных колбас, содержащих от 20 до 35 % суспензии ГМСК в составе рецептуры; обосновали выбор допустимой концентрации суспензии ГМСК в рецептуре вареной колбасы с применением математических методов определения ВСС и оценки потребительских свойств.
На четвертом этапе проводили оценку структурно-механических свойств и качественных показателей готовых колбасных изделий (колбасы вареной «Столовой» 1 сорта, колбасы вареной с содержанием 25% суспензии традиционного соевого концентрата и колбасы вареной, в рецептуре которой 25 % мясного сырья заменено суспензией генетически модифицированного соевого концентрата).
Наиболее перспективным методом для выявления в продуктах питания и пищевом сырье трансгенной ДНК является полимеразная цепная реакция (ПЦР). Присутствие трансгенной ДНК в продукте свидетельствует о генно-инженерном происхождении его источника. Методика ПЦР (качественное определение) основана на детекции продуктов амплификации (многократное воспроизведение целевого фрагмента ДНК с помощью циклической смены температурных режимов in vitro) методом электрофореза в агарозном геле. Основными преимуществами метода является его универсальность, высокая чувствительность (в образце можно выявлять примеси генетически модифицированных источников (ГМИ), содержание которых 0,1 %) и быстрота.
Процедура качественного определения содержания ГМИ включает следующие этапы: отбор образцов, пробоподготовку, выделение ДНК из исследуемого образца, проведение амплификации, электрофорез в агарозном геле, учет результатов.
Методом количественного определение ГМИ растительного происхождения является полимеразная цепная реакция с детекцией продуктов ГЩР в режиме реального времени (Real Time PCR). «Real Time» метод позволяет определить количественное содержание трансгенной ДНК (с помощью компьютерной программы) в ходе амплификации, исключая этап электрофореза, что минимизирует контаминацию фрагментами ДНК.
Качественное определение ГМИ (ГЩР-анализ) проводили в соответствии с МУ 2.3.2.1917-04; МУК 4.2.1902-04 [61,63].
Количественное определение ГМИ (Real Time PCR) проводили в соответствии с МУК 4.2.1913-04; MP 10-5ФЦ/2557 [62, 64]. Фракционный состав препаратов суммарных соевых белков оценивали методом аналитического ультрацентрифугирования при 50000 об/мин (аналитическая центрифуга MOM 3170, Венгрия) растворов соевых белков в буфере Вольфа (рН 7.6, ионная сила 0.5 моль/л). Концентрация белка в растворе составляла 1%.
Микрокалориметрические исследования проводили на дифференциальном сканирующем микрокалориметре ДАСМ-4А (Институт биологического приборостроения РАН, г. Пущино) в области температур 20 - 120 С, при скорости сканирования температуры 2 С/мин и избыточном давлении в ячейках калориметра 6 бар. Предварительно было установлено, что варьирование скорости сканирования от 0,25 до 2 С/мин не сказывается на результатах измерения. ДСК позволяет непосредственно определить важнейшие термодинамические параметры процесса денатурации белков - температуру и энтальпию денатурации белка, а также его парциальную теплоемкость [176]. В каждом эксперименте шкалу теплоемкости микрокалориметра калибрировали по эффекту Джоуля-Ленца. Надежность электрической калибровки дополнительно проверяли, используя лизоцим куриного яйца в качестве калориметрического стандарта. По нашим данным, температура денатурации этого белка равны 338,8 К при рН 2,5 в 0,01 М глициновом буфере, что вполне соответствует данным Хечинашвили. Для калориметрических исследований использовали 0,1-0,5%-ые растворы белков в Na-фосфатном буфере, рН 7,6 , ионной силы 0,1 , отдиализованные против указанного буфера.
Получение и обезжиривание соевых шротов
Соевый белок экстрагировали из препаратов обезжиренной соевой муки 0.1% раствором сульфита натрия при рН 8.0. Соотношение мука/экстрагент составляло 1:9, продолжительность экстракции - 30 минут, температура - 25С. Экстракт отделяли от нерастворимого остатка центрифугированием при 2000 об/мин в течение 30 минут (центрифуга ОС-6М, Россия). Осветленный экстракт осторожно отделяли декантацией от нерастворимого остатка и доводили рН экстракта до 4.7-4.8 титрованием 0.2 М раствором соляной кислоты. Образовавшийся изоэлектрический осадок (суммарные соевые белки) отделяли центрифугированием при 1000 об/мин в течение 15 минут. Супернатант осторожно сливали, изоэлектрический осадок нейтрализовали до рН 7.4-7.6 титрованием 0.5 М раствором едкого натра.
Отбор проб проводили по государственным стандартам, устанавливающим порядок отбора проб для однородных групп пищевой продукции: ГОСТ 9792-73 [19] и MP 10-5ФЦ/2557 [64].
- из исследуемой партии отбирают не менее 10 навесок, по 5-Ю г каждая, которые помещают в одноразовый полиэтиленовый пакет 20 х 30 см и перемешивают при помощи одноразового шпателя, формируя объединенную пробу (50-100 г);
- из этой пробы отбирают среднюю пробу весом 10 г, которую помещают в герметично закрывающийся контейнер, опечатывают и отправляют на анализ. Если средняя проба не является гомогенной или мелкоизмельченной, то перед началом проведения анализа ее необходимо поместить в фарфоровую ступку и растереть фарфоровым пестиком до однородного мелкодисперсного гомогенного состояния;
- в качестве лабораторной пробы для проведения выделения ДНК используют 75-100 мкл по насыпному объему, отобранные из средней пробы в одноразовую микропробирку объемом 1,5 мл при помощи одноразового шпателя.
Отбор и подготовка к анализу материалов исследования плотной консистенции (колбаса, сыр, растительные ткани, чипсы, поп-корн, соевый шрот, фуражная кукуруза и т.п.):
- из исследуемой партии отбирают не менее 10 навесок, по 5-Ю г каждая, которые помещают в одноразовый полиэтиленовый пакет 20 х 30 см и перемешивают при помощи одноразового шпателя, формируя объединенную пробу (50-100 г);
- из объединенной пробы отбирают среднюю пробу весом 10 г, которую помещают в герметично закрывающийся контейнер, опечатывают и отправляют на анализ;
- перед началом проведения анализа среднюю пробу измельчают при помощи скальпеля (ножниц), помещают в фарфоровую ступку и растирают фарфоровым пестиком до однородного мелкодисперсного гомогенного состояния;
- в качестве лабораторной пробы для проведения выделения ДНК используют пробу 100-150 мкл по насыпному объему, отобранную из гомогенной средней пробы в одноразовую микропробирку объемом 1,5 мл при помощи одноразового шпателя.
Для подготовки проб необходимо использовать одноразовые полипропиленовые пробирки, ступки и пестики, предварительно обработанные хромовой смесью и фламбированные инструменты -пинцеты, скальпели, ножницы.
- Пробы сухих гранулированных и сыпучих продуктов отбирают в ступку по 3-5 г и растирают пестиком до гомогенного состояния. Для анализа необходимо 10-30 мг образца.
- Пробы плотных продуктов (сырых или подвергшихся кулинарной обработке) весом 3-5 г помещают в ступку, измельчают ножницами, затем растирают пестиком до гомогенного состояния. Для анализа необходимо 10-30 мг образца.
- Буфер для лизирующего реагента и раствор для отмывки 1 (если они хранились при 2-8 С) прогреть при 64 С до полного растворения кристаллов.
- Отобрать необходимое количество одноразовых пробирок, включая отрицательный контроль выделения ДНК. В пробирки, предназначенные для исследуемых проб, внести образцы исследуемых проб. В пробирку отрицательного контроля выделения ДНК (ОК) внести 100 мкл отрицательного контрольного образца (ОКО).
- Отдельными наконечниками с аэрозольным барьером внести в каждую пробирку по 400 мкл буфера для лизирующего реагента и по 17 мкл лизирующего реагента. Тщательно перемешать содержимое пробирок.
- Инкубировать пробирки при 64 С в течение 1 ч, периодически встряхивая на вортексе (5 раз через каждые 10-12 мин).
- Осадить нерастворенные частицы образцов центрифугированием при (12-14)х10 об/мин в течение 5 мин.
