Введение к работе
з 1. Актуальность темы. Увеличение производства и повышение качества продуктов животноводства в значительной степени зависит от благополучия стад по инфекционным болезням, в том числе и по туберкулезу крупного рогатого скота.
В неблагополучных стадах борьба с туберкулезом ведется длительное время с использованием аллергической диагностической пробы, которая не всегда отображают истинную картину развития туберкулезного процесса (Ю.Ю. Данко, 2006; Л.М. Ходун с соавт., 1991, А.С. Донченко, с соавт., 1990, 1991, В.И. Кузин, 1977, 1992, Э.Д. Лакман, 1982; А.Х. Найманов, 2001; Н.П. Овдиенко, 2001; В.И. Ротов, В.П. Урбан, 2004; В.А. Кузьмин, 2012).
Кожный туберкулиновый тест не информативен при проведении аллергических исследований на животных, находящихся в латентной форме развития туберкулезного процесса и сенсибилизированных атипичными микобактериями. Возникает проблема выделения микобактерий из биоматериала (без видимых патологоанатомическим изменениям присущих теберкулезу) при проведении лабораторной диагностики. Выделение микобактерий из биоматериала, в силу их физиологического строения клеточной стенки (генетических и фенотнпических особенностей) всегда представляет трудную задачу при проведении бактериологических исследований (Л.В. Галатова, 1990, 1993; Б.Ф. Керимжанова, 1991; В.Г., A3. Равилов, 1999; О.А. Иртуганова, 2006).
Исследования ряда авторов (B.C. Федосеев, 1985; Донченко А.С. с соавт.; 1986, 2001, 2004; И.Р. Дорожкова, 1994, 1993; Б.Ф. Керимжанова, 1991; Г.М. Николаева, 1995; К. Duncan, 1997 и др; В.Г. Ощепков, 2001, 2009; Л.А. Таллер, 2003; В.И. Голышевская, 2004; А.А. Евглевский, 2011 и др.) дают основания предположить, что одной из причин длительного неблагополучия хозяйств по туберкулезу крупного рогатого скота, а также рецидивы в оздоровленных хозяйствах, является персистенция в организме животных L-форм микобактерий туберкулеза.
Существующие методы предпосевной обработки биоматериала заключаются в длительном воздействии кислот, что приводит к уничтожению не только сопутствующей микрофлоры, но и кислотоустойчивых микобактерий. При
этом, возникают трудности связанные с сохранностью клеточной стенки микобактерий, а в дальнейшем с существованием самой микобактерий во время предпосевной обработки биоматериала (В.И. Голышевская и соавт., 1997; И.Г. Шемякин и соавт., 2000; В.Н. Донченко, 2007; А.А. Безбородова, 2008; Т.М. Shinnik, 1996).
В этой связи вопросы усовершенствования предпосевной обработки патологоанатомического материала, лабораторной диагностики, направленные на повышение эффективности существующих методов выделения микобактерий и разработки новых способов, является актуальной задачей, что и предопределило цель нашего диссертационного исследования.
Цель исследования. Целью исследования явилось усовершенствование метода выделения L-форм микобактерий из патологоанатомического материала и объектов внешней среды.
В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:
- разработать новый способ предпосевной обработки патологоанатомического
материала, обеспечивающего повышение эффективности выделения
деструктивных по клеточной стенке L-форм микобактерий;
-изучить возможность образования L-форм из бактериальных форм микобактерий в объектах внешней среды и продуктах питания, а также in vitro под действием лекарственных препаратов;
- изучить биологические особенности выделенных L-форм микобактерий, их
сенсибилизирующие и вирулентные свойства.
Научная новизна. Разработан новый способ предпосевной обработки для выделения L-форм микобактерий из патологоанатомического материала и объектов внешней среды заключающийся в обработке патологоанатомического материала 2-3%-ным раствором серной кислоты и дополнительной фильтрации, который позволяет повысить на 30% высеваемость микобактерий туберкулеза из биоматериала от животных и из объектов внешней среды (положительное решение на патент РФ №2011150969/15 (076563) «Способ предпосевной обработки патологоанатомического материала для выделения L-форм микобактерий» от 14.12.2011г. и патент UA №39178 «Способ выделения L-форм микобактерий из патологического материала» от 10.02.2009г.). Изучена возможность образования
5 L-форм микобактерий в объектах внешней среды и продуктах питания, а таїоке in vitro под действием лекарственных препаратов. Изучены сенсибилизирующие и вирулентные свойства выделенных L-форм микобактерий.
Практическая значимость работы. Повышение выделяемое L-форм микобактерий из биоматериапа от животных, из объектов внешней среды с использованием усовершенствованного метода предпосевной обработки патологоанатомического материала позволит увеличить высеваемость на питательных средах как в бактериальной так и в L-форме микобактерий, чго позволит выделить всех инфицированных животных, оперативно организовать противотуберкулезные мероприятия и ускорить проведения оздоровительных мероприятий.
Результаты исследований использованы при составлении методических рекомендаций «Микобактерий деструктивные по клеточной стенке: диагностика, культивирование, идентификация» утвержденных ученным советом факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» им. В.Я. Горина (протокол №1 от 13 сентября 2011 г.), «Выделение L-форм микобактерий» (методические рекомендации) утверждены научно - методическим советом Государственного комитета ветеринарной медицины Украины (протокол №1от 23 декабря 2009 г.).
Материалы исследований использованы при подаче заявки на патент РФ «Способ предпосевной обработки патологоанатомического материала для выделения L-форм микобактерий» (положительное решение от 14.12.2011 г. №2011150969/15 (076563)) и формировании патента UA №39178 «Способ выделения L-форм микобактерий из патологического материала» от 10.02.2009г.
Материалы исследования использованы в учебном процессе по дисциплине эпизоотология и инфекционные болезни животных для студентов 4 и 5 курса факультета ветеринарной медицины, ФГБОУ ВПО «Белгородская ГСХА им В.Я. Горина».
Апробация. Основные положения диссертационной работы были доложены на: - на международной научно-практической конференции (АР Крым, Феодосия, 14-18 сентября 2009 г.);
- на международной научно-практической и учебно-методической
конференции (Харьков, 2009, 2010 г.);
на заседаниях кафедры инфекционной и инвазионной патологии и отчетных сессиях Ученого совета Белгородской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Я. Горина (2011-2012 гг.);
научно практической конференции, посвященной дню науки в Белгородской ГСХА им. В.Я. Горина (г. Белгород, 8 февраля 2012 г.).
Публикация результатов исследований. Основные результаты диссертационной работы опубликованы в 8 научных статьях, в том числе 2 в изданиях перечня ВАК Российской Федерации.
Получены положительное решение на выдачу патента Российской Федерации и патент Украины.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 140 страницах машинного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, практических предложений. Библиографический список использованной литературы включает 153 отечественных и 61 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 17 таблицами, 11 рисунками.
