Введение к работе
Актуальность темы. Болезнь Марека (БМ) — широко распространенное лимфопролиферативіюе заболевание кур, возбудителем которого является онкогенный ДНК-содержащий герпес вирус болезни Марека (ВБМ) 1-го серотипа. По принятой Всемирной организацией здоровья животных (ВОЗЖ) классификации инфекционных болезней БМ относится к списку В, включающему «заразные болезни, которые имеют существенное значение в области общественной экономики в пределах отдельных стран, а также в международной торговле животными и продуктами животноводства» (Макаров В.В., 2003).
В комплексе мер борьбы с БМ важнейшее место занимает специфическая профилактика. Для этого в мировой практике используют живые вакцины на основе аттенуированных штаммов Ісеротипа, апатогенных 2 и 3 серотипов, а также комбинаций 1-3 серотипов вируса ВБМ. Аналогичные вакцины созданы и в нашей стране (Коровин Р.Н. и др., 1973; Коровин Р.Н., 1974; КуляшбековаШ.К. и др., 1999; Баррос-Паллома Е.В. и др., 2003).
Однако с появлением высоковирулентных со знаком плюс (w+) и «гипервирулентных» штаммов ВБМ эффективность созданных вакцин стала заметно снижаться. Такие штаммы вызывают цитолитический процесс в главных лимфоидных органах тимусе и бурсе и раннюю смертность птицы, при этом не успевая образовывать опухоли во внутренних органах (Witter R.L., 1997; Witter R.L. et al., 1999; Witter R.L., Kreager K.S., 2004).
Аналогичная ситуация по БМ, хотя и несколько позже, сложилась в РФ. Так, по данным Росптицесоюза её удельный уровень в инфекционной патологии птиц в 2003 г. составил 7,61%, 2005 г. -6,93% и в 2006 г.-3,0%, в то же время в хозяйствах с высокими экономическими показателями он не превышал 0,05-0,02 % от привитого поголовья.
Стало очевидным, что образование высоковирулентньгх штаммов обусловлено генетической адаптацией ВБМ на фоне иммунизированной птицы и селекция новых штаммов для разработки вакцин не поспевает за эволюцией вируса в природе. Затраты такого поиска могут быть доступны не многим производителям биопрепаратов (Witter R.L., 2007).
Следовательно, для контроля болезни Марека требуется применение альтернативных стратегий, к которым можно отнести применение с вакцинами иммуномодулирующих препаратов нового класса -рекомбинантных форм эндогенных цитокинов (Rachman М.М., Ео S.K., 2012).
До недавнего времени роль цитокинов в патогенности и иммунном ответе при БМ были слабо изучены. Разработка полноценной панели реагентов куриных цитокинов (ОТ-ПЦР) в реальном времени позволила выявить
увеличение м-РНК ИНФ-у в спленоцитах инфицированных цыплят между 3 и 10 днем цитолитической фазы как у чувствительных, так и резистентных линий цыплят. У чувствительных линий отмечена экспрессия транскриптов ИЛ-6 и ИЛ-18. Изменений уровня цитокинов ИЛ-2 и ИЛ-ір не выявлено (Kaiser P. et al., 2003). После вакцинации ВГИ получены противоречивые результаты выработки ИНФ-у (Djeraba, A. et al., 2002а).
Цитокин миеломоноцитарный ростовой фактор (МРФ), используемый в качестве адъюванта векторной вакцины ВГИ на основе вируса оспы птиц, предотвращал гибель и снижал развитие опухолей у зараженных патогенным ВБМ цыплят (Djeraba, A. et al., 20026).
В РФ для повышения иммуногенности вакцин против БМ с положительным результатом испытан ронколейкин - полный структурный и функциональный аналог эндогенного ИЛ-2 человека (Егорова В.Н., Островский М.В., 2005).
Особенно стоит остановиться на ИЛ-1р\ В механизме иммунитета при БМ ему принадлежит важная роль (Davison Е, Nair V., 2004). Следовательно, возможно применение его рекомбинантной формы одновременно с вакциной против этой болезни.
В ФГУП «ГосНИИ ОЧБ» ФМБА разработан иммуномодулирующий препарат - рекомбинантный ИЛ-1(5 млекопитающих (беталейкин), усиливающий дифференцировку предшественников Т-лимфоцитов с преимущественной стимуляцией образования Т-хелперов 1 типа (Патент РФ №2142958, 1999; Симбирцев А.С., 2004) и созданы наборы ИФА для определения наиболее важных цитокинов (ИЛ-1а, ИЛ-ір, ИЛ-2 и ИНФ-у). Поэтому представляется своевременным и обоснованным изучить роль цитокинов в патологии БМ, а с учетом гомологии между рекомбинантным ИЛ-ір у птиц и млекопитающих ( Kaiser P. et al., 1998, 2004; Weining К.С. et al., 1998) и беталейкин в качестве адъюванта при её специфической профилактике.
Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы являлось изучение цитокинового уровня у цыплят раннего постнатального периода при воздействии патогенным и вакцинным ВБМ в сочетании с беталейкином и обоснование применения этого препарата для повышения эффективности вакцинации кур против болезни Марека. В связи с этим необходимо было решить следующие задачи:
определить вирулентность двух патогенных штаммов ВБМ для цыплят;
изучить в динамике цитокиновый уровень (ИЛ-1а, ИЛ-ір, ИЛ-2 и ИНФ-у) в сыворотке крови интактных цыплят раннего постнатального периода и при воздействии патогенными штаммами ВБМ;
выяснить взаимосвязь между показателями цитокинового уровня и вирулентностью ВБМ для цыплят;
изучить влияние беталейкина на показатели клеточного иммунитета у цыплят раннего возраста;
исследовать влияние сочетанного применения беталейкина с сухой вакциной из штамма «ФС-126» против БМ на показатели естественной резистентности (уровень цитокинов, лизосомально-катионный тест и др.) у цыплят раннего возраста;
разработать Методические положения по применению иммуномодулятора беталейкина для повышения естественной резистентности и специфической профилактики болезни Марека.
Научная новизна работы. Методом твердофазного ИФА изучен уровень цитокинов (ИЛ-1а, ИЛ-ір, ИЛ-2 и ИНФ-у) у цыплят раннего возраста в норме и при заражении патогенными штаммами вируса болезни Марека.
Впервые установлены дозы, кратность и иммуномодулирующие свойства беталейкина на состояние естественной резистентности организма в ранний период выращивания цыплят.
Впервые экспериментально установлено иммуномодулирующее действие беталейкина при сочетанном применении с сухой вакциной из штамма «ФС-126» против болезни Марека.
Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований для практического использования в птицеводческих хозяйствах предложен иммуномодулирующий препарат беталейкин, который повышает показатели естественной резистентности (уровень цитокинов, митогенной стимуляции лимфоцитов, фагоцитоза, лизосомально-катионных белков) организма цыплят.
Разработаны Методические положения «Применение иммуномодулятора беталейкина для повышения естественной резистентности и специфической профилактики болезни Марека», утвержденные Координационным Советом по животноводству и ветеринарии ГНУ Северо - Западного регионального научного центра Россельхозакадемии, протокол №1 от 22 января 2013г.
Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:
- определение уровня провоспалительных цитокинов (ИЛ-1а, ИЛ-1р\ ИЛ-2
и ИНФ-у) у интактных цыплят раннего возраста;
- результаты изучения уровня цитокинов у цыплят, зараженных
вирулентными вирусами БМ;
- данные влияния беталейкина на показатели клеточного иммунитета у
цыплят раннего возраста;
результаты испытаний сочетанного применения иммуномодулятора беталейкина и сухой вакцины из штамма «ФС-126» против болезни Марека на показатели естественной резистентности у цыплят раннего возраста;
разработка Методических положений по сочетанному применению беталейкина и сухой вакцины против болезни Марека.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на 15-ом Конгрессе - выставке Всемирной птицеводческой научной ассоциации, Пекин, 2007; Научно-практической конференции «Новое в диагностике и профилактике болезней птиц», СПб, 2008; Международной научно-практической конференции «Новые подходы к решению актуальных ветеринарно-санитарных и зоотехнических проблем в птицеводстве на современном этапе», СПб, 2011; П-ом Международном конгрессе ветеринарных фармакологов и токсикологов, посвященного восьмидесятилетию засл. деят. науки РФ, проф. Соколова В.Д. « Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии», СПб, 2012.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе одна в журнале, входящем в список ВАК.
Личный вклад. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Диссертация иллюстрирована 13 таблицами и 8 рисунками. Список литературы включает 205 источников, из которых 125 зарубежных.
