Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Взаимосвязь показателей иммунобиологической реактивности с репродукцией животных 10
1.1.2. Повышение воспроизводительной функции коров путем коррекции иммунобиологической реактивности организма 20
1.1.3 Методы коррекции воспроизводительной функции коров и телок 35
1.2. Получение эмбрионов у коров-доноров гормональным вызыванием суперовуляции и факторы повышения его эффективности 41
2. Материал и методы исследований 49
3. Собственные исследования 60
3.1. Влияние «достима» на иммунный статус 60
3.2. Стимуляции параовуляторного периода у коров герефордской породы 66
3.2.1.Стимуляция половой охоты и повышение оплодотворяемости коров мясных пород с использованием лютеолитических, овуляторных и витаминных препаратов 67
3.2.2. Определение эффективности применения «достима» для стимуляции половой функции и повышения оплодотворяемости коров герефордской породы 71
3.3. Применение «достима» для повышения выхода пригодных для пересадки эмбрионов крупного рогатого скота 77
3.4. Определение эффективности применения «достима» для регуляции родовой деятельности у коров-реципиентов и становления иммунной системы телят-трансплантантов герефордской породы 82
3.4.1. Определение эффективности применения «достима» для регуляции родовой деятельности у коров-реципиентов 83
3.4.2. Влияние «достима» на иммунологические показатели крови телят трансплантантов 89
3.5. Экономическая эффективность применения «достима» при получении эмбрионов у коров герефордской породы 93
4. Обсуждение результатов исследований 95
Выводы 108
Практические предложения 109
Используемая литература 110
Приложения 132
- Взаимосвязь показателей иммунобиологической реактивности с репродукцией животных
- Получение эмбрионов у коров-доноров гормональным вызыванием суперовуляции и факторы повышения его эффективности
- Определение эффективности применения «достима» для стимуляции половой функции и повышения оплодотворяемости коров герефордской породы
- Влияние «достима» на иммунологические показатели крови телят трансплантантов
Введение к работе
Актуальность темы исследования. Воспроизводство сельскохозяйственных животных является основой технологии разведения, содержания и получения продукции в мясном скотоводстве. От состояния воспроизводства стада зависит продуктивность, экономичность и рентабельность отрасли.
Эффективность воспроизводства стада мясного скота может быть повышена путем синхронизации и стимуляции половой охоты. Высокая активность гормонально–активных соединений лютеолитического, овуляторного и лютеотропного действия в регуляции воспроизводительной функции обусловливает их широкое использование для синхронизации половой охоты коров и телок при сезонной случной компании и пересадке эмбрионов (А.Г. Абуов и соавт., 1991; Е.У. Байтлесов, 2002; Е.У. Байтлесов и соавт., 2006; А.А. Буянов, 1982; Д.Н. Воробьев, Т.Н. Лукашевич, 2004; В.Н. Кинзеев, 1998; Ю.Д. Клинский, 1970; А.С. Лободин, 1990; В.В. Мадисон, В.Л. Мадисон, 1988; Т.А. Мороз, С.М. Блохин, 1997; П.Н. Никоноров, 1992; Ф.Н. Насибов и соавт., 2006, 2007; С.А. Рассадников, А.Н. Безин, 2008; В.М. Шириев, 2000; Л.К. Эрнст, Н.И. Сергеев, 1989 и др.).
Вместе с тем, дальнейшее решение проблемы связано с всесторонним изучением динамики клеточных и гуморальных факторов, характеризующих защитные силы организма, и на их основе внедрением современных методов стимуляции воспроизводительной функции коров мясных пород.
Поэтому изучение сравнительной оценки методов коррекции репродуктивной функции у коров мясных пород при трансплантации зигот, основанных на использовании иммуномодулирующих препаратов, является актуальным направлением ветеринарной науки и практики.
Степень разработанности проблемы. В настоящее время достаточно хорошо отработаны теоретические и практические основы биотехнологии трансплантации эмбрионов у коров, однако вопросы стимуляции воспроизводительной функции коров мясных пород не утратили своей значимости.
Вопросам изучения физиологических особенностей естественной резистентности животных, ее изменчивости при патологиях и под влиянием фармакологических средств, а также разработке методов коррекции функции размножения у коров и повышения жизнеспособности телят с использованием иммуномодулирующих средств посвящены работы Е.У. Байтлесова, 2002; Е.У. Байтлесова и соавт., 2006; А.С. Лободина, 1990; В.В. Мадисон, В.Л. Мадисон, 1988; Ф.Н. Насибова 2006, 2007; В.М. Шириева, 2000; Л.К. Эрнста, Н.И. Сергеева, 1989; К.В. Леонова, 2005; В.П. Дегтярева, 2006 и др.; С.А. Семиволос, 2010. Однако, не смотря на достигнутые успехи многие вопросы, в том числе методы коррекции репродуктивной функции у коров мясных пород при трансплантации зигот остаются актуальными и требуют дальнейшего изучения.
Цель и задачи исследования. Целью работы является изучение эффективности применения «достима» для стимуляции половой охоты и повышения оплодотворяемости коров мясных пород, трансплантации зигот у коров герефордской породы.
Для реализации цели были определены следующие задачи:
- изучить иммуно-биохимические показатели крови коров, при применении «достима»;
- определить эффективность применения «достима» для увеличения количества и качества зигот;
- изучить динамику отелов и особенности течения послеродового периода у коров после применения «достима»;
- рассчитать экономическую эффективность применения препарата достим для повышения выхода пригодных для пересадки эмбрионов.
Научная новизна. Впервые комплексными исследованиями изучены процессы становления и активации адаптационно-метаболических процессов после стимуляции половой охоты, родовой деятельности и особенности становления иммунного статуса телят-трансплантантов герефордской породы Канадской селекции на фоне применения «достима». При этом установлено, что использование достима в дозе 20 мл в сочетании с препаратами лютеолитического и овуляторного действия, сопровождается активизацией иммуно-биохимических процессов в организме животных, способствует стимуляции параовуляторного периода, повышению выхода и качества эмбрионов от коров-доноров (до 11,8±0,73 из них 7,2±0,58 пригодных для пересадки эмбриона). Применение «достима» в системе профилактики послеродовой патологии у коров-реципиентов обеспечивает благоприятное течение родового процесса, сокращение сроков инволюционных процессов в репродуктивных органах на 3,1±0,32 дня, снижение на 40% послеродовых заболеваний у животных и повышение жизнеспособности телят-трансплантантов.
Предлагаемый способ суперовуляции у коров-доноров защищен патентом РФ(№ 2469738 от 20 декабря 2012г).
Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований расширяют и дополняют существующие представления о механизмах регуляции половой цикличности, оплодотворяемости коров после применения «достима» в сочетании с эстрофаном, сурфагоном и препаратом Е-селен, а также о механизмах активизации родовой деятельности у коров-реципиентов и становления иммунного статуса у телят-трансплантантов герефордской породы.
Предложенные производству способы стимуляции репродуктивной функции у коров мясной породы с применением «достима», способствуют повышению рентабельности мясного скотоводства и могут быть использованы в учебном процессе при подготовке специалистов ветеринарного и биологического профиля, на семинарах и курсах переподготовки в системе послевузовского образования, практической деятельности зооветеринарных специалистов сельскохозяйственных предприятий мясного направления.
Предмет и объект исследования. Объект исследования: коровы и телки герефордской породы, новорожденные телята.
Предметом исследования служили: препарат «достим» (производитель ООО «Научно-исследовательский центр Игнатова», Россия, Регистрационный №1007 39-93 ОВФП), клинические, гематологические, иммунологические ультразвуковые и статистические показатели коров, телок и новорожденных телят.
Методология и методы исследования.
Методологической базой при проведении экспериментальных исследований явились клинико-гинекологические, гематологические, биохимические, иммунологические и ультразвуковые методы исследований, которые позволили получить достоверные и обоснованные данные по коррекции репродуктивной функции при трансплантации зигот у коров мясных пород с использованием «достима».
Положения выносимые на защиту:
- состояние иммуно-биохимического статуса коров после применения «достима»;
- эффективность применения «достима» для стимуляции половой функции и повышения оплодотворяемости коров мясной породы;
- влияние использования «достима» при суперовуляции коров-доноров на выход и качество эмбрионов;
- течение родов и послеродового периода у коров после применения «достима»;
Степень достоверности, апробация и реализация результатов исследований. Экспериментальные исследования проведены на сертифицированном оборудовании с использованием общепринятых методов исследований в ветеринарии. Полученные результаты детально проанализированы и подвергнуты статистической обработке общепринятым методом вариационной статистики с помощью параметрического t-критерия Стьюдента. На основании проведенных исследований сформулированные выводы и практические предложения.
Материалы диссертации доложены и обсуждены: на XII международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Вклад молодых ученых в реализацию приоритетного национального проекта «Развитие агропромышленного комплекса» (г. Троицк, 2008), международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию УГАВМ «Инновационные подходы в ветеринарии, биологии и экологии» (г. Троицк, 2009), международной научно-практической конференции «Инновационные подходы в ветеринарии, биологии и экологии» (г. Троицк, 2011), и на расширенном заседании кафедры акушерства и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных ФГБОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины » (г. Троицк, 2012).
Результаты исследований используются в работе научно-исследовательского центра биотехнологии репродукции сельскохозяйственных животных УГАВМ, а так же в учебном процессе кафедры акушерства и патологии мелких животных ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана», кафедры хирургии и акушерства Института ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Алтайского государственного аграрного университета», кафедры ветеринарной хирургии, акушерства и патоморфологии ФГБОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины».
Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, в т.ч. 3 в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Объем и структура диссертации.
Взаимосвязь показателей иммунобиологической реактивности с репродукцией животных
Иммунная система, наряду с нервной и эндокринной, сохраняет и поддерживает постоянство внутренней среды и состав организма, то есть обеспечивает гомеостаз (Л.П. Сизякина, И.И. Андреева, 2004). Под иммунитетом большинством авторов понимается совокупность процессов и механизмов, направленных на сохранение постоянства внутренней среды организма от патогенного фактора и других, чужеродных для него агентов с использованием как специфических, так и неспецифических факторов защиты.
Специфические защитные механизмы разделяются на клеточные и гуморальные. Клеточные иммунные реакции осуществляет система Т-лимфоцитов. Гуморальный иммунный ответ основан на дифференцировке и трансформации В-лимфоцитов в плазматические клетки, которые синтезируют антитела (В.Г. Дорофейчук, 1968; Н.Б. Кукушкин, 1999 и др.). Так как специфические антитела появляются в организме животных только спустя некоторое время после контакта с генетически чужеродным белком, первичная реакция организма на его воздействие в латентный период осуществляется факторами неспецифической резистентности.
Основными закономерностями иммунного ответа на внедрение чужеродного агента сводятся к тому, что антиген, попадая в ткани организма животного, провоцирует миграцию лейкоцитов, на фоне чего активизируются клеточные и гуморальные факторы иммунитета. Естественные антитела и комплемент обезвреживают микробов, но в первую очередь опсонируют их, после чего они фагоцитируются и перевариваются полиморфноядерными лейкоцитами, моноцитами и фагоцитами (В.Н. Денисенко, 1987 и др.).
Затем наступает первая стадия специфической иммуной реакции -обработка и передача антигенной информации посредством моноцитов и клеток моноцитарного ряда, образующих систему макрофагов, и воспринимается Т-лимфоцитами.
Имея сигнал о наличии антигена (непосредственно или через макрофаг) и, получив второй сигнал от Т-хелперов, В-лимфоцит активизируется и превращается в плазматическую клетку, которая продуцирует иммунные тела вначале класса М, затем G и другие.
Таким образом нормальный иммунный ответ на большинство антигенов требует кооперации макрофагов, Т- и В-лимфоцитов.
Нарушение любой фазы иммунного ответа может привести к недостаточности иммунитета (А.А. Сысоев, 1978; В.Н. Денисенко и др., 1987).
Способность иммунной системы поддерживать неизмененный антигенный состав позволяет каждому индивидууму сохранять свою антигенную индивидуальность посредством: защиты от возбудителей инфекционных заболеваний; противоопухолевого иммунологического надзора; создания условий для внутриутробного развития плода; отторжения пересаживаемых органов, тканей и клеток.
В зависимости от физиологического состояния самок меняется и иммунобиологическая реактивность организма, связанная с воспроизводительной функцией (А.А. Сысоев, 1978; А.Т. Семенюта, 1981; А.В. Селиванов и др., 1984; В.Н. Денисенко и др., 1987; Н.Н. Гугушвили, 2000 и другие).
В современных условиях в виду усиления антропогенного воздействия уровень естественной резистентности у животных значительно понизился, что сопровождается высокой заболеваемостью и недополучением продукции (У.Е. Байтлесов и соавт., 2006; К.Д. Валюшкин, 1987; Ф.Н. Насибов и соавт., 2006, 2007).
Изучение особенностей иммуно-биохимического статуса организма животных в разные периоды их воспроизводительной деятельности позволяет определить критические периоды с целью коррекции иммунобиологической реактивности.
Исследования В.И. Говалло (1971, 1987), В.П. Радченкова (1993) и других свидетельствует, что все этапы зарождения новой жизни в организме матери, от оплодотворения до прикрепления зиготы и дальнейшего ей развития, сопровождается значительной иммунологической перестройкой организма, изучением которых занимается иммунология репродукции. Установлено, что при оплодотворении взаимодействие яйцеклетки и сперматозоида, а в последующем и растущего эмбриона с организмом матери осуществляется по принципу антиген-антитело, а появляющееся потомство обладает полноценным иммунной реакцией к чужеродным агентам (Т.О. Амагырова, 2005). Зигота, является аллотрансплантантом, прикрепляется к слизистой оболочке матки, (имплантируется) и в последующем развивается, потому, что в организме матери формируются иммунодепрессивные факторы, защищающие зиготу от отторжения. Наивысшая активность иммунного ответа организма матери отмечается во время прикрепления зиготы. По мнению А.В. Мануйлова (2004) эти изменения иммунобиологической реактивности в начале беременности имеют главным образом плацентарное происхождение, а в конце беременности осуществляются центральными иммунными органами. В связи с этим изучение физиологических особенностей становления беременности, осуществляющих жизнеспособность зиготы и плода и влияющих на родовой процесс, а также патогенетических основ нарушения развития плода, развития патологии беременных животных, родового акта и послеродового периода возможно при анализе иммунологического статуса самок.
Исследованиями Т.О. Амагыровой (2005) установлена зависимость воспроизводительной функции коров от иммунобиологической реактивности организма. В период осеменения коров, высокая иммуннобиологическая реактивность организма нормализует оплодотворение и дальнейшее развитие зиготы. Автором подмечено, что в крови оплодотворившихся животных, достоверно увеличивалось количество лейкоцитов на 6%, процентное содержание Т-лимфоцитов достоверно возрастало на 22%, а уровень Т-хелперов - на 13%. Автор рекомендует учитывать полученные данные при разработке методов повышения воспроизводительной функции, профилактики послеродовых осложнений, бесплодия и яловости с целью повышения рентабельности скотоводства.
При изучении активности показателей клеточного иммунитета методом розеткообразования (Е-РОК), а также в кожной пробе с фитогемагглютинином Скопец Б.Г. (1988), установил, что удлинение продолжительности бесплодия (до 40 дней) сопровождались изменениями показателей активности клеточного звена иммунной системы в сторону повышения или понижения через 1-2 месяца после отела.
Е.П. Кот с соавт. (1986) доказал, что показатели клеточного и гуморального иммунитета находятся во взаимосвязи с репродуктивной функцией коров. Начало половой охоты у коров сопровождается увеличением количества лейкоцитов и объема циркулирующей крови, а относительное и абсолютное число Т- и В-лимфоцитов в крови снижается.
Показатели клеточного иммунитета по данным И.М. Грязновой с соавт. (1987), Л.В. Тимошенко с соавт. (1989), у самок с нормально протекающей беременностью при сроках беременности до 2-х месяцев, активность, значительно снижена. В дальнейшем по данным авторов отмечается некоторое их восстановление, а к концу беременности показатели постепенно снижаются. Относительное и абсолютное число В- и 0- лимфоцитов в динамике нормально протекающей беременности практически не изменяются. На основании проведенных исследований автор утверждает, что изменения количества Т-лимфоцитов при нормально протекающей беременности направлено на предотвращение отторжения фетоплацентарного комплекса и согласуется с критическими периодами развития плода.
Однако, по мнению P.M. Васильева (2001), до и после отела у коров количество Т- и В-лимфоцитов существенно не менялось: до родов показатели Т-лимфоцитов составляли 40%, а через сутки после них - 43%, показатели В-лимфоцитов- 18% и 17% соответственно.
Повышение Т-лимфоцитов происходит главным образом за счет Т-хелперов, которые имеют большое значение в развитии иммунного ответа организма на антигены микрофлоры, развивающейся в матке. В начальных стадиях воспалительного процесса слизистой оболочки Т-хелперы учувствуют в распознавании чужеродных антигенов и способствуют превращению В-лимфоцитов в плазматические клетки, которые синтезируют антитела. В дальнейшем роль и уровень Т- хелперов в этом процессе постепенно снижается до нормы (Н.Б. Кукушкин с соавт., 1999).
O.K. Баргесян (1989) в своих исследованиях установил, что при угрозе выкидыша изменяется динамика критериев клеточного и гуморального факторов иммунитета: до четырех месяцев наблюдалось увеличение количества лимфоцитов, лейкоцитов и абсолютного содержания Т- и 0- популяций лимфоцитов, а также понижение относительного количества В- лимфоцитов. Концентрация иммуноглобулинов в сыворотке крови достоверно не менялась. Во второй половине беременности отмечалось понижение абсолютного и относительного содержания Т-лимфоцитов, концентрации в сыворотке крови иммуноглобулинов классов G и А, а также увеличение абсолютного и относительного содержания 0- популяций лимфоцитов.
Получение эмбрионов у коров-доноров гормональным вызыванием суперовуляции и факторы повышения его эффективности
Наиболее важным этапом в технологии трансплантации эмбрионов является гормональное вызывание суперовуляции, от которой напрямую зависит степень получения большого числа эмбрионов на донора. Согласно методическим рекомендациям БелНИИЖ (И.И. Будевич, B.C. Антонюк, Н.Ф. Жук и др. 1996), это достигается за счет регламентированных по времени и дозам внутримышечных инъекций, начиная с 9-11 дня полового цикла, гипофизарных гонадотропных гормонов (ФСГ+ЛГ) или гонадотропина сыворотки жеребых кобыл (ГСЖК) в сочетании с простагландином F2a и другими биологически активными веществами. Из общего количества гормонально обработанных коров положительный суперовуляторный ответ (3 и более овуляций) удается получить примерно у 80-85% доноров (В.А. Зоранян, 1983; В.Ю. Бабенков, 1998). Оптимальными показателями у донора считают 10-15 овуляций, оплодотворяемость 70-80% яйцеклеток и, после извлечения, выход пяти-шести пригодных к использованию эмбрионов (В.Л. Мадисон, В.И. Лебедев, А.П. Дронин, В.В. Мадисон и др., 1993). Фактически у коров-доноров, даже при использовании одинаковых доз стандартных гонадотропных препаратов, число вызванных овуляций колеблется от 0 до 50 (Б.П. Завертяев, 1989), извлеченных эмбрионов от 0 до 38 (Broadbent P.J., 1985), жизнеспособных эмбрионов от 0 до 30 (Мадисон В.Л., В.И. Лебедев, А.П. Дронин, В.В. Мадисон и др., 1993).
Высокая вариабельность и непредсказуемость как по числу овуляций, так и количеству и качеству извлеченных эмбрионов у коров-доноров, с учетом неудачных осеменений и извлечений и, особенно, минимального индекса овуляций, создают трудности в планировании программы пересадок эмбрионов, ведут к существенному повышению затрат на трансплантацию (И.И. Будевич, В.Л. Плешкевич, В П. Кононенко, Н.Ф. Жук, 1988; В.П. Рябых, 1989; В.Л. Мадисон, В.И. Лебедев, А.П. Дронин, В.В. Мадисон и др., 1993; Б.П. Завертяев, 1989; Н.И. Сергеев, А.Ш. Амарбеев М., 1987). В связи с этим большое внимание при отборе и подготовке животных к получению эмбрионов уделяется факторам, влияющим на эффективность метода суперовуляции.
По мнению ряда авторов (В.П. Рябых, 1989; В.Л. Мадисон, В.И. Лебедев, А.П. Дронин, В.В. Мадисон и др., 1993; Б.П. Завертяев 1989) основной причиной высокой вариабельности реакции суперовуляции и выхода полноценных эмбрионов является большое разнообразие популяции фолликулов в яичниках коров перед гормональной обработкой. Преантральные фолликулы, имеющиеся в начале гормональных обработок, не могут расти до преовуляторного состояния. Ранние атретические фолликулы без овуляции лютеинизируют или продолжают расти, образуя кисты. Лишь наличие достаточного числа малых антральных фолликулов (диаметр 1-3 мм), чувствительных к экзогенным гонадотропинам, обеспечивают соответствующий уровень суперовуляции (В.Л. Мадисон, В.И. Лебедев, А.П. Дронин, В.В. Мадисон и др., 1993; Б.П. Завертяев 1989). Крупные по размеру фолликулы (диаметр 7-10 мм и более) снижают способность к дальнейшему росту фолликулов диаметром 1-3 мм (А.П. Калашников, В.И. Фисинин, В.В. Щеглов, Н.И. Клейменов, 2003; Gregory К.Е., Echternkamp Е., Discerson G.E., 1988). Определение гормонального фона у коров-доноров, в частности уровней половых гормонов в крови перед введением гонадотропинов, позволяет уточнить функциональное состояние яичников и способствует правильному отбору животных. Стабильные результаты по суперовуляции и числу нормальных эмбрионов можно получать при концентрации прогестерона в крови более 2 нг/мл, соотношение между прогестероном и эстрадиолом 1:5-6 (A.M. Гавриков, Н.И. Сергеев и соавт., 1994; М.М. Челецкий, С.Г. Щаловило, Н.М. Шаран, И.М. Кудла 1988). В определенной степени показатели метода суперовуляции зависят от применяемых гонадотропных препаратов. В настоящее время ассортимент и объемы производства гонадотропинов в мире достаточно велики. Гипофизарные препараты ФСГ, в силу своих химических, биологических свойств и степени очистки, позволяют получать более высокие показатели по индуцированию суперовуляции и выходу эмбрионов по сравнению с сывороточными гонадотропинами (А.П. Дронин, А.О. Смирнов, Н.Г. Павлов, 1988; В.Н. Кинзеев, 1998; Н.М. Решетникова, Т.А. Мороз, A.M. Малиновский и др., 1997; A.M. Гавриков, Н.И. Сергеев и соавт. 1994), но при этом доля коров, реагирующих суперовуляцией, остается приблизительно одинаковой (В.П. Рябых 1989). На практике чаще используют гипофизарный ФСГ - выделенный в относительно чистом виде или в сочетании с ЛГ в соотношении 5 : 1 (М.И. Прокофьев 1983; Б.П. Завертяев 1989; Gregory К.Е., Echternkamp Е., Discerson G.E., 1988). Для препаратов сывороточных гонадотропинов соотношение ФСГ и ЛГ-активности 3:1 считается оптимальным в отношении результатов суперовуляции у коров-доноров (СЮ. Шеховцов 1988). Соотношение ФСГ и ЛГ в разных гриях препаратов может меняться в значительных пределах, что является одной из причин вариабельности числа индуцированных овуляций (Gregory К.Е., Echternkamp Е., Discerson G.E. 1988). Согласно исследованиям (Herrier A. et. al., 1991), обработка коров молочного направления продуктивности очищенным ФСГ (40мг) с добавлением малого количества ЛГ (0,052 ME) не вызывала суперовуляции.
Основное действие ФСГ, выделенного в относительно чистом виде из гипофизов сельскохозяйственных животных, заключается в стимуляции развития множества овариальных фолликулов, приводя к пролиферации клеток гранулезы. Однако фолликулы не достигают полного развития и не секретируют эстрогены под действием одного ФСГ. Почти все биологические эффекты гонадотропных гормонов - развитие фолликулов, овуляция, секреция эстрогенов - происходят в результате совместного воздействия ФСГ и ЛГ. Очищенные препараты ФСГ и ЛГ взаимно усиливают друг друга, что принято называть эффектом аугментации (М.И. Прокофьев 1983). Добавочное введение ЛГ дублирует физиологический гормональный профиль во время фолликулярного развития, обеспечивает более высокий уровень суперовуляции, повышает оплодотворяемость яйцеклеток и улучшает качество эмбрионов (Н.М. Решетникова 1989).
По данным Seidel G.E., повышение реакции коров наблюдалось при сочетании препаратов ФСГ с 20% ЛГ. При стимуляции яичников избыток ФСГ обеспечивает развитие большого количества полостных и преовуляторных фолликулов, но снижение продукции эндогенного ЛГ приводит к образованию фолликулярных кист. Поэтому для вызывания суперовуляции применяют препараты, сочетающие ФСГ и ЛГ (Н.М. Решетникова 1989).
В исследованиях Donaldson L.E., Ward D.N. получены результаты, напротив, свидетельствующие о негативном влиянии примеси ЛГ в составе гонадотропного препарата. Добавление ЛГ к очищенному ФСГ уменьшало реакцию яичников животных и число нормальных эмбрионов с 7,8 до 4,4 на донора, увеличивало количество аномальных зародышей.
Chupin D. и др. (1985), изучая влияние различных соотношений ФСГ и ЛГ в препаратах на суперовуляторный ответ животных, отмечали, что увеличение содержания ЛГ в гонадотропном препарате у фризских коров снижало, а у коров породы шароле повышало уровень полиовуляции.
В настоящее время на постсоветском пространстве для стимуляции роста и развития большого числа фолликулов у коров-доноров широко применяется препарат ФСГ высокой степени очистки - ФСГ-супер. В данном гонадотропине на 1000-1500 ед. ФСГ приходится 1 ед. ЛГ. Согласно исследованиям А.А. Овсепяна, А.С. Кривохарченко и Г.А. Серобяна (1997), от 39 обработанных ФСГ-супер коров-доноров красной горбатовской породы извлечено в среднем по 3,9 пригодных эмбрионов, при этом только от 9 коров (23%) получено достаточное их количество (6 и более эмбрионов). М.И. Бащенко (1999) констатирует, что применение ФСГ-супер позволило в среднем на донора получить 4,1 пригодных эмбрионов, 2,6 - дегенерированных и 0,4 - яйцеклеток. Н.Ф. Жук и др.(1999), (Broadbent P.J., (1985) сравнили эффективность использования у черно-пестрых коров препаратов ФСГ-супер и ФСГ-п (в различных сериях препарата соотношение ФСГ : ЛГ колеблется от 1:1 до 2:1 (В.В. Мадисон, В.Л. Мадисон, 1986). После введения ФСГ-п по сравнению с ФСГ-супер выход пригодных эмбрионов был на 24% больше (5,7 против 4,6). А в исследованиях О.Ф. Гончар (1994) преимущество по получению пригодных зародышей составило 28% в пользу препарата ФСГ-п при сопоставлении с ФСГ-супер (6,4 против 5,0). Однако Т.А. Мороз, СМ. Блохин (1991, 1997) сообщают, что препарат ФСГ-супер высокой степени очистки вполне конкурентоспособен, поскольку использование его на донорах костромской породы оказалось более эффективным в сравнении с препаратами ФСГ в сочетании с ЛГ (ФСГ-п, фоллитропин). Также был выявлен ряд положительных свойств препарата ФСГ-супер: гонад отропин никогда не приводил к образованию кист яичников и исключал разрастание стромы яичника (Н.В. Тарасенко, В.В. Шевченко, 1997). В.И. Деряженцев, A.M. Бортников (1998) привели результаты сравнительной оценки на коровах украинской красно-пестрой и симментальской породы различных гипофизарных гонадотропинов: ФСГ-супер, ФСГ-П, фоллитропин (соотношение ФСГ к ЛГ составляет 5:1) и не установили значительных различий по числу извлеченных жизнеспособных эмбрионов (от 5,8 до 7,0).
Определение эффективности применения «достима» для стимуляции половой функции и повышения оплодотворяемости коров герефордской породы
Предложенные в настоящее время современные методы изучения иммуно-биохимического статуса животных, позволяют анализировать полученные при исследованиях результаты и глубже понять явления, которые способствуют в организме животных обеспечивать половую цикличность и эффективную оплодотворяемость.
Дальнейшее решение вопросов стимуляции воспроизводительной функции коров, определяемое современными требованиями животноводства, невозможно без детального изучения и анализа динамики клеточных и гуморальных факторов иммунитета для разработки и внедрения современных методов стимуляции воспроизводительной функции коров в мясном скотоводстве.
Одним из таких методов повышения репродуктивной функции у коров мясных пород является применение иммуномодулирующих препаратов, к числу которых относится «достим».
Для решения поставленной задачи с учетом полученных результатов (разд. 2.2., 2.3.1.) в 2008-2009 г.г были проведены исследования в ООО «Агрофирма Калининская» Брединского района Челябинской области. Для проведения экспериментальных исследований было сформировано по принципу аналогов 3 группы коров герефордской породы.
Для нормализации половой функции у животных первой опытной группы (п=20) нами проведена двукратная с интервалом в 14 дней стимуляция фолликулогенеза эстрофаном в дозе 2 мл в сочетании с витамином Е-селен с последующим введением сурфагона в дозе 10 мл внутримышечно и однократным искусственным осеменением ректо-цервикальным способом.
У животных второй опытной группы (п=20) эта схема использования препаратов лютеолитического и овуляторного действия в сочетании с витамином Е-селен дополнена применением «достима». Препарат вводили с первой инъекцией эстрофана в сочетании с витамином Е-селен в дозе 15 мл внутримышечно двукратно через день. У животных третьей контрольной группы (п=20) использовали схему стимуляции фолликулогенеза, применяемую в хозяйстве. При этом вводили 2 мл эстрофана двукратно с интервалом 10 дней, на 14-й день (72-76 часов) после второй инъекции проводили искусственное осеменение коров (не взирая на внешние признаки течки) с последующим повторным искусственным осеменением (15-й день).
У всех животных перед применением препаратов проводили обследование половых органов на гинекологические отклонения.
Для изучения иммуномодулирующих свойств «достима» проводили иммуно-биохимические исследования коров в каждой группе коров (п=5) до введения препаратов и на 14-й день.
Исследования содержания общего белка и белковых фракций в сыворотке крови коров второй опытной группы показали повышение концентрации общего белка на 14-е сутки до 89,2±3,60 г/л, против 71,3±2,20 г/л, снижение содержания альбуминов до 38,4±0,89 %, против 45,8±1,22% увеличение а - глобулинов до 12,27±0,88 % против 8,9±0,32 % и гемоглобина в крови до 122,2±4,62 г/л против 110,4 ±5,20 г/л (Р 0,05). Следует отметить, что при более низких фоновых показателях СМП в сыворотке крови животных второй группы, увеличилась концентрация церулоплазмина на 31,82% (Р 0,05), что свидетельствует о повышении антиоксидантной защиты организма.
Достоверные изменения этих показателей отсутствовали у коров первой опытной и контрольной группы. В связи с этим далее представлен анализ показателей клеточного звена иммунной системы контрольной и второй опытной группы животных.
Анализ лейкограммы (таблица 11) показал, что у коров опытной группы наблюдалось увеличение общего количества лейкоцитов на протяжении всего периода наблюдения. Повышение общего количества лейкоцитов произошло за счет увеличения процента нейтрофилов на 1,91% (Р 0,05) и лимфоцитов на 9,20% (Р 0,05).
Важным фактом при введении коровам «достима» служит количественное повышение моноцитарного звена, так как моноциты обладают свойствами не только естественных киллеров, но также являются предшественниками тканевых макрофагов, которые выполняют в различных тканях многочисленные функции по очистке организма.
Эти изменения, на наш взгляд, являются прямым следствием измененного метаболизма в лейкоцитах под действием препарата за счет активизации энергетического обмена. Как результат системных сдвигов в состоянии лейкоцитов, включающих в реализацию специфическую для них фагоцитарную функцию, повышается иммунологическая реактивность организма, что и подтверждается количественными изменениями популяций лимфоцитов.
Анализ количественного состава отдельных популяций лимфоцитов показывает, что увеличение общего содержания лимфоцитов периферической крови в опытной группе по сравнению с фоном и контролем происходило за счёт Т- и В-популяций лимфоцитов, уровень которых был достоверно выше к 14-му дню на 9,3% и 14,1% соответственно.
Содержание молодых незрелых форм лимфоцитов, каковыми являются 0-лимфоциты, через 10 суток у коров контрольной и опытной группы было стабильным и практически не отличалось от исходного показателя.
Влияние «достима» на иммунологические показатели крови телят трансплантантов
При трансплантации эмбрионов у крупного рогатого скота вопросы иммунологических отношений между организмом матери-реципиента и донорскими эмбрионами остаются по настоящее время малоизученными. Вместе с тем общепризнано, что приживляемость эмбрионов и выживаемость потомства более низкие, чем при общепринятых способах воспроизводства, а факт создания пассивного иммунитета у новорожденных животных с выпойкой молозива не вызывает сомнений.
В связи с этим нами были изучены особенности динамики живой массы и некоторых иммунологических параметров у телят, полученных традиционным путем, и телят-трансплантантов герефордской породы Канадской селекции от коров-реципиентов симментальской породы.
В производственном опыте находилось три группы новорожденных телят герефордской породы по 5 голов в каждой, содержащихся в одинаковых условиях содержания и кормления, принятых в агрофирме (раздел 2.5.1.).
В первой группе находились телята, полученные традиционным путем (после искусственного осеменения), во второй группе - новорожденные телята-трнсплантанты, в третьей-новорожденные телята-трансплантанты, матерям которых вводили «достим» в дозе 20 мл двукратно за 10 дней до предполагаемого отела и в день отела.
Динамику иммунологических показателей у телят контрольной и опытных групп изучали в возрасте 1, 5, 10, 30, 60 и 90 дней.
Было установлено, что такие показатели как, количество лейкоцитов, содержание общего белка и лизоцимная активность сыворотки крови у телят-трасплантантов второй группы относительно показателей сыворотки крови телят, полученных после искусственного осеменения, были снижены на протяжении всего периода наблюдения. При этом концентрация белка сыворотки крови однодневных телят-трансплантантов была на 7,8% (Р 0,05), а лизоцимная активность - в 2,1 раза (Р 0,001) ниже. К двухмесячному возрасту достоверность сравниваемых показателей была утрачена (таблица 16).
Лейкограмма новорожденных телят-трансплантантов характеризуется более высоким содержанием нейтрофилов. Данный показатель коррелирует с показателями лизоцимной активности сыворотки крови.
Таким образом, механизмы становления иммунного статуса на данном этапе онтогенеза характеризуются низким уровнем содержания общего белка, гемоглобина, лейкоцитов, лимфоцитов, что в общих чертах характерно для возрастного физиологического иммунодефицита. Вместе с тем показатели прироста живой массы телят-трансплантантов канадской селекции превышали таковые показатели телят, полученных традиционным путем.
Показатели концентрации общего белка сыворотки крови у телят-трансплантантов, матерям которых вводили «достим» (третья группа), с 10-х суток наблюдения отличались от полученных результатов телят контрольной и первой опытной группы на 7,47 и 10,69 % соответственно. С 2-месячного возраста содержание гемоглобина в крови телят третьей группы составило 111,5±2,31 г/л против 109,2±3,24 г/л и 107,9±3,14 г/л у телят первой и второй группы соответственно. Лизоцимная активность сыворотки крови телят-трансплантантов третьей опытной группы повышалась относительно показателя второй опытной группы с 10-го дня опыта на 7,2% (Р 0,05), а к 3-месячному возрасту этот показатель превышал данные сыворотки крови телят первой и второй групп. При этом живая масса новорожденных телят-трансплантантов третьей группы превышала живую массу новорожденных телят первой и второй групп на 3,8 и 3,0 кг соответственно, а к 3-мес. возрасту, разница в живой массе телят-трансплантантов второй и третьей опытной групп составила 7,7%. Таким образом, необходимо учитывать особенности становления иммунной системы у телят-трансплантантов, полученных от коров-рецепиентов, имеющих 100%-ный чужеродный генетический материал, т.к. только к середине подсосного периода (3-месячного возраста) у этих телят происходит становление клеточного и гуморального иммунитета при соблюдении зоогигиенических условий содержания и полноценного кормления.
Полученные в производственных условиях данные, свидетельствуют о высокой эффективности применения «достима» для регуляции родовой деятельности, благоприятного течения послеродового периода у коров-реципиентов и становления гомеостаза организма новорожденных телят-трансплантантов герефордской породы Канадской селекции.
