Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 9
2.1. Морфологические особенности строения почек кошек 9
2.2. Строение фильтрационного барьера почки 13
2.3. Обмен веществ в почках 15
2.4. Почечная недостаточность – современное состояние вопроса 18
2.5. Этиология хронической почечной недостаточности 23
2.6. Клиническое проявление хронической почечной недостаточности 29
2.7. Изменения в моче при поражениях почек 33
2.8. Концентрация фосфатов, паратиреоидного гормона и кальция в плазме крови 39
2.9. Концентрация мочевины и креатинина в сыворотке крови. 42
3. CLASS Собственные исследования CLASS 45
3.1. Материалы и методы 45
3.1.1. Клинические исследования 48
3.1.2. Проведение общего анализа мочи 48
3.1.3. Гематологические исследования 49
3.1.4. Исследования биохимического профиля сыворотки крови 50
3.1.5. Ультразвуковые исследования 50
3.1.6. Рентгенологические исследования 51
3.1.7. Гистологические и гистохимические методы 52
3.1.8. Статистическая обработка результатов 53
4. CLASS Результаты исследований и их обсуждение CLASS 55
4.1. Клинический мониторинг кошек с хронической почечной недостаточностью 55
4.2. Биохимические исследования сыворотки крови у кошек с III стадией
хронической почечной недостаточности 56
4.3. Клинический анализ мочи у кошек с III стадией хронической почечной недостаточности в динамике наблюдения 66
4.4. Гематологические изменения у кошек с III стадией хронической почечной недостаточности в процессе наблюдения 70
4.5. Ультразвуковая и рентгенологическая картина почек у кошек с III стадией ХПН 74
4.6. Морфологические и гистологические изменения почек при III стадии ХПН у кошек 81
Выводы 96
Практические предложения 98
Библиографический список 99
- Строение фильтрационного барьера почки
- Клиническое проявление хронической почечной недостаточности
- Исследования биохимического профиля сыворотки крови
- Гематологические изменения у кошек с III стадией хронической почечной недостаточности в процессе наблюдения
Строение фильтрационного барьера почки
Почка кошки представляет собой парный паренхиматозный орган, расположенный ретроперитонеально, с обильным кровоснабжением, бобовидной формы и плотной консистенции. Почки плотоядных животных классифицируются как гладкие однососочковые. У кошки почки желтовато-красного цвета, светлого или темного. У кошки, в отличие от собак, обе почки имеют примерно одинаковую массу. Следует учитывать, что с увеличением возраста, увеличивается и масса почек. Почки млекопитающих, в том числе и кошки имеют ярко выраженную дифференциацию на 2 зоны – корковую (cortex renis) красно-коричневого цвета и толщиной 2 – 5 мм и мозговую (medulla renis) лилово-красного цвета. Мозговое вещество почек образует 8-18 пирамид; над пирамидами и между ними лежат слои коркового вещества – почечные (бертиниевы) столбы. Каждая пирамида имеет широкое основание, примыкающее к корковому веществу, и закруглённую и более узкую верхушку – почечный сосочек, обращённый в малую почечную чашечку. Последний открывается в большие почечные чашечки, из них моча поступает в почечную лоханку и далее в мочеточник. У кошки почечный сосочек общий и имеет центральный гребень, характерно наличие псевдососочков. На продольном разрезе органа почечная паренхима разделяется на корковый и мозговой слои. На светооптическом уровне корковый слой представлен почечными тельцами, извитыми канальцами и интерстициальной тканью. У кошки в каждой почке содержится 200000 – 500000 почечных телец в зависимости от массы тела. Мозговой слой содержит петли Генле, собирательные трубочки и канальцы, кроме того, он подразделяется на секции перегородками, которые сформированы почечными дивертикулами и междолевыми сосудами (Фольмерхаус Б., Фревейн Й. с соавт., 2003).
По данным J. Bartges, D.J. Polzin (2011), топография почек кошек имеет возрастные и породные особенности. В большинстве случаев левая почка находится на границе L2 – L5, правая L1-L4. Правая почка расположена краниальнее левой, но не заходит в подреберную часть брюшной полости, как это наблюдается у собак. Правая почка кошки зафиксирована печеночнопочечной связкой к хвостатому отростку печени, но не образует на нем вдавления как у собак. Левая почка имеет менее постоянное положение из-за более длинной брыжейки (Фольмерхаус Б., Фревейн Й. с соавт., 2003).
Каудальная полая вена идет вблизи ворот правой почки, брюшная аорта – вблизи ворот левой почки. От этих крупных сосудов отходят левые и правые почечные артерии и вены. Ветви почечной артерии васкуляризуют фиброзную и жировую капсулы почки, мочеточник и надпочечники. Артерии почки являются концевыми, поэтому в почке возможны инфаркты. Ветви почечных артерий разделяются в области мозговых пирамид на междолевые артерии, которые переходят в дуговые артерии на границе коркового и мозгового вещества. От дуговых артерий в мозговое вещество радиально отходят междольковые артерии. Междольковые артерии отдают множество приносящих клубочковых артериол в прямые артериолы, формируя капиллярную сеть. Прямые артериолы образуют капиллярную сеть в области мочевых канальцев и собирательных трубок, из которых формируются интраорганные венозные сосуды.
По почечным венам, которые вливаются в каудальную полую вену, происходит отток крови от почек. У кошки отток крови из поверхностного слоя коры происходит через поверхностные междольковые вены и капсулярные вены. Эти капсулярные вены в виде ветвящихся деревьев распределены по поверхности почки, проходя к воротам почки, где вливаются в почечную вену. Эта картина расположения капсулярных вен как раз и характерна для семейства кошачьих. Отток крови из глубоких слоев коркового вещества осуществляется глубокими междольковыми венами, которые вливаются в дуговые вены. Следует отметить, что между обеими системами междольковых вен нет анастомозов.
Почечная лоханка представляет собой тонкостенный мешок, который воронкообразно охватывает почечный сосочек, тем самым дублируя его по форме. По краю лоханки у кошки расположены 8 – 10 двойных карманов – рецуссов почечной лоханки, которые внедряются в паренхиму почки. Между обоими листками каждого рецусса к границе между корой и мозговым веществом проходит пара междольковых сосудов, вена и артерия. Почечная лоханка является резервуаром для сбора мочи. Пучки мышечных волокон почечной лоханки расположены косо, в области сосочка мышцы проходят почти циркулярно. У кошки мышечный слой исчезает в верхней трети почечной лоханки (Фольмерхаус Б., Фревейн Й. с соавт., 2003).
Структурная и функциональная единица почки – нефрон, образованный клубочковым аппаратом и канальцевой частью, состоящей из проксимального отдела, петли Генле и дистального отдела, в которых происходят реабсорбция и экскреция. Микроскопически клубочковый аппарат представлен сосудистым клубочком, двухслойной капсулой Шумлянского – Боумена, образованной висцеральным и париетальными листками. Между капиллярами клубочка располагаются мезангиальные клетки (Хем А., Кормак Д., 1983).
Эпителиоциты проксимальных извитых канальцев кубической формы покрыты щеточной каемкой. Здесь происходит облигатная реабсорбция воды и других веществ за счет особенностей ультраструктуры эпителиоцитов, в то время как в дистальных отделах реабсорбция веществ факультативная или избирательная.
Клиническое проявление хронической почечной недостаточности
Фильтрационный барьер гломерулы, который легко проницаем для воды и растворенных в ней веществ, представляет собой стенку артериального капилляра, имеющего особенное строение. Барьер непроницаем для подавляющего большинства белковых молекул и клеток крови. Мысль о фильтрации воды и растворенных веществ как первом этапе мочеобразования была высказана в 1842 г. немецким физиологом К. Людвигом. В 20-х годах XX столетия американскому физиологу А. Ричардсу в прямом эксперименте удалось подтвердить это предположение – с помощью микроманипулятора пунктировать микропипеткой клубочковую капсулу и извлечь из нее жидкость, действительно оказавшуюся ультрафильтратом плазмы крови.
Состав клубочкового фильтрата зависит от свойств эпителиального барьера и базальной мембраны. Размер и свойства пор фильтрационного барьера вариабельны, поэтому в обычных условиях в ультрафильтрате обнаруживаются лишь следы белковых фракций, характерных для плазмы крови. Прохождение достаточно крупных молекул через поры зависит не только от их размера, но и конфигурации молекулы, их пространственного соответствия форме поры (Walsh P. C., Retik А.В. et al., 1992). Ультрафильтрация – фильтрация первичной мочи, представляет собой чисто механический процесс и не требует затрат энергии и кислорода. Движущей силой этого процесса является осмотическое давление, возникающее в результате разности диаметра приносящей (афферентной) артериолы и микрокапиллярных петель клубочка и выносящей (эфферентной) артериолы (Polzin D.J., Osborne C.A. et al., 2000).
Фильтрационный барьер почки (клубочковый фильтр) состоит из трех частей: эндотелиального слоя, базальной мембраны и эпителиального слоя. При протеинурии идет нарушение структурной целостности каждого из слоев в отдельности или всех одновременно. Гломерулярная базальная мембрана (ГБМ) – это средний, несущий, слой, представляющий собой пластинку, сформировавшуюся путем слияния эндотелиальной и эпителиальной базальных мембран. ГБМ со стороны просвета капилляра покрыта фенестрированным эндотелием, а со стороны мочевого пространства – ножками второго и третьего порядка эпителиальных клеток, называемых подоцитами.
Фенестрированный эндотелий (ФЭ) представляет собой эндотелиоциты, имеющие уплощенную форму, которые плотным непрерывным монослоем покрывают внутреннюю, обращенную в просвет капилляра поверхность ГБМ. ФЭ покрыт слоем гликокаликса. Не менее 1/3 площади эндотелия капиллярных петель занимают локальные истончения – фенестры, или окошечки и поры, затянутые тончайшими мембранами. ФЭ не только служит одним из фильтрационных слоев, но и является важной частью всего эндотелиального дерева как почек, так и организма в целом, принимающего самое активное участие в процессах гемостаза и регулирования тонуса сосудов (уровня кровяного давления). Разумеется, что эндотелиальной дисфункции принадлежит ведущая роль в патогенезе большинства острых и хронических гломерулонефритов (Damico G., Bazi C., 2003).
Висцеральные эпителиальные клетки (подоциты) одновременно являются висцеральным листком капсулы Боумена-Шумлянского и эпителием капиллярных петель клубочка. С точки зрения гистоморфологии, подоциты – это третий, заключительный, слой фильтрационного барьера. Все подоциты имеют тело, свободно расположенное в мочевом пространстве боуменовой капсулы, и ножки первого, второго и третьего порядков – цитотробекулы и цитоподии (педикулы). Между ножками подоцитов щелевые диафрагмы, которые затянуты тонкой пленкой, образованной преимущественно трансмембранным белком с адгезивными функциями – нефрином (Петросян Э. К., 2006). Нефрин является важнейшей частью всего почечного фильтрационного барьера участвующего в передаче межклеточных сигналов (Benigni A., Tomasoni S. et al., 2001; Furness P.N., Hall L.L. et al., 1999). Подоциты выполняют синтез компонентов ГБМ, принимают участие в фагоцитозе, регулируют степень растяжения капилляров клубочка благодаря наличию в структуре ножек двигательных белков. Наравне с афферентными и эфферентными артериолами, подоциты принимают участие в поддержании эффективного фильтрационного давления в широком диапазоне системного. Подоцитурия, наряду с микроальбуминурией, является одним из первых признаков различных хронических заболеваний почек (Петросян Э. К., 2006).
Благодаря анионному заряду, который несут на себе ГБМ, щелевые диафрагмы и плазмолемма подоцитов, создается препятствие в прохождении в первичную мочу не только крупных белков, но и мелких отрицательно заряженных, способных преодолеть размероселективность всего почечного фильтра (Lees G.E., Brown S.A. et al. 2005).
2.3. Обмен веществ в почках
Важнейшая физиологическая роль почек — гомеостатическая: почки участвуют в поддержании постоянства концентрации осмотически активных веществ в плазме и межклеточной жидкости, их объема, электролитного и кислотно-щелочного баланса, экскретируют продукты азотистого обмена, принимают участие в процессах метаболизма белков, углеводов, липидов, в превращении и выделении из организма токсических веществ, в регуляции системной гемодинамики (Тареева Е.М., 1983).
Процесс образования мочи начинается с клубочковой фильтрации, величина которой зависит от ряда гемодинамических факторов, прежде всего от объема почечного кровотока, который регулируется, главным образом, вазоактивными субстанциями (адреналин, ангиотензин, простагландины, брадикинин и др.), симпатическими нервами, гормонами. Почки содержат большое количество кровеносных сосудов, общее сопротивление которых невелико, поэтому в почки ежеминутно поступает около 25% сердечного выброса (Лютинский С.И., 2005).
Клубочковая фильтрация снижается при уменьшении системного артериального давления, при повышении давления в канальцах и, соответственно, в капсуле клубочка (вследствие затруднения оттока мочи, при повышении давления в интерстиции почки) (Бикхардт К., 2001).
Регуляция скорости клубочковой фильтрации в каждом нефроне осуществляется объемом протекающей крови и скоростью реабсорбции натрия в данном нефроне. Этот процесс протекает при участии юкстагломерулярного комплекса, реагирующего на растяжение приносящей артериолы притекающей кровью и на квоту реабсорбции натрия в канальце. Секреция ренина, возрастающая при уменьшении растяжения артериолы, активирует превращение ангиотензиногена в ангиотензин, что приводит к повышению АД, увеличению почечного кровотока и клубочковой фильтрации, стимулирует рефлекс жажды (Лютинский С.И., 2005).
В проксимальном отделе нефрона реабсорбируется почти полностью профильтровавшийся белок, аминокислоты, глюкоза и большая часть солей. В канальцах и собирательных трубках происходят последующие процессы всасывания и секреции веществ, определяющие окончательный состав выделяемой мочи. Экскреция белка с мочой в норме не превышает 50 мг в сутки. Увеличение фильтрации белка при поражении клубочков или недостаточная его реабсорбция в проксимальных канальцах могут быть причиной протеинурии.
Исследования биохимического профиля сыворотки крови
Среди кошек болезни почек имеют широкое распространение. По этой причине их иногда считают едва ли не нормальным состоянием стареющих животных данного вида. Между тем, кошки подвержены очень широкому спектру патологий почек, одни из которых протекают остро и имеют потенциально обратимый характер при условии своевременного и правильного лечения; другие болезни почек имеют хроническое течение, и для того, чтобы добиться видимого улучшения состояния животного, может понадобиться проведение пожизненной специфической терапии. Почечная недостаточность (ПН) является видимым клиническим проявлением нарушения функций почек, при котором происходит потеря способности выводить продукты обмена. Такое состояние можно наблюдать при потере более 75% функциональной массы почек (Герке А.Н., 2006; Di Bartola S.P.,1987).
В зависимости от этиологических факторов, почечную недостаточность разделяют на преренальную, ренальную и постренальную. При преренальной ПН наблюдается острое расстройство почечного кровообращения. При ренальной ПН идет поражение паренхимы почек, причем, любого ее отдела. Причиной постренальной ПН является препятствие оттоку мочи на любом уровне мочевыводящих путей, двустороннее или одностороннее. Разделение почечной недостаточности на острую и хроническую используется при прогнозах, но сделать это бывает очень трудно. Дифференциация почечной недостаточности на острую и хроническую часто основана на продолжительности клинических симптомов (потеря веса, отсутствие аппетита и анемия или гиперпаратиреоидизм). Однако эти симптомы можно отнести к патологии других органов (Маждраков Г.,1973; Шилова Е.М., 2007; Lane I.F., Grauer G.F. et al., 1994).
Острую почечную недостаточность (ОПН) можно отнести к клиническому синдрому, который проявляется вследствие внезапного, быстрого нарушения функции почек или диуреза с последующей азотемией и нарушениями регуляции водно-электролитного баланса и кислотно-щелочного равновесия (Байнбридж Д., Элиот Д., 2003; Пытель Ю.А., 1985; Avasthi P. S., Tokuda S. et al., 1971).
Результат нескольких, часто совместных повреждений почек, приводит к развитию ОПН. Существует 2 основные категории причин ОПН: ишемические и нефротоксические. Распространёнными причинами развития ОПН являются недавно перенесенные хирургические и инвазивные вмешательства, применение нефротоксических препаратов (этиленгликоль, цисплатин, аминогликозиды, нестероидные противовоспалительные препараты и др.), аллергия, проведенные гемотрансфузии, недавно перенесенные инфекции, острая обструкция мочевыводящих путей. Основные патофизиологические механизмы развития ОПН заключаются в том, что после ишемического или нефротоксического поражения почки, афферентное сужение артериол ведет к недостаточной перфузии и клеточной гипоксии, истощению запасов аденозинтрифосфата, а также нарушению обмена веществ, что вызывает повреждение мембраны и некроз эпителия канальцев. С другой стороны, при сильном расширении эфферентных артериол происходит снижение гидростатического капиллярного клубочкового давления и скорости клубочковой фильтрации, в результате чего уменьшается диурез и снижается регуляция реабсорбции растворенных веществ и воды (Тареева И.Е., 2000). Нарушение целостности выстилки эпителия могут вызывать токсические и ишемические повреждения почек, при этом фильтрат просачивается назад в интерстициальную ткань и околоканальцевые капилляры, что приводит к низкому диурезу. Обтурация канальца продуктами распада клеток и мочевыми цилиндрами ведет к дальнейшему снижению тока жидкости в канальцах, что, в свою очередь, приводит к набуханию клеток и отеку интерстициальной ткани. Это состояние ведет к ухудшению обратного оттока и фильтрации. При коррекции этих аномалий можно восстановить ток жидкости в канальцах, однако поврежденный эпителий канальцев может оказаться неспособным регулировать гомеостаз жидкостей и растворенных веществ, вследствие чего усиливаются аномалии водного баланса (полиурия), а также электролитного баланса и кислотно-щелочного равновесия (Кирк Р., Бонагура Д., 2005; Шилова Е.М., 2007). Хроническая почечная недостаточность (ХПН) характеризуется прогрессирующим структурными поражениями, приводящими к нарушению в почках экскреторной, биосинтетической и регуляторной функций. Периоды прогрессирующего развития болезни чередуются с длительными ремиссиями, во время которых почки продолжают функционировать на стабильном уровне (Геддес Р., 2013). В отличие от ОПН, причины развития хронической почечной недостаточности более разнообразны. Они приводят к различным заболеваниям почек, а, следовательно, имеют различные патофизиологические механизмы развития синдрома почечной недостаточности (Кирк Р., Бонагура Д., 2005; Чандлер Э.А., Гаскелл К.Д. с соавт., 2002; Fine L.G., 1987). Снижение функций почек в патогенезе ХПН происходит по 3-м основным механизмам: уменьшение количества функционирующих нефронов, значительное снижение скорости фильтрации в каждом отдельном случае без уменьшения числа нефронов, сочетание первого и второго механизмов.
Любой из этих механизмов будет снижать скорость клубочковой фильтрации (СКФ), а как следствие и фильтрационную способность почек. СКФ показывает, сколько мл первичной мочи образуется в почках за 1 мин. Уменьшение числа функционирующих нефронов постепенно ведёт к значительному изменению биохимических показателей крови и тяжелым обменным нарушениям (Башков Г.В., Калишевская Т.М., 1987; Карпенко Л.Ю., 2004). Отмечается развитие уремии с накоплением потенциальных токсинов и продуктов метаболизма белков: мочевины, креатинина, мочевой кислоты (Пилаев, Н.В., 1998; Шейман Д.А., 1999). Согласно В.Н. Денисенко (2009), S.P. Di Bartola, M.J. Tarr, et al. (1986), накопление в крови средних молекул – белковых веществ, имеющих молекулярную массу от 300 до 500 дальтон, которые образуются в результате нарушения гомеостатической функции почек, вызывает развитие уремической интоксикации. Осмотический диурез – выделение большого объема мочи (полиурия), в результате повышенной экскреции осмотически активных веществ, развивается в результате чрезмерной загрузки проксимального отдела нефрона осмотически активными веществами (продукты азотистого метаболизма), несмотря на значительное снижение клубочковой фильтрации. Присутствие в просвете проксимальных канальцев осмотически активных веществ в концентрациях, превышающих максимальную способность к их реабсорбции, приводит к снижению проксимальной реабсорбции воды. В результате в петлю нефрона и дистальные канальцы поступает большой объем жидкости. Плотность мочи при этом снижается и становится стабильной на уровне 1,008—1,015, что соответствует плотности крови и указывает на снижение концентрационной способности почек (Есилевский Ю.М., 1995; Bernard D.B., Salant D.J., 1991; Brown S.A., Crowell W.A. et al., 1997; Couser W. G., 1998; Short R. P., Lobetti R.R. et al., 1999). Полиурия приводит к дегидратации. При этом снижается почечный кровоток, ухудшается клубочковая фильтрация и усугубляется ХПН (Шульга Ю.Д., 1973).
Гематологические изменения у кошек с III стадией хронической почечной недостаточности в процессе наблюдения
Средний объём эритроцита (MCV) вычисляли по формуле как отношение гематокрита к количеству эритроцитов, измеряется в фемтолитрах (10-15/л). Один фемтолитр равен одному кубическому микрометру (одна миллионная часть метра), рассчитывали по формуле: MCV = HCTх10/ RBC (фл).
Среднее содержание гемоглобина в эритроците (MCH) отражает, сколько гемоглобина в среднем содержится в одном эритроците. Измеряется в пикограммах (одна триллионная часть грамма, 10-12) на эритроцит и рассчитывается как отношение гемоглобина (г/л) к количеству эритроцитов, соответствует цветному показателю, который использовался ранее для отражения содержания гемоглобина в эритроцитах и рассчитывали по формуле: MCH = HGB/RBC (пг).
Средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах (MCHC) – показатель насыщения эритроцита гемоглобином, в отличие от MCH, характеризует не количество гемоглобина в клетке, а «плотность» заполнения клетки гемоглобином, рассчитывается как отношение общего гемоглобина (г/л) к гематокриту – объему, который занимают эритроциты в кровяном русле. Он измеряется в граммах на литр и является наиболее чувствительным показателем при нарушениях образования гемоглобина. Рассчитывали по формуле MCHC = HGBх100/HCT (г/л). 3.1.4. Исследования биохимического профиля сыворотки крови
Биохимический состав сыворотки крови исследовали на анализаторе «Humalizer Junior» в 1, 5, 30, 90-е сутки исследования. Определяли уровень креатинина, мочевины, глюкозы, общего белка, альбумина, общего кальция, неорганического фосфора, калия и натрия. Исследование проводили в сыворотке крови путем забора крови у кошек из vena saphena в количестве 3 мл, отстаивали в течение часа для образования сгустка, затем центрифугировали.
Ультразвуковые исследования Ультрасонографические исследования проводили на момент обращения в клинику. Шерсть на животе выбривали обычным способом, кожу обрабатывали медицинским спиртом, после этого использовали ультрагель «Гельтэк» для УЗИ. Положение животного при исследовании лежачее – на спине или на боку (А.М. Шабанов, А.И. Зорина, 2005). С точки зрения УЗИ–диагностики почка – парный паренхиматозный орган, который при дорсальной укладке животного расположен в месте пересечения нижней реберной дуги с прямой мышцей спины. Правая почка расположена краниальнее левой. В норме визуализируются четыре эхоструктуры в почке: капсула почки, паренхима коркового вещества, паренхима мозгового вещества, почечная лоханка. При сонографическом исследовании оценивали следующие параметры почек: факт и качество визуализации, топографию, размеры и форму каждой почки, ровные или неровные контуры почки, чёткие или нечёткие границы почки, эхогенность и дифференциацию слоёв почки, эхоструктуру каждого слоя, состояние лоханки, би– или монолатеральность процесса (Бушарова Е.В., 2011). Ультразвуковые исследования проводили на аппаратах: Medison, Mindray DC – 7 и Mindray DP – 50 c микроконвексным датчиком с частотой 7,5 МГц.
Рентгенологические исследования Рентгенологическое исследование проводили на момент обращения животного в клинику. Анатомически почки расположены ретроперитонеально, в норме у кошки визуализируются обе почки как гомогенные овальные или бобовидные объекты с рентгенологической плотностью мягких тканей, их длина колеблется от 2 до 3 длин второго поясничного позвонка. При проведении рентгенологического исследования мы учитывали, что почки расположены под углом к позвоночнику, поэтому на снимках видны уменьшенные размеры почек (Бушарова Е.В., 2012). На рентгеновских снимках мы оценивали факт и качество визуализации каждой почки, топографическое положение, контуры, границы и рентгенографическую плотность каждой почки, наличие конкрементов. Рентгенологические исследования проводили в правой латеральной либо в вентродорсальной проекции. Экспозицию проводили во время максимального выдоха животного. Исследование проводили на рентгеновском передвижном диагностическом аппарате 12П5 и цифровой рентгенодиагностической установке для ветеринарии, при напряжении 40 кВ, силе тока 100 мА, экспозиции 0,6 с., на расстоянии до снимаемого объекта 100 см. Во время работы использовали рентгенологическую пленку Kodak. Пленку проявляли стандартными методами, принятыми в рентгенологии (Ищенко Б.И., 2004). 3.1.7. Гистологические и гистохимические методы
Морфологическое исследование включало в себя изучение макро- и микропрепаратов почек у трупов кошек, которым при жизни по клиническим, биохимическим показателям был поставлен диагноз III стадия ХПН. Макропрепараты изучали визуально путем оценки линейных размеров почек, состояние капсулы, вид поверхности на разрезе, плотность, наличие неоднородных включений. Для обычной диагностики использовали универсальную гистологическую окраску срезов гематоксилином и эозином. Красящие свойства гематоксилина реализуются в слабощелочной среде, и базофильные структуры (ядра клеток, отложения солей извести и колонии бактерий) окрашиваются этим красителем в синий или темно-синий цвет. Слабую базофилию могут давать некоторые виды слизи. Эозин в кислой среде окрашивает оксифильные компоненты (цитоплазма клеток, волокна, эритроциты, белковые массы и большинство видов слизи) в розово-красный или красный цвет.
Для гистохимического исследования патанатомического материала применяли окраску пикрофуксином по Ван-Гизон (I.Th. van Gieson), коллагеновые волокна соединительной ткани окрашивались в красный цвет, протоплазма клеток и эритроциты – в желтый цвет; ядра – в лиловый или коричневый цвет. Метод Ван-Гизон позволяет обнаружить даже небольшое количество соединительной ткани, неразличимое при окраске гематоксилином и эозином. Также проводили выявление белка и слизи по Крейбергу, при котором ядра клеток темно-синие, кислые гликозаминогликаны голубые, клетки красные, прочие ткани розовые и фиолетовые.
