Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 12
1.1 Роль биологически активных веществ из морской микроводоросли Laminariasaccharina 12
1.2. Функциональные нарушения красного костного мозга при воздействи ионизирующих излучений 17
1.3. Клинико-биохимические и морфологические изменения органов и тканей при воздействии ионизирующего излучения 19
1.4. Иммунная система и иммунопатология. Изменения иммунологических реакций при действии на организм радиоактивного облучения 25
2.Собственные исследования 40
2.1. Материал и методы исследований 40
2.2. Изучение безвредности препарата «Ламинария-плюс» 46
2.2.1. Изучение действия препарата «Ламинария-плюс» на физиологические показатели экспериментальных животных 46
2.2.2. Влияние препарата «Ламинария-плюс» на изменение массы тела экспе риментальных животных 51
2.3. Изучение радиопротекторных свойств препарата «Ламинария-плюс» при экспериментальном облучении 55
2.3.1 .Радиозащитная активность препарата «Ламинария-плюс» 55
2.3.2.Результаты исследования ультраструктурных изменений красного костного мозга у экспериментальных животных 57
2.3.3. Результаты гематологических исследований 68
2.3.4. Сравнительный анализ леикограммы 77
2.3.5. Изучение биохимических показателей 88
2.4. Результаты исследования гуморальных факторов неспецифического иммунитета у экспериментальных животных 98
Обсуждение результатов 106
Выводы 121
Практические предложения 122
Список литературы 123
Приложение 144
- Функциональные нарушения красного костного мозга при воздействи ионизирующих излучений
- Иммунная система и иммунопатология. Изменения иммунологических реакций при действии на организм радиоактивного облучения
- Изучение действия препарата «Ламинария-плюс» на физиологические показатели экспериментальных животных
- Результаты гематологических исследований
Введение к работе
Актуальность темы. Использования атомной энергии, внедрение источни-ков ионизирующего излучения в промышленность, сельское хозяйство и дру-гие отрасли производства приводит к возникновению ситуаций не предна-меренного облучения животных и человека.
После аварии на Чернобыльской АЭС возникла необходимость разра- ботки надёжных способов повышения радиорезистентности организма. Подобного рода препараты должны вводиться пролонгировано до облуче-чения и при этом не вызывать отрицательных последствий для здоровья животных и человека. Важной характеристикой таких препаратов является их терапевтическая широта. Так, например, радиозащитный эффект тиолов нарастает с дозой препарата и достигает максимума одновременно с проявлением токсического действия, вызывающего гибель животных (Курило А.И., 1997, Ботарашвили Н.М., 2002; Дадали В.А., 2003; Ярмоненко С.П., Вайнсон А.А., 2004; Ильязов Р.Г., 2008; Иванов С.Д., 2009). В связи с изложенным поиск новых радиозащитных средств является актуальным.
Среди многообразия лекарственных препаратов, средства, имеющие природное происхождение имеют ряд преимуществ (низкая токсичность, наличие вспомогательных компонентов: витаминов, макро-, микроэлементов и др.). Представителем растительного мира, содержащим природный радиопротектор является Laminaria saccharina - морская бурая водоросль, действующее вещество которой - соль альгиновой кислоты. Кроме того, Laminaria saccharina, содержит ряд витаминов: тиамин, рибофлавин, фолиевую кислоту, провитамин «А» и бета-каротин. Известно, что концен- трация аскорбиновой кислоты (витамин С) в ламинарии выше, чем в таких овощных культурах как свекла и морковь (Фёдоров А.Ф. , Злобин В.С., 2002).
Многочисленные опыты показывают, что водоросли, используемые в качестве добавки к рациону сельскохозяйственных животных оказывают по-ложительное влияние, на их здоровье, при этом улучшается пищеварение, и обеспечивается их потребность в макро и микроэлементах, витаминах и дру-гих биологически активных веществах (Злобин В.С., 1999; Кириллов А.Л., 2002).
Под руководством профессора В.С.Злобина был разработан препарат «Ламинария-плюс», представляющий собой неомыленные вещества морс- кой микроводоросли Laminaria saccharina, изучить радиопротекторные свойства которого представляло научный и практический интерес.
Цель и задачи исследований. Основной целью работы стало установить эффективность радиопротекторных свойств препарата «Ламинария-плюс»
при экспериментальном облучении крыс линии «Вистар».
Исходя, из поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:
1. Изучить радиопротекторные свойства и безвредность препарата «Ламина- рия-плюс», отработать схему его применения;
2. Выявить влияние препарата «Ламинария-плюс» на ультраструктурные из- менения красного костного мозга.
3.Изучить гематологические показатели крыс при экспериментальном облу-чении.
4.Определить влияние препарата «Ламинария-плюс» на показатели неспе- цифического иммунитета экспериментальных животных.
Научная новизна работы. Впервые изучены радиопротекторные свойства препарата «Ламинария-плюс» при экспериментальном облучении крыс и пос-ледовательное описание изменений происходящих в кроветворной системе
животных в сравнительном аспекте.
Установлено, что пролонгированное введение БАД «Ламинария-плюс» способствует восстановлению микроструктуры красного костного мозга и клеточных популяций.
Изучено влияние препарата «Ламинария-плюс» на биохимическую харак-теристику комплекса белков сыворотки крови, концентрацию гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов и факторы неспецифической резистентности орга-низма у экспериментальных животных при введении препарата «Ламинария-плюс».
Отработана схема и доза применения препарата «Ламинария- плюс» при облучении крыс.
Практическая значимость работы. Предложен способ превентивной защи-ты животных при облучении. Выявлена возможность пролонгированной подготовки иммунной системы и факторов неспецифической и специфической резистентности организма к лучевым поражениям, а также раннее и ускорен-ное восстановление иммунной и белоксинтезирующей систем при лучевой болезни.
Теоретически обосновано и экспериментально доказано профилакти-ческое применение препарата «Ламинария-плюс» в оздоровительных целях для стимуляции гемопоэза, общего белка сыворотки крови и его фракций при воздействии радиации. Данные о радиорезистентном и иммуномоделирующем действием БАД «Ла- минария-плюс» могут быть использованы в учебном процессе.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложе- ны и обсуждены на:Научной конференции «Актуальные проблемы ветери-нарной медицины», Санкт-Петербург, 2006г.; Научной конференции профес-
сорско-преподавательского состава научных сотрудников и аспирантов ФГОУ ВПО «СПб ГАВМ» «Новые фармакологические средства в ветерина-рии», Санкт-Петербург,2006г; Первом Международном конгрессе Ветери-нарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекар-ственные средства» Санкт-Петербург, 2008г.; Конференции «Белые ночи»
Актуальные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии», Санкт-Петербург», 2008г.; Международной научной конференции профессорско-
преподавательского состава сотрудников и аспирантов ФГОУ ВПО « СПб ГАВМ», Санкт-Петербург, 2010г.
Основные результаты и положения, выносимые на защиту.
1. Результаты, полученные при изучении радиопротекторных свойств препа- рата «Ламинария-плюс».
2. Данные по исследованию ультраструктурных изменений красного костно- го мозга у экспериментально облучённых крыс.
3. Результаты гематологических и биохимических исследований в сравните-льном аспекте.
4. Результаты изучения влияния препарата «Ламинария-плюс» на факторы неспецифической резистентности организма животных в динамике.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в т.ч. 2 работы в журналах рекомендованных ВАК РФ.
Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 141 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания
методов и материалов исследований, выводов и списка литературы. Список
литературы включает 187 источников, в том числе 53 зарубежных источни-
ков, в том числе 53 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 9 таб-лицами и 29 рисунками.
2. Материалы и методы исследований
Работа выполнена на кафедре «Ветеринарной радиобиологии и безо-пасности жизнедеятельности в чрезвычайных ситуациях» Федерального Го- сударственного Общеобразовательного Учреждения Высшего Профессиона-льного Образования «Санкт-Петербургская Академия ветеринарной медици-ны».
Исследования биохимических показателей препарата «Ламинария-плюс» проводили на кафедре биохимии, гематологические исследования кро-ви на кафедре клинической диагностики, гистологические исследования на кафедре патологической анатомии ФГОУ ВПО «СПб ГАВМ».
Эксперимент проводили на 390 клинически здоровых самцах белых лабораторных крыс линии «Вистар» средней массой тела 180-200г. Животных содержали в виварии при температуре воздуха 20-22 С, влажнос- ти не более 50%, в стандартных железных клеток с мелкой древесной струж- кой. Содержание и кормление крыс осуществлялось по нормам утверждён- ных Министерством здравоохранения СССР (приказ №163 от 10 марта 1966).
Для постановки эксперимента было сформировано четыре группы по 50 крыс в каждой: 1группа - физиологический контроль; 2 группа –физиоло- гический контроль получавший препарат «Ламинария-плюс»; 3 группа-облучённые контрольные животные; 4 группа – животные, получавшие пре- парат «Ламинария-плюс» в качестве кормовой добавки до облучения.
Клинические показатели (состояние волосяного покрова, пищевая воз-будимость, мочеиспускание, координация движений) оценивали путём визу-альной оценки. Взвешивание животных проводили на лабораторных весах ВЛКТ-500г-М.
Кровь для гематологических, иммунологических и биохимических исследований брали из хвостовой вены на 1,3,6,10,14,21 и 30 сутки. Материа-лом для исследований послужили цельная и стабилизированная трилоном Б кровь, сыворотка, мазки крови и суспензия клеток красного костного мозга. Лейкоцитарную формулу выводили на мазках крови, окрашенных по Паппе-нгейму. Определение концентрации гемоглобина осуществляли гемоглобин-циадным методом на фотоэлектрическом концентрациионном колориметре КФК-2 при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр). Содержание общего белка сыворотки крови определяли по биуретовой реакции. К 5 мл рабочего раствора биуретового реактива добавляли по 0,1 мл сыворотки крови. Через 30 минут измеряли на фотоэлектро-оптическую плотность опытной пробы против контрольной с длиной волны 540-560 нм (зеленый светофильтр).
Содержание белковых фракций определяли нефелометрическим методом на основе фосфатного буфера. К 0,5 мл сыворотки крови добавляли 5 мл соответствующих фосфатных буферов. Результат определяли через 15 мин по оптической плотности на фотоэлектроколориметре при длине волны 630-690 нм (красный светофильтр) против контроля.
Источником клеток красного костного мозга служила грудная кость. Животных забивали методом цервикальной дислокации спинного мозга в шейном отделе. Получение суспензии костного мозга проводили следующим образом: вскрывали полость грудной кости и с помощью иглы и шприца вы-мывали содержимое кости физиологическим раствором (0,5-1 мл раствора на кость). Материал ресуспензировали путём пропускания через иглы умень- шающего диаметра (без образования пены), центрифугировали при 1500 обо-ротов в минуту в течении 15 мин. После этого удаляли третью часть надоса-дочной жидкости, материал ресуспензировали и готовили мазки (Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., 1992).
Изучение препаратов проводили методом микроскопии мазков при раз- личном увеличении с помощью микроскопа МБИ 6. Фотографирование маз-ков осуществлялось фотоаппаратом «Олимпус С-350».
Статистическую обработку полученных данных проводили методом вариа-ционной статистики с использованием t критерия Стьюдента на персональ-ном компьютере помощью пакета программ Microsoft Office XP и XSTAT- 2006. Различия считали значимыми, если вероятность случайности не превышала 5% (Р<0,05).
Функциональные нарушения красного костного мозга при воздействи ионизирующих излучений
Механизм опустошения красного костного мозга впервые был описан Паком (1965), продемонстрировавшим возможность полного моделирования кинетики радиационного поражения кроветворных клеток ингибиторами митозов концимидом или винбластином. Такие же результаты были получены A.M. Кононенко (1970) при исследовании слизистой кишечника подвер-гнотому воздействию облучения. Данные исследования позволяют рассматривать данный механизм в качестве универсального, объясняющего пострадиационное опустошение органов, работающих по принципу открытых систем (Ярмоненко СП., Вайнсон А.А., 2004).
В результате воздействия радиации у животных отмечается ступенчатый характер их гибели в определённых дозах, из-за выхода из строя критических систем и органов, ответственных за выживание. Радиочувствительность организма часто определяется поражением красного костного мозга, т.к. красный костный мозг является критической системой, отвечающей за выживание при дозах до ЮГр (Расулова А.В., Лелюк В.Г., 2002; Wingard J.R., Vogelsang G.B., Deeg H.J., 2002).
Из-за высокой чувствительности клеток костного мозга, связанной с их интенсивным делением и дифференциацией, наблюдаются существенные изменения в периферической крови под воздействием радиации. В костном мозге обнаруживаются следующие изменения: аплазия, фиброз, жировое его перерождение с островками кроветворной ткани, состоящей из зрелых гра-нулоцитов, через 6 месяцев после облучения обнаруживаются скопления ретикулярных клеток (Суворова Л.А., Гордеева А.А., 2000).
Гипоплазия и аплазия костного мозга отмечается в течение первых суток после облучения, что связано с массовой гибелью клеток. Нарушения выявляются сначала в гранулоцитопоэзе, затем в тромбоцитопоэзе, значительно позднее в эритропоэзе (Heyworth P.G., Cross A.R., Cumutte J.T., 2003; Берсенев А.В., 2006).
В результате проведённых экспериментов было установлено, что через 3-е суток после воздействия радиации, когда доля клеток с абберациями ещё достаточно велика, соотношение разделившихся клеток при дозах 7 19 7,2 Гр составляет 1:10, в то время как число жизнеспособных клеток при дозе в 7 Гр в 30 раз меньше. Это объясняется тем, что с увеличением дозы увеличивается доля патологических митозов среди разделившихся клеток.
В результате этого можно сделать вывод, что существует строгая взаимосвязь между дозой излучения, числом погибших клеток и началом регенерации, что в свою очередь позволяет использовать общее количество клеток в некотором объёме костного мозга в качестве количественного критерия оценки тяжести поражения в определённые сроки после облучения (Ярмоненко СП., Вайнсон А.А., 2004).
Морфологические изменения, происходящие в клетках организма при лучевой болезни, опубликованы во многих работах. Прижизненные изменения лейкоцитов периферической крови, исследованные методом флуоресцентной микроскопии позволило, выявить в клетках некоторые изменения. Для лейкоцитов характерно яркое свечение ядра с отчётливо различимыми тонкими структурами (Окладникова Н.Д., Пестерникова B.C., 2003).
После воздействия излучения в клетках крови были обнаружены, структурные повреждения, а конкретно, огрубение ядерного вещества с последующим его расслоением, которые впоследствии могут привести к гомогенизации и распаду клетки и ядра. При этом оболочка ядра утолщается и расслаивается. На месте мелких гранул в цитоплазме образуются скопления глыбок хроматина неправильной формы и различной величины, которые при этом светятся ярко красным цветом. Оценка лейкоцитарных реакций по общему количеству лейкоцитов не только не отражает процессов изменения в белой крови, но даже устраняет противоположно направленные изменения в содержании различных видов клеток. Например, общее количество лейкоцитов в период от начала облучения до шести-семи часов после воздействия рентгеновского излучения существенно не отличается от такового у интак-тных крыс, обследованных в те же сроки в течение суток (Алексеев Н.А., 2002).
Совершенно другой характер изменения крови можно наблюдать при определении абсолютного количества нейтрофилов и лимфоцитов. При облучении в дозе от 200 до 800 рентген количество лейкоцитов уменьшается, степень лимфоцитопении больше зависит от дозы облучения, нежели величина нейтрофильного лейкоцитоза (Савченко В.Г., Паровинчикова Е.И., 2004).
Если в норме на 100 клеток крови приходится 4-6 разрушений нейтрофилов, то в период начальных регенерационных процессов количество разрушенных клеток достигает 40-60. В этот же период и в красной крови отмечаются признаки регенеративного характера. В периферической крови появляются эритробласты, увеличивается количество полихроматофильньгх эритроцитов, возрастает число ретикулацитов (Zhang J., Niu С, Ye L., 2003). В костном мозге и селезёнке содержание хроматина в клетках, гемоглобина в эритроцитах эти клетки резко отличаются от нормальных клеток и являются неполноценными, вследствие чего их цитолиз резко возрастает (Суворова Л.А., Гордеева А.А., 2000). Синдром вызывается аплазией кроветворных тканей, которая характеризуется двумя признаками: непосредственной гибелью наиболее радиочувствительность клеток и серьёзным повреждением хромосомного материала в клетках (Stossel Т.Р., 1994).
Наибольшее действие облучения проявляется в лимфоцитах, число которых быстро снижается, уже через 15 минут после облучения в дозах выше 50 рад. Кроме того, лимфоциты позднее всех других лейкоцитов восстанавливают свой нормальный уровень после облучения (Мороз Б.Б, Дешевой Ю.Б.., 2001). Лимфоцитопения вначале проявляется гранулоцитозом, поддерживающим общее число лейкоцитов близких к нормальным пределам. Двухфазный лейкоцитоз наблюдают через 8-24 часа после облучения. Первая реакция обусловлена ускорением созревания граиулоцитов в костном мозге и их выходом в циркуляцию, а второй подъём является реакцией на общее поражение тканей. Гранулоцитозы менее радиочувствительны, чем лимфоциты (Fajrdo L.F. Anderson R.E., 2001). Число моноцитов периферической крови изменяется во времени аналогично количеству лимфоцитов, но нормальные уровни их восстанавливаются через 6 дней после облучения в дозе 100 рад и выше. На плазматические клетки, редко встречающиеся в крови, облучение, по-видимому, не оказывает влияние (Melnikova Е. V., Lubarsky M.S., 2001). Эритроциты, имеющие большую продолжительность жизни, в противоположность лейкоцитам не изменяются резко по своему количеству. Эритробласты так же радиочувствительны, как лимфоциты. Их радиочувствительность проявляется в снижении числа ретикулацитов в периферической крови при облучении в дозах ниже ЗООрад (Han Youngsoo, Platonov А., Akhalaia М., 2005).
Иммунная система и иммунопатология. Изменения иммунологических реакций при действии на организм радиоактивного облучения
Защитные функции организма определяются взаимодействием иммунной системы и комплекса гуморальных факторов, таких как бета-лизины, ли-зоцим, антитела, комплемент и т.д. В основе защитных реакций определённая роль принадлежит фагоцитозу и молекулярпо-генетическому механизму (Ярилин А.А., 1999, Coto М., Hachimura S., Ametani A., Sato Т., 2003). Существует мнение, что иммунная система организма, в том числе и животных, состоит из клеток и лимфоидных тканей (Колычев Н.И., Гасманов Р.Г., 2003, Коляков Я.Е., 1986). Из клеток состоят все органы и ткани организма, клетки принимают активное участие в защите гомеостаза. Поэтому лимфоидная система, в которой локализованы два вида клеток: макрофаги (А-клетки) и лимфоциты (Т-клетки и В-клетки). Макрофаги и Т и В- лимфоциты представляют собой морфологический эквивалент иммунной системы организма (Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г., 2002). Центральным органом иммунной системы является тимус или вилочковая железа, у млекопитающих костный мозг, а у птиц фабрициева сумка. Периферические органы иммунной системы представлены кровью, лимфатическими узлами, селезёнкой и различными лимфатическими скоплениями, расположенными по всему организму находящиеся на разных стадиях дифференцировки. Работа периферических органов находится под контролем центральных органов иммунитета, среди которых важная роль отведена тимусу (Сепиашвили P.M., Бахолдина М.Г. и др., 2000). Тимус является первичным лимфоидным органом, осуществляющим контроль за созреванием и функциональной активностью лимфоцитов, а также осуществляет связь и взаимодействие всех органов иммунной системы. Лимфоциты, костномозгового происхождения, под влиянием тимуса могут принимать участие в реакциях как клеточного, так и гуморального иммунитета (Ройт А., Бростофф Дж., Мийел Д., 2000).
Выработка Т-лимфоцитов (тимус-зависимых клеток) и В-лимфоцитов (бурсазависимых клеток) является физиологическим процессом, который проходит без присутствия антигенной стимуляции, но на прямую зависит от поступления стволовых клеток из костного мозга (Ashton-Rickardt P., Bandei-ra A., Delaney J., Van Kaer L., Pircher H.P., 1994).
Основным механизмом функционирования иммунной системы является взаимодействие трёх типов клеток: Т-В-лимфоциты и макрофаги. Макрофаги включают в себя моноциты крови и тканевые макрофаги, на поверхности которых имеются рецепторы для антител и комплемента. Эти клетки перерабатывают и фагоцитируют антигенный материал, которой потом передаётся В-клеткам. Весь этот процесс позволяет, объяснить какую роль принимают макрофаги в реакциях иммунитета (Askenasy N., Farkas D.L., 2002). Именно макрофаги и полиморфноядерные лимфоциты принимают участие в обеспечении неспецифической резистентности организма. Они представляют собой центральное звено, от деятельности которого зависит реакция фагоцитоза и продукция гуморальных неспецифических факторов защиты-лизоцима, интерферона, комплемента и т.д. (Сидорович И.Г., Игнатьева Г.А., 2000). Для всесторонней оценки устойчивости организма, необходимо изучение показателей Т и В-лимфоцитов, а также факторов неспецифической защиты, т.к. в зависимости от вида животного изменяется последовательность включения клеточных и гуморальных реакций (Boyd R., Chidgey А., 2002). В настоящее время определены факты, свидетельствующие о том, что иммунная система по своей природе - это регуляторная система, связанная с нервной и эндокринными системами и обладающая функциями, далеко выходящими за рамки традиционных представлений о защите. В данном аспекте защита рассматривается как, способ реализации регуляторных процессов, осуществляющих связь между иммунной системой и другими физиологическими системами организма (Ройт А., Бростофф Дж., Мийел Д., 2000).
Инфекционные осложнения - одна из основных причин гибели облучённых животных. При этом наиболее существенную роль играет нарушение факторов естественного иммунитета. Существуют данные, что высокие концентрации антител в сыворотке крови не обеспечивают устойчивости облучённых животных к инфекции. Факторы специфического иммунитета обусловливают такую устойчивость только в сочетании с факторами неспецифической резистентности. При этом весьма важное значение придаётся фагоцитарной активности клеток и ретикулоэндотелиальной системе (Бростофф Дж.Миел Д., Ройт А., 2002).
Немаловажное значение имеет выявленное угнетение бактерицидной способности сыворотки крови при действии внешнего и внутреннего облучения. Это снижение принято связывать с такими факторами бактерицидносте, как комплемент, лизоцим и другие. Угнетение лизоцима, снижение его активности в сыворотке крови и в слюне облучённых животных регистрировалось при внешнем облучении и инкорпорации радионуклидов. Этот расщепляющий мукополисахариды бактериальной клетки фермент обладает способностью вызывать лизис некоторых микроорганизмов. Общеизвестна роль комплемента в лизисе клеток, однако угнетение его активности регистрировалось лишь при значительных дозах и перед гибелью облучённого животного. При внутреннем облучении не удавалось выявить отчётливой зависимости между степенью подавления комплементарной активности и поглощённой дозой (Massoco С, Palermo-Neto J., 2003).
Изучение действия препарата «Ламинария-плюс» на физиологические показатели экспериментальных животных
Изучение биологической активности препарата «Ламинария-плюс» начали с определения безвредности. С этой целью были сформированы 4 группы крыс, по 10 особей в каждой. Животные 1-й группы служили физиологическим контролем, 2,3 и 4-м группам в рацион добавляли препарат «Ламинария-плюс» в дозах от 0,5 г/кг до 1,5 г/кг. За крысами наблюдали в течение 10 дней в одно и тоже время суток в 10 часов утра, определяя у них температуру тела, пульс и дыхание. Проводя, анализ данных представленных 3 и 4 таблицах стоит отметить, что общее состояние экспериментальных крыс было удовлетворительным на протяжении всего опыта - 10 дней. Особенности в поведении, расстройства координации движений, неадекватные реакции на внешние раздражители - отсутствовали. Волосяной покров во всех группах - гладкий, блестящий, окраска слизистых оболочек полости рта - розовая, координация движений - движения координированы. Тонус скелетных мышц - сохранён, фекальные массы - оформлены. Характер мочеиспускания на всём протяжении эксперимента был в пределах физиологической нормы. Реакция на тактильные, звуковые и световые раздражители была в пределах допустимых показателей.
Частота дыхательных движений находилась в пределах от 93 до 116 ударов в минуту, в опытных группах и 110-126- в контрольной группе. Частота пульса в контрольной группе находилась в пределах 118 ударов в минуту, в опытных группах 124-138 ударов в минуту. Температура тела экспериментальных животных находилась в пределах физиологической нормы от 37,9-38,2С, в контрольной группе и 37,6-38,8 С в опытных группах. Полученные результаты позволяют, говорит о том, что применение препарата «Ламинария-плюс» в диапазоне доз от 0,5 до 1,5г/кг массы тела экспериментальных животных не оказывает отрицательного влияния на физиологические показатели здоровых животных и может быть использован для исследования в радиобиологических экспериментах.
В связи с чем, оптимальной для применения препарата «Ламинария-плюс» можно считать среднюю дозу - 1,0 г/кг массы тела крыс. В результате представленных данных таблицы 4 видно, что масса тела в группе контрольно облучённых животных на первые сутки эксперимента была выше на 64,1% выше, чем в группе физиологического контроля. Начиная с 3-х суток опыта в 3-й опытной группе регистрировали снижение массы тела до 190,30±2,1г. Наименьший показатель в данной группе отмечали на 14-е сутки опыта- 159,18±2,39г, что было в 1,5 раза меньше, чем в группе Физиологического контроля.
Показатели массы тела в группе облучённых крыс которым скармливали БАД «Ламинария-плюс» начиная с 1-х суток опыта повышались на 66,5% по отношению ко 2-й опытной группе и на 64% по отношению к группе физиологического контроля. Начиная с 6-х суток опыта в группе облучённых крыс с применением БАД регистрировали незначительное снижение мае сы тела до 187,25±1,23г, тогда как у животных из 2-й опытной группы масса тела животных находилась на уровне 140,00±6,01г, что на 74,7% ниже, по от ношению к данным в 4-й опытной группе. Наименьшее значение по массе те ла у крыс из 4-й опытной группы отмечали на 10-е сутки эксперимента 180,15± 1,42г. Начиная с 14-го дня опыта в группе облучённых животных которым скармливали препарат «Ламинария-плюс» регистрировали увеличение массы тела экспериментальных животных. На момент завершения эксперимента масса тела крыс из 4-й опытной группы находилась на уровне -190,23±3,6г, что было на 97,7% выше, чем во 2-й опытной группе.
Основной задачей постановки эксперимента было, изучение радиозащитных свойств препарата «Ламинария-плюс» в условиях экспериментального облучения крыс. Из данных таблицы 5 видно, что в группе контрольно облучённых животных гибель крыс регистрировали, начиная с 3-х суток эксперимента, тогда как, в группе облучённых животных, которым скармливали БАД «Ламинария-плюс» гибель отмечали к 6-му дню опыта. К 14-м суткам (к моменту гибели крыс) во 2-й опытной группе выжило 12 особей, тогда как в 3-й опытной группе 30 особей из 50. К моменту завершения опыта (30-е сутки) летальность во второй группе составила 100%. В группе с применением препарата «Ламинария - плюс», на момент завершения эксперимента выживаемость крыс составила 50%, что свидетельствует о наличии эффективных радиозащитных свойств исследуе ого препарата.
Результаты гематологических исследований
Основным признаком при воздействии ионизирующего излучения на живой организм является поражение кроветворной системы. Существуют общие закономерности в изменениях качественного и количественного состава периферической крови под воздействием радиации. Известно, что снижение количества форменных элементов наступает тем раньше и интенсивней, чем больше доза облучения. Как видно из данных, представленных в таблице 6, в 1-е сутки после облучения содержание эритроцитов у животных из 3-й опытной группы было на уровне 5,30±4,40х10 7л, что было ниже по сравнению с физиологически здоровыми необлучёнными особями из 1-й группы на 3,1%, а по сравнению с необлучёнными получавшими БАД «Ламинария - плюс» из 2-й группы-ниже на 10,9%. В это же время уровень эритроцитов у облучённых крыс, получавших препарат «Ламинария-плюс» из 4-й опытной группы составлял 5,45±0,20х10 "/л, что было ниже по отношению к данным полученным в 1-й и 2-й группах, на 8,6% и на 16,0 %, соответственно.
На 14-е сутки содержание эритроцитов у облучённых крыс из 3-й груп-пы было резко снижено (2,5 раза) и составило 2,70±0,53х10 "/л, т.е. на 60,1% меньше, чем у особей из 1-й группы и на 47,5% чем — во 2-й группе. Тогда как в это в это время у животных из 4-й опытной группы регистрировали уве-личение содержания эритроцитов до 5,50±0,82х10 "/л, что по отношению к этому параметру у крыс из 1-й группы было ниже на 18,6% и, по сравнению с показателем у особей из 2-й группы - выше на 7%.
Уровень гемоглобина в 1-е сутки, после облучения составлял у крыс из 3-й опытной группы 98,00±4,50г/л, что было ниже, по сравнению с 1-й и 2-й группами на 17,6% и 27,4% соответственно. В 4-й опытной группе содержание гемоглобина было на уровне 110,00±2,82 г/л, что было ниже, по сравнению с 1-й и 2-й на 7,6% и 18,5%, соответственно. На 14-е сутки с момента облучения регистрировали тенденцию снижения гемоглобина во всех группах, за исключением 2-й группы. Так, содержание гемоглобина, у облучённых животных из 3-й опытной группы составляло 64,00±1,60г/л, что было ниже на 31,9% и 52,6%, по сравнению с этим показателем у крыс из 1-й и 2-й групп. У крыс из 4-й опытной группы на 14-е сутки, уровень гемоглобина составлял 94,00±9,80г/л, что было ниже по сравнению с 1-й и 2-й группами на 14,6% и 30,4%, соответственно.
На 30-е сутки у крыс, получавших Б АД «Ламинария -плюс» из 4-й Опытной группы, уровень гемоглобина составлял 106,07±2,40г/л, что было ниже на 8,6% по сравнению с физиологически здоровыми животными и на 35,0% ниже по сравнению со здоровыми крысами, получавшими препарат «Ламинария-плюс».
Цветовой показатель в 1-е сутки после облучения составлял 0,75±0,02 у животных из 3-й группы, что было ниже по сравнению с этим показателем в 1-й и 2-й группах, на 13,8% и 21,9%, соответственно. Тогда как, в 4-й группе, где применяли препарат «Ламинария-плюс» этот показатель был достоверно выше, чем в 1-й и 2-й группе, в 2 раза и составлял 1,80±0,01.
К 14-м суткам с момента облучения цветовой показатель был выше у крыс из 3-й и 4-й группы по сравнению с физиологически здоровыми животными из 1-й в 1,8 и 1,2 раза. Тогда как, по отношению к крысам из 2-й группы (здоровые животные получавшие БАД) уровень цветового показателя был выше у особей из 3-й группы в 1,4 раза и ниже у животных из 4-й группы на 5,9%.
Примечание: Различия достоверны: - р 0,05; р 0,01 1-физиологический контроль; 2-здоровые животные, которым скармливали препарат «Ламинария-плюс»; 3- облучённый контроль; 4- крысы, которым до облучения в рацион вводили препарат «Ламинария-плюс» Самым знаковым результатом было изменение уровня лейкоцитов. Как видно из данных таблицы 6, содержание лейкоцитов у облучённых крыс из 3-й опытной группы в 1-е сутки было на уровне 2,70±0,90х10 /л, что было ниже по сравнению со здоровыми животными получавшими Б АД в -5,8 раза. Уровень лейкоцитов у крыс из 4-й опытной группы составлял 5,40±0,40х109/л, что было ниже по сравнению с этим показателем у особей из 1-й и 2-й групп в 2,3 и 3 раза, соответственно. На 14-е сутки регистрировали наименьший уровень лейкоцитов у крыс из 3-й опытной группы -0,72±0,21х109/л, что было ниже по сравнению с 1-й и 2-й группами в 19,5 и 26,2 раза, соответственно. Тогда как у животных из 4-й опытной группы разница была существенно ниже. Так по сравнению с 1-й группой в 1,7 раза, а со 2-й группой в 2,3 раза.
На 30-е сутки с момента облучения уровень лейкоцитов у облучённых крыс, получавших препарат «Ламинария-плюс» восстанавливался и был на уровне 14,19±0,30х109/л, что было выше, чем у здоровых животных из 1-й группы на 4,3% и ниже по сравнению с особями из 2-й группы (здоровые получавшие Б АД) на 27,4%.
