Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 8
1.1 Понятие молекулярного маркера и основные типы
маркерных систем 8
1.2 ДНК-полиморфизм на основе использования различных маркерных систем 11
1.3 Использование ДНК маркеров в селекции и генетике винограда ., 21
1.4 Основы клоновой селекции 27
2. Условия, объекты и методика проведения исследований 32
2.1 Исходный материал и методы описания 32
2.2 Почвенно-климатические условия района проведения исследований 35
2.3 Метеорологические условия в годы наблюдений 38
2.4 Подготовка растительного материала и экстракция ДНК.. 41
2.5 Молекулярные маркеры, использованные в работе 42
2.6 Проведение полимеразной цепной реакции и электрофореза продуктов амплификации 43
2.7 Анализ электрофореграмм 45
2.8 Статистическая обработка данных 46
3. Экспериментальная часть 48
3.1 Биометрическая оценка морфологических признаков сравниваемых генотипов винограда 48
3.2 Анализ агробиологических показателей сравниваемых генотипов винограда 56
3.3 Анализ устойчивости сравниваемых генотипов винограда к вредителям и грибным болезням 67
3.4 Технологическая оценка вина сравниваемых генотипов винограда , 71
3.5 Анализ генетического разнообразия сортов и клонов винограда ампелографической коллекции КубГАУ с использованием полиморфизма микросателлитных маркеров 74
3.6 Ампелографическое описание исследуемых генотипов винограда 87
Выводы 101
Предложения для практической селекции 104
Список используемых терминов и сокращений...
- ДНК-полиморфизм на основе использования различных маркерных систем
- Использование ДНК маркеров в селекции и генетике винограда
- Метеорологические условия в годы наблюдений
- Анализ устойчивости сравниваемых генотипов винограда к вредителям и грибным болезням
Введение к работе
Актуальность проблемы. Виноград является многолетней вегетативно размножаемой культурой и одним из наиболее возделываемых растений в мире. Эта культура выделяется большим генетическим разнообразием, поэтому характеристика и идентификация популяции являются важным шагом в познании биологии винограда для использования ее особенностей на практике [20].
С точки зрения генетики виноград как объект исследований является многолетним аллогамным поликарпическим полигетерозиготным вегетативно размножаемым растением, характеризующимся продолжительностью генераций при половом размножении и высоким полиморфизмом. Эти особенности обуславливают широкие возможности к самоопылению, неограниченное вегетативное размножение, легкость скрещивания представителей видов рода Vitis L., проявляющийся спонтанный мутагенез (именно поэтому необходима клоновая селекция), плохую всхожесть семян и др. [48, 50].
Исторический взгляд и биометрическая информация, комбинированная с ампелографическими данными, часто используется для описания возделываемых сортов и определяет их взаимосвязи. Однако выводы, базирующиеся на этих данных, часто вызывают вопросы, достаточно много ошибок делается при идентификации сортов и клонов. Синонимы и омонимы требуют тщательной проверки на генетическом уровне.
Возможности молекулярных средств, показывающие взаимосвязи между геномами растений, предоставляют ответ на эти и другие вопросы. Некоторые из наиболее используемых средств уже доказали свою эффективность при исследованиях культуры винограда.
Именно развитие и применение ДНК-технологий изменяет суть генетики винограда. ДНК-маркеры способствуют исследованию происхождения
изучаемых культур и представляют собой мощное средство для идентификации генотипов винограда.
Среди всех генетических маркеров микросателлиты являются самым мощным типом ДНК-маркеров, предоставляя уникальную генетическую структуру по каждой культуре, что позволяет более точно идентифицировать исследуемые популяции и группы растений.
Это связано с тем, что они являются локус-специфичными и кодоминантными, отсюда микросателлитные маркеры позволяют определить взаимосвязь между видами или родами и дают возможность гипотетически определить ареал происхождения самых популярных и важных мировых винных сортов.
Генетическое картирование винограда только сейчас получило распространение, а генотипирование клонов - совсем недавно. Длительный срок возделывания, генетическая гетерозиготность и недостаток обычных морфологических генетических маркеров препятствовали картированию в прошлом. Сейчас молекулярные маркеры являются базовыми, ускоряющими процессы отбора и размножения винограда на раннем этапе селекции. Генетическое картирование в комбинировании с физическим изучением может позволить найти гены, контролирующие важные процессы, механизм которых еще неизвестен. Другие гены винограда будут изучены с помощью сравнения полученной ДНК-последовательности с большой базой данных хорошо охарактеризованных генов из других популяций растений.
Методы ввода генов в виноград или другие организмы сейчас хорошо представлены и описаны и позволяют создавать модификации в существующих генотипах. Они могут дать возможность устранить болезни и уменьшить использование пестицидов при классическом культивировании винограда без изменения основных атрибутов вина, производимого из этих сортов [81].
Объективно возрастающая потребность в пополнении сортимента винограда и недостаточная разработанность теоретического аспекта изучения
полиморфизма популяций как элементарной единицы процесса эволюции, способной реагировать на изменения среды перестройкой своего генофонда обусловили выбор темы диссертационного исследования.
Цель и задачи исследования. Целью работы является изучение полиморфизма черноягодных популяций винограда для отбора высокопродуктивных клонов на основе использования ампелографических и молекулярно-генетических методов.
В связи с этим в ходе исследований были поставлены следующие задачи:
Провести сравнения клонов у черноягодных популяций Каберне-Совиньон и Мерло по морфологическим параметрам листьев как основным ампелографическим признакам.
Изучить агробиологические и технологические показатели клонов двух черноягодных популяций Каберне-Совиньон и Мерло.
Проанализировать полевую устойчивость популяционных групп Каберне-Совиньон и Мерло к основным грибным болезням и вредителям.
Оценить уровень полиморфизма у клонов и сортов в обеих популяциях на основе использования полиморфизма микросателлитных локусов.
Исследовать генетические взаимосвязи в популяциях Каберне-Совиньон и Мерло и с помощью микросателлитных маркеров.
Описать исследованные клоны винограда по ампелографической схеме и передать лучшие их них на госиспытания в Российской Федерации.
Научная новизна исследований. Впервые в отечественном виноградарстве с помощью микросателлитных маркеров паспортизированы черноягодные популяции винограда Каберне-Совиньон и Мерло, выполнена оценка генетического родства клонов и их исходных сортов, описаны по ампелографической схеме 4 клона Каберне-Совиньона и 3 клона Мерло.
Основные положения выносимые на зашиту:
Оценка изменчивости морфологических признаков листьев клонов у популяций Каберне-Совиньон и Мерло.
Сравнение клонов двух черноягодных популяций винограда по агробиологическим и технологическим показателям.
3. Анализ полиморфизма у клонов и сортов обеих популяций.
Научно-практическая ценность работы. Модифицированная методика
оценки генетической дистанции между клонами и сортами винограда позволила дифференцировать популяции Каберне-Совиньон и Мерло, произрастающие в коллекции учхоза «Кубань» КубГАУ, по комплексу признаков отобран высокопродуктивный клон Каберне-Совиньон-14 и передай на госиспытания в Российской Федерации под названием Кабернек, подтвержден статус ранее переданных на госиспытания клонов Мерло Грамотенко и Рислиналк.
Апробация работы. Результаты исследований доложены на заседаниях кафедры, научных конференциях и региональных научно-практических конференциях молодых ученых КубГАУ (2003-2005 гг.), на международном симпозиуме в университете Удины (Италия, 2006), во время стажировки в Исследовательском центре герцогства Люксембург. За активное участие в научных исследованиях по приоритетным направлениям развития агропромышленного комплекса получена грамота.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 работ и поданы две заявки на изобретения.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения и обсуждения результатов, выводов и предложений, списка литературы и приложений. Работа изложена на 164 страницах IBM-текста, содержит 17 таблиц и 35 рисунка. Список литературы включает 186 наименований, в том числе 125 иностранных авторов.
ДНК-полиморфизм на основе использования различных маркерных систем
В настоящее время ДНК-технологии широко используются для разработки методов управления потоком генетического материала (селекция с помощью молекулярно-генетических маркеров — MAS, в этих целях — картирование, маркирование главных генов количественных признаков — QTL; сохранение биоразнообразия с использованием молекулярно-генетических маркеров; разработка генетически обоснованных программ разведения и подбора родительских форм животных с учетом данных экологической генетики), для создания новых форм животных в целях получения «биореакторов» (продуцентов терапевтически важных для человека белков), изучения генетических механизмов развития и предупреждения различных заболеваний (онкопатологий, устойчивости к канцерогенезу, различных моно - и полигенных генетически детерминированных заболеваний, повышения эффективности ксеногенной трансплантации органов, генной терапии при использовании трансгенных соматических клеток), а также для фундаментальных исследований структурно-функциональной организации генетического материала, межгенных взаимодействий (создание генных конструкций с включением структурно-функциональных элементов и анализ их регуляторных эффектов на экспрессию различных генов), большие перспективы для детального картирования хромосом, идентификации генов, их клонирования и конструирования новых сортов растений,
С введением молекулярных маркеров в практику биологических исследований появились новые возможности изучения генетического разнообразия, определения родства на внутри- и межвидовом уровне.
Использование маркеров - "сигналий", изменчивость которых связана с признаками, важными для селекционеров, началось с работ А.С.Серебровского в 1926 году. В дальнейшем оказалось, что наиболее удобными маркерами являются полиморфные варианты белков (маркеры структурных генов) и фрагментов ДНК (различные участки структурных генов, анонимные последовательности ДНК) [7].
Среди более широко распространенных методов выявления полиморфизма последовательностей ДНК выделяют следующие: - анализ полиморфизма длин рестриктных фрагментов ДНК (ПДРФ или RFLP); - анализ полиморфизма с помощью ПЦР (RAPD, ISSR, AFLP, SSR). Использование полиморфизма длины рестриктных фрагментов является основным методом молекулярного маркирования без применения ПЦР. Для анализа полиморфизма по длине рестриктных фрагментов (restriction fragment length polymorphism-RFLP) выделенная из растительных тканей ДНК «разрезается» специфичными бактериальными ферментами - рестриктазами, мишенью для которых служат короткие специфические последовательности ДНК-сайты рестрикции. Продукты рестрикции разделяют электрофоретическим методом в агарозном геле, длина и концентрация геля зависит от диапазона длин распределяемых фрагментов [24].
После электрофоретического разделения их переносят из агарозного геля на нейлоновую мембрану с помощью Саузерн-блоттинга, «проявляют» путем гибридизации с радиоактивными зондами-фрагментами ДНК и затем анализируют по положению на радиоавтографах [57,58].
В качестве зондов могут служить случайные продукты рестрикции геномной ДНК, однако чаще всего используют специально отобранные клоны уникальных и редко повторяющихся последовательностей ДНК, применяемых для составления молекулярных карт геномов и физического картирования генов [85,93,150,176,182].
При селекции с помощью ДНК-маркеров (олигонуклеотиды, RFLP, VNTR) имеются следующие принципиальные преимущества: наследование происходит по законам Менделя по типу кодоминирования, что делает возможным непосредственный анализ генотипа и позволяет различать гомо- и гетерозигота; путем подбора соответствующих зондов в сочетании с различными рестрикционными энзимами может быть идентифицировано множество вариантов ДНК; информативные ДНК-зонды распределяются по всему геному (функциональные и нефункциональные области), что позволяет вслед за геном выбрать хромосомный регион, а затем и признак. Если имеются в наличии необходимые полиморфные ДНК-маркеры, которые с достаточной плотностью распределяются по всему геному, становится возможным маркирование всего генома. Это позволяет проводить анализ сцепления, пользуясь насыщенными генными картами; - также к преимуществам RFLP-анализа можно отнести его универсальность и высокую воспроизводимость.
С применением данной маркерной системы составлены генетические карты для многих видов растений. Генетическая карта винограда была построена с использованием 8 RPLP-проб в рамках программы сравнения маркеров RFLP, AFLP и SSR [78]. Другие генетические карты были простроены для интерспецифических гибридных популяций Cayuga White X Aurore [138, 139]. Также эта техника использовалась для определения сортовой идентификации винограда и подвоев, клоновой идентификации [70, 71, 72, 73, 109, 165, 170, 171, 184]. Составление таких карт требует больших затрат времени, труда и ресурсов, что зачастую ограничивает выполнение такого рода работ. Наряду с этими ограничениями существует еще ряд факторов, сдерживающих широкое использование данной маркерной системы.
Использование ДНК маркеров в селекции и генетике винограда
Микросателлитные маркеры недавно стали одним из лучших типов ДНК-маркеров для идентификации культуры винограда, и их возможности обширны при сортовой идентификации, базируемой на использовании разнообразных частей виноградного растения для определения предков и конструирования генетических карт.
В настоящее время получение характеристик сортов связано с анализом их по комплексу количественных и качественных морфологических признаков, принятых Международной организацией винограда и вина (окраска цветка и ягоды, форма и тип опушения листовой пластинки, длина побега и др.). Однако полигенное наследование большей части этих признаков затрудняет интерпретацию полученных результатов. По мнению большинства исследователей, проблема идентификации видов и сортов винограда останется неразрешенной до тех пор, пока не будут применены молекулярно-генетические критерии [104,185],
Традиционные методы идентификации сортов, изучение изменчивости и таксономии винограда, ампелографии и ампелометрии обычно базируются на описании морфологических различий сортов [47]. Однако несколько ограничений накладываются на эти методы. 1. В течение вегетационного периода необходимо использование взрослых листьев. 2. Вызревшие черенки имеют лишь несколько (обычно 4) градаций морфологии. 3. Фенотипы растений очень сильно взаимодействуют с окружающей средой. Различные условия внешней среды могут вызывать морфологические изменения, касающиеся ампелографических признаков, внося свой вклад в ложную идентификацию [121,158,159]. 4. Общее количество сортов винограда в ампелографических коллекциях насчитывается до 42000, большинство из них является результатом мутации или рекомбиногенеза, и количество сортов постоянно увеличивается. Если даже сосредоточить все растения в идеальных условиях, будет тяжело дифференцировать все морфологические характеристики [62, 63,146]. 5. Использование ампелографических методов требует знания индивидуальных особенностей каждого сорта в отдельности, однако никто не имеет доступа и необходимых знаний о тысячах разных сортов, возделываемых по всему миру, просто из-за того, что не каждая коллекция может содержать полностью все генетические ресурсы своего региона. Ампелографы обычно знают сорта винограда, которые используются в их регионе, и менее знакомы с сортовым составом в других регионах. Частично недостатки традиционных методов оценки генотипов компенсируются использованием комплекса ампелографических признаков [49,51,53].
Вопросы идентификации генотипов винограда не менее важны и в процессе клоновой селекции. Чрезвычайно сложно дифференцировать генотипы, являющиеся модификантами в популяции сорта, фенотип которого изменчив в зависимости от результатов взаимодействия генотип-среда. При этом ставится задача выявления генотипических вариаций среди массы фенотипически близких высокопродуктивных растений [53].
Именно развитие ДНК-маркеров позволило изменить такое состояние и дало возможность легко идентифицировать сорта до такой степени, что можно использовать людей без специальной ампелографической подготовки. Результаты не только объективны, но они также не зависят от условий окружающей среды и болезней, присутствующих в растениях. ДНК-маркеры стали одним из полезных средств, позволяющих решать во многих случаях проблемы, связанные с синонимами и неправильным названием [98, 128, 130, 133, 143]. По этой причине требуются альтернативные методы сортовой и клоновой идентификации, которые бы лучше иллюстрировали различия на генетическом уровне [52].
Среди основных направлений использования молекулярных маркеров при работе с генетическими ресурсами растений можно выделить следующие.
1. Интродукция генетических ресурсов растений: поиск нового разнообразия для привлечения в коллекцию; контроль процесса включения нового образца в коллекцию (для предотвращения дублирования).
2. Структура коллекции: выяснение с использованием молекулярных маркеров внутривидовых связей и межвидовых отношений; анализ родства видов и генотипов для наиболее эффективного подбора родительских пар при гибридизации.
3. Создание коллекций на основе использования молекулярных маркеров: идентификация и регистрация образцов коллекции; формирование стержневых коллекций; контроль генетической стабильности при создании коллекций in vitro.
4. Охрана авторских прав: идентификация и регистрация источников и доноров ценных признаков, решение спорных вопросов авторства сортов и образцов растений [20].
За последние 20 лет разнообразные методики по молекулярному маркированию использовались для решения многих из этих задач на уровне ДНК [3,103,117].
Следует отметить широкое использование молекулярных маркеров для оценки степени генетического родства культурных форм и оценки генетического разнообразия коллекций сортов.
Метеорологические условия в годы наблюдений
Урожай следует рассматривать и оценивать как их функцию. Если подсчитать влияние экзогенных факторов, то урожай винограда на 80 - 83 % зависит от почвенных и агротехнических показателей и на 13 - 15 % - от климатических условий. Поэтому немаловажно при изучении новых сортов учитывать влияние природных факторов, их изменений в различные годы, а также в течение вегетационного периода [43].
В данной работе велись наблюдения за техническими сортами в период с 2003 по 2005 гг. в учхозе «Кубань».
Краснодар входит в третью агроклиматическую зону. Поэтому климат характеризуется резко выраженным годовым ходом температуры. На территории города Краснодара зима малоснежная, с частыми оттепелями. Преобладающими ветрами являются ветры северо-восточного направления, зимой они относительно холодные, а в весенне-летний период они носят суховейный характер. Весна затяжная, возможны заморозки. Лето отличается аномально высокими температурами и выпадением осадков ливневого характера. Осенний период характеризуется теплой погодой и повышенными нормами выпадения осадков.
По данным Краснодарской метеостанции (табл. 3 и 4), среднегодовая температура воздуха (+12,2 С), на период исследований, на 1,6 С превышала среднемноголетнюю. Зима была теплой, среднемесячная температура воздуха за декабрь, январь и февраль на 4,4 С превышала многолетнюю.
В весенние месяцы среднемесячные температуры воздуха были близки к среднемноголетним: апрель теплее, а май прохладнее обычного. В летние месяцы стояла более жаркая погода.
Для выделения ДНК использовали листья вышеперечисленных генотипов, которые были собраны с кустов в учхозе «Кубань» и помещены в азот при - 70 С0. Экстракцию ДНК проводили, используя СТАВ-метод, модифицированный по следующей схеме [140].
Листья растирали в жидком азоте до состояния светло-зеленой пудры, которую затем вносили в микропробирки с прогретым до 60 С0 2хСТАВ буфером, содержащим 2 % СТАВ (цетилтриметиламмоний бромид), 1,4 М хлористого натрия, 0,1 М трис-гидрохлорид, 20мМ ЭДТА (этилендиаминотетраацетат). При этом соблюдали соотношение 500 мкл буфера на ОД г ткани. Образцы прогревали 3 часа при 60 С0, после чего вносили равный объем хлороформа и инкубировали при перемешивании в течение 20 минут. На следующем этапе образцы центрифугировали 10 минут при 5 тыс.об. мин., отбирали супернатант и добавляли к нему 0,2 V 5 СТАВ буфера, содержащего 5 % СТАВ и 350мМ ЭДТА и инкубировали 10 минут при 60 Сс. После инкубации в пробирки с образцами вносили равный объем хлороформа и инкубировали при перемешивании 20 минут, центрифугировали 10 минут при 5 тыс. об./мин., отбирали верхнюю фазу в чистую пробирку, добавляли равный объем буфера для преципитации (1% СТАВ, 50мМ Трис-HCI, ЮмМ ЭДТА) и оставляли на ночь при комнатной температуре. После преципитации ДНК осадок растворяли в 500 мкл солевого буфера (1 М NaCI, ЮмМ Трис-HCI, 1мМ ЭДТА), добавляли 1 мл этилового спирта (96 %) и ставили при -20 С на 2-3 часа. По истечении этого времени центрифугировали образцы 10 минут при 13 тыс. обУмин., после чего осадок промывали 70 % этиловым спиртом, высушивали и растворяли в 100 мкл. стерильной дистиллированной воды.
Концентрацию выделенной ДНК определяли спектрофотометрически по стандартной методике [26], а также методом разведений полученных препаратов с последующим их электрофорезом в 2% агарозном геле, содержащем 1 мкг/мл бромистого этидия и визуализацией в ультрафиолете. При этом исходили из того, что порог чувствительности бромистого этидия в агарозных гелях составляет 10 нг ДНК [31].
Для анализа генетического разнообразия генотипов коллекции учхоза «Кубань» были использованы 6 нейтральных микросателлитных (SSR) маркеров: VRTAG79, VVMD5, VVMD7, VVMD27, VRZAG62, VVS2 [76, 77, 158,170,171]. Праймерные пары, фланкирующие указанные микросателлитные локусы, были синтезированы фирмой ЗАО «Синтол», Россия (табл. 5). В ходе работы по отбору микросателлитных маркеров, полиморфных между исследуемыми генотипами для всех маркеров, были использованы одинаковые условия ПЦР, позволяющие получить максимальное количество продукта реакции. Наряду с этим, при таких условиях реакции возможен повышенный выход неспецифически-амплифицированных фрагментов, однако, для определения наличия - отсутствия разницы в размерах продуктов реакции, а не ее величины, это не является серьезной помехой.
Ниже приведены параметры ПЦР, использованные в данном эксперименте: - 9 минут при 94 С0 - начальная денатурация, затем следующие 35 циклов: - 30 секунд денатурация при 94 С0; - 1 минута отжиг праймеров при 55 С0; - 2 минуты синтез при 72 С0; - последний цикл синтеза 5 минут при 72 С0.
ПЦР смесь включала 10 нг /ДНК, 2,5 mM MgCI2, 0,2 тМ дезоксинуклеозидтрифосфатов (dNTPs), 50 mM KCI, 10 тМ Tris-HCI, рН 9,0, 0,1 % Тритон Х-100, 0,23 цМ каждого праймера, 0,25 единицы Taq-полимеразы, в общем объеме 5мкл. Амплификация была проведена в амплификаторе Chassis Express фирмы Thermo Hybaid.
Продукты амплификации разделяли электрофорезом в 3 % агарозном геле, на основе 0,5хТрис-боратного буфера (0,045 М Трис, 0,045 М Борной кислоты, 1 мМ ЭДТА, рН=8,2) при напряжении 120V в течение 2,5 часов, в камерах для горизонтального электрофореза Sub Cell GT фирмы ВІо-Rad.
Для электрофореза использовали весь реакционный объем (5 мкл), который смешивали с 1 мкл неденатурирующего буфера нанесения (40 % сахароза, 0,025 % бромфеноловый синий, 0,025 % ксилен цианол) и наносили в лунки геля под слой электродного буфера. В качестве электродного буфера использовали также 0,5 хТрис-боратный буфер. После проведения электрофореза гелевые пластины помещали на 20 минут в раствор бромистого этидия 5 мкг/мл, и фотографировали в ультрафиолете.
Определение степени генетического родства с применением микросателлитных маркеров требует определения точной разницы в размерах амплифицйрованного участка ДНК у исследуемых сортов, поэтому необходим более детальный подход к установке параметров ПНР, прежде всего это относится к температуре отжига праймерной пары. В связи с этим, экспериментально были подобраны оптимальные условия ПНР, обеспечивающие высокий выход амплифицйрованного продукта наряду с минимальным количеством неспецифики: - 5 минут при 94 С0 - начальная денатурация, затем следующие 30 циклов: - 30 секунд денатурация при 94 С0, - 30 секунд отжиг праймеров при N С0, - 30 секунд синтез при 72 С0; - последний цикл синтеза 3 минуты при 72 С0.
Где N=50 С0 для маркеров VrZag 62 и VrZag79; 52 С0 для маркера VVS2; 55 С0 для маркеров VVMD5 и VVMD7; 56 С0 для маркера VVMD27. Изначально температура отжига праймеров была рассчитана по формуле DieffenbachC.W.[76]:
Т = 4 С0 х (G + С) + 2 С0 х (А + Т) - 3, где G, С, А, Т - количество гуанидиновых, цитозиновых, адениновых и тиминовых оснований соответственно. Затем оптимальную температуру для каждой праймерной пары отбирали путем уменьшения или увеличения ее, в зависимости от качества получаемого ПЦР-продукта.
Анализ устойчивости сравниваемых генотипов винограда к вредителям и грибным болезням
Технический (винный) сорт для производства высококачественных красных сухих и десертных вин. Сорт-клон отобран из произраставших в агрофирме «Фаногория» Темрюкского района (гор. Новороссийск) Краснодарского края кустов промышленных насаждений сорта Каберне-Совиньон, посаженных в 1996 году, как выделяющийся лучшей продуктивностью и эффектными внешними данными, В сравнении с исходным сортом Каберне-Совиньон-15Б заметно отличается высокой продуктивностью и отличным качеством сырья и продуктов переработки, более крупной гроздью и умеренно плотным ее сложением при несколько более сильном росте побегов.
Ныне сорт возделывается: в АФ «Фаногория» Темрюкского - 10, в безвирусном корнесобственном маточнике Крымской ОСС ВИР - 10 кустов, на виноградно-орехоплодном госсортоучастке в учхозе «Кубань» Кубанского ГАУ - 10 кустов, итого 30 кустов.
Площадь питания кустов на виноградно-орехоплодном госсортоучастке 3 х 1 м. Форма ведения кустов - односторонняя веерная бесштамбовая. Шпалера вертикальная одноплоскостная высотой 1,8 м с 3 ярусами проволок. Нагрузка кустов при обрезке в среднем 30 глазков. Оптимальная длина обрезки плодовых стрелок клона-сорта Каберне Мысхако 8 глазков. Средняя нагрузка кустов побегами после обломки - 20-25.
Урожайность - 30 ц/га, при сахаристости ягод 21,4 г/100 см3 и титруемой кислотности 8,2 г/дм . Дегустационная оценка столовых вин 7,6-7,9 балла. Средняя масса грозди 107 г, на 23 % больше сорта Каберне-Совииьон.
Лист средней величины, округлый, глубоко или среднерассеченный, пятилопастный, реже семилопастный, с налегающими лопастями и характерными для сорта просветом. Боковые лопасти часто закрытые с типичным для Каберне-Совиньон округлым просветом ("прострелом"). Верхняя поверхность пластинка листа шагреневая сетчато-пузырчатая, нижняя - со слабым паутинистым опушением. Черешковая выемка открытая, лировидная, иногда закрытая, с плоским дном и округлым просветом. Гроздь средняя и выше средней, цидиндро-коническая, изредка крылатая, средней плотности и плотная. Ягода средняя, округлая и круглая, сине-черная, сочная мякоть, с ярко выраженным пасленовым привкусом (Рис 15-17).
Технический (винный) сорт для производства высококачественных красных сухих и десертных вин. Сорт-клон отобран из произраставших в Крыму кустов промышленных насаждений сорта Каберне-Совиньон, посаженных в 1980-х годах, как выделяющийся лучшей продуктивностью и эффектными внешними данными. В сравнении с исходным сортом Каберне-Совиньон-5А заметно отличается высокой продуктивностью и отличным качеством сырья и продуктов переработки, более крупной гроздью и умеренно плотным ее сложением при несколько более СИЛЬНОМ росте побегов.
Ныне сорт возделывается: в Крыму - 20 кустов, в безвирусном корнесобственном маточнике Крымской ОСС ВИР - 5 кустов, на ампелографической коллекции ННИИВиВ "Магарач"- 10 кустов, на виноградно-орехоплодном госсортоучастке в учхозе «Кубань» Кубанского ГАУ - 20 кустов, итого 55 кустов.
Площадь питания кустов на виноградно-орехоплодном госсортоучастке 3 х 1 м. Форма ведения кустов - односторонняя веерная бесштамбовая. Шпалера вертикальная одно плоскостная высотой 1,8 м с 3 ярусами проволок. Нагрузка кустов при обрезке в среднем 30 глазков. Оптимальная длина обрезки плодовых стрелок клона-сорта Каберне 5А 8 глазков. Средняя нагрузка кустов побегами после обломки - 20-25,
Урожайность - 30 ц/га, при сахаристости ягод 19 г/100 см3 и титруемой кислотности 6,65 г/дм Дегустационная оценка столовых вин 7,5-7,8 балла. Средняя масса грозди 75 г.
Лист средней величины, округлый, иногда вытянутый, очень глубокорассечениый, пятилопастный, реже семилопастный, с налегающими лопастями, образующими липсовидные или округлые просветы с плоским дном. Верхняя поверхность пластинка листа шагреневая сетчато-морщинистая, нижняя - со слабым паутинистым опушением. Черешок короче срединной жилки. Черешковая выемка чаще закрытая с овальным или треугольным просветом, реже открытая, лировидная. Иногда дно ограничено жилками. Гроздь средняя, цилиндро-коническая, , средней плотности и плотная. Ягода средняя, округлая и круглая, сине-черная, сочная мякоть, с ярко выраженным пасленовым привкусом (Рис. 18-20).
Технический (винный) сорт для производства высококачественных красных сухих и десертных вин. Отобран из произраставших в ПОХ «Магарач» Бахчисарайского района Автономной Республики Крым кустов сорта Мерло, которые были посажены на ампелографической коллекции в качестве вегетативного потомства выделенного Л.П.Трошиным лучшего по продуктивности растения в насаждении, заложенном в 1964 г, по инициативе кандидата с.-х. наук П.М.Грамотенко.
В сравнении с исходным французским сортом Мерло-2 № 49 заметно отличается высокой продуктивностью и отличным качеством сырья и продуктов переработки, более крупной гроздью и умеренно плотным ее сложением при несколько более сильном росте побегов.
Сорт-клон Мерло-2 № 49 возделывается: в безвирусном корнесобственном маточнике Крымской ОСС ВИР - 17 кустов, на клоноиспытательном участке филиала кафедры виноградарства КГАУ «Кубаньвиноградселекция» - 15 кустов, на вияоградно-орехоплодном госсортоучастке в учхозе «Кубань» Кубанского ГАУ - 10 кустов, итого 42 куста. Площадь питания кустов на госсортоучастке 3 х 1 м. Форма ведения кустов -односторонняя веерная бесштамбовая. Шпалера вертикальная одноплоскостная высотой 1,8 м с 3 ярусами проволок. Нагрузка кустов при обрезке в среднем 30 глазков. Оптимальная длина обрезки плодовых стрелок клона-сорта Мерло-2 № 49 7-8 глазков. Средняя нагрузка кустов побегами после обломки - 20.
Средняя урожайность клона 111 ц/га (у родительского сорта - 82,0 ц/га) - на 36 % выше сорта Мерло. Сахаристость при сборе урожая в конце сентября 18,8 г/см3 при титруемой кислотности 6,8 г/дм . Средняя масса грозди клона 128 г.
Лист средней величины, средне или глубоко рассеченности, пятилопастный, иногда средняя лопасть вытянута в длину, с налегающими друг на друга лопастями, образуя просветы овальной или треугольной формы с округлым дном, часто со шпорцем. Верхняя поверхность листа темно-зеленая, матовая, опушение на нижней стороне листа среднее паутинистое, пузырчатость верхней стороны пластинки средняя. Нижние боковые вырезки открытые, лировидной формы, часто со шпорцем на дне. Черешок равен или короче срединной жилки. Черешковая выемка закрытая, округлая. Гроздь средняя и выше средней, цилиндроконическая, средней плотности и плотная. Ягода средней величины, округлая, темно-синяя, с выраженным пасленовым привкусом. Дегустационная оценка столового вина 7,63 балла (Рис. 21-23).
Похожие диссертации на Изучение полиморфизма черноягодных популяций винограда
