Введение к работе
Актуальность проблемы. Многие патологические процессы периода новорожденности оставляют глубокий след и могут проявиться на любом возрастном этапе всей последующей жизни, несмотря на высокие репаративные возможности организма в раннем постнатальном онтогенезе (Н.Н.Володин, 2008; Г.Н.Чистякова, 2005; Е.В.Аронскинд и др., 2004; Е.В.Шниткова и др., 2000; Ю.И.Барашнев, 2001; M.C.McCornic et al, 1992). В связи с этим, актуально выявить доманифестный критерий состояния здоровья новорожденного ребенка.
Постоянно мигрирующий лимфоцит, представляя собой центральное звено иммунной системы, её функциональную и морфологическую единицу, способен отражать все происходящие в организме изменения (Р.П.Нарциссов, 1978, 1984). В одноименных структурах клеток различных систем и органов (нервная, иммунная, печень, лёгкие и др.) изменения развиваются стереотипно, и процесс восстановления клеточных структур после прекращения патогенного воздействия не зависит от этиологического фактора (Д.С.Саркисов, 1993).
Известно, что характер адаптационных реакций определяется состоянием нуклеиновых кислот: РНК отвечает за кратковременную адаптацию, а ДНК - за долгосрочную (Д.С.Саркисов, 1987, 1993). С учётом данного положения оценка параметров клеточной и внеклеточной ДНК позволяет разработать методы долговременного прогнозирования исходов срыва адаптации у новорожденного ребенка в раннем неонатальном периоде.
Работ, посвященных изучению ядерной ДНК лимфоцитов и внеклеточной ДНК в педиатрической науке и практике, к сожалению, крайне мало. Имеются лишь единичные литературные источники, посвященные исследованию ядерной ДНК у новорожденных (Н.Е.Громада, 2008; В.Ю.Талаев, 1997, 1998, 1999; В.В.Софронов, 1999), но информация, содержащаяся в них, разноречива в силу различных методических подходов с использованием рутинных (качественных и полуколичественных) методов определения нуклеиновой
4 кислоты. Данные, представленные в источниках литературы, немногочисленны, нуждаются в дополнениях и систематизации.
Оценка параметров клеточной и внеклеточной ДНК в раннем неонатальном периоде позволит прогнозировать осложнения адаптации новорожденного ребенка в раннем неонатальном периоде.
Цель исследования. Разработка метода прогнозирования течения периода адаптации у новорожденных различного гестационного возраста на основании результатов изучения особенностей параметров ядерной и внеклеточной ДНК.
Задачи исследования:
В соответствии с основной целью исследования были поставлены следующие задачи:
Исследовать и сравнить цитофлуометрические характеристики ядерной ДНК лимфоцитов у новорожденных различного гестационного возраста;
Исследовать особенности цитофлуометрических характеристик ядерной ДНК лимфоцитов у новорожденных с осложнениями периода адаптации;
Определить концентрацию внеклеточной ДНК у новорожденных различного срока гестации с различными клиническими вариантами течения периода адаптации;
На основании полученных результатов разработать методы прогнозирования течения периода адаптации новорожденных.
Достоверность полученных результатов. Для получения достоверных результатов проведено достаточное количество исследований. Статистическую обработку результатов исследования проводили с помощью табличного редактора Microsoft Excel 2003, Statistica 6.0. Данные, подчиняющиеся закону нормального распределения, представляли в виде среднего значения и стандартного отклонения. Данные, не подчиняющиеся закону нормального распределения, представляли в виде медианы и крайних значений вариационного ряда. Статистическая обработка полученных результатов проводилась с использованием параметрических (критерий Стьюдента) и непараметрических критериев (критерии Манна-Уитни, Ван-дер-Вар дена и
5 Краскела-Уоллиса, предусмотренные для сравнения ранжированных значений, с поправкой Бонферрони для исключения эффекта множественных сравнений). Для оценки связи между признаками применяли коэффициент ранговой корреляции Спирмена. Уровень статистической значимости (р) считался меньше 0,05.Для прогнозирования использовался метод отношения шансов.
Научная новизна:
Получены новые научные данные о параметрах ядерной и внеклеточной ДНК у новорожденных различного гестационного возраста с различными осложнениями периода адаптации.
Научно доказано клиническое значение роли количества гиподиплоидных и гиперплоидных лимфоцитов в формировании адаптационных процессов у новорожденных различного гестационного возраста.
Установлены повышенные уровни гиподиплоидных и гиперплоидных лимфоцитов и концентрации внеклеточной ДНК у новорожденных различного гестационного возраста с различной перинатальной патологией.
С помощью комплексных исследований получены новые данные, которые существенно расширяют возможности раннего прогнозирования осложнений периода адаптации у новорожденных различного гестационного возраста.
Научно-практическая значимость работы:
Получены новые знания о процессах апоптоза и пролиферации лимфоцитов периферической крови новорожденных с разными вариантами течения периода ранней неонатальной адаптации и разными сроками гестации. Результаты исследования могут быть использованы для понимания процесса формирования и становления адаптационных систем у новорожденных и разработки нового теоретического и методологического подхода к ранней диагностике осложнений неонатального периода.
Установлены значения гиподиплоидных и гиперплоидных лимфоцитов и концентрации внеклеточной ДНК 22,5 нг/мл для условно здоровых доношенных новорожденных с неосложненным течением периода ранней неонатальной адаптации.
Рекомендовано применение показателя процентного содержания лимфоцитов крови с гиподиплоидным и гиперплоидным количеством ядерной ДНК при оценке зрелости новорожденных.
Доказана прогностическая значимость увеличения содержания гиперплоидных лимфоцитов при наличии гнойно-воспалительных заболеваний у доношенных новорожденных и детей со сроками гестации 32-34 недели и 31 неделя и менее, а также при перинатальном поражении центральной нервной системы у детей со сроком гестации 35-37 недель.
Разработана теоретическая и методологическая база для нового подхода к прогнозированию осложнений раннего неонатального периода на основе анализа параметров клеточной и внеклеточной ДНК у новорожденных детей.
Научные положения, выносимые на защиту:
Параметры ядерной ДНК лимфоцитов определяются сроком гестации и наличием перинатальной патологии новорожденных;
Параметры внеклеточной ДНК у новорожденных детей определяются гестационным возрастом и наличием перинатальной патологии;
Оценка параметров ядерной и внеклеточной ДНК в раннем неонатальном периоде позволяет прогнозировать осложнения периода адаптации у новорожденного ребенка.
Личный вклад автора в исследование. Приведенные в диссертации данные получены при личном участии автора на всех этапах работы, в том числе автор осуществлял сбор анамнеза, объективное обследование новорожденных детей, проводил забор крови. Изучение состояния популяции лимфоцитов у новорожденных выполнялось на базе иммунологической лаборатории РЦПБ СПИД. Определение концентрации внеклеточной ДНК проводилось на базе лаборатории нуклеиновых кислот кафедры биохимии Казанского государственного университета. Автором лично проведены анализ, статистическая обработка и интерпретация полученных результатов. Формулирование выводов, рекомендаций, положений, выносимых на защиту, также принадлежит лично автору.
Апробация работы. Основные результаты исследований докладывались на ежегодной научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» Казанского государственного медицинского университета (2008 г.), на V Научно-практической конференции «Педиатрия и детская хирургия в Приволжском федеральном округе» (2008), на конференции «BioScience 2006 -bioscience for the 21st century», (23 - 27 July, Glasgow, UK, 2006).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, в том числе 3 статьи в центральных изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией. Общий объем публикаций 1,7 у.п.л., в том числе личный вклад автора составляет 0,7 у.п.л.
Реализация результатов работы. Результаты исследования внедрены в практику работы отделения реанимации и интенсивной терапии новорожденных МУЗ «Детская городская больница №1» г. Казани. Материалы диссертации используются в учебном процессе кафедры пропедевтики детских болезней и факультетской педиатрии с курсом детских болезней лечебного факультета, кафедры госпитальной педиатрии с курсами поликлинической педиатрии и ПДО ГБОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 136 страницах машинописного текста, включает 28 рисунков и 24 таблицы; состоит из введения, 5 глав (обзор литературы, материалы и методы исследования, клинико-лабораторная характеристика, результаты специальных собственных исследований, заключение), выводов, практических рекомендаций, приложения и списка литературы, включающего 250 ссылок, из которых 146 - на отечественные, 104 - на зарубежные работы.
