Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы .
1.1. Характеристика и применение авермектинов в агрохимии и ветеринарии
1.2. Токсичность и остаточные количества авермектинов в пищевых продуктах
1.3. Коррекция морфофункциональных изменений в организме животных фитоадаптогенами .
1.3.1. Состав и свойства фитоадаптогенов, выделенных из бересты березы
2. Собственные исследования .
2.1. Материалы и методы исследований .
2.1.1.Экспериментальные животные и схема опытов .
2.1.2. Исследования периферической крови .
2.1.3. Определение белка и белковых фракций в сыворотке крови
2.1.4. Определение аминотрансфераз
2.1.5.Выделение клеток костного мозга у лабораторных животных
2.1.6. Исследование продуктов перекисного окисления липидов в суспензии клеток костного мозга в тесте с тиобарбитуровой кислой...
2.1.7. Гистологические и морфометрические исследования .
2.1.8. Статистическая обработка результатов .
2.2. Результаты собственных исследований
2.2.1.Морфофункциональные изменения в организме крыс при абиктиновой интоксикации .
2.2.1.1. Морфологические показатели периферической крови при действии абиктина
2.2.1.2. Биохимические показатели периферической крови при действии абиктина .
2.2.1.3. Влияние абиктина на перекисное окисление липидов в клетках костного мозга in vivo
2.2.1.4. Гистологические изменения и морфометрический анализ органов гомеостатического обеспечения при введении абиктина.
2.2.2. Изучение защитного действия фитоадаптогена (ЭББ) при абиктиновой интоксикации .
2.2.2.1. Влияние ЭББ на морфологические показатели периферической крови на фоне абиктиновой интоксикации
2.2.2.2. Влияние ЭББ на биохимические показатели перефирической крови на фоне абиктиновой интоксикации
2.2.2.3. Влияние экстракта бересты березы на перекисное окисление липидов в клетках костного мозга in vivo на фоне абиктиновой интоксикации .
2.2.2.4. Гистологический и морфометрический анализ органов гомеостатического обеспечения крыс при коррекции действия абиктина ЭББ .
3. Обсуждение полученных результатов .
Выводы .
Практические предложения .
Список литературы
- Токсичность и остаточные количества авермектинов в пищевых продуктах
- Состав и свойства фитоадаптогенов, выделенных из бересты березы
- Исследования периферической крови
- Влияние ЭББ на морфологические показатели периферической крови на фоне абиктиновой интоксикации
Введение к работе
Актуальность темы. В сельском хозяйстве нет фактора, более тесно связанного с проблемой охраны природы, особенно охраны здоровья человека, чем химизация отрасли Вопросы безопасного обращения пестицидов, агрохимикатов и химиотерапевтичсских средств чрезвычайно важны Способность их к циркуляции в объектах окружающей среды (вода, почва) и их наличие в сельскохозяйственной продукции обуславливает возможность хронического неблагоприятного воздействия на живой организм К тому же немало действующих веществ пестицидов и агрохимикатов, обладают способностью к материальной биологической кумуляции - накоплению в биосредах человека в крови, грудном материнском молоке, волосах (Жуленко В Н, Рабинович М И, Таланов Г А , 2001, Онищенко Г Г, 2003, Амиров Н X , Васильев В В , Иванов А В , 2005)
Увеличение в экосистеме вредных факторов химической этиологии, обусловленное деятельностью человека, и отрицательные последствия применения современных агрохимикатов и химиотерапевтических препаратов становятся причиной изменения важнейших параметров функционирования живых систем, и ставит задачу комплексного изучения воздействия ксенобиотиков на организм (Кашин А С , 2000, Донкова Н В , 2004)
В современной агрохимии и животноводстве широкое распространение получили авермектины, как одни из самых эффективных средств борьбы с эндо- и эктопаразитами растений и животных Применение препаратов данной группы в качестве пестицидов приводит к повышению санитарно-гигиенической опасности, связанной с загрязнением их остатками сельхозпродукции По данным некоторых авторов лишь 0,1% применяемых пестицидов достигает цели, остальная же часть является источником загрязнения окружающей среды, в том числе продуктов животноводства (Русаков С В , Стерлина Т С , Новик ТС и др, 2003, Scogerboe Т L et al, 2000, Gunter F.A, 2004) Вместе с тем отдаленные последствия воздействия авермектинов на организм животных и человека остаются до конца не изученными
Известно, что одним из базовых механизмов токсичности ксенобиотиков является индукция ими окислительного стресса Поддержание устойчивого состояния окислительно-восстановительного гомеостаза клетки может происходить при действии адаптогепов природного происхождения, которые оказывают влияние, как на клеточные мембраны, так и на ее метаболизм, проявляя антиоксидантную и антигипоксантную активность (Яременко К В, 1990, Кармолиев Р X , 2002, Сулайманова Г В , 2005)
В настоящее время идет поиск новых видов адаптогенов, которые бы обладали широким спектром защитного действия Одним из таких адаптогепов является бетулин - тритерпеноид, получаемый из внешней коры березы, проявляющий широкий спектр биологической активности (Pavlova N J et al, 2003) Однако, технически гораздо проще и дешевле использовать
бетулиносодержащие экстракты бересты березы, получаемые традиционными методами экстракции органическими растворителями (Кузнецова С А, 2002, 2005) Вместе с тем механизмы компенсаторно-адаптационных процессов, лежащие в основе действия бетулинсодержащих адаптогенов на организм на фоне токсических и стрессорных факторов, остаются недостаточно выясненными, что существенно снижает возможности их практического применения
Цель работы: изучить морфофункциональные изменения органов гомеостатического обеспечения крыс при абиктиновой интоксикации и разработать коррекцию этих изменений при помощи бетулинсодержашего фитоадаптогена
Задачи исследований:
1 Исследовать морфобиохимические показатели крови крыс при
токсическом действии ксенобиотика - абиктина
2 Исследовать процессы перекисного окисления липидов в суспензии
клеток костного мозга при воздействии абиктина
Изучить гистоструктуру печени, почек, 12-перстной кишки и головного мозга крыс при абиктиновой интоксикации
Изучить защитное действие фитоадаптогена (экстракта бересты березы) на фоне абиктиновой интоксикации
Научная новизна. Впервые изучены морфофункциональные изменения в организме крыс при длительном воздействии абиктина, проявляющиеся в виде угнетения кроветворения и развития патологических процессов в органах гомеостатического обеспечения - почках и печени
Впервые установлены антиоксидантные и антитоксические свойства нового фитоадаптогена - экстракта бересты березы (ЭББ) на фоне воздействия ксенобиотика Показано, что применение фитоадаптогена ЭББ в условиях абиктиновой интоксикации предотвращает развитие анемии и препятствует развитию деструктивных изменений в почках и печени
Практическая и теоретическая значимость работы:
Данная работа является фрагментом темы «Структурно-функциональные основы гомеостаза сельскохозяйственных животных при экстремальных состояниях» основных научных исследований института ветеринарной медицины и биотехнологии Красноярского государственного аграрного университета
Работа носит экспериментальный характер
Полученные данные расширяют представления о механизме цитотоксического действия абиктина Выявленные закономерности морфофункциональных изменений позволяют оптимизировать пути коррекции токсических эффектов ксенобиотика Продемонстрирована эффективность экспериментального препарата - экстракта бересты березы в снижении цитотоксического - действия абиктина Результаты исследования могут быть использованы при оценке степени вреда, наносимого избыточным применением пестицидов, содержащих абиктин
Внедрение. Основные материалы используются в учебном процессе и научной работе на кафедрах аграрных ВУЗов России Бурятской, Иркутской госсельхозакадемий, Хакасского государственного университета, Алтайского и Красноярского государственных аграрных университетов
Основные положення, выносимые на защпгу:
1 Морфобиохимические изменения в периферической крови при
длительном воздействии ксенобиотика - абиктина
2 Индукция окислительного стресса в клетках красного костного мозга
под действием абиктина в зависимости от дозы и кратности введешш
препарата
3 Морфофункциональные изменения в органах гомеостатического
обеспечения (почках, печени, кишечнике и головном мозге) при длительном
воздействии абиктина
4 Защитные свойства фитоадаптогена, выделенного из бересты березы, на
фоне токсического действия ксенобиотика
Апробация работы. Основные материалы исследований доложены и полупили одобрение на XI Международном симпозиуме «Гомеостаз и экстремальные состояния организма» (Красноярск, 2003), Международной конференции молодых ученых (Улан-Удэ, 2004), Всероссийской научной конференции «Аграрная наука на рубеже веков» (Красноярск, 2004), Сибирском ветеринарном конгрессе (Новосибирск, 2005), XIII Международном симпозиуме «Сложные системы в экстремальных условиях» (Красноярск, 2006)
Публикации. По результатам научных исследовании опубликовано восемь печатных работ, из них две - в ведущих научных журналах, перечень которых утвержден ВАК
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обюра. литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследоващш, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений Работа изложена на 113 страницах, содержит 15 таблиц, 2 рисунка, 21 микрофотографию, 12 диаграмм и 1 схему Список литературы включает 229 наименований, из них 34 зарубежных источника
Токсичность и остаточные количества авермектинов в пищевых продуктах
Наиболее выраженным противопаразитарным действием обладает авермектин В1. Выделенный в чистом виде авермектин В1 получил название абамектин. На его основе и на основе его дигидропроизводного – ивермектина, был разработан ряд препаратов, как ветеринарного назначения, так и для защиты растений (Green L.C., Wagner D.A., Glogowski J.G., 1982; Демидов Н.В., 1987; Campbell W.C., 1989; Давыдова Е.М. и др., 2000; Головкина Л.П. и др., 2001). Ивермектины представляют собой химические дериваты авермектинов. Во всех зарубежных препаратах, в которых действующим веществом являются ивермектины, должно содержаться не менее 80% 22, 23-дигидроавермектина В1а и не более 20% 22,23-дигидроавермектина В1в. В отечественных препаратах действующим веществом является смесь авермектинов (Егоров Н.С., 1994; Головкина Л.П. и др., 2001; Жуленко В.Н. и др., 2002; Головкина Л.П., 2003). По определению В.Н. Жуленко (2001) авермектины и ивермектины представляют собой кристаллические вещества белого цвета, хорошо растворимые в органических растворителях и практически нерастворимые в воде. В практике применяют препараты, содержащие 1% действующего вещества в смеси глицерина, полипропиленгликоля, поливинилпиролидона или в этаноле. В нашей стране разработан ряд препаратов для ветеринарии и защиты растений, действующим началом которых является природный авермектиновый комплекс, названный аверсектином С. Аверсектин С, полученный в чистом виде, содержит не менее 36% авермектина В1а , по 22% - авермектинов А2а и В2а и около 10% авермектина А1а. Относительное содержание авермектиновых компонентов может варьировать в пределах нескольких процентов (в зависимости от условий получения комплекса), но преимущественное содержание авермектина В1а, является основным признаком аверсектина С. Авермектины являются внутриклеточными продуктами биосинтеза и в процессе глубинного выращивания культуры продуцента накапливаются в его мицелии (Кругляк Е.Б. и др., 2000; Головкина Л.П. и др., 2001; Давыдова Е.М. и др., 2003).
На основе авермектинов создан ряд препаратов для защиты растений. Широко известны такие зарубежные препараты как вертимек, абак, зефир и другие, действующим веществом в этих препаратах является авермектин В1 (Мельников Н.Н., 1987; Lasota J.A., Dybas R.A., 1990; Мельников Н.Н. и др., 1995). В.Н Чижов (1999) указывает, что высокая токсичность на лабораторных животных явилась причиной того, что эти препараты в нашей стране разрешены к использованию только на цветах.
Российская фирма «Фармбиомед» разработала ряд препаратов для защиты растений от вредителей, действующим веществом которых является весь природный авермектиновый комплекс – аверсектин С (Чижов В.Н., Юркин В.А., 1999; Список пестицидов и агрохимикатов РФ, 2000, 2004). Аверсектин С не накапливается в плодах и овощах, что позволяет использовать препараты на его основе и в период сбора урожая. Срок ожидания 48 часов. В окружающей среде аверсектин С быстро разрушается, попадая на поверхность почвы, препарат прочно сорбируется ее частицами и не мигрирует в почвенные воды (Чижов В.Н., 1999). При этом С.В. Русаков и Стерлина Т.С. (2003) отмечают, что у аверсектина С самая высокая скорость разложения, наиболее низкая – у авермектина, абамектин занимает промежуточное положение. В ветеринарной практике наряду с другими химиотерапевтическими средствами, широко используются противопаразитарные препараты. Это связано с их высокой экономической эффективностью и повсеместным распространении паразитов. Затраты на противопаразитарные обработки животных многократно окупаются увеличением продуктивности, снижением смертности и повышением качества животноводческой продукции. Кроме того, снижение инвазированности животных уменьшает риск заражения паразитами людей. Внедрены в ветеринарную практику препараты, механизм действия которых основан на избирательном влиянии на обмен веществ и нервно-мышечную деятельность паразитов (Оробец В.А., 2001; Розовенко Л.Н., 2001; Бурлаков С., 2002; Couvillion C.E., 2003). Кроме того, начали применять препараты системного действия с оригинальными фармакодинамическими свойствами, основанными на нарушении синтеза хитина (Демидов Н.В., 1987). По данным А. Кузьмина (2000) механизм действия авермектинов основан на параличе мускулатуры паразитов путем усиления выделения и связывания гаммааминомасляной кислоты, участвующей в передаче нервных импульсов в нервно-мышечных синапсах, что приводит к нарушению функционирования натриевых каналов. У млекопитающих эта кислота выполняет функцию тормозного нейромедиатора в центральной нервной системе, однако за редким исключением, концентрация антгельментиков – макролидов в центральной нервной системе позвоночных является недостаточной для проявления какого- либо эффекта вследствие слабой проницаемости гематоэнцефалического барьера. У трематод и цестод гаммааминомасляная кислота не выступает в роли нейромедиатора, поэтому на представителей этих групп паразитов антгельментики – макролиды не действуют. К макроциклическим лактонам у паразитов постепенно вырабатывается резистентность, что наиболее выражено на примере клещей рода Demodex (Викторов А.В., Дриняев В.Н., 2002).
С. Бурлаков (2002) отмечает, что в конце 70-х годов для ветеринарной паразитологической практики были предложены продукты биохимического синтеза, относящиеся к макроциклическим лактонам, известные как авермектины. Наиболее активно действующим и широко распространенным в ветеринарной практике из этой группы являются ивермектин (дигидропроизводное авермектинов В1а и В1в), состоящий из пары близких гомологов, отличающихся только одной метильной группой.
Первым, зарегистрированным в России препаратом на основе ивермектина, является «Ивомек» (Merk, Sharp & Dohme ,США), содержащий в виде действующего вещества 1% ивермектина. Ивомек – препарат из группы макроциклических лактонов, обладающий высокой инсектоакарицидной и нематодоцидной активностью, который нашел широкое применение в ветеринарной практике для лечения паразитарных болезней сельскохозяйственных животных, что нашло свое отражение в многочисленных публикациях (Ремез В.И.,1985; Тимофеев Б.А., Кирюткин Г.В., Красняков В.Я., 1989; Holliday S.M., 1993; Burder D.J., Ellis R.N.W., 1994; Якубовский М.В., Мясцова Т.Я., 1999; Gayrard V., Alvinerie M., 1999; Skogerboe T.L., Smith L.L., Karle V.R., 2000; Vercruysse J., Dorny P., 2000).
Состав и свойства фитоадаптогенов, выделенных из бересты березы
С целью коррекции действия ксенобиотика применяли экстракт бересты березы. ЭББ – аналог бетулина, выделенный ИХХТ СО РАН (г. Красноярск). Основные компоненты, определяемые в экстракте, относятся к тритерпеноидам лупанового ряда, относительное содержание которых превышает 95 %.
Отдельное введение крысам ЭББ не вызывало существенного изменения показателей периферической крови, различия с контролем составляли 2-5 %. Применение ЭББ на фоне абиктиновой интоксикации предотвращало развитие анемии. Количества эритроцитов к седьмым суткам опыта было достоверно выше в четвертой группе по сравнению с третьей на 13 %, а к 14-м суткам – на 7,9 %, что составило соответственно 7,02±0,241012/л (Р 0,05) и 6,04±0,261012/л (Р 0,05) (табл.6). Концентрация гемоглобина к 14-м суткам составляла 138,0±0,16 г/л (Р 0,001), что вдвое больше по сравнению с изолированным введением абиктина (табл.6).
Применение ЭББ предотвращало развитие лейкоцитоза. Количество лейкоцитов увеличивалось незначительно – 16,14±0,4310 9/л (Р 0,05) к 14-м суткам, что в два раза ниже, чем при введении препарата изолировано, и может свидетельствовать о противовоспалительном эффекте адаптогена (табл.6).
При этом сегментоядерный нейтрофилез был менее выражен, количество лимфоцитов было более приближенно к уровню контроля 64,0±0,45% и составляло 58,9±0,98 % (Р 0,05); содержание сегментоядерных нейтрофилов составило 31,2±0,56 % (Р 0,05), что ниже чем при изолированном применении ксенобиотика на 10,4 % (рис. 23, 24, 25, приложение 1). Таблица 6 – Изменение показателей периферической крови при применении фитоадаптогена (ЭББ) на фоне абиктиновой интоксикации
В восстановительный период, показатели периферической крови у крыс, получавших абиктин совместно с ЭББ, возвращались к уровню контроля быстрее, чем у животных, получавших препарат отдельно. И к 28-му дню опыта количество эритроцитов и гемоглобина было только на 10% ниже контроля, что составило соответственно 8,38±0,781012/л и 141,6±1,02 г/л (Р 0,05).
Таким образом, применение ЭББ на фоне абиктиновой интоксикации предотвращало развитие анемии и лейкоцитоза.
Влияние ЭББ на биохимические показатели периферической крови на фоне абиктиновой интоксикации
Установлено, что введение абиктина совместно с экстрактом бересты березы вызывало изменения биохимического состава крови, которые были менее выражены, чем при изолированном действии ксенобиотика. При введении абиктина в дозе 1,0 мг/кг к 14-м суткам количество общего белка снизилось по сравнению с контролем на 14,4% (Р 0,05), что составило 60,64±0,27 г/л, а при поступлении его с экстрактом березы – на 8% (Р 0,05) и составило 65,36±0,38 г/л (рис.26, приложение 4).
Динамика изменений уровня белковых фракций крови отраженна на рис.27, который показывает, что повышение -глобулинов было менее выражено при введении препарата с ЭББ, чем при его изолированном использовании и составило 16,50±0,45 г/л (Р 0,05).
Наряду с изменением белковых фракций крови, при введении абиктина и ЭББ, наблюдалось изменение соотношение ферментов сыворотки крови, таких как АСТ и АЛТ. Достоверное различие между повышением ферментов наблюдалось уже к 7-м суткам: АСТ увеличивалось на 25% (Р 0,05) по сравнению с контролем, АЛТ на 48% (Р 0,05), что составляло соответственно 0,40±0,02 ммоль/лч и 0,49±0,04 ммоль/лч в то время как эти изменения при изолированном действии абиктина были в 2 раза выше (табл.7, рис. 28, 29).
Это свидетельствует о защитном действии лупановых тритерпиноидов, содержащихся в экстракте бересты березы и понижающих показания маркеров цитолиза гепатоцитов, таких как АСТ и АЛТ.
В проведенных нами исследованиях абиктин индуцировал ПОЛ с проявлением зависимостей «доза – эффект» и «время – эффект». Нами установлено, что с увеличением дозы абиктина до 1,0 мг/кг происходила активация свободнорадикальных процессов и к седьмым суткам уровень МДА достоверно увеличивался на 51% (Р 0,01) и составлял 1,12±0,02 мкмоль/л, к 14-м суткам увеличился на 66% (Р 0,01), достигая 1,63±0,11 мкмоль/л.
При этом изолированное действие спиртового экстракта бересты березы не вызывало выраженной индукции ПОЛ увеличиваясь к седьмым суткам на 2,9% (Р 0,01) по сравнению с контролем и составляло 0,58±0,09 мкмоль/л.
При введении спиртового экстракта бересты березы совместно с абиктином в дозе 1,0 мг/кг, адаптоген проявлял защитное действие в доза-зависимой манере, снижая количество ТБК-активных продуктов в клетках к 14-м суткам соответственно на 18% (Р 0,05) по сравнению с изолированным действием абиктина, составляя 0,93±0,04 мкмоль/л (рис.30, приложение 6). К 28-м суткам исследования концентрация МДА постепенно понижалась и возвращение к уровню контроля, при введении ЭББ с абиктином, было быстрее, чем при изолированном действии ксенобиотика.
Таким образом, экстракт бересты березы понижает показатели ПОЛ при токсическом действии ксенобиотика с проявлением прямой зависимости «доза-эффект» и «время-эффект», что свидетельствует об антиоксидантном действии ЭББ.
При микроструктурном анализе печени, почек и 12-ти перстной кишки крыс, получавших абиктин совместно с экстрактом бересты березы в течение 14-ти дней в дозе 0,3 мг/кг и 1,0 мг/кг, отмечались менее выраженные дистрофические изменения, чем при изолированном введении ксенобиотика. На 7-е сутки в органах ярко выраженных изменений выявлено не было. К 14-м суткам опыта в печени крыс, получавших фитоадаптоген на фоне абиктиновой интоксикации, структура печеночных долек была сохранена, гепатоциты без видимых изменений, однако отмечалось полнокровие центральных отделов долек, умеренно выраженная инфильтрация лимфоцитами по ходу синусоидных капилляров. В некоторых препаратах отмечались не ясно выраженные дистрофические изменения гепатоцитов (рис. 31, 32).
В гистологических препаратах почки отмечались единичные некрозы эпителия канальцев, умеренное полнокровие клубочков коркового слоя со скоплением лимфоцитов в мезангии. В кишечнике крыс деструктивных изменений не обнаруживалось. Ворсинки и крипты хорошо выражены, количество бокаловидных клеток умеренное (рис. 33, 34).
Исследования периферической крови
Особое значение для диагностики имеют ситуации, когда ферменты - аминотрансферазы оказываются в увеличенном количестве в плазме крови. Отдельные трансаминазы содержатся в различных органах в неодинаковых количествах. Больше всего аспартатаминотрансферазы содержат кардиомиоциты, затем по убыванию идут печень, скелетные мышцы, почки. Аланинаминотрасфераза присутствует в рекордном количестве в печени, затем идут поджелудочная железа, миокард и скелетная мускулатура (Марли Р., Греннер Д., Мейес П. и др., 1993; Зайчик А.А., Минкевич К.В., 2000) Известно, что возрастание активности ферментов в сыворотки крови при многих патологических процессах объясняется, по крайней мере, двумя причинами: выходом в кровяное русло ферментов из поврежденных участков органов или тканей на фоне продолжающегося их биосинтеза в поврежденных тканях и одновременным повышением каталитической активности некоторых ферментов, переходящих в кровь. Возможно, что повышение активности ферментов при “поломке” механизмов внутриклеточной регуляции обмена веществ связано с прекращением действия соответствующих регуляторов и ингибиторов ферментов, изменением под влиянием различных факторов строения и структуры макромолекул ферментов (Виноградова И.Л., Багрянцева С.Ю., Дервиз Г.В., 1980; Березов В.А., Коровкин Б.Ф., 1990).
Данные наших экспериментов, показали повышении аминотрансфераз в сыворотке крови при введении абиктина, так на 14-е сутки опыта активность АСТ достоверно увеличилась в 1,5 раза, а активность АЛТ в 3 раза по сравнению с показателями интактной группы, что свидетельствует о развитии цитолитических процессов в печени крыс.
Данные литературы также свидетельствуют, что применение макролидов может вызывать повышение содержания аминотрансфераз в сыворотке крови (Буеверов А.О., 2002).
Известно, что около 7% массы плазмы крови составляют различные белки. Специфика их обмена заключается в том, что они возникают в одних органах и тканях, а утилизируются, как правило, в других. В связи с этим, плазма крови – динамическая равновесная система, и ее протеинограмма, подобно зеркалу, отражает состояние разных тканей (Пидэмский Е.Л., 1989; Зайчик А.Ш., Чурило Л.П., 2000; Бакштановская И.В. и др., 2003). Плазменные белки возникают, в основном в гепатоцитах и макрофагах, а -глобулины – продукты плазматических клеток (Harris Z.L., 1995; Healy H., Reith D., 2000).
Выраженная гипопротеинемия, является постоянным и патогенетически важным симптом нефротического синдрома, гипопротеинемия наблюдается также при поражении печеночных клеток (Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф., 1990).
Главный плазменный белок альбумин синтезируется гепатоцитами, он постоянно переходит в тканевую жидкость и возвращается в кровь через лимфу. Утилизация альбумина идет, главным образом, в эритроцитах, и в меньшей степени в клетках почек, самой печени, кожи и даже легких. Альбумин – единственный из главных плазменных белков не является гликопротеидом и, может быть, именно поэтому циркулирует в крови довольно долго (Зайчик А.Ш., Чурило Л.П., 2000; Крыжановский С.А., 2001).
Нами доказано, что при введении абиктина происходит увеличение общего количества белка в плазме крови, главным образом, за счет уменьшения количества альбуминов, что может являться следствием нарушения белково-синтетической функции печени. На фоне введения абиктина увеличивалось содержание - и -глобулинов в сыворотке крови, что свидетельствует о поражение паренхимы печени, которое сопровождается реактивным раздражением клеток ретикуло-эндотелиальной системы.
Общеизвестно, что общий объем крови и его физиологический состав характеризует состояние гемодинамики организма. При различных патологических состояниях соотношение между плазмой и форменными элементами, депонированной и циркулирующей кровью меняется (Налетов Н.А. и др., 1991).
Действительно, введение абиктина в изолированном состоянии вызывало снижение количества эритроцитов и гемоглобина в крови, что связано с гемолизом эритроцитов кровеносном русле под влиянием токсического действия ксенобиотика. Одновременно происходило увеличением сегментоядерных нейтрофилов, что и указывает на торможение процесса регенерации клеток и подавление защитной функции организма (Смирнов П.Н., Апалькин В.А., Колесникова О.П., 1997). Неотъемлемым этапом повреждающего воздействия любого препарата, обладающего каким-либо токсическим действием на организм, являются патологоанатомические и гистологические изменения тканей и органов.
Химически индуцируемые повреждения могут в разной степени зависеть от способности отдельных тканей метаболизировать чужеродные вещества. Метаболизм ксенобиотиков может либо предотвратить возникновение повреждений (путем дезактивации этих веществ) или привести к возникновению активных метаболитов, непосредственно повреждающих ткани (Доклад ВОЗ, 1994). Считается, что печень метабилизирует значительную часть экзогенных соединений до того, как они попадают в системный кровоток. Микросомы почечных клеток содержат большую часть ферментов и осуществляют большинство опосредуемых функций через цитохромы метаболических процессов. Способность почек метабилизировать ксенобиотики составляет 3-50% аналогичной способности печени (Габитов В.Х. и др., 2002; Давлетшин Р.А. и др., 2002).
Следует отметить, однако, что в некоторых ситуациях способность почек метабилизировать чужеродные соединения может быть гораздо выше, чем у печени. Метаболизм ксенобиотиков в печени и почках имеет выраженные качественные отличия. Почечные ферменты сохраняют целостность в процессе выделения микросом с использованием ионов кальция. Печеночный цитохром Р-450 аналогичен почечному цитохрому Р-450, но при этом известно, что печень и почка реагируют по-разному (как в качественном, так и в количественном отношениях) на различные индукторы цитохрома Р-450 (Доклад ВОЗ, 1994; Назаренко М.Е.и др., 2003).
Влияние ЭББ на морфологические показатели периферической крови на фоне абиктиновой интоксикации
Данные положения подтверждались и нашими экспериментальными данными, показывая коррелятивную зависимость между выраженностью изменений в почках и проявлением окислительного стресса. Почки и печень реагируют на любой раздражитель, патологически изменяя свою структуру и функции (Шулутко Б.И., 1993; Садовникова В.В., Садовникова И.В., Иванова Н.Л., 2001; Пауков В.С., Литвицкий П.Ф., 2004). Известно, что авермектины большей часть экскретируются печенью и почками (Кузьмин А.А., 2000), а следовательно, и изменения в них проявляются в большей мере, поэтому в проводимых экспериментах мы акцентировали внимание именно на этих органах.
Данные наших исследований показали клеточную инфильтрацию лимфоцитами и плазматическими клетками интерстиция почек, проявление лимфоцитарной или макрофагальной инфильтрации межуточной ткани почек, локализующихся вокруг сосудов и перигломерулярно, при этом отмечались выраженные гемодинамические и гемореалогические расстройства по типу выраженного эритроцитарного стаза в капиллярных клубочках, прекапиллярах и венулах коркового слоя; множественные обтурирующие, эритроцитарные тромбы в артериях мелкого и среднего калибра. На фоне этого имел место диффузный колликвационный некроз эпителиоцитов канальцев коркового слоя, с полной обтурацией просвета в проксимальных и дистальных извитых канальцах. Отмечалось множество очаговых, лейкоцитарно – макрофагальных инфильтратов, которые располагались преимущественно вблизи клубочков; единичные лимфоцитарные инфильтраты в отечной строме коркового слоя гипертрофированные юкстамедуллярные нефроны, что может являться следствием развития нефрозов. В печени отмечали полнокровие центральных отделов долек и умеренную инфильтрацию портальных зон зернистыми лейкоцитами, макрофагами и лимфоцитами. Полученные данные согласуется с многочисленными исследованиями при применении разных ксенобиотиков, проведенными на лабораторных животных (Болдырев А.А., Каган В.Е., 1981; 1986; Katsumata T., 1998; Копылова Т.Н., 2000; Байматов В.Н. и др., 2002). Таким образом, анализ литературных данных и результаты собственных исследований показали, что применение абиктина сопровождается активацией перекисного окисления липидов, изменениями морфобиохимического состава крови, развитием дистрофических явлений в печени и проявлением признаков нефроза почек. С целью коррекции токсического действия макроциклического лактона-абиктина, нами применялся растительный препарат, обладающий антиоксидантным действием – экстракт бересты березы в дозе 600мг/кг. Примененный в наших экспериментах экстракт бересты березы – протектор окислительного стресса отвечает таким критериям, как специфичность, универсальность, физиологичность и эффективность действия, подтверждающие возможность коррекции ими экзогенных интоксикаций (Кузнецова С.А., 2004, 2005). Важная роль отводится антиоксидантам, которые снижают активность ПОЛ посредством стабилизации мембран и липопротеидных комплексов (Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К., 1993; Худолей В.В. и др., 1996).
В проведенных нами исследованиях экстракт бересты березы, являющегося аналогом бетулина, ингибировал ПОЛ на фоне действия абиктина, снижая концентрацию малонового диальдегида. Это совпадает с данными других авторов, установивших, что лупановые тритерпеноиды, входящие в состав бересты, тормозят переокисление липидов (Карачурина Л.Т. и др., 2002; Флехтер О.Б. и др., 2002).
Учитывая то, что усиление активности процессов перекисного окисления липидов приводит к образованию активных форм кислорода, которые оказывают повреждающее действие на клеточные и субклеточные структуры, можно полагать, что антиоксидантные препараты оказывают мембраностабилизирующее действие (Саратиков С.А., Венгеровский А.И., 2000).
Действительно, благодаря введению экстракта бересты березы снижалась активность АЛТ и АСТ, проявлялась стабилизация этих показателей, уровень которых повышается при повреждении плазматической мембраны, тем самым, подтверждая его защитные свойства от цитотоксического действия ксенобиотиков.
В дальнейшем при введении экстракта бересты березы наблюдалось ослабление негативного влияния ксенобиотика на белковосинтетическую функцию печени, увеличивая уровень как общего белка, так и белковых фракций, что подтверждает теорию о защитном действии фитоадаптогена. Применение антиоксиданта, приводило к снижению концентрации - и -глобулинов, что свидетельствует об устранении воспалительной реакции в строме печени и подтверждалось в дальнейшем гистологическими исследованиями.
Хотя биохимические показатели и не нормализуются полностью, но согласно литературным данным, это отражает противовоспалительное и гепатопротекторное действие бересты березы, имеющее в своем составе действующее вещество – бетулин (Венгеровский А.И. и др., 2000; Карачурина Л.Т. и др., 2002).
Нами отмечено положительное влияние растительного препарата (ЭББ) на морфологический состав крови и уровень гемоглобина в крови крыс, получавших ксенобиотик – абиктин. При этом сам экстракт бересты березы будучи примененный изолированно не вызывал изменений показателей периферической крови, а введенный совместно с макроциклическим лактоном проявлял менее выраженное гематотоксическое действие, которое носило обратимый характер, выражающееся в восстановлении гематологических показателей. Вероятно, можно допустить, что экстракт бересты березы снижает токсическое действие ксенобиотика, активизируя восстановление гемопоэза.
Сам же экстракт бересты березы вообще не вызывал видимых изменений, а примененный совместно с абиктином сглаживал гистологические изменения почек и печени. Так по нашим данным, в печени к 14 суткам опыта отмечалось появление печеночных долек с нормальной структурой, гепатоциты были без видимых изменений, однако отмечалось полнокровие центральных отделов долек и по ходу портальных трактов наблюдалась умеренно выраженная инфильтрация лимфоцитами. В препаратах почки отмечались единичные некрозы эпителия канальцев, умеренное полнокровие клубочков коркового слоя со скоплением лимфоцитов в мезангии, что подтверждает данные о нефро- и гепатозащитном действии экстракт бересты березы, содержащем в своем составе бетулин (Карачурина Л.Т. и др., 2002; Флехтер О.Б., Нигматулина Л.Р., Балтина Л.А. и др., 2002).
