Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 12
1.1. Сравнительные данные по функциональной и возрастной морфологии почек в онто- и филогенезе... 12
1.2. Морфофункциональные аспекты почечного транспорта лекарственных препаратов
1.3. Цитотоксическое действие лекарственных ксенобиотиков и контаминация ими пищевых продуктов 32
1.4. Методы освобождения внутренней среды организма от ксенобиотиков
2. Материалы и методы исследования 57
3. Результаты собственных исследований 66
3.1. Развитие почек кур в постнатальном онтогенезе... 66
3.1.1. Цитодифференцировка нефронов кур в постнатальном онтогенезе 66
3.1.2. Ультраструктурные и цитохимические особенности нефроцитов кур на разных стадиях постнатального развития 90
3.2. Цитофункциональная характеристика канальцевого транспорта лекарственных ксенобиотиков в нефроцитах половозрелых кур 140
3.2.1. Ультраструктурные изменения в нефроцитах кур после однократного введения пенициллина 140
3.2.2. Ультраструктурные изменения в нефроцитах кур при субстратной стимуляции канальцевого транспорта пенициллина. 147
3.2.3. Ультраструктурные и цитохимические изменения в почках кур при длительном введении пенициллина 154
3.3. Развитие органов гомеостатического обеспечения и возрастная динамика морфобиохимических показателей крови у кур различных кроссов в условиях птицефабрик
3.3.1. Особенности постнатального развития цыплят-бройлеров в условиях птицефабрик 163
3.3.2. Особенности развития органов гомеостатического обеспечения и морфобиохимические параметры крови у яичных кур 183
3.4. Параметры морфофункционального гомеостаза и уровень лекарственных контаминантов у кур при экспериментальном лекарственном воздействии 200
3.4.1. Морфофункциональные изменения в организме цыплят- бройлеров при длительном пероральном применении тетрациклина 200
3.4.1.1. Морфобиохимические исследования крови 200
3.4.1.2. Цитоморфологический анализ внутренних органов 215
3.4.1.3. Оценка остаточных количеств антибиотиков в мясе и субпродуктах 220
3.4.2. Морфофункциональные изменения в организме цыплят- бройлеров и кур-несушек после применения пролонгированного тетрациклина 223
3.4.2.1. Морфобиохимические исследования крови после воздействия нитокса 223
3.4.2.2. Цитоморфологический анализ органов гомеостатического обеспечения кур после воздействия нитокса 229
3.4.2.3. Оценка остаточных количеств антибиотика в мясе и яйцах кур после воздействия нитокса 233
3.5. Влияние энтеросорбции (полифепана) на показатели морфофункционального гомеостаза и уровень лекарственных контаминантов у кур при экспериментальном лекарственном воздействии 239
3.5.1. Влияние энтеросорбции на морфобиохимические показатели крови цыплят-бройлеров при воздействии тетрациклинов 239
3.5.2. Влияние энтеросорбции на цитоморфологические показатели органов гомеостатического обеспечения у цыплят-бройлеров при воздействии тетрациклинов 248
3.5.3. Влияние энтеросорбции на остаточное количество антибиотиков в мясе, субпродуктах и яйцах кур при воздействии тетрациклинов 251
4. Обсуждение полученных результатов 255
Выводы 296
Практические предложения 301
Список литературы 302
Приложения
- Морфофункциональные аспекты почечного транспорта лекарственных препаратов
- Методы освобождения внутренней среды организма от ксенобиотиков
- Ультраструктурные и цитохимические особенности нефроцитов кур на разных стадиях постнатального развития
- Морфофункциональные изменения в организме цыплят- бройлеров и кур-несушек после применения пролонгированного тетрациклина
Введение к работе
Актуальность темы. Многообразие факторов окружающей среды воздействующих на сельскохозяйственных птиц определяет широкий диапазон морфофункциональных изменений в их организме. Специфическое воздействие на органы, ткани, клетки и субклеточные структуры, наряду с разнообразными биотическими факторами оказывают и лекарственные препараты, большинство из которых для организма являются чужеродными, то есть ксенобиотиками, способными нарушать морфофункциональный гомеостаз.
В физиологических условиях постоянство гомеостаза поддерживается системами детоксикации и экскреции: почками и печенью, а жизненно важные функции реализуются по определенным схемам биохимических взаимоотношений под контролем центральной нервной системы. При попадании в организм лекарственных ксенобиотиков, когда органы гомеостатического обеспечения не справляются с детоксикацией и элиминацией лекарств, развиваются цитотоксические явления и органопатии [261, 23, 247, 249, 10]; кроме того, существует вероятность загрязнения продовольственного сырья и пищевых продуктов лекарственными контаминантами [114, 214, 331, 296, 297]. Поэтому так важна структурно-функциональная оценка общетоксического и специфического воздействия лекарственных препаратов на органы и ткани, отвечающие за адаптационно-приспособительные реакции, обеспечивающие гомеостаз.
Ведущим звеном в механизме стабилизации гомеостаза у птиц (из-за отсутствия потовых желез) являются почки. Однако морфофункциональные особенности и динамика становления почек кур в постнатальном онтогенезе изучены недостаточно, нет единого представления о сроках их морфологического созревания [283, 171, 289]. Кроме того, отсутствуют сравнительные данные о морфофункциональном развитии органов гомеостатического обеспечения у кур различных кроссов.
Широкое применение лекарственных средств в промышленном птицеводстве требует знания механизмов выведения их из организма птицы.
Известно, что главными путями освобождения организма от чужеродных веществ является печеночный метаболизм и почечная экскреция, последняя включает в себя фильтрацию в сосудистых клубочках и канальцевый транспорт. Исследования Варшавского, Берхина, Наточина, Вейнара [63, 41, 190, 452] позволили составить общее представление о механизме канальцевого транспорта в почках. Однако до настоящего времени остается недостаточно освещенным вопрос о морфологическом субстрате и цитохимической природе этого процесса, а имеющиеся данные носят противоречивый и фрагментарный характер.
Весьма актуальным является поиск методов, способных осуществлять общую детоксикацию организма птиц при лекарственных воздействиях с тем, чтобы с одной стороны нормализовать гомеостатические функции, а с другой - организовать разрыв порочной цепи перехода и кумуляции лекарственных контаминантов в системе "птица - продукция птицеводства - человек". Одним из доступных в ветеринарной практике способов освобождения внутренней среды организма от ксенобиотиков, является энтеросорбция [155, 234, 250, 218], однако нам не известны сведения о влиянии энтеросорбции на показатели ( морфофункционального гомеостаза кур и уровень лекарственных контаминантов в птицеводческой продукции при лекарственных воздействиях.
Таким образом, изучение становления органов гомеостатического обеспечения у кур в постнатальном онтогенезе, исследование морфофункционального гомеостаза при воздействии лекарственных ксенобиотиков, изучение механизма их элиминации, а также разработка способа коррекции цитотоксического действия и снижения уровня лекарственных контаминантов в птицеводческой продукции представляется весьма актуальным.
Цель и задачи исследований. Основная цель представленной работы заключалась в изучении становления органов гомеостатического обеспечения и параметров морфофункционального гомеостаза у кур в постнатальном онтогенезе и при воздействии лекарственных ксенобиотиков, исследовании цитофункциональной природы транспорта лекарств в почках и обосновании способа получения экологически чистой птицеводческой продукции. Были поставлены следующие задачи: L. Изучить общие закономерности и последовательные этапы развития почек у кур в постнатальном периоде онтогенеза на основе морфометрического, цитохимического и ультраструктурного анализа; а так же установить последовательность цитодифференцировки нефронов с учетом их гетерогенности;
2. Выявить ультраструктурные механизмы и цитохимическую природу трансцеллюлярного транспорта лекарственных ксенобиотиков в нефроцитах половозрелых кур;
3. Провести сравнительный анализ развития органов гомеостатического обеспечения, с учетом возрастной динамики морфобиохимических показателей крови у кур различных кроссов;
4. Установить основные изменения параметров морфофункционального гомеостаза у кур в условиях экспериментального лекарственного воздействия и исследовать уровень остаточных количеств лекарственных контаминантов в пищевых продуктах птицеводства: мясе, субпродуктах и яйцах птиц;
5. Изучить влияние энтеросорбента (полифепана) на показатели морфофункционального гомеостаза кур и уровень лекарственных контаминантов в птицеводческой продукции в условиях экспериментального лекарственного воздействия.
Научная новизна. В работе впервые проведено комплексное морфофункциональное исследование органов гомеостатического обеспечения у " кур в возрастном аспекте и при воздействии лекарственных ксенобиотиков.
Получены новые данные о морфологическом субстрате и цитохимической природе канальцевого транспорта лекарственных веществ в нефроцитах кур. Уточнены сроки морфофункционального созревания органов, обеспечивающих гомеостаз (почек, печени, головного мозга) у кур различных кроссов. Установлено, что чрезмерное лекарственное воздействие в период морфологической и функциональной незрелости органов гомеостатического обеспечения у кур, приводит к каскаду цитотоксических проявлений, развитию органопатий и контаминации птицеводческой продукции лекарственными препаратами. Впервые предложен способ снижения цитотоксического действия и уровня лекарственных контаминантов в продукции птицеводства при применении энтеросорбента - полифепана (Заявка на изобретение №200312721/13, приоритет от 14.07.03).
Практическая значимость. Материалы дисссертационной работы легли в основу методических рекомендаций: «Методы оценки морфофункционального статуса сельскохозяйственной птицы при воздействии лекарственных ксенобиотиков» (Красноярск, 2004), одобренных и принятых к внедрению НТС КрасГАУ (протокол № 5 от 23 декабря 2003), HTG при Министерстве сельского хозяйства республики Хакасия (протокол № 1 от 15 января 2004), на заседании отделения ветеринарной медицины ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (протокол № 16 от 17 июня 2004), и используются для оценки морфофункционального статуса сельскохозяйственных птиц при воздействии биотических факторов, в частности лекарственных ксенобиотиков, на птицефабриках Красноярского края («Березовская», ОАО племзавода «Таежный») и республики Хакасия (2002-2004), а так же в работе ГУ Красноярской краевой ветеринарной лаборатории (2002, 2003), ГУ Управления ветеринарии ЕМО г. Норильска Красноярского края и ГНУ НИИ сельского хозяйства Крайнего Севера.
Основные материалы работы используются в учебном процессе на 20 кафедрах аграрных ВУЗов России: Казанской и Санкт-Петербургской государственных академий; Мордовского и Хакасского государственных (щ университетов; Алтайского, Дальневосточного, Красноярского, Новосибирского, Омского, Ставропольского государственных аграрных университетов; Бурятской, Вятской, Дагестанской, Кабардино-Балкарской, Приморской, Самарской, Ярославской государственных сельскохозяйственных академиях, Красноярском институте переподготовки кадров.
Основные итоги исследований отражены в монографии «Цитофункциональная эндоэкология сельскохозяйственных птиц при воздействии лекарственных ксенобиотиков» (Красноярск, 2004); практикумах: по морфологии «Общая гистология» (Красноярск, 2001) и по цитологии, гистологии и эмбриологии «Частная гистология» (Красноярск, 1999, 2002).
Основные положения, выносимые на защиту:
- основные этапы развития почек и закономерности цитодифференцировки нефронов с учетом их гетерогенности у кур в постнатальном онтогенезе;
ультраструктурная и цитохимическая характеристика трансцеллюлярного транспорта лекарственных ксенобиотиков в нефроцитах половозрелых кур;
- особенности развития органов гомеостатического обеспечения (почек, печени и головного мозга) и возрастная динамика морфобиохимических показателей крови у кур различных кроссов в условиях птицефабрик;
- параметры морфофункционального гомеостаза и уровень лекарственных контаминантов в организме кур при экспериментальном лекарственном воздействии;
- энтеросорбция полифепаном на фоне экспериментального лекарственного воздействия нормализует параметры морфофункционального гомеостаза кур и снижает уровень лекарственных контаминантов в мясе, субпродуктах и яйцах птиц.
Апробация работы. Основные материалы исследований доложены, обсуждены и одобрены на: научно-практических конференциях Ленинградского ветеринарного института (Ленинград, 1984-1987) и Красноярского государственного аграрного университета (Красноярск, 1988-2003), Всесоюзном симпозиуме «Клеточные механизмы адаптации» (Крым, Карадаг, 1985), XXIV конференции студентов и аспирантов морфологических кафедр и лабораторий Ленинградских ВУЗов и научно-исследовательских институтов, (Ленинград, 1985); заседании Ленинградского отделения Всесоюзного общества АГЭ (Ленинград, 1987); Всесоюзном совещании «Теории параллелизма А.А. Заварзина и современная биология» (Ленинград, 1986); II Всероссийском съезде АГЭ (Ленинград, 1988); III зональной научно-производственной конференции «Пути повышения эффективности сельскохозяйственного производства Восточной Сибири» (Красноярск, 1989); Всероссийской научно-производственной конференции «Гигиена, ветсанитария и экология животноводства» (Чебоксары, 1994); научно-практической конференции «Достижения науки и техники - развитию г. Красноярска» (Красноярск, 1997); IX Международном симпозиуме «Реконструкция гомеостаза» (Красноярск, 1998); Всероссийских научно-практических конференциях с международным участием «Достижения науки и техники — развитию сибирских регионов) (Красноярск, 1999, 2001, 2003); X Международном симпозиуме «Гомеостаз организма: медико-биологические аспекты» (Красноярск, 2000); межрегиональной конференции морфологов «Теоретические и практические аспекты ветеринарии и медицины» (Улан-Удэ, 2001); заседании Красноярского отделения Всероссийского общества физиологов им. И.П. Павлова (Красноярск, 2001); региональной научной конференции «Красноярский край - освоение, развитие, перспективы» (Красноярск, 2003); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологии» (Оренбург, 2003); Всероссийской научно-практической конференции «Аграрная наука на рубеже веков» (Красноярск, 2003); XI Международном симпозиуме «Гомеостаз и экстремальные состояния организма» (Красноярск, 2003); Международной научно-практической конференции «Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой, возрастной и экспериментальной морфологии» (Улан-Удэ, 2004).
Публикации. Основные научные положения, выводы и разработки диссертации изложены в 39 работах, в том числе в монографии «Цитофункциональная эндоэкология сельскохозяйственных птиц при воздействии лекарственных ксенобиотиков», двух практикумах, методических рекомендациях и научных изданиях.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 332 Р страницах компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Список литературы включает 457 наименований, из них 165 зарубежных источника. Материалы диссертации иллюстрированы 35 таблицами, 80 микрофотографиями, 36 диаграммами и схемой.
Морфофункциональные аспекты почечного транспорта лекарственных препаратов
С увеличением числа применяемых в современной ветеринарной практике методов активной химиопрофилактики и лечения, изучение механизма освобождения внутренней среды организма от чужеродных веществ приобретает все большую актуальность [151, 261, 93, 249]. Известно, что главными путями элиминации чужеродных веществ из организма является печеночный метаболизм [19] и почечная экскреция [190]. Почечная экскреция включает в себя два процесса: фильтрацию в сосудистых клубочках и канальцевую секрецию. Свободно фильтроваться через клубочковую мембрану могут лишь низкомолекулярные вещества. Большинство же лекарственных веществ довольно значительно связываются белками плазмы крови, в связи с чем их способность фильтроваться в клубочках нефрона ограничена [37]. Непрофильтровавшиеся в сосудистых клубочках вещества, поступают по эфферентной артериоле в околоканальцевые капилляры, откуда и переносятся путем активного транспорта в просвет нефрона. Такой путь выведения веществ носит название канальцевой экскреции или секреции [291].
Канальцевому транспорту лекарственных веществ, который представляет большой практический интерес, посвящены многочисленные работы физиологов, биохимиков, фармакологов, биофизиков [90, 63, 224, 55, 41, 43, 198,452,428,408]. Работами вышеупомянутых авторов показано, что эпителий нефрона обладает двумя механизмами активного транспорта: одним для выделения органических кислот и другим — органических оснований. Источником поступления органических кислот в организм животных, как считают В.М. Бреслер и А.А. Никифоров [55] могут служить органические кислоты растительного происхождения, анионные продукты кишечной флоры, лекарственные и диагностические препараты (пенициллин, кардиотраст). Загрязнение окружающей среды химическими веществами - отходами и побочными продуктами производства, гербицидами, инсектицидами, также может являться источником поступления органических кислот в организм животных [41].
В различных экспериментальных исследованиях с применением методов остановленного тока мочи [448], микроперфузии [454], авторадиографии [351], люминисцентной микроскопии [55] показано, что процесс активного транспорта органических кислот присущ почкам всех позвоночных животных, канальцевый транспорт органических кислот исследован у рыб [160, 365], у амфибий [369], у рептилий [325], у птиц [403, 446, 354, 347, 439,417, 408], у млекопитающих [440].
Немаловажную роль в изучении системы канальцевой секреции сыграл метод введения веществ в портальную систему почек у птиц [443, 416]. Таким методом транспорт органических кислот исследован, главным образом, на почке курицы. Обнаружена секреция фенолового красного, парааминогиппуровой кислоты, мочевой кислоты, креатинина и пр. [324, 427, 457, 300, 439, 385]. Работа системы активного транспорта органических кислот в почках кур в процессе эмбрионального и постнатального развития рассмотрена J. Gersh [349].
У морских рыб, рептилий и птиц, в связи со слабым развитием гломерулярного аппарата, система канальцевой секреции органических веществ играет важную роль в осуществлении почками выделительных функций [90]. На основании имеющихся данных [41, 55] принципиальная схема при транспорте органических кислот представлена в следующем виде. В клеточной мембране, обращенной к интерстициальной жидкости, локализованы переносчики. Как считают R.D. Holohan и C.R. Ross. [361], эти переносчики являются кинетически подвижными белками с молекулярным весом менее 10 тысяч. С помощью переносчиков и с использованием метаболической энергии органическая кислота поступает в клетку. Далее она движется по цитоплазме к апикальной мембране и через нее выделяется в просвет нефрона. Выход органической кислоты через апикальную мембрану происходит пассивно по механизму облегченной диффузии [107].
Наиболее распространенными веществами, используемыми для изучения системы активного транспорта органических кислот, являются парааминогиппуровая кислота и пенициллин. Отмеченные вещества обладают незначительной органотропностью и одновременно высокой способностью к канальцевой секреции [55, 278, 72]. Способность пенициллина к канальцевой секреции обнаружена уже в самых ранних исследованиях [426]. Исследования Э.А. Рудзит с соавт. [225] подтвердили высокую способность пенициллина к канальцевому транспорту в почках млекопитающих и птиц, так у кроликов около 80 % введенного пенициллина выделяется через почки, а скорость почечной экскреции пропорциональна его концентрации в плазме.
По данным СМ. Навашина и И.Л. Фоминой [187] после внутримышечного введения пенициллин всасывается очень быстро, снижение наполовину концентрации антибиотика в крови происходит в течение 30-60 минут. По данным этих же авторов 50-70 % пенициллина выводится с мочой в биологически активной форме; 80 % выводимого пенициллина выводится путем канальцевой секреции, а 20 % путем клубочковой фильтрации. При парентеральном введении, выделение пенициллина начинается уже через 15-20 минут. Г.А. Шакарян и др. [285] показали, что при введении курам полусинтетических пенициллинов их концентрация в почках уже через час довольно значительна, а через два часа в почках кур обнаруживается максимальная концентрация пенициллина.
В.Г. Пашинским с соавт. [206] установлено, что процесс канальцевого транспорта пенициллина локализован в проксимальном отделе нефрона, причем разные проксимальные канальцы и даже разные отделы одного проксимального канальца обладают отличающейся секреторной способностью [325, 327]. Одной из возможных причин этого явления может быть структурная [123, 440] и биохимическая [438] гетерогенность как проксимальных отделов кортикальных и юкстамедуллярных нефронов, так и клеток по длине каждого из канальцев.
Методы освобождения внутренней среды организма от ксенобиотиков
В физиологических условиях постоянство гомеостаза организма птиц поддерживается системами детоксикации и экскреции: почками и печенью, а жизненно важные функции реализуются по определенным схемам биохимических взаимоотношений под контролем центральной нервной системы. На фоне попадания в организм лекарственных ксенобиотиков, когда органы и системы элиминации не в состоянии осуществить детоксикацию организма, развиваются цитотоксические явления, приводящие к развитию органопатий [6, 216, 247, 280, 286, 318]; кроме того, происходит контаминация пищевых продуктов остатками лекарственных препаратов [258, 204, 307, 348]. Поэтому весьма актуальным является поиск оптимальных методов, способных осуществлять детоксикацию организма с тем, чтобы с одной стороны нормализовать гомеостатические функции организма птицы [52, 140, 56], а с другой - организовать разрыв порочной цепи перехода и кумуляции токсинов в системе "птица - продукция птицеводства - человек" [250].
Таковым может явиться метод эфферентной терапии (лат. efferens -выводить) - энтеросорбция. Под энтеросорбцией понимают [35, 131,219, 51, 79] введение в полость, как естественного, так и искусственного происхождения веществ, обладающих адсорбционной активностью, с целью направленной трансформации структурных компонентов внутренней среды организма, ведущим к определенным функциональным преобразованиям и, в конечном итоге, к восстановлению общей реактивности живого организма в субэкстремальных и экстремальных условиях.
Суть энтеросорбции заключается в пероральном введении ряда веществ — сорбентов, свойства которых направлены на удерживание на своей поверхности токсигенных компонентов химуса [35, 36], действие их основано на связывании и выведении из организма через желудочно-кишечный тракт эндогенных и экзогенных веществ, надмолекулярных структур и клеток [153-155]. В настоящее время в ветеринарии адсорбирующие вещества рекомендуются в качестве высокоэффективных антитоксических средств. Кроме того, они повышают общую неспецифическую резистентность организма, способствуют улучшению усвояемости питательных веществ кормовых рационов, являются богатым источником макро- и микроэлементов.
Развитие метода энтеросорбции и обоснование применения энтеросорбентов тесно связано с современной концепцией, направленной на общее понимание процессов интоксикации, вытекающей из клинико 45 лабораторных исследований и клинико-практических наблюдений [266]. Согласно Н.А. Белякову с соавт. [35], рециркуляция эндогенных токсинов происходит между энтеральнои средой и органами детоксикации и экскреции через структурные единицы кишки путем диффузии низкомолекулярных соединений, пиноцитоза для высокомолекулярных соединений и транспорта через дефекты эпителия и межклеточные контакты. Этот эффект физиологически обусловлен и связан с достаточной проницаемостью всех компонентов кишечной стенки, а также с градиентом концентрации, направленным на поддержание динамического равновесия энтеральнои среды. Подобное понимание процессов, участвующих в развитии и течении эндогенной интоксикации, наряду с приоритетом энтеросорбции по отношению к другим методам эфферентной терапии, создали предпосылки для использования довольно широкого ряда энтеросорбентов.
Энтеросорбенты - это фармапрепараты, они обладают выраженной способностью собирать в кишечнике токсические вещества и выводить их из организма, при этом сами они не содержат компоненты, которые бы всасывались в кишечнике и метаболизировались.
Для детоксикации созданы и активно применяются сорбенты, которые классифицированы Н.А. Лопаткиным и Ю.М. Лопухиным [166] следующим образом: по природе происхождения сырья (биологического происхождения -древесина, скорлупа орехов, косточки плодов, кости животных, рыб, морские водоросли; минерального происхождения - торф, ископаемые и каменные угли, минералы, содержащие кремний, магнетит, железо, смолы, полимеры, синтетические углерод-содержащие смолы); в зависимости от избирательности действия по отношению к различным веществам (высоко-, средне-, низкомолекулярные вещества, бактерии, иммунные комплексы); по размеру пор (макро- , мезо- , микропоры); по механизму адсорбции (неспецифическое связывание - физическая адсорбция и абсорбция, ионный обмен, капиллярная конденсация, объемное заполнение, ван-дер-ваальсовое взаимодействие; специфическое связывание); по структуре (гранулы; волокнистые; пены; пасты; гели и другие).
Свое активное применение в ветеринарии и медицине нашли такие энтеросорбенты, как: лечебный лигнин (полифепан, полифан); активные угли (СКН, КАУ, СУГС, карболен и др.); биополимеры природного происхождения, содержащиеся в панцире ракоообразных, насекомых и грибах (хитин, хитозан); алюмосиликаты (каолин); энтеросорбенты из природного вермикулитового сырья (энтеросорбент-В и полисорб-ВП); гумадапта [48, 250, 166, 35, 36, 163, 131, 219, 228, 66, 142, 235, 218, 136].
Согласно Н.П. Бгатовой и Л.Н Рачковской [34] энтеросорбенты должны отвечать ряду требований: они должны обладать механической прочностью, нетоксичностью, нетравматичностью для слизистых оболочек, оптимальной текстурой и удельной поверхностью, достаточной адсорбционной емкостью по отношению к удаляемым компонентам (широкому спектру токсических веществ, бактериальных токсинов, микробных клеток), хорошей эвакуацией из кишечника и отсутствием усиления процессов, вызывающих диспептические нарушения, не давать осложнений, иметь хорошие органолептические характеристики и обеспечивать сохранение ионного баланса в организме.
Ультраструктурные и цитохимические особенности нефроцитов кур на разных стадиях постнатального развития
Ранний период постнатального онтогенеза. Как было показано выше, развитие нефронов происходит из нефрогенной ткани, основным элементом которой является нефрогенная клетка. Ввиду того, что к моменту вылупления сформированы не все нефроны, в почке суточного цыпленка можно видеть различные стадии развития нефроцитов, включая и самые ранние.
При изучении клеток нефрогенной ткани под электронным микроскопом (рис. 21), в них обнаруживаются признаки, типичные для малодифференцированных клеток. Клетки характеризуются относительно крупным ядром, преимущественно округлой формы, с одним или двумя ядрышками, многочисленными зернами хроматина, равномерно распределенными по всей нуклеоплазме. Цитоплазма нефрогенных клеток богата свободными рибосомами и полисомами, содержит единичные митохондрии. Среди нефрогенных клеток содержатся мезенхимные элементы, свободно лежащие между нефрогенными клетками. Для нефрогенной ткани характерно довольно свободное расположение клеток, между которыми имеются достаточно широкие межклеточные промежутки.
Первым этапом нефрогенеза является образование нефрогенных пузырьков, которые обычно расположены в непосредственной близости от собирательных трубок. Каждый пузырек имеет шаровидную форму, покрыт тонкой базальной мембраной, обладает выраженной полостью. Клетки, выстилающие нефрогенный пузырек, относятся к малодифференцированным (рис. 22). Они содержат небольшой объем цитоплазмы, а в ядрах появляются единичные гранулы гетерохроматина. Несмотря на немногочисленность свободных рибосом и полисом, данные органоиды являются доминирующими структурными элементами цитоплазмы. Небольшое число мелких округлых митохондрий равномерно распределено по всей клетке. S-образное тело (рис. 23), являющееся следующей ступенью нефрогенеза, сформировано также из малодифференцированных клеток с относительно крупным ядром и узкой цитоплазмой. Распределение в этих клетках органоидов равномерное и неориентированное.
Нефрогенная клетка, нефрогенный пузырек и S-образное тело — последовательные стадии образования нефрона, причем обнаружить каких-либо специализированных или специфических признаков почечных телец и канальцев на этих стадиях не удается. Дифференцировка же различных отделов нефрона начинается со стадии S-образного тела. Вначале на одном из концов его, удаленного от собирательной трубки, происходит формирование почечных сосудистых клубочков, что сопровождается активной пролифирацией клеточных элементов и в конечном итоге формирующих шаровидное скопление (рис. 24). В дальнейшем в шаровидной массе клеток постепенно осуществляется целый ряд структурных изменений, приводящий к дифференцировке париетального и висцерального листков капсулы почечных телец и появлению кровеносных капилляров. Между подоцитами и эндотелиальными клетками появляется тонкая базальная мембрана, которая сначала выражена единичными фрагментами, соединяющимися друг с другом, и образующими границу с кровеносными капиллярами.
Гематоксилин Гейденгайна. Об. 90х Ок. 7х будущего подоцита от кровеносных капилляров. По мере развития клубочка в процессе постнатального онтогенеза наблюдается постепенное истончение эндотелия. Между отростками подоцитов и эндотелиальными клетками видна трехслойная базальная мембрана, к которой со стороны капсулы примыкают формирующиеся ножки подоцита, между которыми определяются различной степени выраженности тонкие щелевые диафрагмы (рис. 25).
Исследования показали, что почечные канальцы в каждом будущем нефроне формируются почти одновременно с формированием почечных телец. При этом вся постгломерулярная часть S-образного тела дифференцируется в проксимальный и дистальный отделы нефрона. Причем проксимальный отдел нефрона формируется из участка S-образной трубки, прилежащей к почечному тельцу. Тубулярная часть S-образного тела удлиняется, расширяется ее диаметр и просвет.
Первым признаком, по которому можно идентифицировать клетки проксимальных канальцев, является формирование пиноцитозных инвагинаций и пузырьков, которые появляются на апикальной поверхности клеток S образного тела. Практически одновременно с этим обнаруживаются и единичные микроворсинки (рис. 26). !; Клетки проксимальных канальцев на этой стадии малодифференцированы, содержат крупные ядра и незначительный объем цитоплазмы. В цитоплазме видны мелкие округлые митохондрии, равномерно распределенные по цитоплазме, а между ними встречаются отдельные-профили гладкого эндоплазматического ретикулума. Вся цитоплазма клеток на этом этапе клеток заполнена многочисленными рибосомами и полисомами. Базальная инвагинация выражена слабо (рис. 27).
Морфофункциональные изменения в организме цыплят- бройлеров и кур-несушек после применения пролонгированного тетрациклина
В условиях экспериментального лекарственного воздействия, вызванного однократной внутримышечной инъекцией пролонгированного тетрациклина — нитокса в дозе 200 мг/кг, исследованы цитофункциональные изменения в организме цыплят-бройлеров и кур-несушек, а так же установлен уровень остаточных количеств антибиотика в мясе, субпродуктах и яйцах птиц.
Морфобиохимические исследования крови у цыплят-бройлеров проводили на первые, седьмые, 14-е и 20-е сутки после введения нитокса. Перекисное окисление липидов (ПОЛ). Установлено, что после внутримышечной инъекции нитокса, в дозе 200 мг/кг, в сыворотке крови цыплят-бройлеров увеличивается содержание малонового диальдегида (МДА) — одного из конечных продуктов перекисного окисления липидов биомембран (табл. 20). Так, через сутки после однократной внутримышечной инъекции нитокса уровень МДА возрастал с 2,876±0,05 мкмоль/л в контроле до 3,590±0,17 мкмоль/л в опыте, то есть на 25 % (Р 0,01). На седьмые сутки содержание МДА в сыворотке крови опытных цыплят достигало 4,32486±0,19 мкмоль/л, то есть превышало контрольные показатели на 50 % (Р 0,001); на 14-е сутки снижалось до уровня 4,02215±0,14 мкмоль/л, на 20-е сутки определялось на уровне 3,85194±0,11 мкмоль/л, превышая контрольные значения на 29,3 % (Р 0,001). Следовательно, внутримышечная инъекция нитокса в дозе 200 мг/кг, приводит к значительному увеличению уровня МДА в сыворотке крови цыплят. Повышенное содержание МДА сохраняется на протяжении всего периода последействия препарата вплоть до убоя птицы на мясо, что объясняется высокой дозой (200 мг/кг), превышающей вдвое терапевтическую, и эффектом пролонгированного действия препарата.
Трансминазы. О функциональных изменениях в печени цыплят-бройлеров при применении нитокса судили по изменению активности аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (ACT). В частности на развитие цитолиза гепатоцитов указывало значительное повышение активности индикаторных ферментов: АЛТ и ACT (табл. 20).
Так, через сутки после последнего введения нитокса в сыворотке крови цыплят-бройлеров уровень АЛТ повышался на 63,2 % с 11,40±1,72 нмоль/(с-л) до 18,60±1,20 нмоль/(с-л) (Р 0,01). Повышение уровня ACT в этот период было недостоверным. На седьмые, 14-е и 20-е сутки после воздействия препарата отмечалось достоверное повышение уровня обеих трансфераз, но особенно
225 АЛТ. В указанные периоды активность АЛТ превышала контрольные значения более чем вдвое, достигая соответственно 24,0±1,77 нмоль/(с-л) (Р 0,001); 28,2±2,53 нмоль/(с-л) (Р 0,001) и 21,8±1,92 нмоль/(с-л) (Р 0,01). Уровень ACT так же увеличивался, но не столь значительно, достигая на седьмые сутки 320,6±16,79 нмоль/(с-л); 14-е сутки - 362,4±15,28 нмоль/(сл) и 20-е сутки — 322,6±12,50 нмоль/(сл), что превышало контрольные показатели на 38,2 % (Р 0,05); на 63,4 % (Р 0,001) и на 43,8 % (Р 0,05) соответственно. Достоверное понижение коэффициента де Ритиса во все исследуемые периоды после воздействия нитокса, свидетельствует о преимущественном увеличении активности АЛТ, что указывает на развитие цитолиза гепатоцитов у птиц.
Таким образом, острая лекарственная интоксикация, вызванная внутримышечным введением пролонгированной формы окситетрациклина — нитокса в дозе 200 мг/кг, вызывала поражение печеночной паренхимы, о чем свидетельствует более чем двукратное повышение маркера цитолиза гепатоцитов — аланинаминотрансферазы и снижение коэффициента де Ритиса. Холестерин, билирубин, глюкоза. Динамика изменений уровня холестерина, билирубина и глюкозы в сыворотке крови цыплят-бройлеров при введении нитокса представлена в таблице 20. Откуда следует, что введение цыплятам повышенных доз окситетрациклина пролонгированного действия приводит к холестеринемии, билирубинемии и гипогликемии, что объясняется развитием холестаза и нарушением процессов глюконеогенеза, развившихся вследствие цитолиза гепатоцитов.
Белок и белковые фракции. Динамика изменений уровня общего белка и белковых фракций представлена в таблице 21. Откуда следует, что уровень общего белка достоверно снижался на седьмые сутки после воздействия препарата с 35,60±0,42 г/л контроле до 32,31±0,85 г/л в опыте (Р 0,01); на 14-е сутки - с 35,30±0,88 г/л до 29,48±1,35 г/л (Р 0,01) и на 20-е сутки - с 35,70±0,71 г/л до 27,34±0,62 г/л (Р 0,001) соответственно.
Острое воздействие пролонгированным тетрациклином сопровождалось развитием лейкоцитоза, который регистрировался во все периоды после действия препарата. Уровень лейкоцитов возрастал уже через сутки после применения нитокса, превышая контрольные показатели на 51 % (Р 0,001). На седьмые сутки количество лейкоцитов увеличивалось, по сравнению с контролем, более чем вдвое, достигая 65,87±2,98- 109/л (Р 0,001), в дальнейшем отмечалось некоторое снижение уровня лейкоцитов, однако оно было не существенным.
В лейкоцитарном профиле преобладали псевдоэозинофилы (табл. 23), их количество на первые и седьмые сутки возрастало почти вдвое, по сравнению с контролем, составив 59,2±2,82 % и 53,2±0,82 % (Р 0,001). В дальнейшем уровень псевдоэозинофилов несколько понижался, достигая к 20 сутках 38,4±3,67 %, что превышало контрольные значения на 50 % (Р 0,05). При этом концентрация лимфоцитов была значительно снижена, что может быть связано с иммуннодепрессивным действии нитокса.
