Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. Токсические свойства производных бензимидазолкарбаматов 9
1.2. Фармакокинетика и метаболизм препаратов, производных бензимидазолкарбаматов 17
1.3. Некоторые аспекты влияния паразитов на организм хозяина 22
1.3.1. Краткая характеристика биологии развития Trichinella spiralis и Т. pseudospiralis и реакций у хозяина 23
1.3.2. Цитогенетическое действие паразитов на геном у хозяина...31
2. Собственные исследования 42
2.1. Материалы и методы 42
2.1.1. Опыты по оценке влияния заражения мышей культурами A. tetraptera, Т. spiralis и Т. pseudospiralis на митоз и проявление антимитотического действия албендазола у хозяина 42
2.1.1.1. Схема опытов на мышах, зараженных A tetraptera 42
2.1.1.2. Схема опытов на мышах, зараженных Т. spiralis 44
2.1.1.3. Схема опытов на мышах, зараженных Т. pseudospiralis .45
2.1.2. Опыты по оценке влияния заражения, tetraptera, Т. spiralis и Т. pseudospiralis на биодоступность и метаболизм албендазола 45
2.1.3. Оценка токсических свойств микрокапсулированного албендазола 46
2.1.3.1. Острая токсичность 46
2.1.3.2. Подострая тосичность 46
2.1.3.3. Антимитотическое действие 47
2.1.3.4. Особенности биодоступности и метаболизма албендазола в печени при введении в виде микрокапсул 48
2.1.4. Статистическая обработка 48
2.2. Результаты исследований 48
2.2.1. Влияние инвазии A. tetraptera на митоз іслеток костного мозга у мышей и проявление антимитотического действия албендазола 48
2.2.1.1. Влияние инвазии A. tetraptera на митоз клеток костного мозга у хозяина 48
2.2.1.2. Влияние албендазола в дозе 5 мг/кг на митоти-ческую активность клеток костного мозга у незараженных мышей 50
2.2.1.3. Влияние инвазии A tetraptera и албендазола в дозе 5 мг/кг на митотическую активность клеток костного мозга мышей 52
2.2.1.4. Влияние албендазола в дозе 10 мг/кг на митотическую активность клеток костного мозга у незараженных мышей 54
2.2.1.5. Влияние инвазии A tetraptera и албендазола в дозе 10 мг/кг на митотическую активность клеток костного мозга мышей 56
2.2.2. Влияние инвазии Trichinella spiralis и Т. pseudospiralis на митоз клеток костного мозга у мышей и проявление антимитотического действия албендазола 58
2.2.2.1. Влияние инвазии Trichinella spiralis и Т. pseudospiralis на митоз клеток костного мозга у мышей 58
2.2.2.2. Влияние инвазии Т. spiralis и Т. pseudospiralis на проявление антимитотического действия албендазола 62
2.2.3. Особенности биодоступности и метаболизма албендазола у мышей, зараженных A. tetraptera, Т. spiralis и Т. pseudospiralis 70
2.2.3.1. Методические указания по определению остаточных количеств албендазола и метаболита албендазола сульфоксида в пробах животного происхождения методом ЖХВД 70
2.2.3.2. Динамика содержания албендазола и албендазола сульфоксида в печени и почках у незараженных
мышей 79
2.2.3.3. Динамика содержания албендазола и албендазола сульфоксида в печени и почках у мышей, зараженных A. tetraptera 84
2.2.3.4. Динамика накопления, распределения и мета болизма албендазола у мышей, зараженных Т. spiralis и Т. pseudospiralis, по сравнению с незараженными животными 87
2.2.4. Токсические свойства микрокапсулированного албендазола 100
2.2.4.1. Острая токсичность 101
2.2.4.2. Подострая токсичность 102
2.2.4.3. Антимитотическое действие микрокапсулированного албендазола 109
2.2.4.4. Особенности накопления и метаболизма албендазола
в печени при его введении в виде микрокапсул 112
Обсуждение 115
Выводы 124
Практические предложения 126
Список литературы
- Фармакокинетика и метаболизм препаратов, производных бензимидазолкарбаматов
- Опыты по оценке влияния заражения, tetraptera, Т. spiralis и Т. pseudospiralis на биодоступность и метаболизм албендазола
- Влияние инвазии A. tetraptera на митоз іслеток костного мозга у мышей и проявление антимитотического действия албендазола
- Влияние инвазии Т. spiralis и Т. pseudospiralis на проявление антимитотического действия албендазола
Введение к работе
Актуальность проблемы. Токсические свойства химиотерапевтических средств, в том числе антгельминтиков, оцениваются в эксперименте на здоровых животных. Правильность такой постановки исследований традицион-на и по существу не вызывает сомнений.
В то же время возбудители практически всех паразитарных заболеваний индуцируют различные морфологические и функциональные изменения во многих органах и системах организма хозяина. В результате токсические эффекты противопаразитарных препаратов и их поведение в организме зара-женных животных могут подвергаться значительной модификации по сравнению со здоровыми. Особое значение в данном случае приобретает ситуация, когда токсические свойства препарата на фоне инвазии усиливаются. Получение подобных сведений не только расширит имеющуюся информацию о том или ином лекарственном средстве, но и позволит прогнозировать и предупреждать возможные отрицательные эффекты при лечении человека и животных.
Среди токсикологических характеристик препаратов и различных факторов биологической природы особое значение придается их влиянию на клеточное деление и генетический аппарат. Хорошо известно, что антгель-минтики, производные бензимидазолкарбаматов, в частности, албендазол (Р. Delatour, J. Richard, 1976; Л.А. Лаптева, 1988; СИ. Чукина, 1990; Т.С. Новик, 1992), обладают выраженным антимитотическим действием, т.е. нарушают митоз. Продукты обменных процессов гельминтов, помимо всего прочего, способны вызывать нарушения генома у хозяина (Вл.Я. Бекиш, О.-Я.Л. Бе-киш, 2004). В подобной ситуации вполне логично задаться вопросом об общем эффекте антгельминтика и инвазии на митотическое деление клеток у зараженных животных и вытекающих отсюда последствиях.
В отношении албендазола такой вопрос приобретает особую остроту с учетом его интенсивной биотрансформации в организме человека и животных с образованием целого ряда метаболитов. Среди них продукт сульфо-
окисления албендазола, т.е. его сульфоксид, имеет особое значение, именно он ответственен за антгельминтное действие и токсические эффекты препарата. В этой связи интересно оценить реальное влияние инвазии на метаболизм албендазола и, в частности, его превращение в сульфоксид; изменение этих процессов может привести к модификации токсических свойств и терапевтической эффективности препарата.
Выяснить и исследовать поставленные вопросы можно при использовании адекватных лабораторных моделей нематодозов, например, мышей, зараженных Aspiculuris tetraptera, Trichinella spiralis и Т. pseudospiralis.
Применение албендазола в качестве основного препарата для экспериментов побудило нас провести также исследования несколько иного рода. Этот препарат является действующим веществом перспективной микрокап-сулированной формы, разработанной в ВИГИСе. Установлена его высокая терапевтическая эффективность при альвеолярном и цистном гидатидозе, а также трихинеллезе на лабораторных животных (Ф.П. Коваленко, 1998; 2000). Исходя из этого, в задачи наших исследований входила оценка некоторых токсических свойств препарата и выявление особенностей биодоступности и метаболизма действующего вещества.
Цель исследований и задачи. Целью настоящей работы была оценка влияния инвазии (на примере A. tetraptera, Т. spiralis и Т. pseudospiralis) на проявление антимитотического действия албендазола и его биодоступность, а также оценка некоторых токсических свойств микрокапсулированного албендазола.
Для выполнения поставленной цели необходимо было решение следующих подчиненных задач:
Оценка воздействия экспериментального заражения A. tetraptera, Т. spiralis и Т. pseudospiralis на митоз клеток костного мозга хозяина.
Оценка воздействия различных доз албендазола на митоз клеток костного мозга у мышей.
Оценка антимитотического действия албендазола на фоне заражения A. tetraptera, Т. spiralis и Т. pseudospiralis.
Изучение особенностей биодоступности и метаболизма албендазола в органах мышей, зараженных A. tetraptera, Т. spiralis и Т. pseudospiralis.
Оценка острой токсичности микрокапсулированного албендазола.
Изучение подострой токсичности микрокапсулированного албендазола.
Оценка антимитотического действия албендазола в микрокапсулах.
Изучение динамики содержания и метаболизма албендазола после введения микрокапсулированного препарата.
Научная новизна.
Впервые оценено влияние инвазий A. tetraptera, Т. spiralis и Т. pseudospiralis на митоз клеток костного мозга и проявление антимитотического действия албендазола у зараженных животных.
Изучены особенности содержания и метаболизма албендазола у животных на фоне инвазий A. tetraptera, Т. spiralis и Т. pseudospiralis.
Проведена токсикологическая оценка микрокапсулированного албендазола.
Практическая значимость.
Подготовлены «Методические указания по определению остаточных количеств албендазола и метаболита албендазола сульфоксида в пробах животного происхождения методом жидкостной хроматографии высокого давления» (одобрены секцией «Инвазионные болезни животных» РАСХН 01.03.2007 г.).
Результаты токсикологической оценки микрокапсулированного албендазола позволяют рекомендовать его к применению в лечении гельминтозов человека и животных и составляют основу материалов для регистрации препарата.
Апробация работы. Результаты исследований были неоднократно представлены на отчетных научных конференциях ВИГИС и научных конферен-
циях «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями животных» (2006; 2007 гг.).
Личный вклад соискателя. Представленная диссертационная работа является результатом трехлетних научных исследований автора. Исследования по изучению влияния A. tetraptera, Т. spiralis и Т. pseudospiralis на митоз у хозяина, особенностей всасывания, распределения и метаболизма албендазола, а также проявление его антимитотического действия у зараженных мышей и оценка токсических свойств микрокапсулированного албендазола выполнены аспиранткой лично.
Работы выполнялись под научным руководством доктора биологических наук, профессора Т.С. Новик, которая оказывала научно-методическую помощь в проведении исследований и анализе полученных результатов.
Основные положения, выносимые на защиту.
Влияние возбудителей аспикулуроза и трихинеллеза на деление соматических клеток костного мозга у хозяина.
Антимитотическое действие албендазола у незараженных и зараженных аспикулурисами и трихинеллами мышей.
Особенности накопления и биотрансформации албендазола в органах у мышей, больных аспикулурозом и трихинеллезом.
Изучение токсических свойств микрокапсулированного албендазола.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных статей, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемой проблеме, в том числе, две статьи в издании, рекомендованном ВАК РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 146 страницах компьютерного текста. Список использованной литературы включает 232 источника, в том числе 122 отечественных и ПО иностранных. Работа иллюстрирована 27 таблицами и 35 рисунками.
1. Обзор литературы
Приводим анализ литературных данных, имеющих непосредственное отношение к вопросам наших собственных исследований. Среди них можно выделить информацию, касающуюся токсикологии и фармакокинетики препаратов из группы бензимидазолкарбаматов, поскольку наши основные усилия были связаны с ярким представителем данных биологически активных соединений — албендазолом.
Кроме того, оценивалось влияние экспериментальной инвазии на проявление антимитотического действия албендазола, при этом в наших исследованиях выделился очень интересный фрагмент работы, касающийся воздействия самих гельминтов на клеточное деление. Исходя из этого, нам представлялось необходимым по возможности обобщить литературные данные по цитогенетическому действию различных патогенных организмов и паразитов у хозяина.
Фармакокинетика и метаболизм препаратов, производных бензимидазолкарбаматов
Поскольку бензимидазолкарбаматы являются действующим веществом многих известных антгельминтиков и других лекарственных средств, то вопросы их фармакокинетики, остаточных количеств и метаболизма очень хорошо освещены в литературе. Приводим наиболее интересные и важные вопросы. Предворяя анализ этих данных, можно отметить, что в основном, за небольшим исключением, соединения данной группы незначительно всасываются из желудочно-кишечного тракта, подвергаются интенсивному метаболизму и довольно быстро выделяются. Однако конкретный характер и интенсивность этих процессов определяются химическим строением соединений. Критическим фактором является замещение в 5-ом положении бензимида-зольного кольца (рисунок 1.2.1.).
Условно разделив соединения данной химической группы по этому признаку, рассмотрим их основные метаболические превращения и особенности фармакокинетики.
Наиболее простое строение имеют бензимидазолкарбаматы без заместителей в 5-ом положении бензимидазольного кольца.
К препаратам данной группы относятся, например тиабендазол, беномил и БМК (медамин). Данные соединения претерпевают примерно одинаковые изменения в организме животных: гидроксилирование в 5-ом, иногда в 4-ом положениях. Гидроксилированные производные являются более полярными соединениями, лучше растворяются в воде и быстро выделяются из организма.
Вот типичная «судьба» таких бензимидазолкарбаматов у животных. При введении тиабендазола жвачным животным — телятам, ягнятам и козам было установлено, что препарат быстро всасывается, его максимальная концен трация в плазме крови устанавливается через 4-7 часов после введения. Спустя 96 часов после введения в крови не обнаружено следов ангельминти-ка даже при использовании высокой дозы (D.J.Tocco et al., 1965). Аналогичное исследование на человеке, крысах и собаках позволило определить, что максимальная концентрация препарата в крови детектируется через 2-3 часа после введения; а через 24-48 часов препарат практически не обнаруживается (D.J.Tocco et al., 1966).
Ещё одним соединением, относящимся к данной группе, является беномил. Беномил долгое время широко применялся в качестве фунгицида; нам он интересен тем, что в организме животных превращается в БМК (метиловый эфир 2-бензимидазолилкарбаминовой кислоты) (J.A.Gardiner, R.K.Brantley, H.Sherman, 1968). Последнее соединение было предметом многолетних исследовний, проводимых в 80-90-е годы в ВИГИСЕ, с целью снятия эмбриотропного действия и создания новых антгельминтиков (Т.С.Новик, 1992).
J.A.Gardiner et al. в 1975 г. показали, что через 24 часа большая часть беномила выделяется с мочой (78,9%) и только 8,7% — с фекалиями. Основное выделение соединения имело место в течение 72 часов. Авторы сделали вывод, что беномил и его метаболиты сравнительно быстро выводятся из организма животных.
Другая группа бензимидазолкарбаматов включает в себя более современные и высокоэффективные антгельминтики, такие как фенбендазол, ме-бендазол, оксфендазол, камбендазол, триклабендазол, албендазол и др. Эти препараты были синтезированы при введении различных заместителей в 5-е положение бензимидазольного кольца. Подобное изменение молекулы бензимидазолкарбаматов привело к замедлению их метаболизма и выделения.
Приводим некоторые характерные данные, позволяющие составить адекватное мнение об особенностях всасывания, биотрансформации и выделения этих соединений.
При введении фенбендазола лабораторным и домашним животным его всасывание во всех случаях было низким, причем, у животных с однокамер ным желудком оно проходило быстрее, чем у жвачных. Максимальная концентрация в крови установлена через 24 часа после введения, выделение препарата в основном завершалось через 3-7 суток (O.Christ, H.M.Kellner, G.Kloepffer, 1974).
В результате окисления по сере фенбендазол превращается в оксфенда-зол (также известный антгельминтик) (AJ.Ngomuo, S.E.Marriner, J.A.Bogan, 1984). C.J.Di Cuollo et al., 1974 обнаружили в организме овец 7 метаболитов после введения парбендазола, которые в химическом отношении представляли собой спирты, кетоны, диол и карбоновую кислоту.
Для некоторых бензимидазолкарбаматов также характерна реакция гидролиза уретановой группировки (флубендазол, фенбендазол, мебендазол и албендазол), которую катализируют эстеразы. Также может иметь место N-метилирование бензимидазольного кольца, в частности, у тиабендазола и ал-бендазола.
Бензимидазолы-кетоны, типа мебендазола или флубендазола, превращаются в соответствующие спирты, представляющие собой основные метаболиты, циркулирующие в крови и не обладающие антгельминтной активностью (H.Van den Bossche et al., 1982; B.C.Mayo et al., 1978). При пероральном введении мебендазола отмечается низкая биодоступность препарата. Однако при назначением людям одновременно с жирной пищей его уровень в крови возрастал (GJ.Munst, G.Karlaganis, J.Bircher, 1980). Максимальное накопление в плазме крови отмечалось через 2-4 часа после введения препарата. Основное выведение из организма происходило в течение 48 часов. Продукты метаболизма мебендазола интенсивно выделяются с желчью и это основной путь их экскреции (RJ.Allan and T.R.Watson, 1982; P.A.Braithwaite et al., 1982).
Опыты по оценке влияния заражения, tetraptera, Т. spiralis и Т. pseudospiralis на биодоступность и метаболизм албендазола
Опыты по оценке подострой токсичности микрокапсулированного албендазола проводили на белых мышах-самцах с исходной массой тела 20-24 г.
Из 40 мышей сформировали 4 группы по 10 животных в каждой. Мышам 1; 2 и 3 групп препарат вводили в виде суспензии на оливковом масле соответственно в дозах 1/10; 1/100 и 1/1000 от LD5o (точнее от максимально возможной дозы для перорального введения, установленной в остром опыте). Контрольная 4 группа мышей аналогичной массы и пола получала оливковое масло в соответствующем объеме. Продолжительность введения составила 10 суток.
В течение всего периода введения препарата наблюдали за общим состоянием и поведением животных, приемом корма и воды, видимыми физиологическими функциями и т.п. Ежедневно у мышей регистрировали массу тела. В конце опыта через 1 сутки после последнего введения препарата мышей убивали дислокацией шейных позвонков и отбирали пробы крови (с и без антикоагулянта) для определения гематологических и биохимических показателей.
Основные показатели периферической крови крыс определяли на гематологическом анализаторе «ACT-Diff» (США); лейкоцитарную формулу крови — общепринятым методом.
На биохимическом анализаторе «Clima-15» (Испания) проводили определение биохимических показателей.
Влияние микрокапсулированного албендазола на митотическую активность в популяции костного мозга мышей оценивали методом C.F.Ford, J.L.Hammerton (1956). Препарат в форме суспензии, приготовленной на оливковом масле, вводили беспородным мышам-самцам массой 18-20 г пе-рорально однократно в дозе 30 мг/кг (по ДВ). Через 3; 6; 24; 48 и 72 часа после введения препарата убивали по 6 мышей с последующим извлечением костного мозга. Выделение костного мозга и обработку материала проводили, как описано выше (раздел 2.1.1.1.). Определяли митотический индекс, который выражали в процентах. Регистрировали все стадии митоза и также выражали в процентах. Контролем служили мыши, не получавшие препарат.
Параллельно оценивали влияние албендазола (без микрокапсулирова-ния) на оливковом масле на митоз клеток костного мозга мышей. Препарат в форме суспензии на оливковом масле вводили животным также в дозе 30 мг/кг по вышеописанной схеме.
Для выявления возможных особенностей содержания и метаболизма албендазола у мышей при его введении в виде микрокапсул сформировали две группы по 12 животных в каждой массой 20-23 г. Мышам 1 группы вводили микрокапсулированный албендазол на оливковом масле в дозе 30 мг/кг по действующему веществу; животные 2 группы получали албендазол в виде суспензии на оливковом масле также в дозе 30 мг/кг.
По 3 мыши из каждой группы убивали через 3; 6 и 24 и 48 часов после введения препаратов. Отбирали пробы печени, в которых определяли содержание албендазола и албендазола сульфоксида методом жидкостной хроматографии высокого давления (2.2.3.). До анализа пробы печени хранили при -20С. Во всех случаях статистическую обработку полученных данных проводили с использованием метода Стьюдента-Фишера с t-критерием.
Перед исследованием влияния нематод A. tetraptera на проявление антимитотического действия албендазола необходимо было выяснить, оказывает ли сама инвазия влияние на митотическую активность костного мозга у мышей. Целесообразным было провести подобное исследование при различной интенсивности инвазии у животных. Полученные данные приведены в таблице 2.2.1.1. и в более наглядной форме на рис. 2.2.1.1.
При оценке влияния инвазии A. tetraptera на митоз у хозяина можно отметить, что при относительно низкой интенсивности инвазии (2-50 экземпляров на мышь) митотический индекс (основной показатель митоза) не претерпевал достоверных изменений по сравнению с контрольным значением (р 0,05). При данной интенсивности инвазии значение митотического индекса колебалось в пределах от 1,00+0,18 до 1,32+0,19, против 1,02±0,12% в контроле. Однако при увеличении интенсивности инвазии (90 и 210 экземпляров на мышь) имело место повышение митотического индекса до 1,72±0,24% и 1,54±0,17% по сравнению с контролем (1,02±0,12% ) (р 0,05).
Обратим внимание на данные, касающиеся процентного соотношения отдельных стадий митоза в популяции клеток костного мозга мышей. При интенсивности заражения в пределах 2-30 экз/мышь количество профаз, метафаз, анафаз и телофаз было сравнимым с соответствующими контрольными значениями (таблица 2.2.1.1.). При интенсивности инвазии, составляющей 50 экземпляров A. tetraptera на мышь, снизилось количество профаз (р 0,05), но уровень метафаз, несмотря на тенденцию к увеличению, не подвергся достоверным изменениям (р 0,05).
Влияние инвазии A. tetraptera на митоз іслеток костного мозга у мышей и проявление антимитотического действия албендазола
Кроме того, необходимо отметить, что влияние личинок Т. spiralis на митоз клеток костного мозга хозяина снижалось по мере развития личинок от кишечной к мышечной стадии. Напротив, действие личинок Т. pseudospiralis по мере их развития изменялось не существенно, и проявлялось на всех стадиях, при достоверном различии не только с незараженным контролем, но и с эффектом Т. spiralis на мышечной стадии развития (рисунок 2.2.2.1.)..
Подобные различия (во всяком случае, на мышечной стадии) мы связываем с морфологическими особенностями личинок Т. pseudospiralis, то есть отсутствием капсулы. Кроме того, не исключено, что продукты метаболизма бескапсульных личинок обладают более патогенными свойствами в отношении митоза клеток костного мозга хозяина.
При анализе данных таблицы 2.2.2.1. мы ограничивались констатацией факта увеличения митотического индекса у мышей после их заражения трихинеллами. Сам по себе этот факт должен был бы скорее свидетельствовать об усилении митотической активности в популяции клеток костного мозга хозяина, и сейчас нам предстоит выяснить, насколько это соответствует действительности. В этой связи рассмотрим данные по процентному содержанию клеток, находящихся на разных стадиях митоза.
В тех случаях, когда нами отмечалось повышение митотического индекса, одновременно имело место увеличение процентного содержания метафаз с сопутствующим снижением других стадий митоза. В качестве показательных примеров приводим данные по процентному количеству отдельных стадий митоза в популяции клеток костного мозга у мышей: 1) зараженных Т. spiralis (на кишечной стадии развития личинок) - профазы -17,81±14,41%, метафазы - 73,97+5,17%, анафазы - 4,11±2,34% и телофазы -4Д1±2,34%; 2) зараженных Т. pseudospiralis (на кишечной стадии развития личинок) - профазы - 5,67+2,48%; метафазы - 85,23+3,80%; анафазы -4,55±2,23% и телофазы - 4,55±2,23%; и, наконец, 3) зараженных Т. pseudospiralis (на мышечной стадии развития) — профазы 5,15±2,26%; метафазы — 88,66±3,23%; анафазы - 2,07+1,45% и телофазы 4,12+2,03% против соответствующих контрольных значений — профазы — 16,67+6,22%; метафазы -55,56±8,40%; анафазы - 10,24±3,05% и телофазы - 17,53+6,57%.
Напрашивается однозначный вывод, что заражение трихинеллами приводило к увеличению количества клеток, находящихся на стадии метафазьт, с одновременным снижением других стадий митоза. Иными словами, имело место накопление метафаз, вероятно, за счет остановки клеточного деления на этой стадии митоза. Повышение митотического индекса было результатом указанных нарушений.
Таким образом, трихинеллы оказывают антимитотическое действие на клетки костного мозга хозяина, вызывая накопление метафаз и увеличение митотического индекса. Указанный эффект имеет свои особенности проявления в зависимости от вида и стадии развития трихинелл.
В разделе 2.2.2.1. мы показали, что заражение мышей Т. spiralis и Т. pseudospiralis само по себе уже приводит к нарушению митоза в популяции клеток костного мозга.
Как уже неоднократно указывалось выше, антгельминтик албендазол также проявляет выраженное антимитотическое действие. В связи с этим было вполне логичным предположить, что подобное действие албендазола может усугубляться или, во всяком случае, изменяться на фоне трихинеллеза. Исходя из вышесказанного, еще одним интересным вопросом наших исследований была оценка антимитотического действия препарата на фоне инвазии, вызванной различными видами трихинелл и на различных стадиях развития личинок.
В данном случае представляется целесообразным сравнить действие албендазола на митоз клеток костного мозга мышей, зараженных Т. spiralis и Т. pseudospiralis, с учетом стадий развития инвазионных личинок, а также с данными по албендазолу у незараженных мышей. Ввиду большого количества экспериментального материала и упрощения его сравнительного анализа в последующих таблицах приводим результаты исследования эффектов албендазола у зараженных и незараженных мышей (в обоих случаях в дозе препарата 30 мг/кг) и повторяем данные по влиянию самой инвазии на митоз у хозяина.
На 5 сутки после заражения мышей личинками Т. spiralis (кишечная стадия развития личинок) введение албендазола (30 мг/кг) привело к достоверному повышению митотического индекса по сравнению с интактным контролем (0,47+0,08%). Значения данного показателя составили 0,86±0,11; 1,01+0,11 и 0,88±0,10% соответственно, через 3; 6 и 24 часа после введения албендазола (таблица 2.2.2.2.1.). У мышей, зараженных Т. pseudospiralis (кишечная стадия), митотические индексы достигали величин 0,82±0,09; 0,85+0,09; 1,10±0,11% соответственно через 3; 6 и 24 часа после введения препарата (таблица 2.2.2.2.2.).
Влияние инвазии Т. spiralis и Т. pseudospiralis на проявление антимитотического действия албендазола
Рассмотрим приведенные данные с учетом вида и стадии развития трихинелл. При введении албендазола мышам на 5 сутки после заражения Т. spiralis, т.е. на кишечной стадии развития паразита, концентрация самого албендазола в печени мало отличалась от таковой у здоровых мышей: на 3; 6 и 24 часа она составила соответственно 2439,38±53,24; 1807,89±142,11 и 227,63±38,70 нг/г против аналогичных значений у здоровых мышей 2100,77±675,41; 1562,90±163,51 и 469,73±93,40 нг/г (рисунок 2.2.3.4.1.).
В печени зараженных и незараженных мышей максимальный уровень неизмененного албендазола был обнаружен через 3 часа после введения препарата с последующим его снижением.
Обращает на себя внимание существенно более низкий уровень албендазола сульфоксида в печени мышей, зараженных трихинеллами, соответственно 86,90±15,42; 230,07±27,87 и 550,20±74,78 нг/г против соответствующих значений 2616,69+380,95; 2015,73±156,70 и 976,16±246,82 нг/г в контроле. Подобный установленный факт, скорее всего, свидетельствует об определенном угнетении метаболизма албендазола у мышей после заражения трихинеллами данного вида (рисунок 2.2.3.4.2.).
В отношении содержания албендазола в почках можно отметить следующее. Максимальный уровень препарата обнаружен через 3 часа после введения как у мышей после экспериментального заражения, так и у здоровых животных, причем, с учетом арифметических ошибок различия не носили статистически значимый характер: 6581,41 ±358,43 и 7678,32+254,78 нг/г (рисунок 2.2.3.4.3.). В последующие сроки исследований концентрация препарата снижалась, но в целом была выше по сравнению с печенью.
Представляет интерес рассмотреть данные, касающиеся распределения албендазола и его основного метаболита в печени и почках мышей, зараженных Т. spiralis, которые находятся на миграционной стадии своего развития. У зараженных животных максимальный уровень албендазола в печени и почках имел место через 3 часа после введения с последующим снижением к 24 часам. Аналогичная динамика характерна и для контрольных мышей (рисунки 2.2.3.4.5. и 2.2.3.4.7.). Кроме того, концентрация албендазола на этот экспериментальный период (3 часа) была несколько ниже по сравнению с мышами без заражения. Подобная тенденция проявлялась еще в большей степени в последующие периоды времени, т.е. через 6 и 24 часа после введения препарата, так, уровень албендазола у зараженных мышей составил соот ветственно 590,68±104,72 и 205,53±35,70 против 1562,90+163,51 и 469,73±93,40 нг/г.
Не менее интересны данные, касающиеся содержания албендазола сульфок-сида в печени. На все интервалы отбора проб этого органа для анализа уровень основного метаболита бьш существенно ниже по сравнению с мышами, которые не подверглись заражению. Конкретно, его концентрация составила соответственно 920,15±32,72; 117,65±16,72 и 241,51+27,86 нг/г; аналогичные данные у незаражен-ных мышей -2616,69±380,95; 2015,76±156,70 и 976,16±246,82 (рисунок 2.2.3.4.5).
Результаты определения албендазола и его метаболита в почках в целом (за некоторым исключением) также свидетельствуют о более низких концентрациях в сравнении со здоровыми мышами.
Наконец, нас ожидают весьма интересные факты при рассмотрении данных по содержанию албендазола и его метаболита у мышей, зараженных Т. spiralis, на мышечной стадии развития паразитов. В данном случае обращает на себя внимание следующее.
Динамика содержания неизмененного препарата в печени в целом соответствует таковой на других стадиях развития трихинелл. То есть, максимальный уровень албендазола в печени отмечен через 3 часа после введения (1394,95±283,15 нг/г) с последующим снижением к 6 и 24 часам (878,33±60,43 и 140,87±72,69 нг/г). При сравнении с аналогичными значениями у контрольных мышей (таблица 2.2.3.4.1.) можно заключить, что концентрация албендазола у инвазированных животных была ниже по сравнению со здоровыми (рисунок 2.2.3.4.9.).
Концентрация албендазола сульфоксида в печени через 3; 6 и 24 часа после введения препарата равнялась соответственно 641,96+72,12; 298,65±82,46 и 193,82±32,30 нг/г. Аналогичные показатели у неинвазированных трихинеллами мышей были выше (рисунок 2.2.3.4.10.).
