Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 8
1.1. Патогенез и иммунитет при мигрирующих гельминтозах 8
1.2. Антгельминтики при нематодозах собак 11
1.3. Влияние антгельминтиков и иммуностимуляторов на организм животных 20
2. Собственные исследования 37
2.1. Материалы и методы исследований 37
2.2. Результаты собственных исследований 52
2.2.1. Влияние токсокар на гематологические, биохимические и имму нобиологические показатели крови щенят 52
2.2.2. Иммунобиологическая реактивность собак, экспериментально зараженных T.canis 61
2.2.3. Эффективность антгельминтиков при токсокарозе собак 69
2,2.3.1. Сравнительное изучение антгельминтиков при токсокарозе собак 69
2.2.4.1.Эффективность препарата пирадек (суспензии) при нематодо зах собак 70
2.2.4. Фармокотоксикологические и антгельминтные свойства препа рата пирадек 73
2.2.4.1. Острая токсичность препарата пирадек 73
2.2.4.2. Субхроническая токсичность 75
2.2.4.3. Кумулятивные свойства препарата пирадек 78
2.2.4.4. Изучение аллергенной активности пирадека суспензии 79
2.2.4.5. Изучение иммунотоксических свойств 4 препаратов (пиран-тел памоат, натрий рибонуклеат и пирадек двух серий с различным содержанием ДВ) 82
2.2.4.6.Влияние препарата пирадек на организм собак 85
2.2.4.7. Производственные испытания препарата пирадек 90
3. Обсуждение полученных результатов 92
4. Выводы 96
5. Практическое использование полученных научных результатов 97
6. Рекомендации по использованию научных выводов 97
7. Список использованной литературы 98
8. Приложения
- Влияние антгельминтиков и иммуностимуляторов на организм животных
- Влияние токсокар на гематологические, биохимические и имму нобиологические показатели крови щенят
- Фармокотоксикологические и антгельминтные свойства препа рата пирадек
- Изучение иммунотоксических свойств 4 препаратов (пиран-тел памоат, натрий рибонуклеат и пирадек двух серий с различным содержанием ДВ)
Введение к работе
Актуальность проблемы. Гельминтозы мелких домашних животных широко распространены, экономически значимы, а многие из них имеют социальное значение и представляют серьезную угрозу здоровью и жизни человека.
В условиях крупного мегаполиса широкому распространению токсока-розной инвазии способствуют нарушение правил содержания и выгула собак (Г.Ф.Каспранова, 1989; А.Н.Воличев, В.В.Горохов, 1999; Л.П.Головкина, Г.Н.Волкова, 2000; А.Н.Шинкаренко с соавт., 2000; А.И.Колеватова, О.Б.Жданова, С.Г.Назарова с соавт., 2000; С.В.Полоз, М.В.Якубовский, 2000; С.И.Снегирев, И.И. Гуславский, 2001; O.Vanpairijs et al., 1991; М.Franc, М.С. Cadierques et al., 1997; P.A.Overgaauw, Y.H.Boeisema, 1998; Araujo Flabior., P.Araujo Cristina et al., 2000 и другие).
Только в Москве, по данным ВИГИС, популяция собак превышает миллион особей, которая ежегодно оставляет на ее территории около 200 т экскрементов. Исследования показывают, что зараженность токсокарозом бродячих собак в городе достигает 55%, а число яиц гельминтов в 1 г их фекалий - 40 тысяч, что чрезвычайно опасно для человека, у которого ток-сокароз проявляется аллергией, бронхиальной астмой, легочной патологией, поражением глаз и другими серьезными нарушениями здоровья, прежде всего у детей. Число учтенных больных ларвальным токсокарозом в России за последние 20 лет выросло почти в 100 раз (А.В.Успенский, В.П.Сергиев, 2006). В Москве ларвальный токсокароз у детей составляет 5,4%, в Брянской области - 4,9%, в Тульской - 5,5%, Тюменской - 7,3% (данные статистики Федерального Центра Государственного санитарно-эпидемиологического надзора министерства здравоохранения Российской Федерации, 2006).
В литературе имеются отрывочные и часто противоречивые сведения о
патогенном воздействии ларвальных стадий токсокар на организм собак (С.И.Вишняков, 1967; Н.М.Вовченко, 1981; Н.Н.Гладенко, 1985; В.В.Филиппов, 1988; А.Н.Шинкаренко, 2005), однако многие вопросы патогенеза заболевания, иммунитета, а также влияния антгельминтиков на организм собак до настоящего времени слабо изучены.
Не исследовано действие многих препаратов на иммунную систему, а также эффективность комплексного применения антгельминтиков и иммуностимуляторов. Все это требует более детального изучения и актуальным для ветеринарной практики.
В настоящее время известно, что гельминтозы вызывают вторичные иммунодефицита в организме хозяина, сопровождающиеся иммунным дисбалансом (Н.Н.Озерецовская, 1980-1995). Однако применяемые для лечения антгельминтные препараты также могут вызывать иммуносупрессию (Б.А.Астафьев, 1975; Э.Х.Даугалиева, 1978; А.Г.Малахов, С.И.Вишняков, 1984; Э.Х.Даугалиева с соавт., 1991; В.И.Колесников, 1993 и др.). В последние годы возрос интерес к иммунотерапии гельминтозов домашних животных, что значительно повышает иммунобиологическую реактивность организма (Э.Х.Даугалиева, В.И.Колесников, С.В.Новицкий, 1997; И.Н.Ратникова, 2003; С.А.Веденеев, 2005).
Цель и задачи исследований. Целью нашей работы являлось изучение патогенеза, иммунитета и изыскание эффективного антгельминтика для комплексной терапии токсокароза собак.
Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:
изучить гематологические, биохимические и иммунобиологические показатели крови собак, спонтанно и экспериментально зараженных Т. canis;
изучить: фармакотоксикологические свойства нового комплексного препарата «Пирадек»;
- иммунотоксические и аллергенные свойства пирадека;
эффективность пирадека при токсокарозе и других нематодозах собак;
влияние пирадека на организм собак.
Научная новизна. Впервые изучена и проведена сравнительная оценка патогенеза и иммунобиологической реактивности собак, спонтанно и экспериментально инвазированных Toxocara canis. Впервые изучен новый комплексный препарат пирадек при токсокарозе собак, установлены его терапевтические дозы и изучены фармакотоксикологические свойства, изучено влияние пирадека на организм собак и его иммунотропные свойства.
Практическая значимость. Для лечения и профилактики токсокароза собак предложен новый комплексный препарат пирадек, обладающий высокой антгельминтной эффективностью и повышающий иммунный статус, что позволяет уменьшить сроки вакцинации щенков до 10 дней. Научная разработка автора вошла в инструкцию по применению препарата пирадек при нематодозах собак (представлена в Фармкомиссию ФГУ «ВГНКИ»).
Апробация результатов диссертации. Основные положения и материалы диссертационной работы доложены на заседании методической комиссии и Ученого Совета ветеринарного факультета ФГОУ ВПО МГАВ-МиБ (2004-2006); на научно-практической конференции ВИГИС «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2005); межкафедральном заседании профессорско-преподавательского состава ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2007).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных статей, в т.ч. 2 статьи в научных журналах, 4 - в сборниках научных трудов.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 122 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практического использования полученных научных результатов, рекомендаций по использованию научных выводов, списка используемой литературы (199 источников, в том числе 43 зарубежных авторов). Работа содержит
25 таблиц и 6 рисунков и 4 страницы приложения. Положения, выносимые на защиту:
Патогенез и иммунобиологическая реактивность собак, спонтанно и экспериментально зараженных Toxocara canis.
Иммунотоксикологические и аллергенные свойства, фармакотоксико-логическая характеристика препарата «Пирадек».
Влияние пирадека на организм собак.
Влияние антгельминтиков и иммуностимуляторов на организм животных
При мигрирующих гельминтозах происходят глубокие изменения функциональной деятельности органов и систем у животных, а применение антгельминтиков очень часто усугубляет течение патологических процессов. Кроме того, у животных наблюдается активизация патогенной микрофлоры и грибов, а также угнетение иммунной системы. Все это в комплексе побудило ученых применить разные комбинации препаратов для терапии гельминтозов. А.Р.Смирнов, Б.О.Колесниченко (1996) рекомендуют применять при токсокарозе собак параллельно с антгельминтиком фенкуром биостимулятор биолан (5 дней подряд). Эти авторы отмечают, что в данном случае у больных животных быстрее идет восстановление мембранного пищеварения в тонком отделе кишечника, повышается активность всех ферментов на 4-9%, увеличивается количество эритроцитов на 12%, гемоглобина на 9%.
В.З.Галимова (1998) считает, что применение нилверма угнетает жизнедеятельность инфузорий в рубцовом содержимом овец; а совместное применение нилверма с пробиотиком аминосубтилином, который увеличивает ами-лазную и целлюлозную активность, улучшает обменные процессы и повышает эффективность дегельминтизации на 85-100%. В.В.Саушкин (2001) при стронгилятозах и стронгилоидозах мышей и ягнят применял антгельминтик авертин и иммуностимулятор риботан. Риботан, но мнению автора, оказывает выраженный иммуностимулирующий эффект и смягчает местное раздражающее действие нилверма. Э.Х.Даугалиева, К.Г.Курочкина (2001) экспериментально доказали, что комбинации комплексного препарата на основе нилверма и иммуностимулятора при стронгилятозах животных значительно активизируют иммунную систему животных, а также повышают эффективность антгельминтика, пролонгируют и смягчают его действие. Все применяемые комбинации обладают 90-100% эффективностью. А.И.Саитбатталова, Р.Т.Маннапова (2001) апробировали при токсокаро-зе собак комплексный препарат на основе антгельминтика поливеркана с добавлением прополиса и бификола в разных комбинациях. Авторы считают, что такой комплекс нормализует микрофлору кишечника: повышает уровень бифидо- и лактобактерий и обладает выраженным эффектом. Н.С.Беспалова (2000-2002) указывает, что после введения разных комбинаций нилверма с добавлением БАВ при токсокарозе собак наблюдается волнообразное изменение соотношения белковых фракций сыворотки крови, снижение количества эозинофилов, лимфоцитов, повышение эритроцитов, гемоглобина, нормализация ферментов крови.
Таким образом, применение комплекса препаратов на основе базового антгельминтика с добавлением иммуностимулятора, пробиотика или проти-вомикробного средства в значительной степени повышает резистентность организма больного животного, улучшает морфологический и биохимический состав крови и усиливает эффективность дегельминтизации. О.Г.Полетаева (1977), И.А.Гаджиева (1986); Т.Р.Кораблева, Н.П. Барсуков (1997) считают, что система неспецифической защиты организма более древняя и осуществляется клеточными и гуморальными факторами. К клеточным факторам неспецифической защиты относятся фагоцитирующие клетки организма - макро- и микрофаги.
К гуморальным факторам неспецифической защиты относятся: система комплемента, лизосомальные ферменты, в частности лизоцим, бактерицидная активность сыворотки крови, многокомпонентная система белков сыворотки крови и других жидкостей организма, называемая комплементом и другие вещества белковой природы (О.Г.Полетаева, 1984; С.И.Плященко, В.Т.Сидоров, 1979;В.В.Саушкин, 1998). Л.Ю.Карпенко, В.В. Тиханин (1997), изучавшие естественную резистентность собак и кошек, указывают, что у этих животных лизоцим (фермент, относящийся к классу гидролаз, избирательно гидролизирующий гликозид-ные связи в муреине из которого построены стенки бактерий, обнаружен в различных тканях и секретах: сыворотке крови, слезах, слюне, молоке. Максимальное количество его содержится в лейкоцитах. Эти же авторы, ссылаясь на А.С.Степаненко (1961) и О.В.Бухарина, И.В.Васильева (1974) указывают, что в плазму лизоцим попадает при разрушении лейкоцитов и тканей и кроме основного антибактериального действия, лизоцим стимулирует естественную резистентность организма, таким образом, идет предупреждение заболевания.
Л.Ю.Кириенко, В.В.Тиханин (1997) в своих научных работах определяют комплемент как большую группу взаимодействующих между собой белков и глюкопротеидов, имеющуюся у всех позвоночных. Эти белки участвуют в воспалительных процессах, опсонируют чужеродные материалы для их последующего фагоцитоза и опосредуют уничтожение клеток и микроорганизмов. Одна из функций комплемента - участие в иммунных реакциях: фиксирует антитела на антигене, вызывает хемотаксис лейкоцитов, активизирует фагоцитоз и клетки иммунной памяти, участвует в процессе цитолиза. В ходе активации комплемента образуется ряд фрагментов пептидов, играющих важную роль в процессах воспаления, фагоцитозе и аллергических реакциях (Л.И Воронова, 1997; Ю.Н.Федоров, О.А.Верховский, И.В.Слугин, 2000).
Одной из разновидностей фагоцитов являются эозинофилы. Они аккумулируются в тканях с большим количеством тучных клеток. Эозинофилия связана с паразитарной инвазией и аллергией. Процент эозинофилов в крови по отношению к общему числу лейкоцитов значительно варьирует, и в норме составляет 2% у собак (Э.Х.Даугалиева, К.Г.Курочкина, А.В.Аринкин, 1996; A.Abbas, A.Lichtman, J.S.Pober, 1994). Эозинофилы содержат пероксидазу, очень активную в разрушении паразитов, в процессе инвазии, за счет содержания бромида и продукции ОВг" (САПавлович, 1998; A.Y.Butterworth, 1984) установили экспериментальным путем, что при трихинеллезе эозинофилия появляется на 7-Ю день с момента заражения и достигает максимума на 14-28 день, затем количество клеток снижается. Эозинофилы вызывают сильную хемотаксическую реакцию на комплексы антиген-антитело и перемещаются в места локализации гельминтов. Однако эозинофилия не всегда имеет аллергическую основу (R. Gross, 1972). Вопросом динамики морфологических составляющих крови при гельминтозах, в том числе и эозинофилии посвящен целый ряд работ: А.П.Шнайдмиллер, К.С.Исакова (1971); Е.П.Михайлова (1975); Э.Х.Даугалиева (1978); А.В.Маркин, Э.Г.Тихомирова и др. (1995); А.В. Упырев, В.А.Доценко (1995); E.J.Z. Soulby (1979); D.L. Hughes et al. (1981); G.M. Faubert (1981); I.P.Gupta, K.K.Trivedi (1981); I.G.Ottemes et al. (1981); M.B.Rholes et al. (1982); G.G.Kagan, S.E.Maddison (1982); M.G. Baixench, J.F.Magahaval (1993) и другие авторы.
Влияние токсокар на гематологические, биохимические и имму нобиологические показатели крови щенят
Под опыт №1 взяли 10 щенков в возрасте 2-х месяцев спонтанно зараженных Toxocara canis, 5 щенков служили незараженным контролем. Исследования проводили в течение 2-х месяцев. Гематологические показатели представлены в таблице 1, рис. 1. До начала исследований у животных опытной группы содержание гемоглобина составляло 7,45+1,2 г/л, эритроцитов - 7,7+0,1 х 106/мкл, лейкоци-тов - 14,02+0,2 х 10 /мкл, в контрольной группе соответственно 9,28+1,3 г/л, 8,8+0,1 х 106/мкл и 8,1+0,2 х 103/мкл. Начиная с 10 дня, в опытной группе наблюдали снижение гемоглобина и эритроцитов, которое изменялось до конца эксперимента по отношению к контрольным незараженным животным (гемоглобина в 1,5 раза, эритроцитов - в 1,8 раза). Однако в динамике лейкоцитов мы наблюдали лейкоцитоз в опытной группе, который составил 11,4+0,7 х 10 /мкл и 7,0+0,3 х 10 /мкл, что в 1,44 раза выше, чем в контроле. Наибольшую разницу показателей между группами мы отмечали на 60 сутки. Из вышеприведенных данных мы находили у больных токсокарозом собак снижение количества эритроцитов, гемоглобина и увеличение количества лейкоцитов, что, несомненно, указывает на развитие патологических процессов при данном заболевании. При изучении лейкоцитарной формулы (таблица 2) следует отметить, что динамика содержания отдельных видов лейкоцитов достоверно отличалась между опытными и контрольными животными. Так, у больных токсокарозом собак наблюдали увеличение сегментоя-дерных нейтрофилов в 1,1-1,3 раза и снижение лимфоцитов в 1,6-2,0 раза. Следует отметить, что у больных щенят количество эозинофилов было увеличено в 5,2-5,57 раза, моноцитов - в 1,3-2,1 раза по сравнению с контрольной группой, что указывает на развитие патологического процесса. Максимальный разрыв рассматриваемых показателей у собак между опытной и контрольной группами приходился на окончание эксперимента (45 день исследования) и составляет 7,3+0,4% в опытной группе и 1,0+0,4% - в контроле по эозинофилам.
Общий белок и белковые фракции (табл. 3, рис. 2). Данные по содержанию общего белка и белковых фракций представлены в таблице 3. Как видно из данных таблицы, в динамике общего белка заметных изменений мы не находили, лишь незначительное снижение общего белка у собак, инвазированных токсокарозом. По результатам изменения белкового обмена у животных наблюдали снижение количества альбуминов у подопытных щенят в 1,2 раза к концу исследований и увеличение глобулинов в 1,06 раза. В белковых фракциях глобулинов наиболее заметные изменения находили в бета- и гаммаглобулинах, которые были увеличены к концу исследований в 1,3 и 1,2 раза соответственно.
Полученные результаты позволяют заключить, что изменения глобулинов всех фракций зависят от концентрации специфических и неспецифических факторов иммунной реактивности и естественной резистентности организма. Максимальное содержание бета-глобулинов отмечали на 10 и 20 дни исследования, которые оставались на этом уровне до конца опыта. В гамма-глобулиновых фракциях наблюдали аналогичную картину, т.е. увеличение гаммаглобулинов на 30 и 60 дни исследования у подопытных животных. Из аминотрансфераз наибольшее диагностическое значение имеет определение аспартатаминотрансферазы (АсТ) и аланинаминотрансферазы (АлТ). Изменение активности этих ферментов колебалось на протяжении всего периода исследований. У подопытных животных отмечали постепенное увеличение АсТ с 40,1+2,0 до 82,4+3,0 IU/L, а у животных контрольной группы АсТ находилось на уровне 32,7+2,0-38,4+7,0 IU/L. Следовательно отношение АсТ/АлТ у подопытных животных составляло 1,2-2,1, что указывает на воспалительный процесс. Изучение щелочной фосфатазы послужило дополнительным тестом, указывающим на патологический процесс, вызванный T.canis в организме животных. Данные по активности щелочной фосфотазы (ЩФ) указывают на увеличение данного фермента, особенно в первые 10-20 дней исследования в 1,2-1,27 раза по сравнению с контролем (таблица 4, рис. 3). Исследование по естественной резистентности и иммунному статусу щенят проводили только на 60 день исследования. Данные по лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови, Т- и В-лимфоцитам представлены в таблице 5.
Фармокотоксикологические и антгельминтные свойства препа рата пирадек
Под опыт взяли 36 белых беспородных мышей массой 18-20 г, которых разделили на 6 групп по 6 животных в каждой. Препарат вводили животным натощак внутрь с помощью иглы с булавовидным утолщением внутрь в дозах: первой группе - 0,1 мл (5 мл/кг); второй - 0,2 мл (10 мл/кг); третьей - 0,3 мл (15 мл/кг); четвертой - 0,4 мл (20 мл/кг); пятой - 0,5 мл (25 мл/кг); шестой - 0,6 мл (30 мл/кг). Клиническая картина при введении препарата в желудок в токсических и смертельных дозах развивалась в течение первых часов и характеризовалась следующими признаками: угнетение, вялость мышей, учащённое дыхание, тусклость глаз у погибающих мышей. Гибель мышей, как правило, происходила в течение 48 часов. После убоя выживших мышей, которым вводились разные дозы препарата, не было отмечено изменений со стороны желудочно-кишечного тракта; печень вишневого цвета без каких-либо изменений; селезенка в пределах физиологической нормы. ЛДо пирадека (суспензии) при введении в желудок белых мышей составила 4700 мг/кг по лекарственной форме; ЛДіб составила 8750мг/кг; ЛД50 составила 17500 мг/кг; ЛД84 составила 26200 мг/кг; ЛДюо - 30000 мг/кг. Вычисляем доверительные границы ЛД5о 17500 : 1,5 = 11667 мг/кг (нижняя доверительная граница); 17500 х 1,5 = 26250 мг/кг (верхняя доверительная граница). Таким образом, среднесмертельная доза препарата пирадек (суспензия) для белых мышей при алиментарном введении составляет 17500 мг/кг (262,5 мг/кг по ДВ), что позволяет отнести этот препарат к 4 классу токсичности -«малоопасные вещества» (ГОСТ 12.01.007-76). Изучение повторного воздействия пирадека суспензии на организм животных изучали в течение 14 дней (животных дегельминтизируют однократно).
При введении пирадека крысам в дозе 17,5 мл/кг (1 группа) и 1,75 мл/кг (2 группа) изменений не наблюдали. Результаты исследований представлены в таблицах 11-15. При взвешивании животных через 1 и 2 недели опыта (таблица 11) не было отмечено достоверных изменений в массе опытных животных обеих групп с контрольными. При изучении гематологических показателей (таблица 12) количество эритроцитов, лейкоцитов и уровень гемоглобина опытных животных находились на одном уровне с контролем при всех сроках взятия крови. В таблице 13 приведены биохимические показатели крови крыс подопытных и контрольной групп, характеризующие функциональное состояние печени. Активность аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартат аминотрансферазы (АсАТ), пировиноградной кислоты (ПВК), молочной кислоты и холинэстеразы у животных подопытных групп достоверно не отличались от тех же показателей животных контрольной группы. Функциональное состояние почек (таблица 14) оценивали по показателям суточного диуреза, содержанию белка и плотности мочи. Мочу собирали в течение 24 часов в метаболические камеры. Определение плотности мочи и белка проводили общепринятыми методами. Как видно из таблицы, все показатели, характеризующие работу почек, находились на одном уровне с контрольными и достоверно от них не отличались.
По окончании эксперимента все животные были убиты и определены массовые коэффициенты внутренних органов (таблица 15). Полученные данные позволяют сделать заключение, что препарат даже после многократного введения не вызывает изменений во внутренних органах крыс. При патоморфологическом вскрытии выраженных дистрофических и некробиотических изменений в органах у животных подопытных групп не было отмечено. Кумулятивные свойства пирадека изучали на 30 белых беспородных мышах, 10 служили контролем. В течение опыта вели наблюдение за животными, отмечали их смертность. Результаты опыта приведены в таблице 16. Расчет параметров токсического действия при многократном введении в желудок представлено в таблице 17. Определение ЛД5о= ЛДіоо - 2 Zd : n ЛД50 = 119602-1964783 : ЗО = 54109,2 мг/кг Методом пробит-анализа определяли ЛД)6 и ЛД84: ЛД16 = 16820 мг/кг; ЛД84 = 90200 мг/кг. ЛД50 пирадека с учетом стандартной ошибки - 54109,2 ± 1196,7 мг/кг Используя формулу Кагана-Станкевича определили коэффициент кумуляции: ЛД50 многократно 54109,2 К= = = 3,09 ЛД5о однократно 17500 Суммарная доза (ЛД5о - многократная), вызвавшая 50% гибель мышей равнялась 54109,2 мг/кг. Разделив эту величину на ЛД5о при однократном введении, получили, что коэффициент кумуляции равен 3,09. По классификации веществ по кумулятивным свойствам пирадек относится к группе веществ со слабо выраженной кумуляцией.
Изучение иммунотоксических свойств 4 препаратов (пиран-тел памоат, натрий рибонуклеат и пирадек двух серий с различным содержанием ДВ)
О влиянии препарата пирадека судили по ДВ - пирантелу памоату, натрий рибонуклеату. Влияние пирадека двух серий с различным содержанием ДВ на клеточное звено иммунитета судили по выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) по методике, описанной В.М.Манько и др. (1989). В качестве эритроцитарного маркера применяли 1,5%-ную суспензию эритроцитов барана. В нашей работе было использовано 50 белых мышей-самцов массой 18-20 г.
Реакция гиперчувствительности замедленного типа. Под опыт взяли 25 беспородных белых мышей массой 18-20 г, которых разделили на групп по 5 животных в каждой: животным первой группы перорально ввели препарат пирантел памоат в дозе 15 мг/кг; животным второй группы - натрий рибонуклеат в дозе 50 мг/кг; животным третьей группы - пирадек (серия 010903) в дозе 1 мл/кг; животным четвертой группы - пирадек (серия 210504) в дозе 1 мл/кг за 7 суток до сенсибилизации 2%-ной суспензией ЭБ внутри-брюшинно в дозе 0,5 мл. В качестве растворителя использовали 2% крахмальный клейстер. Животные контрольной группы служили контролем, препараты не получали, им вводили только суспензию ЭБ. Через 5 дней после сенсибилизации всем подопытным животным вводили разрешающую дозу 10%-ной суспензии ЭБ в количестве 0,02 мл в правую лапку, а в левую - физраствор в дозе 0,02 мл. Через 24 часа животных убивали, отрезали лапки на уровне голеностопного сустава и взвешивали на торсионных весах для учета индекса стимуляции по формуле:
О неспецифической резистентности организма животных судили по изменению титров гетерофильных агглютининов в сыворотке крови, определяемые в реакции Пауля-Буннеля (1932), в модификации Чернушенко и Ко-госовой (1985). Гетерофильные агглютинины относятся к группе нормальных антител и являются одним из естественных факторов защиты организма, первичного неспецифического иммунитета. Эти тела образуются в результате спонтанной иммунизации антигенами, которые широко распространены в природе. Определение титров гемагглютининов проводили на 7 сутки после введения препаратов. Результаты исследований_представлены в таблице 20.
Полученные данные позволяют заключить, что препарат пирадек обеих серий обладают иммуностимулирующими свойствами, пирантел памоат не обладает иммуностимулирующим действием, а натрий рибонуклеат в дозе мг/кг обладает иммуносупрессирующим эффектом, в результате чего нами были продолжены исследования свойств данного препарата в уменьшенной дозе - 10 мг/кг.
Для этого сформировали 2 группы мышей по 5 животных в каждой. Мышам 1-ой группы ввели натрий рибонуклеат в дозе 10 мг/кг, а мыши 2-ой группы служили контролем. В результате исследований мы установили, что рибонуклеат в дозе 10 мг/кг обладает иммуностимулирующими свойствами, т.к. ИС в контрольной группе составил 7,2%, а в опытной группе - 10,4%.
Под опыт №2 взяли 18 мышей, которых разделили на 5 групп по той же схеме, что и в предыдущих опытах. На 7 сутки мышей убили и собрали у них кровь для отделения сыворотки, которую затем использовали в серологических реакциях. Полученные результаты показаны в таблице 21.
Исходя из результатов исследования можно заключить, что препарат натрий рибонуклеат в дозе 10 мг/кг стимулирует выработку нормальных антител, а препарат пирадек (сер.210504) замедляет выработку гетерофильных агглютининов.
В результате наших исследований мы выяснили, что препараты пирадек обеих серий в дозе 1 мл/кг и натрий рибонуклеат в дозе 10 мг/кг, введенные перорально однократно обладают иммуностимулирующими свойствами на Т-клеточный иммунный ответ в реакции ГЗТ, пирантел памоат в дозе 15 мг/кг не обладает иммуностимулирующими свойствами, но и не угнетает иммунный статус, а препарат натрий рибонуклеат в дозе 50 мг/кг обладает иммуносупрессирующим эффектом в реакции ГЗТ. Препарат натрий рибонуклеат в дозе 10 мг/кг стимулирует выработку нормальных антител, а препарат пирадек (сер.210504) замедляет выработку гетерофильных агглютининов.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что колебания показателей клинического состояния подопытных собак, получавших пирадек суспензию в дозах 15 и 45 мг/кг по ДВ, были в пределах физиологической нормы и существенно не отличались от клинического состояния этих животных до получения препарата, а также от контрольных собак (табл. 22, 23, 24,25). У всех собак третьей группы после введения пирадека в дозе 75
