Введение к работе
Актуальность работы. Природные очаги кожного леишманио.і (КЛ) анимают огромные пространства впутриконпшенытьных пустынь В Центральной и Средней Азии. До последнее времени лейшманий, циркулирующих п этих очяіах, относили к одному шіду - Leishmania major fakimov, Shoknor, 1914 (Келлина, l%5; Стрел к і па, Гдисеев , 1982). исключение составляли данные китайских исследовагелей, которые в 1964 году >бнаружили у большой песчанки лейшманий, не паїиіеннмх для человека, и іьщелили их п самостоятельный вид - L.geibilli (Wanget.al.. 1964).
В 1990 году было доказано, что паразиты, ранее определявшиеся как b.major, в действительности принадлежат к трем видам - Lmajor s.str., L.turanica sp.nov. и L.gerbilli (Strelkova et. al., 1990). Три вида лейшманий твляются паразитами большой песчанки, но только L.major в новом понимании татогенна для человека и вызывает заболевание зопнозным кожным тейшманиозом. Ареалы распространения L.major, 1 turnnica и L.gerbilli на шачительной части территории перекрываются, а зараженность больших тесчанок одновременно L.major и L.turanica может досипать 25% (Стрелкова, 1991). Виды лейшманий морфологически неотличим1-! друг от друга, способны размножаться на одних и тех же питательных средах, и могут быть дантифинированы только биохимическими или генеппе» тими методами.
Новые данные о таксономическом статусе лейпгмшнй и их разном эпидемиологическом значении заставили исследователей пересмотреть прежние танные о возбудителе, с целью определения возможности их использования с гювых таксономических позиций, а также проводіть специальные исследования для получения новых данных об этих видах. В настоящей работе зперпые была поставлена задача провести сравнительные исследования культур грех видов лейшманий in vitro на искусственных питательных средах для толучения новых данных по каждому из трех видов лейшманий.
Культивирование лейшманий лежит в основе практически всех направлений исследований - от эколого-популяиионных до генетико-
биохимических, и являются одним из важных этапов при проведении видоидентификзшш паразитов - основы диагностики и эпиданализа (Стрелкова ссоавт., 1993; Rolland et.al., 1994).
Очевидно, что для успешного поддержания культур лейшманий на искусственных питательных средах необходимо разработать дифференциальный регламент культивирования паразитов. Для этого необходимо знание биологических свойств каждого из видов, а также характера роста на искусственных питательных средах, влияние на рост изменения условий и приемов культивирования, изменений, происходящих при длительном культивировании лейшманий и др.
Снмпатрия лейшманий в природных очагах КЛ приводит к тому, что при выделении нзолятов от больших песчанок на одну и ту же питательную среду могут попадать два вида лейшманий. Судьба промастигот лейшманий разных видов при их совместном культивировании до сих пор была не ясна. Сама же возможность культивирования смеси позволяет экспериментально изучить характер и механизмы взаимовлияния этих паразитов.
Настоящая работа выполнялась как самостоятельный раздел НИР ИМПиТМ им. Е.И.Марциновского, а также как раздел проекта 1NTAS 94-4673.
Цель работы: провести сравнительное изучение биологических свойств Lmajor, Lturanica и Lgerbilli при их раздельном и (отчасти) совместном культивировании на искусственных питательных средах, разработать регламент культивирования для длительного поддержания штаммов и наращивания биомассы.
Задачи исследования:
подобрать методику, позволяющую объективно оценивать рост промастигот лейшманий на искусственных питательных средах и проводить сравнительные исследования разных видов;
сравнить рост культур L.major, L.turanica и L.gerbilii при их культивировании на среде NNN;
сравнить морфогенез штаммов и клонов L.major и L.turanica на среде NNN в течении одного пассажа;
оцепить влияние условий и приемов культивирования на рост трех видов лейшманий;
сравнить свойства и характеристики разных по происхождению культур одного вида - клоповых и штаммовых, свежевыделенных и длительно культивируемых;
отучить особенности роста и качественные изменения смеси L.major и L.turanica при культивировании ее на среде NNN;
исследовать характер взаимодействия L.major и Lturanica при их
совместном размножении.
Научная новизна: Впервые показано, что L.major, L.turanica и L.gerbilli имеют четкие видовые различия при их культивировании на искусственных питательных средах. Установлено, что L.turanica практически всегда имеет преимущество в росте, по сравнению с L.major и L.gerbilli, Рагіичня в характеристиках роста устойчивы при изменении условии и приемов культивирования. Изучение искусственных смесей L major и L.turanica показало, что клоны L.turanica имеют преимущество в росте перед клонами L.major. Впервые описан механизм взаимодействия между L.major и L.turanica при их совместном размножении.
Практическая значимость работы: знание особенностей культивирования на питательных средах трех видов лейшманий позволяет корректировать условия получения биомассы паразитов для их идентификагпгн как биометолом (тестирование на животных), так и различными молекулярно-генетическимн методами (изоэнэимный электрофорез белков, ПЦР), а при длительном поддержании штаммов более рационально использовать компоненты сред.
Положения, выносимые на зашиту:
1. При культивировании на искусственных питательных средах показана
дискретность свойств L.major, L.turanica и L.gerbilli, которая проявляется і
.различии их потенциалов размножения и реакции видов на изменение условий
и приемов культивирования.
-
На основании данных о характере размножения 3 видов на искусственных питательных средах разработан диффференцированный регламент их культивирования.
-
На клоповом уровне Lturanica имеет явное преимущество перел Lmajor в условиях искусственной симпатрии, т.е. при культивировании смеси этих двух видов.
Апробация работы. Основные фрагменты диссертации доложены на: заседаниях московской секции РОПР ( Москва, 1992,1993 ), Y111 Международном съезде паразитологов ( Измир, Турция 1994 ), на ученом совете ИМПиТМ им. Е.И. Маршшовского (Москва, 1997), на коллоквиумах отдела медицинской протозоологии ИМПиТМ ( Москва, 1992, 1993,1994).
Публикации- По теме диссертации опубликовано 6 работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, ^глав, выводов, списка литературы. Объем диссертации 107 страшні машинописного текста, включая 3 рисунка, 12 таблиц. Списох литературы включает 40 отечественных и 84 иностранных источников.
Похожие диссертации на Сравнительное изучение биологических свойств LEISHMANIA MAJOR , L.TURANICA и L.GERBILLI IN VITRO, разработка регламента их культивирования
