Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 12
1.1. Распространение мониезиоза овец 12
1.2. Терапия мониезиоза овец 17
1.3. Иммунотерапия при гельминтозах животных 24
2. Собственные исследования 32
2.1. Материалы и методы 32
2.2. Распространение мониезиоза овец в аридной зоне Юга России 43
2.3. Изучение иммунотропных и антгельминтных свойств новых препаратов при мониезиозе овец 49
2.3.1. Иммунотропные свойства препарата купроферр 49
2.3.2. Определение терапевтической дозы купроферра при мониезиозе ягнят 53
2.3.3. Эффективность купроферра при мониезиозе в производственных условиях 56
2.3.4. Комиссионные испытания купроферра 60
2.3.5. Производственные испытания препарата 63
2.3.6. Определение иммунотропных свойств и терапевтической дозы 2,5% суспензии альбендазола при мониезиозе овец .. 67
2.3.6.1. Иммунотропные свойства 2,5% суспензии альбендазола 67
2.3.6.2. Титрация дозы 71
2.3.6.3. Эффективность препарата при мониезиозе в производственных условиях 73
2.3.6.4. Комиссионные испытания препарата 76
2.3.6.5. Производственные испытания 2,5% суспензии альбендазола при мониезиозе овец 79
3. Обсуждение полученых результатов 83
Выводы 88
Практические предложения 90
Список использованной литературы 91
Приложение 115
- Терапия мониезиоза овец
- Иммунотерапия при гельминтозах животных
- Изучение иммунотропных и антгельминтных свойств новых препаратов при мониезиозе овец
- Определение иммунотропных свойств и терапевтической дозы 2,5% суспензии альбендазола при мониезиозе овец
Введение к работе
Актуальность проблемы. Мониезиоз овец широко распространен в нашей стране и причиняет большой экономический ущерб из-за падежа и значительного снижения продуктивности животных.
По данным В.А. Холощанова (1970), И.С. Ляшенко (1975), у зараженных мониезиями ягнят привесы на 1-3 кг ниже, чем у здоровых животных, недополучено шерсти в среднем на 800 г, снижена сортность за счет выхода мяса третьей категории. В связи с этим, по данным авторов, снижается на 24% и денежный доход от реализации мяса.
Т.Д. Султанкулов (1984) подсчитал убытки одной овцеводческой фермы с поголовьем 16 тыс. овцематок и определили, что она составляет более 14 тыс. рублей от падежа, вынужденного убоя, недополучения шерсти и приплода от кишечных цестодозов только за один весенний период.
Основными методами борьбы с мониезиозом овец на сегодняшний день остается дегельминтизация, которая проводится согласно существующей инструкции. Хотя в инструкции детально разработаны меры борьбы с мониезиозом, но они составлены без учета особенностей эпизоотологии паразитов в конкретных зонах и регионах России.
Особенности динамики эпизоотического процесса, закономерности распространения и течения мониезиоза овец в аридной зоне юга России изучались редко и недостаточно полно (Г.М. Лазарев, 1998).
Для лечения овец предложено большое количество препаратов. Из цестодоцидов применяют в основном сульфат меди (1% р-р), фенасал (йомезан) и его лекарственные формы: (феналидон, полифен и др.), битионол. Более широко при проведении дегельминтизаций, особенно преимагинальных, используют бензимидазолы - панакур, сипкур, вальбазен и др. Однако, несмотря на высокую эффективность,
отмеченные препараты имеют высокую стоимость, а фенасал в настоящее время не производится.
В настоящее время установлено, что как сами гельминты, так и дегельминтизации вызывают иммуносупрессию. Э.Х. Даугалиева (1994), Э.Х. Даугалиева, К.Г. Курочкина (1996).
М.Ш. Акбаев (1998) указывает, что при мониезиозе существенно уменьшается число эритроцитов, падает содержание гемоглобина, увеличивается число лейкоцитов. Значительно повышается содержание гаммаглобулинов и уменьшается количество альбуминов, свободных аминокислот в сыворотке крови.
На наш взгляд, одним из ключевых моментов в решении проблемы терапии мониезиоза овец может быть использование новых методологических подходов, таких как применение иммуномодуляторов в комплексе с антгельминтиками. Это позволит не только изгнать мониезий, но и повысить иммунобиологическую реактивность организма, а также снизить патогенное воздействие паразита на организм овец.
В связи с этим, за последние годы усилия многих исследователей были направлены на изыскание новых комплексных, эффективных и недорогих противопаразитарных средств (Э.Х. Даугалиева, 2002). В числе их заслуживают внимание два новых отечественных препарата -купроферр и 2,5%-ная суспензия альбендазола, которые нам были представлены на изучение их иммунотропной и терапевтической эффективности при мониезиозе овец.
Учитывая своеобразие природно-климатических условий юга России, недостаточно полную изученность распространения мониезиозной инвазии и большое поголовье овец, мы сочли целесообразным уточнить распространение мониезиоза в аридной зоне
юга России, уточнить видовой состав возбудителей мониезиоза овец и разработать комплексную терапию при данном заболевании.
Цель и задачи исследований. Цель исследований - на основании изучения распространения мониезиоза овец в Республике Калмыкия, уточнить видовой и возрастной состав цестодозов овец. Определить сроки дегельминтизации животных, терапевтическую эффективность новых лекарственных форм препаратов купроферра и 2,5%-ной суспензии альбендазола, разработать схему лечения животных и определить иммунотропные свойства препаратов.
В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:
изучить видовой состав и распространение возбудителей мониезий;
определить терапевтическую эффективность препаратов купроферр и 2,5% суспензии альбендазола;
изучить иммунотропные свойства этих препаратов;
разработать сроки дегельминтизаций применительно к зоне проведения работы.
Научная новизна. В условиях аридной зоны юга России изучены распространение, видовой состав возбудителей мониезиоза. Изучена терапевтическая эффективность двух новых антгельминтиков отечественного производства. Проведена титрация доз, установлена терапевтическая доза, эффективность препаратов изучена в эксперименте и производственных условиях. Впервые определены иммунотропные свойства препаратов купроферр и 2,5% суспензии альбендазола.
Практическая значимость. Для внедрения в ветеринарную практику всесторонне изучены терапевтическая эффективность купроферра и 2,5%-ной суспензии альбендазола, проведена титрация доз, определена терапевтическая доза и изучены иммунотропные свойства препаратов. Доказана возможность применения иммуностимуляторов в
комплексе с антгельминтиками, способствующая скорейшему
восстановлению иммунного статуса животных, вызываемых
гельминтами и антгельминтиками. Наши данные по иммунотропным
свойствам препаратов и их терапевтической эффективности вошли в
соответствующие наставления.
Положения, выносимые на защиту:
видовой состав и распространение возбудителей; терапевтическая эффективность купроферра и 2,5%-ной суспензии альбендазола;
иммунотропные свойства препарата купроферр; комплексная терапия при мониезиозе.
Пути реализации: Результаты исследований могут быть использованы при корректировке противомониезиозных мероприятий в других регионах России, а также в педагогическом процессе при подготовке специалистов ветеринарной профессии.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены на заседаниях Ученого Совета ВИГИС (2001 - 2002 гг.), НГСХА (2002 гг.), на научно-практической конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» М., ВИГИС, 2002 г., на международной конференции по борьбе с болезнями животных. Иран, 2002 г, на межкафедральном заседании профессорско-преподавательского состава НГСХА (2002). По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ.
Внедрение: Результаты исследований под авторским надзором с положительным эффектом в 1999-200гг. внедрены в хозяйствах и госветучреждениях республики Калмыкия. Материалы исследований включены в нормативно-техническую документацию по применению 2,5% суспензии альбендазола при паразитозах животных (МСХ РФ, 2002)
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 110 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, собственных исследований, обсуждения их результатов, выводов и практических предложений. Работа иллюстрирована 22 таблицами. Список литературы включает 138 источников отечественных и 90 иностранных авторов. Приложение - на 13 страницах.
Терапия мониезиоза овец
В настоящее время имеется ряд противомониезиозных антгельминтиков, проверенных разными авторами на значительном поголовье овец с определенной эффективностью. Эти препараты широко применяют в ветеринарной практике для профилактических и лечебных дегельминтизаций. Антгельминтики должны обладать эффективностью действия как на имагинальные, так и преимагинальные формы мониезий, безвредностью действия на организм животного, дешевизной и удобством применения на практике. Лекарственные средства растительного происхождения, самые древние в народной и научной медицине, не потеряли своего значения и в настоящее время. При аноплоцефалидозах овец A.M. Петров, А.А. Скворцова (1929) из препаратов растительного происхождения испытали корневище мужского папоротника в дозе 10-30 г на голову с последующей дачей слабительного и получили высокую эффективность. В дальнейшем из корневища мужского папоротника П.Г. Гелбахиани (1957) изготовил препарат филиксан, действующими веществами которого являются филиксантин и филиксантен. Эти препараты в дозах 0,1-0,2 г/кг с успехом применили при мониезиозе овец В.А. Потемкина (1954, 1958, 1960), Н.В. Демидов (1963), М.М. Мардыев (1963), В.А. Холощанов (1963).
По данным К.И. Скрябина и Р.С. Шульца (1937), Б.С. Москалева (1940), Л.Г. Пановой, Б.А. Тахистова (1940) свежая камала в дозе от 5 до 10 г на голову обладает антигельминтным свойством при мониезиозе овец. Однако если хранить камалу больше года, то действующее вещество - ротрелин теряет свою активность. Кроме выше перечисленных растительных препаратов для дегельминтизации использовались семена тыквы, белоземельная полынь (В.А. Потемкина, 1956), чеснок (А.С. Силиванова - Ярцева, 1959), табак. В настоящее время они не имеют практического значения как антгельминтики. Из антгельминтиков минерального происхождения заслуживают внимания препараты меди. М.С. Hall, N.D. Forster (1918) впервые применили 1%-ный раствор сульфата меди против мониезиоза овец и получили высокую эффективность этого препарата. По данным A.M. Петрова и В.И. Пухова (1934) эффективность сульфата меди в лекарственной форме - 1%-ного раствора в дозе от 15 до 30-40 мл на голову, по результатам вскрытий составила от 63,7 до 71,4% при мониезиозе овец. Высокую эффективность 1%-ного раствора сульфата меди при мониезиозе овец отмечали в своих работах A.M. Петров (1931); Л.А. Лосев, А.С. Сидоров (1935); И.П. Грачиниченко (1934); B.C. Ершов, O.K. Горшунова, С.А. Малыгин (1935); Х.Г. Гайнуллина (1939); В.А. Потемкина (1946); Н.П. Попова, С.Н. Морозов (1948); Л.П. Шибаев (1955); Н.Х. Шевченко (1958); А.Т. Попов, Д. Банкова (1959); М.А. Кубанов (1961); П.В. Радионов (1961); Р.А. Пекипелова, Р.У. Давлеткельдиева (1961); М.М. Мардыев (1963); М.Ю. Паскальская (1959); Г.И. Диков (1960); А.И. Степанов (1959); И.Ф.Квестадзе, А.А. Вартанов (1941); С.Д. Ульянов (1961); Ю.Я. Дольников (1958, 1959, 1961, 1962); Е.С. Згардан (1960); Д.К. Дульцев, В. Матвеенко, С. Емельянов, А. Степаненко, Г. Давыдова (1961); И.Х. Играшев, М.А. Риш (1963); М.Ш. Акбаев (1986) и др.
Ю.Я. Дольников (1959, 1960) разработал методику групповой дегельминтизации при мониезиезе овец углекислой медью. Путем скармливания препарата с концентратами из расчета индивидуальной дозы 50 мг/кг, дважды с интервалом в одни сутки. В результате во всех хозяйствах был обеспечен хороший профилактический эффект. Из препаратов группы органических соединений широкое применение в практике нашли битионол, йомезан, фенасал, феналидол, фенбендазол, албендазол, вальбазен и т. д. Битионол (битин, вакцид, анафоксин, лоротидол, тремакол): впервые при мониезиозе овец испытали F.D. Enzie, М. L. Golgasier (1960), но они не установили оптимальную лечебную дозу препарата. М. Fukul (1960) установил, что битионол в дозе 50 мг на кг веса животного эффективен при мониезиозе. По данным В.Р. Подгорного (1964) лечебной дозой битионола для овец является 100 мг/кг веса. Из группы органических соединений не менее эффективным против мониезиоза овец оказался йомезан (R.J. Gonnert, Е. schranfatatter, 1960). При изучении механизма действия йомезана R.J. Gonnert, R. Strafe, (1960) было установлено повреждающее действие препарата на кутикулу цестод. Йомезан также был испытан как цестодоцид при мониезиозе овец S. Tampa, H.J. Terhland (1961) в виде 5%-ной суспензии в дозе 50 мг/кг - 100 мг/кг. Авторы получили ЭЭ равную 80-100 %. В последующем эффективность йомезана при мониезиозе овец была подтверждена в работах К. Zettel (1962), R.K. Reinecke (1962), W.W. Cregor (1963), H.C. Teichert (1963), D. Nigara (1963) и др. Из отечественных ученых подтвердивших высокую эффективность йомезана были Д.Г. Баяндина, А.Ф. Бехли, М.Б. Брауде, А.И. Кротов (1962), З.И. Иванова (1963), В.Ф. Гладких, Х.И. Сейфулле, М.Н. Лебедева, Э.В. Сазанова, И.А. Кузнецова (1963) и др. В 1961 г. А.Ф. Бехли и М.Б. Брауде (институт Медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского) синтезировали идентичный йомезану фенасал.
Фенасал в сравнительном аспекте с йомезаном изучил Д.Г. Баяндина, А.Ф. Бехли, М.Д. Брауде и А.И. Кротов (1962). Они установили, что препараты идентичны по показателям токсичности и эффективности. Ими было показано, что фенасал в концентрациях 10" -10" парализует мускулатуру цестод. Л.В. Русак (1964) установила, что фенасал разрушает первый и второй слои кутикулы, а третий (базальный) слой разрушается только при совместном действии протеолитических ферментов кишечника и фенасала.
Иммунотерапия при гельминтозах животных
Данные отечественной и зарубежной литературы показывают, что паразиты могут оказывать на организм хозяина двоякое воздействие. Так, с одной стороны, они стимулируют иммунный ответ, в результате чего наблюдается ряд феноменов клеточного и гуморального ответа, а с другой стороны вызывают угнетение функциональной и пролиферативной активности клеток лимфоидной ткани, что приводит к развитию вторичных иммунных дефицитов (ВИД) - это способствует резкому изменению характера взаимоотношений в системе хозяин -паразит и помогает выживанию последнего в иммунном организме хозяина (Е.С. Лейкина, 1978).
Оказалось, что почти все виды гельминтов вызывают супрессию нормального иммунного ответа, в результате чего подавляются защитные механизмы хозяина. Насколько полноценно функционирует иммунная система, зависят многие процессы нормальной жизнедеятельности организма. Таким образом, ветеринарная наука стоит перед необходимостью разработки методологии выявления заболеваний иммунной системы животных с целью их профилактики и своевременной терапии (Ю.Н. Федоров, О.А. Верховский, 1996).
Основное направление в этой области - это использование иммуностимулирующих препаратов. Сразу следует оговорить, что действие большинства иммуностимуляторов амбивалентно и направленность их действия (угнетение или активация иммунных реакций) в значительной степени определяются дозой препарата, кратностью его введения и исходной иммунореактивностью организма. Поэтому, несмотря на преобладание в спектре действия стимулирующих свойств, их правильнее рассматривать как иммуномодуляторы. Иммуномодуляторы по происхождению можно условно разделить на эндогенные и экзогенные.
Эндогенные препараты объединяют интерлейкины, лимфокины, монокины, интерфероны, гормоны тимуса и некоторые другие вещества, присутствующие в организме человека и участвующие в регуляции иммунных реакций. Применение этого класса иммуномодуляторов затрагивает достаточно широкий спектр заболеваний. Примером может быть отечественный рекомбинантный ИЛ-1. Продемонстрирована целесообразность применения ИЛ-10 для лечения грануломатоза Вегенера с целью регуляции избыточной продукции ИЛ-12, гамма-интерферона (ИФН) и ФНО-альфа.
Создан целый ряд лекарственных средств на основе ИФН-альфа (реаферон, интрон А, реальдирон, велферон, виферон), ИФН-бета (бетаферон, ферон, фрон) и ИФН-гамма (гаммаферон). Основной областью применения ИФН-альфа и бета являются вирусные заболевания, включая гепатиты.
Изучается возможность применения ИЛ-2 и ИФН-альфа в терапии ВИЧ-инфекции. ИФН-гамма используется в лечении ревматоидного артрита, псориатической артропатии, костных метастазов некоторых опухолей, сепсиса.
Широкий спектр действия - острые и хронические бактериально-вирусные инфекции, расстройства кроветворения и иммуногенеза, онкозаболевания - имеет препарат лейкинферон, включающий комплекс цитокинов: ИФН-альфа, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-12, ФНО-альфа и некоторые другие.
К эндогенным иммуностимуляторам относится группа препаратов тимуса: тимостимулин, тимоптин, т-активин и др. В последнее время, наряду с использованием перечисленных выше многокомпонентных препаратов-экстрактов тимуса, большое внимание уделяется иммуномодуляторам, представляющим собой регуляторные пептиды тимуса: тимулин, тимозин al, Ь4 и др.
Экзогенные иммуномодуляторы включают препараты природного происхождения и синтетические вещества. К природным экзогенным иммуномодуляторам относятся вещества растительного, вирусного, грибкового происхождения, а также препараты выделенные из простейших и беспозвоночных. Яркими представителями синтетических иммуномодуляторов являются отечественные препараты полиоксидоний и имунофан.
Полиоксидоний, N-оксидированное производное полиэтиленпиперазина, обладает влиянием преимущественно на фагоцитирующие клетки: нейтрофилы и моноциты / макрофаги. Наличие у препарата детоксицирующих свойств в сочетании с иммуномодулирующим действием обусловило возможность его применения в хирургической практике у больных с гнойно-септическими осложнениями. Основной клеткой мишенью имунофана, синтетического гексапептида, является Т-лимфоциты. Активная пролиферация и дифференцировка Т-лимфоцитов под действием имунофана, вероятно, осуществляется альтернативным способом, посредством включения продукции других факторов, контролирующих рост и развитие клеток. Данное обстоятельство имеет исключительно важное значение при иммунокоррекции инфекционных больных с выраженными явлениями воспаления и в онкологической практике. Доказана высокая клиническая эффективность препарата при включении в программу комплексной терапии у ожоговых больных с острой токсемией, хроническом гепатите В, оппортунистических инфекциях, дифтерии, сальмонеллезе, эндогенном увейте, псориазе, посттравматических стрессовых расстройствах. При гельминтозах животных, как и при многих других вышеуказанных болезнях, применяют препараты в комплексе с иммуномо дуляторами. С. Elson, Y. Bredby (1971) указывают, что иммуномодуляторы не влияют на гельминтов, а стимулируют в организме животных биологически активные компоненты иммунитета, нормализуют физиологические функции организма. Так, В.А. Гаврилин (1996) предложил внимательнее относится к иммунитету при демодекозе собак и использовать при лечении новые эффективные иммуномодуляторы. При данной болезни О.А. Федорченко (1997) применял комплексные методы лечения с применением иммунопаразитана и АСП. При этом эффективность лечения составила 67%. Наиболее распространенным препаратом с иммуностимулирующими свойствами является левамизол, который начали применять как антигельминтный препарат. Механизм действия его заключается в восстановлении функций периферических Т-клеток и фагоцитов, и стимуляции превращения Т-лимфоцитов -предшественников в функционирующие клетки. Н.Н. Озерецковская, (1980, 1985, 1990,2000) указывает, что левамизол имеет особое значение в коррекции иммунного статуса при паразитарных болезнях животных, которое определяется подавлением гемолитического и анафилаксического компонентов системы комплемента, стимуляцией интерферона, гаммаглобулина.
Изучение иммунотропных и антгельминтных свойств новых препаратов при мониезиозе овец
Экспериментальное изучение иммунотропной активности купроферра провели в соответствии с «Методическими рекомендациями по экспериментальному изучению иммунотропной активности фармакологических препаратов», одобренными Фармкомитетом МЗ России (протокол № 10 от 10 декабря 1998 г.). О влиянии препарата купроферр на клеточное звено иммунитета судили по выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и аутологичным розеткообразующим клетками (ауто-РОК). Реакция гиперчувствительности замедленного типа. Под опыт взяли 20 мышей линии BALB/C массой 18-20 г и разделили их на 2 группы: 1-ой группе (10 мышей) в течение трех дней вводили внутрь купроферр в дозе 0,02 мл/голову, в последний день введения препарата проводили внутрибрюшинно сенсибилизацию 2% суспензией ЭБ в дозе 0,5 мл; 2-ая группа служила контролем, препарат не получала и была сенсибилизирована 2% суспензией ЭБ. Через 5 дней после сенсибилизации животных обеих групп в подушечку правой лапки вводили разрешающую дозу 10% суспензии ЭБ, а левой -физиологический раствор в той же дозе. Через 24 часа животных убивали, отрезали лапки на уровне голеностопного сустава и взвешивали на торсионных весах для учета индекса стимуляции.
В результате установлено, что индекс стимуляции (ИС) у подопытных животных был на уровне 10,3+0,2, а в контроле 2,3. Эти данные свидетельствуют о повышении функциональной активности Т-лимфоцитов. Таким образом, препарат купроферр в дозе 0,02 мл/голову введенный трехкратно внутрь обладает иммуностимулирующими свойствами. Динамика ауто-РОК у животных на фоне введения купуофеууа. Изучения в динамике показателей ауто-РОК у мышей дает нам представление о влиянии препарата на клеточный иммунитет, что выражается в повышении или понижении функциональной активности Т-лимфоцитов. Опыт был проведен на 40 мышах линии BALB/C массой 18-20 г, которых разделили на 2 группы: 1-ой группе в течение 3-х дней внутрь вводили препарат купроферр в дозе 0,02 мл/голову; 2-ая группа служила контролем и препарат не получала. Исследования проводили на 5 и 15 дни после дачи препарата. Результаты представлены в таблице 6. Примечание: - достоверно относительно контроля Установлено, что при введении купроферра в течение 3-х дней в дозе 0,02 мл/голову интактным мышам, кинетика ауто-РОК характеризовалась повышением как абсолютного, так и относительного количества розеткообразующих клеток в крови мышей и составляла на 5-й день исследования 1315,7+31,5 клеток в 1 мкл крови с последующим понижением до 971,3+15,8 клеток в 1 мкл крови к 15-му дню против 61,2+3,7 клеток в 1 мкл в контроле.
Определение антителообуазуюших клеток. В опыт было взято 20 мышей линии BALB/C массой 18-20 г, которых разделили на 2 группы (по 10 мышей). Мышей иммунизировали внутрибрю шинно субоптимальной дозой эритроцитов барана (5x10 ) и сразу после этого 1-ой группе вводили купроферр однократно в объеме 0,02 мл (перорально с помощью зонда). На 4 сутки определяли число АОК в селезенке. Индекс стимуляции иммунного ответа высчитывали как отношение числа АОК в селезенке мышей, получивших купроферр, к числу АОК в селезенке мышей контрольной группы.
Установили, что препарат стимулирует АОК в селезенке мышей при иммунизации эритроцитами барана (таблица 7). Так, содержание спленоцитов в селезенке под влиянием купроферра увеличилось в 1,43 раза. Число АОК на всю селезенку повысилось в 1,3 раза, на спленоцитов - в 2 раза, что указывают на активацию трансформации В-лимфоцитов в АОК селезенки. При оценке действия купроферра на гуморальный иммунитет изучали влияние препарата на индуктивную и продуктивные фазы. Титу гетерофильных агглютининов. Введение препарата повышало титры антител к тимусзависимому антигену - ЭБ и у опытных мышей в сыворотке крови они регистрировались на уровне 3,75-4,3 (log2) через неделю после иммунизации, а в контроле они были на уровне 2,25-2,4 (log2). Более высокий уровень 2gM - 4,3 (log2) по сравнению с уровнем 2gG - 3,75 (log2), говорит о том, что препарат действует более выражено на индуктивную фазу иммунитета, чем на продуктивную.
Кинетика В-лимфоиитое. В опыте использовали 40 мышей линии BALB/C массой 18-20 г. Животные были разделены на 2 группы по той же схеме, что и в предыдущих опытах. Исследования проводили на 10 и 15 дни после последнего введения препарата.
Как видно из таблицы 8, в динамике относительного количества В-лимфоцитов наблюдали увеличение относительного содержания ЕА С -РОК на 10-15-е дни после последнего введения препарата до 21,8+1,5 -22,7+1,3% по сравнению с контролем 17,8+1,9%.
Определение иммунотропных свойств и терапевтической дозы 2,5% суспензии альбендазола при мониезиозе овец
Экспериментальное изучение иммунотропнои активности 2,5% суспензии альбендазола провели в соответствии с «Методическими рекомендациями по экспериментальному изучению иммунотропнои активности фармакологических препаратов», одобренными Фармкомитетом МЗ России (протокол № 10 от 10 декабря 1998 г.). О влиянии 2,5% суспензии альбендазола на клеточное звено иммунитета судили по выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и аутологичным розеткообразующим клетками (ауто-РОК).
Реакция гиперчувствительности замедленного типа. Под опыт взяли 20 мышей линии BALB/C массой 18-20 г и разделили их на группы: 1-ой группе (10 мышей) в течение трех дней вводили внутрь альбендазол (2,5% суспензия) в дозе 4 мкл/голову, в последний день введения препарата проводили внутрибрюшинно сенсибилизацию 2%-ной суспензией ЭБ в дозе 0,5 мл; 2-ая группа служила контролем, препарат не получала и была сенсибилизирована 2%-ной суспензией ЭБ. Через 5 дней после сенсибилизации животных обеих групп в подушечку правой лапки вводили разрешающую дозу 10%-ной суспензии ЭБ, а левой - физиологический раствор в той же дозе. Через 24 часа животных убивали, отрезали лапки на уровне голеностопного сустава и взвешивали на торсионных весах для учета индекса стимуляции.
Таким образом, 2,5% суспензия альбендазола в дозе 4 мкл/голову введенная трехкратно внутрь не угнетает клеточное звено иммунитета. Динамика ауто-РОК у животных на фоне введения альбендазола. Изучение в динамике показателей ауто-РОК у мышей также дает нам представление о влиянии препарата на клеточный иммунитет, что выражается в повышении или понижении функциональной активности Т-лимфоцитов. Опыт был проведен на 40 мышах линии BALB/C массой 18-20 г, которых разделили на 2 группы: 1-ой группе в течение 3-х дней внутрь вводили альбендазол (2,5% суспензия) в дозе 4 мкл/голову; 2-ая группа служила контролем и препарат не получала. Исследования проводили на 5 и 15 дни после дачи препарата. Примечание: - достоверно относительно контроля Установлено, что при введении альбендазола в течение 3-х дней в дозе 4 мкл/голову интактным мышам, кинетика ауто-РОК характеризовалась некоторым снижением как абсолютного, так и относительного количества розеткообразующих клеток в крови мышей и составляла на 5-й день исследования 61,4+8,7 клеток в 1 мкл крови с последующим понижением до 51,1+4,4 клеток в 1 мкл крови к 15-му дню против 62,7+3,4 клеток в 1 мкл в контроле.
Определение антителообуазуюших клеток. В опыт было взято 20 мышей линии BALB/C массой 18-20 г, которых разделили на 2 группы (по 10 мышей). Мышей иммунизировали внутрибрю шинно субоптимальной дозой эритроцитов барана (5x10 ) и сразу после этого 1-ой группе вводили 2,5% суспензию альбендазола однократно в объеме 4 мкл (перорально с помощью зонда). На 4 сутки определяли число АОК в селезенке. Индекс стимуляции иммунного ответа высчитывали как отношение числа АОК в селезенке мышей, получивших препарат, к числу АОК в селезенке мышей контрольной группы.
Установили влияние препарата на АОК в селезенке мышей при иммунизации эритроцитами барана (таблица 17). Так, содержание спленоцитов в селезенке под влиянием альбендазола снизилось в 0,94 раза. Число АОК на всю селезенку снизилось в 0,9 раз, на 106 спленоцитов - в 0,98 раз, что указывают на отсутствие трансформации В-лимфоцитов в АОК селезенки.
При оценке действия альбендазола на гуморальный иммунитет изучали влияние препарата на индуктивную и продуктивные фазы. Титу гетерофильных агглютининов. Введение препарата несколько снижало титры антител к тимусзависимому антигену - ЭБ и у опытных мышей в сыворотке крови они регистрировались на уровне 2,15-2,01 (log2) через неделю после иммунизации, а в контроле они были на уровне 2,21-2,2 (log2). Уровень JgM - 2,6 (log2) по сравнению с контрольным уровнем JgG - 2,15 (log2), говорит о том, что препарат действует более благоприятно на индуктивную фазу иммунитета. Кинетика В-лимфоиитое. В опыте использовали 40 мышей линии BALB/C массой 18-20 г. Животные были разделены на 2 группы по той же схеме, что и в предыдущих опытах. Исследования проводили на 10 и 15 дни после последнего введения препарата.
