Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 12
1.1. Способы получения и характеристика антигенов эхинококков 12
1.2. Иммунопрофилактика эхинококкозов 24
Глава II. Собственные исследования 37
2. Материалы и методы 37
2.1.1. Получение вторичных ларвоцист Echinococcus multilocularis, цист Е. granulosus, приготовление первичной клеточной культуры 37
2.1.2. Культивирование клеток протосколексов Е. multilocularis и Е. granulosus в синтетической питательной среде, получение клеточных метаболитов 38
2.1.3. Получение 3-дневных экскреторно-секреторных продуктов протосколексов Е. multilocularis и Е. granulosus 41
2.1.4. Исследование клеточных метаболитов иммуноферментной реакцией (ИФР), выделение антигеноактивных серий, определение в них антигенов паразита реакцией иммунодифузии (РИД) 41
2.1.5. Физико-химическая характеристика клеточных метаболитов и 3-дневных экскреторно-секреторных продуктов протосколексов Е. multilocularis и Е. granulosus электрофорезом в полиакриламидном геле (ПААГ) 45
2.1.6. Иммунопрофилактические свойства клеточных антигенов протосколексов Е. multilocularis в комплексе: 46
2.1.6.1. с иммуномодулятором Гала-Вет 46
2.1.6.2. с иммуномодулятором ронколейкином 48
2.1.6.3. с противоопухолевым биопрепаратом «К» 49
2.1.7. Изучение иммунотерапевтического действия клеточных антигенов протосколексов Е. multilocularis при экспериментальном альвеолярном эхинококкозе в комплексе: 50
2.1.7.1. с иммуномодулятором ронколейкином 50
2.1.7.2. с противоопухолевым биопрепаратом «К» 51
2.1.8. Протективные свойства клеточных антигенов Е. multilocularis при эхинококкозе собак в комплексе с иммуномодулятором ронколейкином 51
2.2. Результаты исследований 52
2.2.1. Анализ данных по культивированию клеток протосколексов Е. multilocularis и Е. granulosus 52
2.2.2. Характеристика и контроль метаболитов клеточных культур и 3-дневных экскреторно-секреторных продуктов протосколексов из вторичных ларвоцист Е. multilocularis и Е. granulosus 54
2.2.3. Отбор и характеристика антигеноактивных клеточных метаболитов клеток протосколексов Е. multilocularis и Е. granulosus ИФР,РИД 57
2.2.4. Результаты физико-химической характеристики клеточных метаболитов и экскреторно-секреторных продуктов протосколексов Е. multilocularis и Е. granulosus 69
2.2.5. Оценка иммунопрофилактического действия клеточных антигенов Е. multilocularis при экспериментальном вторичном альвеолярном эхинококкозе в комплексе: 74
2.2.5.1. с иммуномодулятором Гала-Вет 74
2.2.5.2. с иммуномодулятором ронколейкином 79
2.2.5.3. с противоопухолевым биопрепаратом «К» 84
2.2.6. Оценка иммунотерапевтического действия клеточных антигенов протосколексов Е. multilocularis при экспериментальном альвеолярном эхинококкозе в комплексе: 89
2.2.6.1. С иммуномодулятором ронколейкином 89
2.2.6.2. С противоопухолевым биопрепаратом «К» 92
2.2.7. Оценка протективного действия клеточных антигенов Е. raultilocularis при эхинококкозе собак с иммуномодулятором ронколейкином 96
Обсуждение полученных результатов 101
Выводы 111
Список использованной литературы 113
Приложения
- Иммунопрофилактика эхинококкозов
- Анализ данных по культивированию клеток протосколексов Е. multilocularis и Е. granulosus
- С противоопухолевым биопрепаратом «К»
- Оценка протективного действия клеточных антигенов Е. raultilocularis при эхинококкозе собак с иммуномодулятором ронколейкином
Введение к работе
Актуальность темы. Эхинококкоз — это один из самых значимых и широко распространенных паразитозов в мире, представляющий серьезную проблему не только для ветеринарии, но и для медицины (Garippa G et al., 2004).
Особенно остро эта инвазия проявляется в регионах с развитым овцеводством и скотоводством как из-за наносимого экономического ущерба животноводству, так и большего риска заболевания человека, являющегося одним из промежуточных хозяев гельминта (Kammerer WS, Schantz РМ., 1993; Mandcll GL et al., 2000).
Если в России заболевание людей цистной и альвеолярной формами гидатидоза за 1986-1995 годы составило около 1,1 случаев на 100 тысяч населения, то в последние годы этот показатель значительно увеличился. Ежегодно регистрируется 2500 первично выявленных больных. Тенденция к увеличению заболеваемости эхинококкозом, по даншым Госсанэпиднадзора МЗ РФ (2001г.), остается актуальной проблемой, что связано с усилением урбанизации, возросшей миграции населения, развала устоявшихся экономических отношений, ухудшением социальной жизни и снижением санитарно-эпидемиологического контроля (Маркин А.В., 1999; Мусаев Г.Х., 1999, Коваленко Ф. П. и др. 2000).С другой стороны, значительно повысилась эффективность диагностических методов, особенно с внедрением в клиническую практику высокоинформативных методов диагностики этого заболевания, например таких как УЗИ и рентгеновская компьютерная томография (Демидов В. Н.Д983, Al-Korawi М. А., 1990, Puma А. О., 1990, Микаэлян М.Р., 1994, Abenste'm В., 2000, Koul Р. А., 2000, Parviaz А., 2000,).
Проблема профилактики и ликвидации гельминтозов сельскохозяйственных животных продолжает оставаться актуальной, несмотря на многочисленные разработки способов и методов борьбы с ними. Особую сложность представляют собой тканевые формы гельминтозов, как ларвальные цестодозы, паразитологическая диагностика которых не представляется возможной, а недостаток, а иногда отсутствие эффективных антигельминтных препаратов при этих гельминтозах выдвигает в качестве первоочередной задачи — изыскание и разработку иммунопрофилактических средств на основе специфических антигенов паразита и неснецифических иммуностимулирующих препаратов. Применение иммунопрофилактических средств позволяет значительно повысить сопротивляемость организма, снизить, а в некоторых случаях и предотвратить заражение животных.
Необходимым условием создания иммунопрофилактических средств против ларвального и имагинального эхинококкозов является получение активных, стандартизированных, видоспецифичных антигенов паразитов.
В последние годы в паразитологии успешно применяются биотехнологические методы получения антигеноактивных препаратов, к числу которых относится и клеточная инженерия, позволяющая использовать для этой цели культуры клеток из различных антигеноактивных субстанций паразитов. Для получения специфических антигенов цестод методом
клеточной инженерии можно использовать как протосколексы, так и яйца паразитов, содержащие инвазионные онкосферы. Однако в целях безопасности и обеспечения необходимой стерильности наиболее предпочтительным является использование протосколексов или герминативной оболочки.
В свете вышеизложенного считаем целесообразными и актуальными исследования по получению клеточных антигенов эхинококков, их физико-химической характеристики и разработки на их основе иммунопрофилактического препарата при эхинококкозе.
Цели и задачи исследования Основной целью наших исследований было получить «клеточные» антигены и 3-дневные экскреторно-секреторные продукты протосколексов Е. multilocularis и Е. granulosus, провести их физико-химическую характеристику и разработать на основе клеточных антигенов Е. multilocularis и иммуностимулирующих средств иммунопрофилактический препарат при эхинококкозе.
Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
Получить «клеточные» метаболиты и 3-дневные экскреторно-секреторные продукты протосколексов Е. multilocularis и Е. granulosus
Провести отбор антигеноактивных серий «клеточных» антигенов протосколексов эхинококков иммуноферментной реакцией (ИФР)
Установить реакцией иммунодифузии (РИД) в агаровом геле наличие антигенов паразита в антигеноактивных сериях клеточных метаболитов и 3-дневных экскреторно-секреторных продуктах культивируемых in vitro протосколексов эхинококков
Провести физико-химическую характеристику клеточных антигенов и 3-дневных экскреторно-секреторных продуктов протосколексов эхинококков электрофорезом в полиакриламидном геле (ПААГ)
Изучить иммунопрофилактические свойства «клеточных» антигенов протосколексов Е. multilocularis при экспериментальном альвеолярном эхинококкозе в комплексе с:
а) иммуномодулятором Гала-Вет
6) иммуномодулятором ронколейкином
в) с противоопухолевым препаратом «К»
б) Оценить лечебное действие клеточных антигенов
протосколексов Е. multilocularis при экспериментальном альвеолярном
эхинококкозе в комплексе с:
а) иммуномодулятором ронколейкином
б) противоопухолевым препаратом «К»
7) Изучить протективные свойства клеточных антигенов Е. multilocularis при эхинококкозе собак в комплексе с иммуномодулятором ронколейкином.
Научная новизна
Впервые проведена сравнительная физико-химическая характеристика клеточных антигенов протосколексов Б. granulosus и Е. multilocularis и 3-дневных экскреторно-секреторных продуктов культивирования протосколексов методом электрофореза в ПААГ. Установлено в белковом спектре исследуемых антигенов протосколексов Е. granulosus соответственно 18 и 9,а Е. multilocularis 16 и 8 компонентов. Наиболее четко выраженные мажорные белковые компоненты в исследуемых антигенах протосколексов обоих видов эхинококков располагались в области подвижности белков мол. массы 200; 116; 66; 45; 31 и 14,4 кДа. Антигенные компоненты исследуемых биоматериалов вьивляли антитела класса IgG в сыворотках больных цистной и альвеолярной формой эхинококкоза, что подтверждает значительную идентичность входящих в их состав белков-антигенов и возможность их взаимозаменяемости. Впервые изучены протективные свойства иммунопрофилактических препаратов на основе «клеточных» антигенов протосколексов Е. multilocularis в комплексе с иммуномодуляторами Гала-Вет, ронколейкином и противоопухолевым препаратом «К» при экспериментальном альвеолярном эхинококкозе. Эффективность защиты составила соответственно: 91,7%; 83,3%; 100%. Установлено, что 2-кратная внутримышечная иммунизация собак клеточным антигеном протосколексов Е. multilocularis в комплексе с иммуномодулятором ронколейкином значительно повышает резистентность животных к заражению протоскодексами Е. granulosus (количество развившихся паразитов в 6,03 раз ниже, чем в контроле, все выделенные гельминты от иммунизированных собак были без сформированного терминального членика). Эффективность защиты составила 94,5 %.
Установлено, что клеточные антигены в комплексе с иммуномодулятором ронколейкином и противоопухолевым препаратом «К» не оказывают лечебного действия при альвеолярном эхинококкозе.
Практическая значимость
Материалы диссертационной работы Сасиковой М. Р. использованы в разработке «Технологического регламсита на комплексный иммунопрепарат для профилактики альвеолярного гидатидоза», одобренного секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (29.09.2007г.).
Подана заявка на изобретение «Способ профилактики вторичного альвеолярного эхинококкоза (гидатидоза)».
Апробация работы
Материалы диссертационной работы представлены и обсуждены на:
1)~научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями (2006-2009гт.)
заседаниях Ученого совета ВИГИС (2006-2008гг.)
секции «Инвазионные болезни животных отделения ветеринарной медицины РАСХН (2007г.)
Личный вклад соискателя
Представленная диссертационная работа является результатом экспериментальных исследований автора по изучению физико-химических и иммунопрофилактических свойств клеточных антигенов и экскреторно-секреторных продуктов протосколексов Е. multilocularis и Е. granulosus. Все исследования проведены автором самостоятельно под руководством д.б.н. Бережко В. К., которая оказывала научно-методическую помощь в проведении экспериментов и анализе полученных результатов.
Основные положения, выносимые на защиту
Получение клеточных метаболитов и 3-дневных экскреторно-секреторных продуктов протосколексов Е. multilocularis и Е. granulosus, отбор антигеноактивных серий ИФР, иммунохимический анализ полученных биоматериалов
Физико-химическая характеристика клеточных антигенов и 3-дневных экскреторно-секреторных продуктов протосколексов Е. granulosus и Е. multilocularis методом электрофореза в ПААГ
Иммунопрофилактические свойства «клеточных» антигенов протосколексов Е. multilocularis при экспериментальном альвеолярном эхинококкозе в комплексе:
а) с ронколейкином
б) с Гала-Вет
в) с биопрепаратом «К»
Изучение лечебного действия клеточных антигенов с ронколейкином и противоопухолевым биопрепаратом «К» при экспериментальном альвеолярном эхинококкозе.
Протективные свойства клеточных антигенов протосколексов Е. multilocularis при экспериментальном эхинококкозе (Е. granulosus) собак в комплексе с ронколейкином.
Публикации
По теме диссертации опубликовано б работ, 3 из которых в рекомендованных ВАК РФ изданиях.
Объем и структура диссертации
Иммунопрофилактика эхинококкозов
В системе мер борьбы с гельминтозоонозами неоднократно высказывалось мнение о необходимости создания эффективных вакцин для массового применения. Вопрос вакцинопрофилактики при гельминтозах получил новое развитие в последние годы с появлением биотехнологических методов получения антигенов паразитов.
Разработка противопаразитарных вакцин, по мнению Kudrna, Prokopic (1986), должна проводиться в трех направлениях с использованием разных подходов в получении антигенов иммунопрофилактической направленности. Во-первых, это вакцины на основе генной инженерии, предполагающие использование генов, кодирующих синтез белков с главными антигенными детерминантами, для получения достаточного количества специфических антигенов. Во-вторых, использование вакцин на основе живых или аттенуированных личинок или яиц возбудителей паразитарных болезней и, в-третьих, использование в качестве вакцинных препаратов поверхностных антигенов, а именно соматических клеток паразита.
Независимо от того, какой антигенный материал используется для приготовления вакцинного препарата, необходимо учитывать особенности развития иммунной ответной реакции при паразитарных заболеваниях, а также невозможность создания эффективного стерильного иммунитета. В большинстве случаев при гельминтозах вырабатывается нестерильный частичный иммунитет, который характеризуется присутствием в вакцинированном организме в течение длительного времени некоторого количества паразитов, не оказывающих существенного влияния на организм хозяина, но тем не менее влияющих на эпизоотологическую ситуацию.
При паразитарных инвазиях, как и при других видах патогенного действия, иммунные механизмы защиты обеспечиваются иммунологическими реакциями клеточного и/или гуморального типа. При гуморальном типе эффекторами защиты выступают антитела, синтезируемые хозяином в ответ на заражение или на введение иммуногенного препарата. Но очень часто можно наблюдать значительный уровень гуморальных антител, не обеспечивающих необходимый защитный эффект, поскольку их взаимодействие с антигенами паразита не нарушает нормальный метаболизм и развитие последнего. В этом случае преимущество сохраняется за паразитом, он может беспрепятственно продолжать свое развитие, достигать половой зрелости, не утрачивая репродуктивной способности.
Так, при заражении трихинеллами стимуляция защитных эффекторных механизмов, по данным Kozar et al.,(1971), происходит уже на 2-й день инвазии, достигая максимума на 35-й день. Однако в последующем, хотя уровень гуморальных антител достигает значительных величин, трихинеллы беспрепятственно проникают в мышцы, инкапсулируются и продолжают получать питание от хозяина, что экспериментально установлено Digenis et al.(1970).
Исследования при фасциолезе, проведенные Hughes et al. (1981), убедительно показали, что развившаяся резистентность от первого заражения фасциолами, приводит при реинвазии к гибели паразитов, проникших в брюшную полость, но не влияет на находящихся в желчных ходах печени. Аналогичное явление отмечено при шистосомозе, когда половозрелые паразиты сохраняются в венозной системе, а развившиеся при реинвазии гибнут (Smithers, Terry, 1969)
Очень длительное время сохраняют жизнеспособность в организме хозяина личиночные стадии цестод, несмотря на развитие иммунной ответной реакции, регистрируемой при первичном контакте с паразитом.
Как предполагает Rickard (1978) это обусловлено тем, что концентрация синтезируемых при заражении антител недостаточна для губительного действия на быстро- развивающиеся онкосферы. Впоследствии цистицерки покрываются антителами, сходными с белками хозяина, блокирующими влияние клеточных иммунных механизмов. Хотя в литературе нет прямых экспериментальных доказательств защитной роли хозяиноподобных антигенов для паразитов, тем не менее этим обстоятельством можно объяснить разницу в потенциальной и функциональной активности антигенов гельминтов. Фактически антигенная адаптация происходит в процессе онтогенетического развития и начинается с личиночной стадии и промежуточного хозяина, сохраняясь в дальнейшем у половозрелого гельминта и окончательного хозяина, далеко отстоящих таксономических групп (Клименко, Сазанов, 1975; Bouchara et al.,1985).
Анализ данных по культивированию клеток протосколексов Е. multilocularis и Е. granulosus
Основная цель исследований по культивированию клеток протосколексов, выделенных из вторичных ларвоцист E.multilocularis, заключалась в установлении идентичности антигенов-метаболитов, синтезируемых этими клетками при культивировании в искусственных питательных средах. Основное внимание при этом должно уделяться тому, чтобы вторичные ларвоцисты содержали достаточное количество жизнеспособных протосколексов, часть из которых использовалась для приготовления первичной клеточной, культуры, получения 3-дневных экскреторно-секреторных продуктов, а другая — для заражения очередной партии животных-доноров.
Исходя из этих требований, мы провели сравнительный анализ результатов по оценке количества и качества протосколексов, полученных из вторичных ларвоцист Е. multilocularis, а также сравнили качество приготовленной из этих протосколексов клеточной суспензии по жизнеспособности, входящих в ее состав клеток и по результатам их дальнейшего культивирования. Использованные нами протосколексы, из которых была приготовлена первичная клеточная культура, были выделены из 4-6-месячных ларвоцист и полученная из них культура клеток состояла из жизнеспособных, с типичной морфологией и очерченными границами клеток. Использованный нами метод нежной гомогенизации позволял довести выход жизнеспособных клеток до 85-87%.
В процессе культивирования, периодически, через каждые 7-10 дней в момент пересева клеток получали клеточные метаболиты, которые исследовали на наличие антигенов паразита. Главным достоинством культур клеток является то, что антигены -метаболиты находятся в секретируемом виде в культуральной жидкости и нет необходимости в их очистке. В клеточных метаболитах, отобранных на 7-10 сутки от первично-перевиваемой культуры, обычно регистрировали низкую антигенную активность в ИФР.
В наших исследованиях культивируемые клетки протосколексов Е. multilocularis длительное время не теряли своей потенции к размножению и при многократных пересевах в свежей питательной среде пролиферировали, образуя монослой клеточной культуры, что однако, не означало присутствие во всех сериях полученных клеточных метаболитов антигеноактивных веществ.
Аналогичным способом проверяли. культуры . клеток протосколексов, выделенных из цист Е. granulosus. В результате культуральной работы было получено 27 серий клеточных метаболитов протосколексов Е. multilocularis и 19- Е. granulosus, а также 11 и 7 серий 3-дневных экскреторно-секреторных продуктов протосколексов E. multilocularis и E. granulosus соответственно. Все полученные культуральные продукты метаболизма клеток и протосколексов обоих видов эхинококков проверили на антигенную активность (ИФР) с использованием положительных и отрицательных контрольных сывороток.
Проверка антигенной активности полученных серий клеточных метаболитов и 3-дневных экскреторно-секреторных продуктов протосколексов эхинококков, проведенная ИФР с использованием сыворотки пациентов с подтвержденным хирургически, и в последующем иммунохимически, диагнозом цистного и альвеолярного эхинококкоза (положительный контроль) и сывороток пациентов-доноров (отрицательный контроль), показала, что не все они имеют в своем составе антигены паразита в достаточной концентрации.
Так, из 27 серий клеточных метаболитов протосколексов Е. multilocularis антигены паразита установлены в 19, а из 19 аналогичных продуктов протосколексов Е. granulosus в 14. Причем, судя по оптической плотности, клеточные метаболиты протосколексов Е. granulosus были более активны.
Аналогичная проверка в ИФР 3-дневных экскреторно-секреторных продуктов протосколексов Е. multilocularis и Е. granulosus показала их достаточно высокую антигенную активность, хотя и в этом случае преимущество было за протосколексами Е. granulosus. Из 11 серий 3-дневных экскреторно секреторных продуктов протосколексов E. multilocularis 9 содержали активные антигены паразита, что касается аналогичного материала Е. granulosus, то все 7 серий были атигеноактивными (табл. 1).
С противоопухолевым биопрепаратом «К»
Многочисленными исследованиями было доказано, что эффективная защита при эхинококкозах и тениидозах достигается при использовании онкосферальных антигенов. Показано, что вакцинация животных антигенами, приготовленными из онкосфер, стимулирует иммунитет против повторного заражения яйцами Т. ovis и Т. saginata (Rickard et al.; 1982). К аналогичному мнению в этом вопросе пришли Osborn, Heath (1982); Osborn et al.(1982); Harrison et al (1999) и др.
Высокая иммуногенность экскреторно-секреторных антигенов онкосфер Е. granulosus, эмульгированных в неполном адъюванте Фрейнда, была установлена при иммунизации овец. Протективный эффект составил 96,04 % (Zhu et al.(1991 a,b)).
Исследованиями Heath et al.(1994) установлено, что в онкосферальном антигене E.granulosus только две фракции молекулярной массы 23 и 25 кДа способны стимулировать защиту от цистного гидатидоза у овец на ранней стадии инвазии.
Для идентификации протективных молекул зрелых онкосфер Heath, Lawrence (1994) использовали иммуноблоттинг, гибель онкосфер in vitro, иммуноабсорбцию и ответы изотипических антител. Эти исследования позволили авторам определить, что протективный эффект связан с нативными антигенами молекулярной массы 23, 25, 30, 34 и 40 кДа.
Последующими исследованиями с использованием аффинно-очищенных антител было установлено, что протективные эпитопы в большей степени содержатся в компонентах мол. массы 23 и 25 кДа. Это было в дальнейшем подтверждено успешной иммунизацией овец этими фракциями, полученными препаративным электрофорезом, при проверочном заражении яйцами Е. granulosus. Несмотря на значительную иммуногенность антигенов эхинококков, производство из них вакцинных препаратов имеет существенные недостатки, которые прежде всего обусловлены опасностью заражения персонала яйцами цестод, дороговизной и трудностью получения достаточного количества взрослых гельминтов от собак.
Поэтому в опытах по иммунопрофилактике при эхинококкозах и тениидозах начали испытывать антигены различного происхождения. Протективным действием, по мнению многих исследователей, обладают не только онкосферальные антигенные препараты. Имеются данные о возможности использования с положительным успехом в качестве вакцинирующих средств антигенов из цист, жидкости ларвоцист и протосколексов эхинококков (Movsesijan et al., 1968; Movsesijan, Mladenovic, 1970; Dottorini et al., 1978; Dada, Belino, 1981; Аделыпин и др., 1983; Heath, 1986; Heath, 1995; Zhang, 2001; Aminjanov et al., 2003 и др.).
Показано, что жидкость ларвоцист Е. granulosus предохраняла иммунизированных овец от последующего проверочного заражения на 76,2 %, в то время как экскреторно-секреторный антиген протосколексов эхинококка обеспечивал уровень защиты в пределах 92,087 % (Zhu et al. 1991b).
О возможности индукции защитной иммунореакции против экспериментального вторичного цистного эхинококкоза у мышей посредством иммунизации их поверхностным антигеном протосколексов паразита указывали Haernandez, Nieto (1994). Авторы установили, что углеводные эпитопы этого антигена, вызывают преимущественно синтез IgM, а белковые - IgG антител. Иммунизация овец и мышей антигенами из протосколексов, цистной жидкости и половозрелых Е. granulosus позволяла предотвратить инвазию на 90,9 % (Hashemitabar, 2005).
О проявлении протективного иммунитета гуморального типа при иммунизации мышей антигенами E.multilocularis сообщали Play ford et al (1993). Авторы установили, что устойчивость животных к заражению этим паразитом обычно ассоциируется с СД4, а восприимчивость - с СД8 Т-клетками.
По данным SHI et al. (2009) 3-кратная иммунизация мышей, с интервалом 14 дней, вакциной rEgP-29 (состоящая из антигенов протосколексов) с полным (1 иммунизация) и не полным адъювантом Фрейнда (2 и 3 иммунизация) и последующим заражением протосколексами Е. granulosus вызывала защиту на 96,6 %.
Не вызывает сомнения тот факт, что иммунопрофилактика-это важное звено в системе мер борьбы с эхинококкозами прежде всего по тому, что она позволяет, с одной стороны, повысить сопротивляемость организма, а, с другой, значительно уменьшить количество и инвазивность выделяемого иммунным организмом гельминтного начала во внешнюю среду.
Так, по данным Aminjanov et al. (2003) вакцина, полученная из протосколексов Е. granulosus, обладала высокой иммуногенной активностью. По результатам исследования у иммунизированных этим антигеном овец защитный эффект достигал от 50 до 100% в зависимости от дозы, причем у этих овец число и размер ларвоцист Е. granulosus был в 3-4 раза меньше по сравнению с контролем.
Достаточно высокий защитный эффект этой вакцины был отмечен авторами у вакцинированных собак. Число обнаруженных эхинококков у иммунизированных собак было в 5-6 раз меньше, чем у контрольных.
Оценка протективного действия клеточных антигенов Е. raultilocularis при эхинококкозе собак с иммуномодулятором ронколейкином
Анализ результатов по оценке протективной эффективности клеточного антигена протосколексов Е. multilocularis в комплексе с иммуномодулятором ронколейкином (таб. 13) показал, что собаки, двукратно иммунизированные этим препаратом, оказались после проверочного заражения протосколексами Е. granulosus (рис. 33), слабо инвазированны. У них обнаружили всего 110-131 экз. паразитов (в среднем по группе 118,6±13,2). Причем оказалось, что длина всех выделенных в этой группе паразитов была не более 1,2 мм без сформированного третьего членика (рис. 34). Эффективность защиты составила 94,5%. У собак 2-й группы, которых иммунизировали только клеточным антигеном протосколексов Е. multilocularis, обнаружили 680-893 (в среднем 788,3±8,4 экз) паразита длинной 1,44 мм со сформированным терминальным члеником без яиц эхинококка. В этой группе протективный эффект составил 66,5%. При вскрытии собак 3-й группы, иммунизированных только иммуномодулятором ронколеикином, число выделенных паразитов было 1254-1368 экз. (в среднем 1307,6±14,5) длинной не менее 1,76 мм. Также как и у животных второй группы выделенные паразиты имели сформированный терминальный членик с незначительным количеством яиц паразита. Эффективность защиты у этих животных была в пределах 39,3%. Что касается собак 4-й группы, которым вводили физраствор, они все были заражены, у них обнаружили 2064-2301 (в среднем 2156,6±25,3 экз.) цестоды, длинной около 2,3 мм. У этих собак все выделенные цестоды были половозрелые с большим количеством яиц паразита в терминальном членике (рис. 35). Резюмируя полученные данные можно констатировать, что 2 кратная иммунизация собак комплексным препаратом, включающим клеточные антигены протосколексов Е. multilocularis и иммуномодулятор ронколейкин, обеспечивает достаточно эффективную иммунную защиту против заражения Е. granulosus. Тем не менее, на наш взгляд, вопрос этот требует дальнейшего изучения, как в плане подбора оптимальных доз клеточного антигена, так и использование его в комплексе с другими эффективными иммуностимулирующими средствами нового поколения. Такие исследования, безусловно, потребуют значительного числа экспериментальных животных, однако, учитывая, что эхинококкоз в последние годы приобрел большое социальное значение почти во всех регионах России, активизация работ по разработке иммунных средств защиты от эхинококкозов должна быть признана приоритетным направлением паразитологии.
Похожие диссертации на Физико-химическая характеристика клеточных антигенов эхинококка и разработка иммунопрофилактического средства
