Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Литературный обзор 7
1.1 Способы получения гидроксинитрозосоединений 7
1.1.1 Введение нитрозогруппы в ароматическое кольцо 7
1.1.2 Получение оксимов 9
1.1.3 Гидролиз нитрозоанилинов 10
1.1.4. Окислительные методы 10
1.1.5 Метод циклоконденсации изонитрозо-Р-дикетонов с кетонами... 11
1.2. Химические свойства производных перзамещенной нитрозоизофталевой кислоты 15
1.2.1 Гидрирование перзамещенных нитрозосоединений 15
1.2.2 Алкилирование производных нитрозоизофталевой кислоты 18
1.2.3 Димеризация нитрозосоединений 19
ГЛАВА II. Синтез новых ариламидов перзамещенной аминоизофталевой кислоты 22
2.1 Получение калиевых солей ариламидов 2-гидрокси-5-нитрозо-4,6-диметилизофталевой кислоты 22
2.2 Выделение и доказательство строения свободных ариламидов нитрозоизофталевой кислоты 25
2.3 Восстановление перзамещенных ариламидов нитрозоизофталевой кислоты с целью получения новых аминопроизводных 30
2.4 Хлорацетилирование и диэтиламинирование производных аминоизофталевой кислоты с ариламидными заместителями в кольце 34
ГЛАВА III. Синтез модифицированных соединений ряда сложных эфиров перзамещенной аминоизофталевой кислоты 39
3.1. Ацетилирование сложных эфиров перзамещенной аминоизофталевой кислоты з
3.2. Хлорацетилирование производных аминоизофталевой кислоты со сложноэфирными заместителями 42
3.3. Диалкиламинирование хлорацетилпроизводных аминоизофталевой кислоты 47
ГЛАВА IV. Исследование аминопроизводных перзамещенной изофталевой кислоты на биологическую активность 53
4.1. Исследование in vivo на лабораторных крысах 53
4.2. Исследование in vitro на культурах бактерий 54
ГЛАВА V. Экспериментальная часть 57
5.1. Получение исходных веществ 57
5.1.1. Удаление влаги из используемых растворителей 57
5.1.2. Получение изонитрозоацетилацетона 57
5.1.3. Получение эфиров ацетондикарбоновой кислоты 58
5.1.4 Получение производных нитрозоизофталевой кислоты со сложноэфирными заместителями 59
5.1.4 Получение ариламидов ацетондикарбоновой кислоты 59
5.2. Реакции циклизации изонитрозоацетилацетона с диариламидами ацетондикарбоновой кислоты 60
5.3. Получение новых аминопроизводных изофталевой кислоты с ариламидными заместителями 70
5.4. Хлорацетилирование и диэтиламинирование производных аминоизофталевой кислоты с ариламидными заместителями в кольце 77
5.5 Ацетилирование сложных эфиров перзамещенной аминоизофталевой кислоты 83
5.6. Хлорацетилирование перзамещенных аминопроизводных со сложноэфирными заместителями в кольце 88
5.7. Диалкиламинирование хлорацетилпроизводных сложных эфиров аминоизофталевой кислоты 95 5.8. Исследование аминопроизводных перзамещенной изофталевой кислоты
с ариламидными группами на биологическую активность 101
5.8.1 Исследования in vivo на лабораторных крысах 101
5.8.2 Исследования in vitro на культурах бактерий 102
5.9. Условия записи УФ, ИК, ЯМР и масс-спектров 103
Выводы 105
Библиографический список 1
- Гидролиз нитрозоанилинов
- Выделение и доказательство строения свободных ариламидов нитрозоизофталевой кислоты
- Хлорацетилирование производных аминоизофталевой кислоты со сложноэфирными заместителями
- Получение производных нитрозоизофталевой кислоты со сложноэфирными заместителями
Гидролиз нитрозоанилинов
По приведенной схеме это вещество получали в Китае [66]. Как видно, ключевым соединением в данной схеме синтеза является аминофенол IV, из которого далее по стандартным методикам получают хлорацетильное производное V а затем аминированием - конечный продукт VI. Недостатками данного метода является то, что пятистадийный синтез аминофенола IV протекает с суммарным низким выходом - около 14 %. При этом четвертая стадия, превращение производного пирана II в нитрофенол III, проводится в трет-бутияате калия с нитрометаном, это трудоемко и взрывоопасно, так как трет-бутияат калия получают из металлического калия и третичного бутилового спирта, обычно в атмосфере азота или аргона. В результате образуется - диэтил 2-гидрокси-4,6-диметил-5-нитроизофталат (III), из которого при гидрировании получают диэтил 5-амино-2-гидрокси-4,6-диметилизофталат (IV), причем на стадию гидрирования расходуется значительное количество водорода и затрачивается длительное время - 3 суток.
Поэтому авторы работы [7] использовали реакцию циклоароматизации для улучшения немецкого способа (схема 12):
В предлагаемом способе авторы исходили из диэтилового эфира ацетондикарбоновой кислоты (I), как и в известной схеме 11. Однако на первой стадии вместо ацетилирования I, что приводило к образованию пиранового цикла (II), авторы воспользовались реакцией циклизации соединения I с изонитрозоацетилацетоном. При этом сразу образовался перзамещенный иа/эд-нитрозофенол - диэтил 2-гидрокси-4,6-диметил-5-нитрозоизофталат (VII), путем гидрирования которого получают диэтиловый эфир IV. Предложенный способ позволил сократить число стадий от вещества I до IV и повысить выход в 4,5 раза. При этом процесс стал более безопасным и проводится при комнатной температуре. Кроме того, стадия восстановления требует вдвое меньшего количества водорода и значительно меньшего времени гидрирования, так как нитрозогруппа легче восстанавливается, чем нитрогруппа.
1.2.2.Алкилирование производных нитрозоизофталевой кислоты Алкиловые эфиры перзамещенной нитрозоизофталевой кислоты авторы [67-68] алкилировали при атмосферном давлении и интенсивном перемешивании. Для этого калиевую соль гексазамещенного пара-нитрозофеонола суспендируют в среде абсолютного диэтилового эфира, добавляя йодистый алкил в 100 - 200 кратном мольном избытке относительно калиевой соли иара-нитрозофенола. Затем кипятят с обратным холодильником при перемешивании в течение суток. Продукт переходит в эфирный раствор, цвет реакционной смеси изменяется от зеленого до желтого. Осадок образовавшейся соли иодида калия отфильтровывают, фильтрат упаривают и затирают с гексаном до образования кристаллов (Схема 13). R,-I
Авторами было установлено, что, несмотря на большую локализацию заряда на атоме кислорода гидроксигруппы, реакция алкилирования перзамещенных нитрозофенолов протекает по атому кислорода нитрозогруппы с образованием энергетически более выгодных алкиловых эфиров гексазамещенных хиноноксимов.
Известно, что многие нитрозосоединения в растворе имеют голубую или зеленую окраску, это можно объяснить тем, что в растворе они находятся в мономерной форме. Но в твердом состоянии нитрозосоединения часто димеризуются, находясь в виде бесцветных или светло-желтых кристаллов. Димеры нитрозосоединений чаще всего имеют структуру N,N -диоксидов азосоединений [69]. Например, нитрозобензол в твердом состоянии находится в виде N,N -диоксида азобензола. Это надежно подтверждено с помощью физических и химических методов анализа [70-76], а также согласуется с данными рентгеноструктурного исследования [77-79].
Благодаря криоскопическому методу исследования было установлено, что у некоторых нитрозосоединенй понижается температура замерзания, это как раз объясняется распадом дим ера на мономер [80]. Но не стоит забывать, что благодаря сопряжению у ароматических нитрозосоединений наблюдается стабилизация мономерной формы [81]. Сопряжение между электронодорными заместителями и нитрозогруппой приводит к еще большей устойчивости мономерной формы [82-84]. Если же в орто-положениях относительно нитрозогруппы в нитрозобензолах находятся большие по размеру заместители, то происходит стабилизация димерной формы [85-88]. Нитрозофенолы с алкоксикарбонильными заместителями находятся только в нитрозоформе [89], при растворении таких соединений в водной щелочи происходит постепенное изменение цвета с оранжевого до ярко-зеленого. Данные УФ и ЯМР !Н спектроскопии подтвердили, что для таких нитрозофенолов характерен переход от димерной формы к мономерной. В ЯМР !Н спектрах, были зафиксированы сигналы метильной группы димера и мономера, измеряя соотношение интенсивности сигналов метильной группы в мономере и димере, была построена кинетическая кривая увеличения концентрации мономера от времени. Процесс перехода димера в мономер происходит на 95% в течении 45 минут [90].
Было установлено, что происходит димеризация в гексазамещенных пара-нитрозофенолах и по данным рентгеноструктурного анализа. С помощью порошковой рентгеновской дифракции было проведено исследование димеризации перзамещенных нитрозофенолов со сложноэфирными заместителями в кольце. Процесс происходит обратимым образом: в щелочной среде наблюдается мономеризация, а в кислой -димеризация [91].
Подводя итог литературного обзора, можно констатировать, что из всех рассмотренных способов получения нитрозосоединений, циклоконденсация дает наибольшие возможности для синтеза нитрозофенолов с разнообразными заместителями в кольце. В то же время в реакции циклоконденсации в качестве активированного кетона использовали лишь эфиры ацетондикарбоновой кислоты. В результате из всех возможных производных перзамещенной нитрозоизофталевой кислоты синтезированы только ее сложные эфиры. Возможности протекания цикло ароматизации с другими активными синтонами, например, с ариламидами ацетондикарбоновой кислоты, остались не изученными, хотя
Выделение и доказательство строения свободных ариламидов нитрозоизофталевой кислоты
В ИК спектрах полученных веществ обращают на себя внимание сильные полосы поглощения карбонильных групп в области 1602 см"1 и 1651 см"1. Оказалось, что для ариламидов нитрозоизофталевой кислоты полосы валентных колебаний карбонильной группы находятся в области меньших частот, чем полосы колебаний карбонильной группы для соответствующих эфиров изофталевой кислоты (1650-1675 см"1 1725-1740 см"1) [90], что согласуется с данными ИК спектроскопии для карбонильных групп сложных эфиров и амидов [100].
В УФ спектре в этаноле имеется два максимума поглощения, характерных для нитрозофенолов, на длинах волн 248 и 397 нм (є = 20260 и 17480 соответственно).
В ЯМР 1Я спектрах всех ариламидов в ДМСО-ёб присутствуют сигналы протонов метальных групп ароматического кольца в области 2.23 -2.45 м.д., сигналы протонов фенильных колец в области 7.10-7.68 м.д., сигналы протонов аминогруппы в области 10.38-10.54 м.д., и сигналы «кислых» протонов в области 14.15-14.27 м.д. Появление сигналов в области столь слабого поля можно объяснить тем, что все ариламиды находятся в оксимной форме. Ранее было отмечено, что перзамещенные нитрозопроизводные изофталевой кислоты со сложноэфирными группами находятся в растворе почти полностью в нитрозофенольной форме [90].
Еще одним подтверждением нахождения ариламидов нитрозоизофталевой кислоты в оксимной форме стал тот факт, что сигналы метальных групп в ЯМР !Н спектре «двоятся», то есть дают два сигнала с одинаковой интенсивностью. Это хорошо объясняется тем, что одна из метальных групп ароматического кольца всегда располагается в син-положении по отношению к оксимной группе, а другая оказывается в анти положении, поэтому метальные группы становятся неэквивалентными. Таутомерное равновесие между нитрозоформой нитрозоизофталевой кислоты и ее хинонмонооксимной формой представлено на схеме 16:
В ЯМР !Н спектре видны сигналы протонов метальных групп ароматического кольца с хим. сдвигом 2.24 м.д. и 2.45 м.д., сигналы протонов фенильных колец с хим. сдвигом 7.10-7.65 м.д., сигналы протонов аминогруппы с хим. сдвигом 10.38 м.д., сигнал в области 14.19 м.д. принадлежит "кислому" протону оксимной группы.
Ранее считалось [89], что перзамещенные нитрозопроизводные сложных эфиров изофталевой кислоты в органических растворителях полностью, на 100% находятся в нитрозоформе, причем нитрозосоединения находятся в равновесии мономер-димер. В зависимости от концентрации нитрозосоединения преобладала либо мономерная форма, либо димерная (азодиоксидная). Лишь недавно при большом разбавлении раствора перзамещенного производного нитрозоизофталевой кислоты в дейтерохлороформе авторы [101] зафиксировали методом ЯМР Н спектроскопии присутствие небольшого количества хиноноксимного таутомера.
В связи с тем, что мы обнаружили нахождение перзамещенных нитрозопроизводных изофталевой кислоты с ариламидными группами в ДМСО исключительно в оксимной форме [97], представлялось важным проверить, в какой таутомерной форме в этих условиях будут существовать гексазамещенные нитрозопроизводные сложных эфиров изофталевой кислоты. И действительно, оказалось, что в данном растворителе такие соединения находятся полностью в оксимной форме. На рисунке 4 представлен ЯМР !Н спектр гексазамещенного нитрозопроизводного диэтилового эфира изофталевой кислоты.
В ЯМР !н спектре, записанном в ДМСО, присутствуют сигналы шести протонов метильных групп сложноэфирных заместителей в виде триплета с хим.сдвигом 1.27 м.д.; сигналы протонов метильных групп ароматического кольца двоятся: три протона выходят с хим.сдвигом 2.19 м.д. и три протона с хим.сдвигом 2.38 м.д. в виде синглетов, видны сигналы четырех протонов метиленовых групп с хим.сдвигом 4.28 м.д., в слабом поле имеется сигнал протона оксимной группы с хим.сдвигом 14.53 м.д.
Дальнейшим продолжением работы стало получение перзамещенных аминопроизводных на основе синтезированных соединений с ариламидными группами в кольце.
Реакцию осуществляли по разработанной методике (схема 17). В этиловом спирте растворяли производные нитрозоизофталевой кислоты, затем добавляли катализатор - палладий на угле, перемешивали в течение 30 минут. По истечении этого времени приливали по каплям гидразингидрат (3 -6 кратный мольный избыток относительно нитрозопроизводного). Начало реакции можно заметить, если начали выделяться пузырьки газа. После того как весь гидразин гидрат добавили, еще 30 минут перемешивали и контролировали окончание реакции по ТСХ. Когда исходное соединение полностью прореагировало, отфильтровали катализатор, а фильтрат упаривали в выпарной чашке. Конечный продукт выпадал в виде белых кристаллов [102-103].
Хлорацетилирование производных аминоизофталевой кислоты со сложноэфирными заместителями
Абсолютирование растворителей, применяемых в реакциях альдольно-кротоновых конденсаций чрезвычайно важно, поскольку влияет не только на выход продуктов, но и на саму возможность протекания процесса. Диметилсульфоксид абсолютировали по методу, описанному в работе [8]. Диэтиловый эфир сушили над хлористым кальцием, перегоняли и хранили над натриевой проволокой[109].
Этиловый спирт. Абсолютизацию этанола осуществляли следующим образом [110]. Кипятили 95,6 % этиловый спирт с 250 г прокаленного оксида кальция. Предварительно оксид кальция прокаливали в муфельной печи в течение 6 часов при 600 С. Таким образом, получили 99,5%-ный этанол. Затем в полученном спирте растворяли металлический натрий, из расчета на 1 л - 7 г натрия. После этого отгоняли спирт. Полученный спирт имел концентрацию 99,99 %. Выход 80 - 85 %, Т кип = 78 С.
Метиловый спирт. Абсолютизацию метанола осуществляли аналогично методике абсолютизации этилового спирта [ПО]. Выход составил 70-72% от теоретического Т = 65 С.
Пропиловый спирт. Абсолютизацию пропанола осуществляли аналогично методике абсолютизации этилового спирта [ПО]. Выход составил 85-87% от теоретического Т = 97 С.
Бутиловый спирт. Абсолютизацию бутанола осуществляли аналогично методике абсолютизации этилового спирта [ПО]. Выход составил 75-80% от теоретического Т =108 С.
Получение изонитрозоацетилацетона вели по стандартной методике [ПО]. Для нитрозирования пентандиона-2,4 использовали сухой азотистокислый натрий в среде соляной кислоты, плотностью реакция прошла через час, выпавший продукт отфильтровывали. Выход 85%. 5.1.3 Получение эфиров ацетондикарбоновой кислоты Диэтиловый эфир ацетондикарбоновой кислоты получали по известной методике [24]. На первом этапе была синтезирована ацетондикарбоновая кислота из лимонной кислоты, затем провели этерификацию полученной кислоты с этиловым спиртом. Выход: 26-30 г (18-21% от теоретического, считая на исходную лимонную кислоту).
Диметиловый эфир ацетондикарбоновой кислоты получали по аналогии с методикой [24]. Ацетондикарбоновая кислота, полученная из лимонной кислоты, вступала в реакцию с абсолютным метиловым спиртом, содержащим расчетное количество безводного хлористого водорода. Эфир перегоняли при 114-116 при 3-4 мм рт ст. Выход: 16-19%.
Дипропиловый эфир ацетондикарбоновой кислоты получали по аналогии с методикой [24]. Ацетондикарбоновая кислота, полученная из лимонной кислоты, вступала в реакцию с абсолютным пропиловым спиртом, содержащим расчетное количество безводного хлористого водорода. Эфир перегоняли при 160-162 С при 2-3 мм рт ст. Выход: (25-27 %).
Дибутиловый эфир ацетондикарбоновой кислоты получали по аналогии с методикой [24]. Ацетондикарбоновая кислота, полученная из лимонной кислоты, вступала в реакцию с абсолютным бутиловым спиртом, содержащим расчетное количество безводного хлористого водорода. Эфир перегоняли при 170-172 С при 2-3 мм рт ст. Выход: (23-25 %).
Диамиловый эфир ацетондикарбоновой кислоты получали по аналогии с методикой [24]. Ацетондикарбоновая кислота, полученная из лимонной кислоты, вступала в реакцию с абсолютным амиловым спиртом, содержащим расчетное количество безводного хлористого водорода. Эфир перегоняли при 200-202 С при 2-3 мм рт ст. Выход: (19-23 %).
Диметил 5-нитрозо-2-гидрокси-4,6-диметилизофталат Получали циклизацией изонитрозоацетилацетона с диметиловым эфиром ацетондикарбоновой кислоты по методике [60]. Выход калиевой соли составил 1,05 г (68%). Диэтил 5-нитрозо-2-гидрокси-4,6-диметилизофталат получали циклизацией изонитрозоацетилацетона с диэтил овым эфиром ацетондикарбоновой кислоты по методике [60]. Выход калиевой соли составил 1,1 г (66%). Дипропил 5-нитрозо-2-гидрокси-4,6-диметилизофталат получали циклизацией изонитрозоацетилаетона с дипропиловым эфиром ацетондикарбоновой кислоты по методике [60]. Выход калиевой соли составил 0,66 г (48%). Дибутил 5-нитрозо-2-гидрокси-4,6-диметилизофталат получали циклизацией изонитрозоацетилаетона с дибутиловым эфиром ацетондикарбоновой кислоты по методике [60]. Выход калиевой соли составил 0,41 г (60%). Диамил 5-нитрозо-2-гидрокси-4,6-диметилизофталат получали циклизацией изонитрозоацетилацетона с диамил овым эфиром ацетондикарбоновой кислоты по методике [60]. Выход калиевой соли составил 0,92 г (48%).
Получение ди(и-хлорфениламида) АДК проводили по аналогии с методикой [92]. Нагревали диэтиловый эфир ацетондикарбоновой кислоты с и-хлоранилином 24 часа в запаянной ампуле. Белые кристаллы. Выход 20%. Т пл. 203-204 С. Получение ди(и-бромфениламида) АДК осуществляли по аналогии с методикой [92]. Нагревали диэтиловый эфир ацетондикарбоновой кислоты с и-броманилином 24 часа в запаянной ампуле. Белые кристаллы. Выход 19%. Тпл. 230-231С. Получение ди(и-метилфениламида) АДК проводили по аналогии с методикой [92]. Нагревали диэтиловый эфир ацетондикарбоновой кислоты с и-метиланилином 24 часа в запаянной ампуле. Белые кристаллы. Выход 30%. Тпл. 173-175 С.
Получали аналогично циклизации изонитрозоацетилацетона с диалкиловыми эфирами ацетондикарбоновой кислоты. Растворяли 0.25 ммоль гидроксида калия в 2 мл абсолютного этилового спирта и добавляли 0.25 ммоль изонитрозоацетилацетона и 0.5 ммоль дифениламида ацетондикарбоновой кислоты, растворенного в 0.5 мл ДМСО. Смесь выдерживали 6 ч при 18-20С, при этом цвет раствора изменялся от оранжевого до темно-зеленого. Калиевую соль перзамещенной изофталевой кислоты выделяли добавлением абсолютного диэтилового эфира до помутнения. Ярко-зеленые кристаллы выпавшего продукта отфильтровывали, перекристаллизовывали из этанола, сушили в вакууме над прокаленным Na2S04 [93].
Получение производных нитрозоизофталевой кислоты со сложноэфирными заместителями
В ЯМР !Н спектре присутствуют в виде триплета сигналы шести протонов диэтиламиноацетамидо группы с хим.сдвигом 1.08 м.д., есть сигналы шести протонов метальных групп сложноэфирных заместителей в виде триплета с хим. сдвигом 1.30 м.д., присутствуют в виде сингл ета сигналы шести протонов метальных групп ароматического кольца с хим.сдвигом 2,08 м.д., видны сигналы четырех протонов метиленовых групп диэтиламиноацетамидо группы с хим.сдвигом 2.67 м.д., имеются сигналы двух протонов ацетильной группы с хим.сдвигом 3.23 м.д., сигналы четырех протонов метиленовых групп в виде мультиплета С ХИМ.СДВИГОМ 4.31 М.Д., в слабом поле выходят сигналы гидроксильной и аминогруппы с хим.сдвигами 9.27 м.д. и 10.04 м.д. соответственно.
Исследование фармакологической активности изофталамидных производных in vivo на антигипертензивную и антиритмическую активность проводили в лаборатории фармакологических исследований НИОХ СО РАН.
Определение биологической активности исследуемых веществ осуществляли на нормотензивных, наркотизированных тиопенталом натрия (в дозе 30 мг/кг внутрибрюшинно) половозрелых крысах самцах массой 190-220г. Животные были получены из вивария Института цитологии и генетики СО РАН, все манипуляции с ними проводили в соответствии с правилами и принципами гуманного обращения с животными. Опыты проводились в одно и то же время с 900 до 1200.
Для выполнения исследований животных разделяли на группы по 10 особей в каждой. Изучение антиаритмической активности проводили при 102 внутривенном введении агентов в различных дозах. Аритмию вызывали путем однократного введения в бедренную вену 10% раствора СаС12 в дозе 250 мг/кг или адреналина гидрохлорида (АГ) в дозе 0,3мг/кг. Данные дозы являются летальными для крыс в 100% случаях. Запись ЭКГ производили в течение 10 мин. ЭКГ регистрировали во втором стандартном отведении на приборе фирмы «LabLinc V» model v75-ll. Оценивали длительность интервалов RR, PQ, QRS, QT, зубца Р; амплитуду зубцов Р, Т, R. Определение параметров артериального давления проводили в остром эксперименте путем введения канюли в сонную артерию. Регистрацию показателей вели с помощью прибора фирмы «Coulbourn instruments» (США), а статистическую обработку данных - с помощью программы "Statistica 6.0", усредняя основные показатели систолического артериального давления. В качестве отклонения от среднего значения использовали среднюю статистическую ошибку, в качестве критерия достоверности был взят t-критерий Стьюдента.
В результате было установлено, что: 1) Ди(и-хлоранилид) 2-гидрокси-5-амино-4,6-диметилизофталевой кислоты проявляет эффект в дозе 0,5 мг/кг на модели адреналовой аритмии, вызывая восстановление ЭКГ в 50% животных. Кроме того, показано, что соединение в дозе 0,45мг/кг проявляет гипотензивный эффект, снижая давление у крыс более чем на 20%. 2) Ди(и-толуидид) 2-гидрокси-5-амино-4,6-диметилизофталевой кислоты в дозе 4 мг/кг проявляет антиаритмический эффект на адреналовой аритмии, вызывая восстановление ЭКГ в 70% животных. Исследования влияния агента на артериальное давление крыс показало, что введение агента в дозе 0, 5мг/кг оказывает гипотензивный эффект и снижает давление более чем на 20%.
Исследования in vitro на культурах бактерий Для выявления антибактериальной активности полученных соединений in vitro проведены исследования в лаборатории микробиологии
Красноярского государственного медицинского университета им. профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого. Определение антибактериальной активности проводили методом серийных разведений на тест культурах: Е. coli (Escherichia coli, штамм АТСС 25822 чувствительный к антибиотикам), S. aureus MSSA (Staphylococcus aureus, штамм 209 Р чувствительный золотистый стафилококк) и Staphylococcus aureus MRS А (Метициллин резистентный стафилококк). Двукратное разведение соединений в объеме 1 мл готовили на дистиллированной воде. В каждую пробирку с растворенным аминофенолом вносили по 0.1 мл взвеси испытуемых тест-культур, приготовленных из 18-часовых агаровых культур по стандарту мутности 0,5 макфарланда. Пробирки инкубировали при 37 градусах Цельсия. Высев производили через 24 часа на сектора штрихом в чашки с мясопептонным агаром. Учет результатов производили по наличию и характеру роста культур на питательной среде. Исходная концентрация изучаемых перзамещенных аминопроизводных составляла 5 10"4 моль/л.
Для доказательства строения впервые полученных производных перзамещенной нитрозоизофталевой кислоты, продуктов их гидрирования, хлорацетилирования и диалкиламинирования были записаны различные спектры.
УФ спектры снимали на спектрофотометре Helios Omega с диапазоном измерения 190-1100 нм в кварцевых кюветах 1 см. Концентрация солей в 0.1 н. водной калиевой щелочи 0.1-10"4 моль/л в ультрафиолетовом диапазоне, а в области п - перехода нитрозогруппы (600-700 нм) - 0.1-10"2 моль/л.
Спектры ЯМР 1Я (600.13 МГц) и 13С (151.91 МГц) регистрировали в ацетоне- на приборе Bruker Avance III 600 Красноярского регионального центра коллективного пользования СО РАН. Калиевые соли ариламидов 2-гидрокси-5-нитрозо-4,6-диметилизофталевой кислоты записывали в дейтероацетоне, амино-, ацетил-, хлорацетилпроизводные в ДМСО d6. ИК спектры ИК спектры получены на ИК микроскопе SpecTRA TECH InspectIR на базе ИК Фурье-спектрофотометра Impact 400. Пробу вещества помещали на позолоченную пластину, раскатывали роликовым ножом, помещали на столик микроскопа и снимали спектр НІШО. Детектор МСТ/А, объектив Si Caplugs, диапазон волновых чисел 4000-650 см"1, разрешение 1.928 см"1, количество сканирований 64, программное обеспечение OMNIC 5.1E.S.P.
Масс-спектры записывали на приборе Finnigan МАТ 8200. С двойной фокусировкой, метод ионизации электронного удара. Диапазон регистрируемых масс был установлен в диапазоне из 5-2000 а.е.м.
