Введение к работе
Актуальность темы. Опухолевый рост, кеч известно, сопровожден значительными нарушениями в системе иммунитета и естест-іной резистентности, которые занимают важное место в патогене онкологического процесса. Установлено, что активность ес-твенных супрессорных клеток (ЕСК) многократно увеличивается : росте опухоли (Nicoletti. 1985; Young et al., 1988; SuMza al., 1989). Полученные от животных-опухоленоситедей ЕСК сб-агат широки».» спектром неспецифического иммуносупрессорного ствия. Показана их способность подавлять функцию Т-лимфоші-
(Ycung et al., 1988; SuMza et al., 1989), в частности, об-ование цитотоксических лимфоцитов (Nlcolettl et al., 1985), имфоцитоз (Nicoletti et al., 1985; Subl2a et al., 1989; Kyc-цев 1990), а также клеток естественной противоопухолевой ре-тентности: активность натуральных киллеров (Nicoletti et , 1985; Young et al., 1990), и продукцию опухоленекротичес-
0 фактора макрофагами (Young et al., 1992).
С другой стороны, кроме многообразного иммуносупрессорного зтвия интактные костномозговые ЕСК способны In vitro подав-ь рост различных опухолевых клеток (Seledtsov et al.і 1995; luraetal., 1G90). Причём, стимуляция иммукосупрессорной <ции ЕСК in vitro интерлейкиноы-3 (ИЛ-З).и граяулоцит-макро-эльным колониестимулируюсим фактором (ГМ-КСФ) (рекоыбинант-і или опухолевого происхождения) также приводит к усилению и гивоопухолевой активности. Подобный механизм стимуляция ЕСК гт место и при опухолевом росте in vivo (Young et al., 1988, L; Suglura et al:, 1992).
В литературе имеются неоднозначные данные о роли ЕСК в опусом росте. Так, на модели перевивной легочной карциномы Ль-
1 убедительно показано, что подавление противоопухолевого
тштета (через ингибициа образования С04~8+-лимфоцитов) ес-
"веняыми супрессорными клетками, имеющими фенотип граііулоцн-
іакрсфагальшх предшественников, является основным механиэ-
з патогенезе данного опухолевого-процесса. Актиезцйя ЕСК з
і случае происходит за счет выработки опухольа ГМ-КС-3 (Young
ti., 1992, 1994). В тоже время, несмотря ка усиление ахтиз-
'и ЕСК и появление их з селезенке яиБоткых с опухольа Зрли-
естественнке супресссры ке нгразт роли в имеющей кесто з :ой ситуации кнгибиции синтеза противоопухолевых IgM (Vinue-t al., 1991; Subina et al., 1992). Кромо'того, гри развитии ского лейкоза у шшей линии AKR описано появление незрелых ск эритроэдной природу с выраженной остестзеннссупрс-сесрнс;": бностью, причем спогуляцня зритропоэз-я на стадии "пселзон-
коза" снижала выход лейкозов (Лксуко^ и др., 1985; Казлакова J др., 1988). Так ко показано антилейкоэное действие ЕСК индуцированных в РТПХ (Palatnumpat et al.. 1992).
Таким образок, ЕСК, проявляя иммуносупрзсссрное и/или противоопухолевое действие, ыогут двояко влиять на опухолевый процесс: с одной стороны, благодаря своему противоопухолевому дейстБЕо они могут тормозить рост опухоли, а с другой, ингиби-руя системы иммунитета.и неспецифической резистентности, ЕСК могут нарушать механизмы противоопухолевой защиты и, следовательно, способствовать бластомогенезу.
Известно, что ЕСК являются гетерогенной популяцией, состоящей из субпопуляции, принадлежащих к различным росткам кроветворения (гранудоцитарно-макрофагальному, эритроидному, лимфоид-ному), и, возможно, различающихся по степени зрелости. Эти субпопуляции могут различаться и по функциям: действовать на разные мкоекн, продуцировать различные факторы и др., и, следовательно, по разному влиять на опухолевый рост In vivo.
Учитывая вышесказанное, представляется актуальным исследовать свойства естественных супрессорных клеток, принадлежащих к разным субпопуляциям, а также изучить прямое влияние факторов, вырабатываемых .опухолью, на некоторые субпопуляции ЕСК.
Дедъ и 8адачи исследования. Целью настоящей работы является характеристика естественных супрессорных клеток разного происхождения и влияния на них опухолевых факторов in vitro. В ранках этой цели решались ел едущие задачи:
-
Охарактеризовать ЕСК иктактного костного мозга, селезенки, печени эмбриона разных сроков внутриутробного развития и костного мозга бестиыусных мышей "nude" с использованием различных мишеней: митогенстимудированных Т- и В-лимфоцитов и опухолевых клеток, а также механизм этого ингибкторного действия.
-
Сравнить' уровень супрессорной активности ЕСК интактного костного иозга, селезенки, печени эмбриона разных сроков внутриутробного развития и костного мозга Сестиыусных мызей "nude" а отноаениа ьзітогенстииудированкьк лимфоцитов и опухолевых клеток.
-
Оценить прямое воздействие на костномозговые ЕСК ОПуХОЛе-dux супернатаятоа в зависимости от наличия в них іїодокиестгігу-лйруюпих факторов.
-
Определить относительное содержание клеток, несущих антиген зрптрсоластов, в клеточных, популяциях с разлинуй уровне*.: естественной супрессорной активности (костный }/озг, г.імус, селезень яитаэтных 'л опуходене-сущ'л глвотных, печгн^ г>:С;р::сна). |
-
Охарактеризовать роль клеток, несущих антиген зритроблас-тов, в естественной супрессорной активности кнтактного костного мозга. '
-
Сравнить влияние опухолевых факторов на активность ЕСК клеточных популяций с различным содержанием клеток, несусдах антиген эритробластов (костный мозг взрослых животных и печень эмбриона разных сроков внутриутробного развития).
Научная новизна. В результате проведенных исследований дана характеристика и проведено сравнение естественной супрессорной и противоопухолевой активности ЕСК разного происхождения. Показано, что противоопухолевым и иммуносупрессорнш действием обладают как клетки костного мозга, так и печени эмбриона мыши разного возраста. Определено, что уровень естественной супрессорной активности костного мозга бестимусных мышей выше, чем у эутимусных. Впервые показано, что ЕСК, происходящие из эмбриональной печени, обладают кроме иммунссупрессорной, также и противоопухолевой активностью.
Установлено наличие ингибирующего функцию ЕСК действия опухолевых факторов in vitro, а также отсутствие корреляции между супрессориндуцирующим эффектом и колониестимулирующей активностью у опухолевых супернатачтсв.
Впервые показано, что удаление клеток, несущих антиген эритробластов, или связывание моноклональных антител с этим антигоном приводит к снижению или отмене естественной супрессорной активности костного мозга.
Установлено, что воздействие опухолевых факторов, обладающих колониестимулирующей активностью, приводит к усиленна естественной супрессорной активности печени эмбриона 14 и 19 дней внутриутробного развития как в отноаенки опухолевых мишеней, так и митогенстимулированных лимфоцитов.
Теоретическое и практическое значение работы. Теоретическое значение полученных результатов заключается в расширении представлений о свойствах естественных супрес'ссрнкх клеток разного происхождения и их роли в опухолевом процессе. Проведенные исследования позволяют заключить, что наблюдаемая in vivo активация естественных супрессорнкх клеток может реалізовуваться, очевидно, через различные механизмы,з зависимости от сзойств опухоли. Полученные в работе результаты могут служить основой для дальнейшего изучения механизмов опуходеиндуцированной клму-носупрессии и создания подходов для усиления противоопухолевого иммунитета путём злкмкнацни или регуляции активности супрессср-ных клеток, индуцированных спухольз.
Основные полозеник, гсмосглае гл з&'с.ту: 1. Неадгезивнные клетки геыопоэтических органов (костного мозга и эмбриональной печени) интактньи животных обладают выраженной способностью инг"пировать in vitro пролиферацию ыито-генстимулированньк-%имфоцитов, а также опухолевых клеток.
-
В феномене естественной супрессорной активности участвуют клетки несудае антиген эритрэбдастов.
-
Естественносупрессорная и противоопухолевая активности неадгезивнных клеток костного шага и эмбриональной печени чувствительны к прямому воздействию факторов выделяемых опухолевыми клетками.
Апробация работы. Основные результаты работы доложены и об-сухдены на Всероссийской конференции "Лабораторные животные и их использование в медико-биологических исследованиях" с международным участием (г.Москва, 1992 г), на 8-м Международном конгрессе по иммунологии (Будапешт, 1992), на расширенном засе^ даний Томского общества иммунологов (Томск, 1993). на 12 Европейской иммунологической конференции (Барселона, 1994).
Публикация результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, из них 4 статьи в центральной печати.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 137 страницах машинописного текста, иллюстрирована 15 рисунками, 31 таблицами и состоит из введения, 6 глав, заключена к выводов, списка литературы из 175 наименований.
