Введение к работе
Актуальность темы. В последние десятилетня одним из перспективных методов для решения проблем канцерогенеза, диагностики и прогнозирования клинического течения опухолевых заболеваний признан метод проточной цитомстрии ДНК ядер неопластических клеток {Николаева Т.Г. и соавт., 1990. Johnson T.S.. Katz R.L., Pershouse М„ 1988, Gansler Т., 1989, Vassilacos P., Albe X., 1990, Sasaki K.., Murakom Т., 1992, Zackon I.L.. Goolsby C.L., 1994). Этот метод позволяет в одном и том же образце при небольшом количестве материала определить два важных параметра, отражающих сущность и потенцию злокачественного роста и характеризующих биологическое поведение опухоли - интенсивность клеточной пролиферации, в том числе распределение популяции опухолевых клеток по митотическому циклу, и изменение содержания ДНК в их ядрах (выявление несбалансированности генома - анеуплоидии и степени ее выраженности).
В нашей стране, к сожалению, этот надежный и высоко воспроизводимый метод не получил достаточно широкого распространения. Одной из причин такого положения, наряду с трудностями внедрения нового дорогостоящего оборудования, является то, что несмотря на активные исследования в данной области (в основном, в зарубежных лабораториях) остаются нерешенными ряд принципиальных вопросов аналитической цитологии и фундаментальной онкологии. Так, неясно, является ли анеуплоидия характерной особенностью только клеток злокачественных новообразований или она может выявляться и в доброкачественных опухолях, какова частота анеуплоидных опухолей в злокачественных новообразованиях различного тканевого происхождения, какова зависимость между морфологическими проявлениями анаплазии опухоли и анеуплоидией, возможно ли использование показателей плоидности и пролиферативной активности клеток опухоли в качестве самостоятельных критериев прогноза (частота рецидивов, метастазов, исхода онкологического заболевания), какая степень анеуплоидии находит отражение в биологическом поведении новообразования.
Не подлежит сомнению необходимость и перспективность исследований, направленных на решение перечисленных вопросов.
Кроме того, представляются крайне интересными сравнительные данные об особенностях пролиферативной активности и содержания ДНК в новообразованиях различной тканевой природы (в том числе различных тпителиев), так как типы тканей обладают своими характерными чертами (в значительной степени тго касается кинетики клеточного обновления, а гакже сіабильности генетического аппарата
в различных условиях нормы и патологию, что может найти отражение в возникших из них опухолях.
Цель и задачи исследования. rWo.»-ri. :рп"::::тгльі,^^ ...^.ісдивание осооенно-
?"" .;„.,. ... ДИ»ч м иролиферативнои активности клеток наиболее часто встре
чающихся эпителиальных опухолей различного происхождения (эктодермального,
энтеродермального, мюллерова) в аспекте использования этих параметров и
морфологической структуры новообразований для оценки биологического по
ведения этих опухолей.
В соответствии с целью исследования поставлены следующие задачи:
1. С помощью метода проточной цитометрии определить содержание
ядерной ДНК и пролиферативную активность клеток в плоскоклеточном раке языка и
дна полости рта, аденокарциноме ободочной и прямой кишок, пнвазивном протоковом
раке молочной железы и эндометриальной аденокарциноме тела матки, т.е. в типах
опухолей, наиболее характерных для соответствующих органов.
-
Изучить те же параметры в исходных для перечисленных опухолей эпите-лиях у лиц без опухолевых заболеваний.
-
Сопоставить данные о содержании ядерной ДНК и пролиферативной активности изучаемых опухолей с особенностями их микроскопической структуры (степень дифференцнровки, глубина инвазии, нял:ічиє метастазов и др.).
4. Провести сопоставление полученных цитометрических параметров с
агрессивностью течения болезни, определяемой по клинико-морфологическим
критериям прогноза (степень гистологической злокачественности инвазивного
протокового рака молочной железы, стадия распространения опухоли толстой
кишки по Дюксу, клинический прогноз аденокарциномы тела матки) и выживае
мости больных плоскоклеточным раком языка и дна полости рта для оценки воз
можности использования показателей плоидности и пролиферативной активности
клеток в качестве прогностических критериев заболевания.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Анеуплоидия не встречается в микроскопически нормальном мпителии ро
говой полости, толстой кишки, молочной железы, матки лип без опухолевой пато
логии.
2. Анеуплоидия является характерной особенностью злокачественных
новообразований, ее наличие и степень выраженности связаны с агрессивностью
плоскоклеточного рака дна полости рта, аденокарциномы прямой кишки, инвачив-
ного протокового рака молочной железы и лдепокарциномы гела матки. Клоны ане-уплоидных клеток встречаются в микроскопически неизмененной слизистой оболочке толстой кишки и матки при наличии в них анеуплоидных новообразований, что может быть обусловлено распространением опухолевых клеток по слизистой оболочке органа.
3. Опухоли ^'.несколькими клонами анеуплоидных клеток характеризуются
неблагоприятными клинико-морфологическнми показателями при плоскоклеточном
раке языка, инвазивном протоковом раке молочной железы и аденокарциноме тела
матки.
-
Увеличение индекса ДНК связано с неблагоприятными клинико-морфологическими показателями при аденокарциноме тела матки и плоскоклеточном раке языка. Тетраплоидия не связана с неблагоприятными факторами при плоскоклеточном раке дна полости рта, аденокарциноме прямой кишки и инвазивном протоковом раке молочной железы.
-
Пролиферативная активность микроскопически нормального эпителия ротовой полости, толстой кишки, молочной железы и матки здоровых лиц приблизительно в полтора раза ниже, чем в соответствующих опухолях. Индекс пролиферации может служить дополнительным критерием прогноза при аденокарциноме тела матки.
Научная новизна. Впервые с использованием метода проточной цитометрии проведено сравнительное исследование содержания ядерной ДНК и интенсивности пролиферации клеток с определением их распределения по фазам митотического цикла в опухолях различной эпителиальной природы в сопоставлении с нормальными их прототипами. Степень анеуллоидии и изменения кинетических параметров пролиферации сопоставлены с макро- и микроскопической структурой изучаемых опухолей (размеры опухоли, степень их дифферокцироВкн/степень гистологической злокачественности, глубина инвазии, наличие метастазов), с предполагаемым прогнозом, определяемым по клинико-морфологическим данным при аденокарциноме тела матки, л при раке языка и дна полости рта цйтометрические показатели сопоставлены с 2,5-летней выживаемостью пациентов. Выявлены различия п частоте встречаемости анеуплоидии и величины пролиферативной активности в злокачественных новообразованиях различной локализации. Установлена зависимость плоидмости и пролиферативной активности опухолей от возраста пациентов. Выявлена возможность использования шюидцосіи и пролиферативной активности при некоторых типах новообразований (аденокарцинома тела матки и прямой кишки.
ннвазивный протоковый рак молочной железы, плоскоклеточный рак дна полости рта) как дополнительных факторов прогноза новообразования.
Практическая значимость. Показано значение анеуплоипии как "лугзгге.""
агрессивности течения тп,^..» --;.;: р„.>и шличпии железы, аденокарци-
номы прямой кишки и тела матки, плоскоклеточного рака дна полости рта. Установлено, что высокая пролиферативная активность является неблагоприятным прогностическим фактором при аденокарциноме тела матки. Данные показатели можно использовать для дифференциального подхода к пациентам с целью динамичного наблюдения за больными, а в ряде случаев для назначения более интенсивного лечения. Показано, что в микроскопически нормальном эпителии тела матки и толстой кишки в случае анеуплоидных новообразований возможно нахождение клонов ане-уплоидных клеток, что может быть причиной рецидива опухоли.
Апробация работы. Результаты исследования обсуждались на научных лабораторных конференциях НИИ онкологии им.проф. Н.Н.Петрова и ВЦЭМ, а также были доложены на заседании Санкт-Петербургского общества патологоанатомов (1994), на 23 научной сессии НИИАГ им. Д.О.Отта (1994), на Российском симпозиуме с международным участием по онкогинекологии "Скрининг и новые подходы к лечению начального гинекологического рака" (Новгород, 1994), на 28 ежегодном съезде Европейского обществе генетиков человека (Лондон, 1996), на Международной конференции "Спид, рак и сопутствующие проблемы" (Санкт-Петербург, 1996).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на '"-У страницах маши
нописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов
и методик исследования, результатов исследования, обсуждения полученных ре
зультатов, выводов и списка литературы. В диссертации приведены 'ттаблиц,2^>исун-
ков и микрофотографий. Список использованной литературы содержит назва-
