Введение к работе
Актуальность проблемы. В последние годы во всех странах мира отмечается увеличение частоты госпитальных инфекций у новорожденных, особенно детей, находящихся в отделениях реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ), где концентрируются наиболее тяжелые больные с перинатальной патологией (Володин Н.Н.,2004; Дементьева Г.М. и соавт.,2007; Brito A.S.J.,2002; Nagata E.,2002; Stroll B.J., 2011). Показатель частоты внутрибольничных инфекций (ВБИ) у новорожденных согласно данным официальной статистики составляет в среднем 0,6 – 1%, однако, по результатам выборочных исследований ВБИ регистрируются у 15-18% новорожденных (Ковалева Е.П., Семина Н.А., 2002; Касихина С.А. и соавт., 2004; Kreymann K.G et al., 2007).
Первыми микроорганизмами, с которыми контактирует плод, являются бактерии, присутствующие в материнском организме. Идентичность условно-патогенной микрофлоры (УПМ) родовых путей матери и новорожденного доказана многими исследователями (Минасян В.С. и соавт., 2006; Беляева И.А. и соавт., 2007; Савченко Т.Н., 2011). Одновременно колонизация детей условно-патогенными микроорганизмами происходит при контакте с медицинским персоналом через руки, предметы и воздух родильного помещения (Коршунова Г.С., 2004; Егоричева С.Д. и соавт., 2005; Абаев Ю.К., 2006; Dellinger R.P. et al., 2004; Bellid L.L., Ohning B.L., 2006).
В этиологической структуре госпитальной инфекции новорожденных грамположительная флора составляет от 17 до 40% и представлена стафилококками и стрептококками. Причем роль S. aureus несколько снизилась, преобладают коагулазоотрицательные стафилококки (КОС) - S. epidermidis, S. warneri, а также Enterococcus faecalis и Enterococcus faecium. Грамотрицательная флора представлена E. coli, бактериями родов Klebsiella, Enterobacter, Proteus. Кроме того, наблюдается увеличение частоты инфекции новорожденных, обусловленной грибами рода Candida (Акимкин В.Г., 2003; Егоричева С.Д. и соавт., 2005; Самсыгина Г.А. и соавт., 2007; Любимова А.В. и соавт., 2010). Следовательно, условия отделений акушерско-гинекологического стационара, где находятся новорожденные, необходимо рассматривать с позиций специфической экологической системы.
В условиях экологического и социального неблагополучия, изменившейся иммунологической резистентности организма человека, нерационального использования значительного арсенала антибактериальных препаратов и антисептических средств наблюдается изменение этиологической структуры возбудителей современных гнойно-септических инфекций (ГСИ) (Воробьев А.А., 2002; Володин Н.Н., 2008; Oston S. et al., 2004). Профилактика ГСИ включает комплекс дезинфекционных мероприятий, направленных на уничтожение патогенных и условно-патогенных микроорганизмов на объектах в окружении пациента, при этом недостаточно учитывается специфика, закономерности бактериальной контаминации и перманентного реинфицирования новорожденных (Сидоренко С.В., 2003; Белобородов В.Б., 2005; Кафарская Л.И. и др., 2007; Донских Е.Е., 2010).
В свою очередь, представители нормальной микрофлоры составляют систему биологической защиты организма. Облигатная микрофлора и УПМ в составе различных биотопов в форме нормобиоценоза являются основополагающими компонентами саморегуляции, иммунологических реакций и неспецифической защиты организма (Грачева Н.М., Бондаренко В.М., 2009; Нилова Л.Ю., 2009; Kaibni M.N. et al., 2009).
В большинстве лечебных учреждений общее количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха превышает существующие нормы (Милева О.И. и соавт., 2004). Оздоровительный эффект чистого природного воздуха состоит не только в отсутствии пыли, как главного источника микробов и бактерий. Воздух оздоравливается атмосферным электричеством, точнее его носителями – отрицательными аэроионами (ОАИ) (Чижевский А.Л., 1976, 1989, 1995; Партылов В.С., 2001; Колотова О.В., 2002; Ryushi T., 1998; Nakane H. Et al., 2002).
Метод аэроионификации может быть применен без дополнительных изысканий в операционных, перевязочных, палатах (инфекционных, родильных и др.), боксах микробиологических лабораторий (Лившиц М.Н., 1990; Скипетров В.П., 2005; Пакин В.Н., 2011; Dudley C. A., Moss R. L., 1999; Fletcher L.A. et al., 2007).
Исследование нормальной микрофлоры новорожденных, беременных и родильниц, изучение влияния аэроионов и пробиотиков на ее свойства позволяет расширить научные знания о профилактике ВБИ и разработать новые перспективные методы снижения уровня госпитального инфицирования в акушерско-гинекологических стационарах.
Цель: изучить закономерности становления микробиоценозов новорожденных во взаимосвязи с микробиотой матери и бактериальной обсемененностью объектов окружающей среды (ООС) в условиях акушерско-гинекологического стационара и определить влияние на выделенную микрофлору аэроионов в присутствии лактобактерий.
Для выполнения указанной цели поставлены следующие задачи:
-
Изучить закономерности формирования, качественный и количественный состав микробиоценозов новорожденных в динамике в условиях детского отделения (ДО) и ОРИТ с оценкой антибиотикорезистентных свойств микроорганизмов.
-
Исследовать микробные ассоциации цервикального канала беременных женщин, родильниц, объектов окружающей среды с определением антибиотикорезистентности выделенных штаммов микроорганизмов.
-
Изучить влияние аэроионов в присутствии лактобактерий на антибиотикорезистентность условно-патогенных микроорганизмов, выделенных в условиях акушерско-гинекологического стационара.
-
Разработать способ коррекции микроэкологических нарушений репродуктивного тракта женщин с применением аэроионов и пробиотических микроорганизмов.
Научная новизна и теоретическая значимость
Разработана концептуальная схема комплексного микроэкологического мониторинга новорожденных ДО и ОРИТ в период постнатальной адаптации, учитывающая колонизацию УПМ различных биотопов организма ребенка, матери и окружающей среды.
Показаны закономерности формирования микробиоценозов новорожденных по биотопам и дням жизни, характеризующиеся у детей ОРИТ в отличие от ДО постепенным заселением микробиологических локусов к 10-му дню жизни преимущественно грамположительными кокками с отставанием процесса контаминации биолокусов бифидобактериями и лактобактериями.
Впервые установлено изменение антибиотикорезистентности в виде увеличения зон подавления роста выделенных штаммов S. warneri антибактериальными средствами под влиянием потока ОАИ при участии лактобактерий, возможно, по механизму квантовой реакции, когда свободные электроны, присутствующие на молекулах кислорода, поглощаются молекулами антагонистических микробных клеток, и по принципу когерентности происходит распределение энергии в наиболее чувствительные структуры клеток (плазмиды, реактивные центры ферментных групп).
Предложен новый способ коррекции микробиоты репродуктивного тракта женщин с применением комплекса бифидобактерий и лактобактерий (Патент РФ № 2354368).
Практическая значимость работы
Проведенный микробиологический мониторинг микробных ассоциаций новорожденных, женщин, объектов ООС с определением антибиотикорезистентных свойств выделенных штаммов позволил создать базу данных с целью отслеживания циркуляции условно-патогенных и патогенных штаммов в условиях акушерско-гинекологического стационара.
Полученные результаты по влиянию отрицательных аэроионов при участии лактобактерий на культуральные и биологические свойства микроорганизмов, включая их антибиотикочувствительность, позволили предложить аэроионы в сочетании с лактобактериями ввиду их безопасности в ряд мер профилактики внутрибольничного инфицирования.
Материалы исследований позволили разработать новый эффективный и безопасный способ коррекции микроэкологических нарушений репродуктивного тракта женщин с применением пробиотических микроорганизмов.
Материалы диссертации использованы при:
- разработке и внедрении Патента РФ № 2354368 «Способ лечения вульвовагинального кандидоза» (Заявка № 2008103407, приоритет изобретения от 29 января 2008 г);
- внедрении в практику работы ООО «Читинская медицинская компания» (Акт внедрения результатов НИР от 11.05.2009);
- внедрении в практику работы Перинатального центра ГУЗ «Краевая клиническая больница» Забайкальского края (Акт о внедрении результатов НИР от 12.09.2010 г);
- организации и проведении учебного процесса на кафедре микробиологии с вирусологией и иммунологией ГОУ ВПО «Читинская государственная медицинская академия» (Акт о внедрении результатов НИР от 11.09.2009).
Положения, выносимые на защиту:
1. Установлены закономерности формирования микробиоценозов новорожденных ДО преимущественно первые трое суток, у детей ОРИТ постепенно к десятым суткам жизни. Состав микробных ассоциаций у новорожденных в ОРИТ в сравнении с группой детей ДО отличается преобладанием энтерококков и КОС, отсутствием в микробном пейзаже бифидобактерий и лактобактерий в связи с применением с первых часов жизни лечебно-диагностических манипуляций, химиотерапевтических средств и искусственного вскармливания.
2. Микробиоценоз половых путей женщин в третьем триместре беременности, представленный преимущественно лактобактериями и грамположительными кокками, в ранний послеродовый период характеризуется увеличением количества анаэробов, в других биотопах родильниц преобладают грамположительные кокковидные бактерии.
3. Обнаружено, что биотопы новорожденных, женщин и ООС содержат преимущественно КОС и энтерококки, значительная часть которых отличается антибиотикорезистентными свойствами, у родильниц достигая двух третей от числа выделенных грамположительных кокков.
4. Получены новые научные сведения о действии отрицательно заряженных аэроионов в присутствии лактобактерий in vitro с подавлением роста и размножения S. warneri, снижением антибиотикорезистентности микроба к ряду антибиотиков в два и более раз.
5. Предлагаемый комплексный метод коррекции микрофлоры половых путей родильниц имеет высокую эффективность (96,7%), безопасен и физиологичен, позволяет большинству женщин нормализовать микрофлору половых путей, способствует ее восстановлению после родов.
Апробация результатов исследования
Основные положения работы и материалы исследований были доложены и обсуждены на:
- Областной межведомственной конференции Всероссийской научной конференции «Современные проблемы науки и образования» (Москва, 2006);
- IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов «Итоги и перспективы обеспечения эпидемиологического благополучия населения РФ» (Москва, 2007);
- Краевой научно-практической конференции, посвященной 85-летию Государственной санитарно-эпидемиологической службы РФ (Чита, 2007);
- Международной научно-практической конференции «Состояние и перспективы специализированной медицинской помощи» (Улан-Удэ, 2007);
- Международной научно-практической конференции, посвященной 30-летию детской инфекционной больницы №4 г. Тулы «Третьи Тульские педиатрические чтения» (Тула, 2007);
- IX Тихоокеанской конференции «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины» (Владивосток, 2008);
- Всероссийской научной конференции «Теоретические основы эпидемиологии, современные профилактические аспекты инфекционных и массовых неинфекционных заболеваний» (Санкт-Петербург, 2008);
- V Scientific Conference «Present-day problems of experimental and clinical medicine» (Thailand, 2008);
- VIII Конгрессе детских инфекционистов России «Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики» (Москва, 2009);
- Региональной научно-практической конференции, посвященной 75-летию санитарной службы Забайкальского края (Чита, 2010);
- 14th International Congress on Infectious diseases (Miami, 2010);
- Научной конференции «Этиологические, эпидемиологические и клинические аспекты инфекционных болезней» (Иркутск, 2010);
- Межрегиональном семинаре «Научные и практические аспекты дисбиозов» (Иркутск, 2011).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 18 печатных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 2 монографии и патент РФ.
Личное участие автора осуществлялось на всех этапах работы и заключалось в выполнении всех микробиологических исследований, статистической обработке результатов, анализе полученных данных, в обобщении и оформлении результатов.
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 158 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов, общего заключения и выводов, включает 42 таблицы, 35 рисунков и список литературы, содержащий 187 источников, в том числе 134 отечественных и 53 зарубежных.
