Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Система классификации прокариот, основанная на анализе 16s РРНК 6-15
ГЛАВА 2. Систематика актиномицетов и еіизких бактерий . 14 - 48
2.1. Геносистематика 14-19
2.2. Признаки, используемые в систематике актиномицетов и близких бактерий 19 -43
2.2.1. Морфологические признаки. Использование в систематике цитологических данных 19-24
2.2.2. Физиолого-биохимические признаки 24-27
2.2.3. Хемотакеономические признаки 27-43
2.2.3.1. Тип клеточной стенки 28-30
2.2.3.2. Тип пептидогликана 30-33
2.2.3.3. Тейхоевые кислоты 33-35
2.2.3.4. Миколовые кислоты 35-36
2.2.3.5. Состав жирных кислот 37 - 40
2.2.3.6. Состав фосфолилидов 40-41
2.2.3.7. Состав менахинонов 41-43
2.3. Фаготипирование 43-44
2.4. Бумерическая таксономия. 44-48
ГЛАВА 3 . История описания культур рода promiqromowospora 49 - 52
Экспериментальная часть 53 -Г63
Материалы и методы исследований 53-74
Результаты исследований 75-149
ШАВА 4. Предварительная вдентйвшция изолированных штаммов 75-78
ГЛАВА 5 . Таксономическое изучение культур рода promicro monospora 79-140
5.1 . Еультуральные и морфологические свойства. Ультра структура клеток 79 - 99
5.1.1. Культуральные свойства. 79-81
5.1.2. Морфологические свойства 81-88
5.1.3. Ультраструктура клеток 88-99
5.2.Жизненные циклы 99-105
5.3 . Хемотаксономические признаки 105 - 125
5.3.1. Еуклеотидный состав ДНК 106 -108
5.3.2. Состав клеточной стенки 108 -116
5.3.2.1. Главные диагностические компоненты 108 -НО
5.3.2.2. Вариации и тип пептидогликана ІІО-ІІЗ
5.3.2.3. Тейхоевые кислоты 113 -116
5.3.3. Состав липидов 116 -123
5.3.3.1. Жирные кислоты целых клеток 116 -123
5.3.3.2. Другие липидные компоненты 123
5.4. Физиолого-биохимические признаки. Нумерический анализ 124 -140
ГЛАВА 6 . Таксономическое положение promicromonospora enterophila и близких штаммов 141 -149
ГЛАВА 7. Диагноз рода promicromouospora, его положение среди близких родов и ввдовой состав рода pro-micromonospora 150 -163
Выводы 163 -165
Литература 166 -210
- Признаки, используемые в систематике актиномицетов и близких бактерий 19
- Состав жирных кислот
- . Еультуральные и морфологические свойства. Ультра структура клеток
- . Хемотаксономические признаки
Введение к работе
Таксономические исследования раскрывают разнообразие мира микроорганизмов и выявляют специфические особенности культур каждого таксона. Эти исследования необходимы как для развития фундаментальных теоретических областей науки (среди них теория эволюции, генетика: и экология популяций), так и для решения прикладных проблем медицины, сельского хозяйства, охраны окружающей среды. Создаваемые таксономистом системы классификации бактерий обладают прогностической ценностью и предоставляют необходимую информацию для поисков в природе штаммов-продуцентов хозяйственно ценных метаболитов. В последние годы, главным образом благодаря внедрению новых биохимических и молекулярно-биологических методов,микробная таксономия достигла значительных успехов, в связи с чем ряд ранее описанных таксонов должен быть подвергнут реклассификации. К таким таксонам относится род Ргошісготопоарот-га, выделенный Н.А.Красильниковым, Л.В.Калакуцким и Н.Ф.Кирилловой. Со времени описания рода в 1961 г. в литературе имелись лишь отдельные сведения, относящиеся, в основном, к типовому штамму единственного вида рода P.citrea вкм Ас 665. В то же время более изученные актиномицеты рода Oerskovia, близкие к промикромоно-спорам,стали известны как продуценты ферментов: глюканаз (Наи-warrd, Sly, 1976; Jeffries, Macmillan, 1981), протеаз (Obata et al., 1977; Mann et al., 1978; Scott, Schekman,1980), рестриктаз (Roberts, 1984); была показана их способность к трансформации нуклеотидов и стероидов (Зарецкая с соавт., 1978; Lechevaiier et al., 1982); предложено использовать их в борьбе с патогенными дрожжами (Scott, Schekman, 1980). Среди близких промикромоноспо-рам организмов выявлены возбудители заболеваний человека (Sotnek et al., 1977; Cruickshank et al., 1979). В связи со сказанным целью нашей работы было таксономическое изучение актиномицетов рода Promicromonospora на основании исследования большого числа штаммов с привлечением современных таксономических методов. В конкретные задачи исследований входило: I) Изолирование из природных источников культур и создание коллекции штаммов рода Promicromonospora. 2) Изучение морфологии, тонкого строения, хемотаксономических, физиолого-биохими-ческих признаков культур с их последующим нумерическим анализом. 3) Составление диагноза рода Promicromonospora. 4) Определение видового состава рода. 5) Определение места рода Promicromonospora среди других актиномицетов. 6) Построение диагностических ключей ДЛЯ идентификации культур рода Promicromonospora И близких бактерий.
Признаки, используемые в систематике актиномицетов и близких бактерий 19
Морфологические признаки. Разнообразие органического мира издавна воспринималась как разнообразие морфологических форм. Из этого естественно следовало, что первые системы классификаций микроорганизмов, тафе как и системы животных и растений, строились преимущественно на основании морфологических (и куль-туральных) характеристик. Актиномицеты с их разнообразием морфологических форм не явились исключением.
При построении систем классификации и идентификации актино-мицетов учитывались и учитываются признаки, характеризующие особенности мицелия и . репродуктивных структур: окраска, наличие в жизненном цикле стадии фрагментации мицелия, продолжительность мицелиальной стадии, характер деления мицелия - направление делящих гифы септ, наличие спор, спорангиев, их размеры и форм характер спороносцев (прямые, волнистые, спиральные), число спор в цепочках,их подвижность (Красильников, 19606, 1970; Гаузе с соавт. , 1957, 1983; Szabo et al., 1975; Bergey, 1974; Nonomura, 1974; Nonomura, Ohara, 1971; Preobrazhenskaya et al., 1977; Barnes et al., 1980).
В систематике коринеподобных бактерий, не образующих репродуктивных структур и имеющих более простые жизненные циклы, морфология также играла значительную роль. В качестве основных признаков здесь используются сведения о размерах, форме и подвижности клеток, отмечается выраженность ихпдеоморфизма, наличие булавовидных, гигантских, ветвящихся клеток, T,V - форм; характеризуется способ обособления клеток - раскалывающийся (snap- ping) и сгибающийся (bendiug), наличие почкования и(или) бинарного деления, отмечается выраженность жизненного цикла (кокк-палочка-кокк), образование цист и артроспор (Барыйбва, 1980; Нестеренко, 1982; Головлев, 1983; Bergey, 1974; Yamada, Komagata, 1969, 1972; Stackebrandt, Kandler, 1979; Keddie, Jones, 1981).
Ряд представителей порядка Actinomycetales имеют сходные с некоторыми коринеподобными бактериями жизненные циклы. Морфологические признаки, используемые при характеристике коринеподобных бактерий, таюке применялись и в систематике актиномицетов, особенно не Образующих спор, В частности таких, как Actinomyces spp., Mycobacterium spp., Rhodococcus spp., Oerskovia spp. (Gross,Goodfellow, 1973; Bergey, 1974; Slack, Gerenser, 1975).
Морфологические признаки использовались на разных таксономических уровнях как для характеристики организмов порядка Actinomycetales и группы коринеподобных бактерий в целом, так и при описании их родов и видов.
Выделение из природы и изучение большого числа новых форм актиномицетов привело к тому, что между вполне определенными морфологическими типами актиномицетов, известных на начальном этапе исследований (имеются в виду представители родов strepomyces (Waksman, Henrici, 1943), Micromonospora (Oerskov,1923) обнаружены переходные морфологические формы. Так, например, стали известны актиномицеты, образущие одновременно как споры в цепочках, так и одиночные споры: Micropolyopora (Lechevalier et al., 1961), Microtetraspora (Thiemann et al,, 1968), Saccharomo-nospora (Nonomura, Ohara, 1971), Thermomonospora (Henssen, 1957). Было установлено, что число спор у многих актиномицетов детерминировано вообще недостаточно четко (Калакуцкий, Агре, 1977). Появились сведения о том, что у нокардий фрагментация мицелия может быть выражена в различной степени, что на гифах их субстратного и воздушного мицелия могут формироваться экзоспоры (Сои-на с соавт., 1979; Нестеренко, 1982), а стрептомицеты могут образовывать нокардиоподобные мутанты (Никитина с соавт., 1971; Кузнецов, 1973, 1975; Калакуцкий, Никитина, 1976; Никитина с соавт., 1971; Hopwood et al., 1973).
По мере накопления сведений об изменчивости отдельных групп актиномицетов стало ясно, что морфологические признаки могут быть достаточно нестабильны. Широко известен, например, факт о потере способности образовывать спорангии культурами актиноплан И франкий (Kroppenstedt et al., 1981; Lechevalier, Lechevalier, 1979).
To же можно сказать о признаках, характеризующих представителей коринеподобных бактерий. Расширение крута изолированных и изученных культур привело к тому, что признаки, характеризующие ранее отдельные роды, были.выявлены и у представителей других родов. Так, простой тип обособления клеток присущ видам родов Arthrobacter, Cellulomonas, а также акТИНОМИЦетам родов Rhodo-coccus, Mycobacterium, сгибающийся ("bending" - тип) - видам ро 22
Дов Arthrobacter, Brevibacterium, Rodococcus, Pimelobacter, pac-калыващийся ("snapping") - всем вышеперечисленным организмам,a также представителями рода Corynebacterium. Одинаковые типы скользящего роста дочерних клеток найдены у видов Rhodococcus и Arthrobacter, Arthrobacter и Mycobacterium, Rhodococcus и Mycobacterium. И почкование, и бинарное деление? как способы размножения клеток, выявлены у представителей родов Arthrobacter, Brevibacterium, Corynebacterium (Нестеренко, 1983; Komagata et al., 1969).
Подвижность клеток, число жгутиков также могут варьировать у представителей одного рода и часто зависят от условий культивирования (Аристархова, 1981; Bergey, 1974; Stackebrandt, Kandler, 1979; Thayer, 1984).
Накопление подобных фактов привело к определенному кризису "морфологического подхода" в классификации рассматриваемых групп организмов, особенно коринеподобных бактерий. Взгляд на роль морфологических признаков стал меняться, им стали придавать меньшее значение. Ход этого процесса стимулировался внедрением в систематику хемотаксономических признаков (см.раздел 2.3.3).
Состав жирных кислот
Состав жирных кислот, определяемый методами газожидкостной хроматографии, является хорошим критерием для дифференциации ак-тиномицетов и близких бактерий. В практике таксономической работы существует несколько подходов к оценке состава жирных кислот. Одним из них является простое сравнение спектров жирных кислот разных организмов (рис.3). Уже из такого сравнения можно видеть, что представители различных таксонов имеют в значительной степени различающиеся спектры жирных кислот. Количество отдельных кислот - компонентов спектра - может существенно варьировать в зависимости от условий культивирования микроорганизмов (іубан, 1977; Ефимова с соавт., 1977; О Лири, 1978). Однако у организмов одного или близких видов, выращенных в стандартных условиях, как правило, обнаруживаются близкие по составу ЖИрНОКИСЛОТНЫе спектры (Ballio, Barselona, 1968; Krop-penstedt, Kutzner, 1981; Collina et al., 1980a, 19826; O Donnel et al,, 1982; Suzuki,Komagata, 1983a,б). У такс0Н0МИЧЄСКИ далеких организмов состав жирных кислот существенно различается (там же). Другой подход к оценке жирнокислотного состава (Кгорреп stedt, 1979, 1982; Kroppenstedt, Kutzner, 1981) основан на сравнении общих количеств гомологичных или сходных по строению углеводородной цепи кислот. Принимается во внимание содержание насыщенных, ненасыщенных, прямоцепочечных, разветвленных - изо- и антеизо- серий, а также 10-метилразветвленных и отдельно-тубер-кулостериановой кислот; указываются преобладающие группы. Принцип, похожий на вышеупомянутый, лежит в основе разделения коринеподобных бактерий на группы по типам жирных кислот (Suzuki, Komagata, 1983а). Авторы выделяют 4 группы организмов в)Спектры жирных кислот бактерий: а) Corynebacterium diphteriae, б) Arthrobacter globifor-mis, в) A.simplex (Suzuki, Komagata, 1983b), r) Streposporangium sp.DSM 43181 (Kroppestedt, 1979). (Обозначения лшрных кислот см. в Гл.5, табл.8). в зависимости от преобладания определенных групп кислот: насыщенных и мононенасыщенных, прямоцепочечных (I тип); изо- и ан-теизоразветвленных (П тип). Типы I и П разделяют на подтипы по присутствию в спектрах других, не приматных кислот. Тип Ш характеризуется наличием ш-циклогексановой кислоты; тип ІУ (смешанный) - рядом различных кислот изо- и антеизосерий, с неразвет-вленной цепью, насыщенных, мононенасыщенных, 10-метил и 2-гид рокси-кислот. Авторами предлагается перечень видов бактерий с характерными для них типами и подтипами жирных кислот.
Бойсфельд с соавторами (Beuafeld et al.f 1982) предположили обрабатывать данные по составу жирных кислот различных организмов методами нумерического анализа (см. раздел 2.4). Однако трудно согласиться с тем, что при таком подходе отдельные,часто специфические компоненты спектров, содержащиеся в минорных количествах, имеют малый "вес" или не учитываются вовсе. Предложенная авторами группировка изученных штаммов не соответствует таковой, основанной на хемотаксономических характеристиках.
Все упомянутые выше подходы к оценке жирнокислотного состава актиномицетов и близких бактерий с целью их классифицирования и идентификации сходны в одном: они рассматривают его в статике. Успешное их использование возможно только при учете других признаков. В ряде работ (Андреев, Склифас, 1979; Андреев, 1982; Andre ev et ai., 1983) Л.В.Андреевым предложен подход, учитывающий изменение состава жирных кислот культур в процессе их роста и возможные вариации спектра жирных кислот, обусловленные условия учитывающий ми культивирования, а также взаимосвязи между отдельными жирными кислотами и интермедиатами их биосинтеза, многие из которых играют решающую роль в важнейших функциональных системах клеток. Автор обращает также внимание на тот факт, что различные жирные кислоты спектра неравноценны как в функциональном, так и в таксономическом отношении. Им разработана гипотеза, согласно которой у микроорганизмов соотношения различных жирных кислот, биосинтез которых сопряжен, закономерно связаны» Их количества изменяются в соответствии с математическими уравнениями, значения которых не зависят от параметров, определяемых условиями культивирования (температурой, составом и кислотностью среды, возрастом культуры) и близки у родственных штаммов. Автором предложены такого рода уравнения ДЛЯ Некоторых ГраМОТрицатеЛЬНЫХ (Pseudomonas spp. и Escherichia coli) И грамположителышх (Kurthia spp., Staphylococcus spp.). бактерий (Андреев, 1982; Андреев, Склифас, 1979; Andreev et ai., 1983 } Нестеренко с соавт., 1980). В практике таксономической работы наиболее широко используется второй из вышеупомянутых подходов (Kroppenatedt, 1979). На его основании ( и с учетом такого хемотаксономического признака, как тип клеточной стенки) предложен ключ для идентификации родов актиномщетов, который можно с успехом использовать при определении актиномицетов до рода (Kroppenatedt, 1979). Состав жирных кислот в значительной мере учитывается при реклассифика-ции и описании таксонов актиномицетов и бактерий (Collins et al., 19836; Collins, Kroppenstedt, 1983; O Donnel et al#, 1982).
. Еультуральные и морфологические свойства. Ультра структура клеток
Колонии изученных культур развиваются на плотных агаризован-ных средах на второй-третий день на сложных органических и на третий-четвертый - на синтетических. В последнем случае рост культуры менее обильный. Колонии вариабильны по цвету, консистенции, степени выраженности воздушного мицелия. Около половины изученных культур (14 штаммов) имеют различной интенсивности желтую окраску - от ярко-желтой и лимонно-жел-ТОЙ (штаммы БКМ Ас 665 (ТИПОВОЙ), ВКМ Ас 791, LLG 165, IMET 7085, IMET 7408, IMET 7409, IMET 7579 и другие) до слабо-желтой и кре-MOBO-ЖЄЛТОЙ (ВКМ Ас 789, ВКМ Ас 790, ШЕТ 7260, IMET 7266, ШЕТ 7001). В старых культурах упомянутые штаммы имеют буроватую или оранжево-бурую окраску.
Другая группа штаммов характеризуется белой (вкм Ас 783,вкм Ас 784, ВКМ Ас 785, ВКМ Ас 786, ШЕТ 7490, ШЕТ 7493, IMET 7495, ШЕТ 7496, ШЕТ 7580, LLG 173) или слабо-кремовой окраской ВКМ Ас 787), темнеющей в старых культурах.
Консистенция колоний культур в значительной мере зависит от среды. Колонии обычно пастообразные до кожистых, пастообразные и слизистые (на богатых органических средах). Можно, однако, выделить группы культур, у которых преобладающими на большинстве сред являются колонии следующих типов: актиномицетноподобные,кожистые, (главным образом, это желтоокрашенные культуры - вкм Ас 665, ВКМ Ас 788, ВКМ Ас 789, ВКМ Ас 790, ВКМ Ас 791, LLG: 201, ШЕТ 7408, ШЕТ 7409); нокардиоподобные, пастообразные (главным образом,колонии вышеперечисленных штаммов с белой окраской колоний, а также желтоокрашенные ШЕТ 72бо, ШЕТ 7266, ШЕТ 7267, ШЕТ 7578); бактериоподобные слизистые колонии (вкм Ас 786, ШЕТ 7001, ШЕТ 7085, ШЕТ 7579, С-111),
Воздушные гиФы образуются у всех культур на синтетических и некоторых органических средах, таких, как пептонно-кукурузная и овсяная,после 4-6 дней инкубирования при 28С. Штаммы с кожистыми колониями образуют хорошо видимый мицелий, покрывающий плотным войлоком всю колонию или ее периферическую часть.
У другой группы штаммов (ВКМ Ас 787, ВКМ Ас 796, ШЕТ 7578, ШЕТ 7580, ШЕТ 7581) воздушный мицелий можно наблюдать только на синтетических средах в виде слабого мучнистого налета на поверхности колоний. При рассмотрении в микроскоп он выглядит неплотным войлоком, покрывающим периферическую часть колонии. Одиночные короткие воздушные гифы группы штаммов с белыми КОЛОНИЯМИ (LbQ 173, ВКМ Ас 783, ВКМ Ас 784, БКМ Ас 785, ВКМ Ас 786) и желтыми КОЛОНИЯМИ (LLG 165, ШЕТ 7001, ІМЕШ 7085, МЕТ 7579, С—111) можно наблвдать только в микроскоп. Они выглядят как редкие, ориентированные вверх удлиненные клетки.
У ряда штаммов способность к образованию воздушных гиф может исчезать после серии пересевов на богатых пептонсодержащих средах (в большей мере это относится к штаммам со слаборазвитыми воздушными гифами). В случае хранения культур в жидком азоте или почве культуральные характеристики (в том числе и наличие -.- воздушных гиф) не изменяются.
Наблюдения за развитием изученных культур промикромоноспор проводили на плотных (№ 79 Праузера, пептонно-дрожжевая, мясо-пептонная, картофельная, пептонно-кукурузная, Гаузе-1, глюкозо-аспарагиновая) и жидких средах (№ 79 Праузера, пептонно-дрожжевая и Гаузе-1).
При микроскопировании воздушных гиф было установлено, что они, как правило, прямые или слегка искривленные, ветвятся крайне редко, на 5-7 сутки распадаются на короткие палочковидные фрагменты. На всех воздушных гифах изученных культур нами не было обнаружено структур, напоминающих споры.
Изучение морфологии культур при выращивании на упомянутых жидких средах установило, что в этих условиях возможности культур раскрываются значительно полнее. Разнообразие клеточных форм становится значительно большим, индивидуальные черты морфологии отдельных штаммов выявляются более отчетливо.
Типы клеток. Все многообразные формы клеток, наблюдавшееся у изученных культур, могло быть сведено к девяти основным типам, представленным на схеме (рис.5). Описанные выше воздушные гифы мы отнесли к 1-му типу (рис. 5а). На основании различий в длине и чистоте ветвления гиф погруженных культур выделено три их морфологических типа: длинные с редким ветвлением - тип П (рис.56,6), длинные с частым ветвлением - тип Ш (рис.бв, 7), напоминавшие по характеру ветвления субстратные гифы культур на плотных средах, а также короткие гифы с редким или частым ветвлением (тип ІУ, рис.5г,8). Гифы всех перечисленных типов в ходе развития могли увеличиваться в диаметре, фрагментироваться и модифицироваться в клетки, относящиеся к одному из типов, перечисленных ниже. Гифы с утолщенными до 1,5 мкм концевыми - тип У (рис.5д,9, 10,11); интеркалярные утолщения гиф до 2,5 мкм в диаметре - тип УІ, последние могли быть овальной, чечевицеобразное форш (рис. 5е,10,12,13). Подобные клеткиописаны у многих актиномицетов, часто они назывались хламвдоспорами. Нередко форма интеркалярных утолщений гиф была неправильной: булавовидной, полигональной, грушевидной. К типу УП отнесены спороподобные клетки (рис.5ж,14, 15,16,17), которые по размерам (1-2 мкм в диаметре), форме и расположению на мицелии напоминали споры промикромоноспор, подобные таковым в первоописании (Красильников с соавт., 1961). К типу Ж отнесены гигантские клетки сферической или лимоновидной формы (3-6 мкм в диаметре) (рис.5з,18,19,20).
. Хемотаксономические признаки
В обзоре литературы (Глава 3) приведены хемотаксономические признаки, которые были изучены у типового штамма p„citrea до начала нашей работы. В задачу настоящего исследования данной группы признаков входило уточнение имеющихся сведений, определение степени, в которой упомянутые признаки варьируют у культур,предварительно идентифицированных нами как представители рода Promic 106 romonospora, а также уточнение таксономического значения некоторых из признаков для промикромоноспор и близких бактерий. Кроме того, необходимо было получить данные о хемотаксономических приз-признаках, не исследовавшихся ранее у промикромоноспор.
Изучение упомянутых признаков проводилось на разном числе штаммов. Признаки, считающиеся дополнительными или достаточно постоянными, изучали не у всех штаммов; в их числе, однако,всегда присутствовали крайне культурально-морфологичеекие типы, описанные в разделах При изучении некоторых признаков, решая отдельные конкретные задачи, мы использовали референтные штаммы. Выбор последних определялся имевшимися литературными сведениями о содержании ГЦ-пар в ДНК типового штамма p.citrea и лизина в его клеточной стенке, а также выводами, которые мы сделали при изучении морфологии, цитологии и жизненных циклов промикромоноспор (разделы 5.2, 5.2, 5.3). В числе референтных штаммов использовали Oersko-via turbata ШЕТ 7130, O.xanthineolytica ШЕТ 7406 (Prauser et al., 1970; Lechevalier, 1972), Cellulomonas cartae DSM 20106 (Stackebrandt, Kandler, 1980) (штамм близок к O.xanthineolytica по ряду хемотаксономических признаков) и культуры коринеподобных бактерий, которые были получены нами под разными родовыми названиями, и в годы, когда выполнялась работа, переопределенные как представители рода Microbacterium (Keddie, Jones, 1981).
Исследование наименее изученного у актиномицетов признака -тейхоевых кислот - было проведено с привлечением широкого круга организмов.Нулеотидный состав ДНК был изучен у 14 штаммов бактерий (таблица 3). Содержание ГЦ-пар в ДНК оказалось очень высоким -от 70,9 до 74,6 мол %. Результаты определения нуклеотидного сое 107 Таблица Нуклеотидный состав ДНК изученных і итаммов промикро моноспор п/п j і Название штаммов f ГЦ (мод получены нами под видовым названием p.citrea (табл.1). (Определение их видовой принадлежности проводилось только на основании культурально-морфологических свойств и чувствительности к фагам. В связи с с чем было необходимо проверить правильность идентификации упомянутых культур и до уточнения видовой принадлежности упомянутых штаммов мы относили их к группе Promicromonospora sp.). тава у типового штамма вкм Ас 665 совпали с данными, полученными при первоначальном определении (Цыганов, 1966; Yamaguchi, 1967). 5.3.2. Состав клеточной стенки 5.3.2.1. Главные диагностические компоненты 30 изученных штаммов промикромоноспор не содержали ДМ и миколовых кислот в гидролизатах целых клеток; в качестве диффе ренцирущей аминокислоты клеточной стенки у всех культур был обнаружен лизин.
Изучению состава Сахаров в гидролизатах целых клеток мы уделили особое внимание, потому что в некоторых работах (Leche-valier, 1972) галактоза описана как сахар, присутствие которого позволяет дифференцировать культуры родов Oerskovia (содержат галактозу) от Promicromonospora (не содержат галактозы). Признак фигурирует также в сводных таблицах хемотаксономических признаков и ключах для определения актиномицетов, приводимых в некото рых Обзорах (Lechevalier, Lechevalier, 1981; Goodfellow, Cross, 1984). В связи со сказанным изучение состава Сахаров в гидролизатах целых клеток Сахаров проводилось в сравнении со штаммами Cell.cartae и Oerskovia spp.
Среди продуктов гидролиза обнаружены глюкоза, галактоза и неидентифицированный сахар. 13 штаммов промикромоноспор содержали все три сахара, у 14 штаммов отсутствовала галактоза, у 3-х-глюкоза. Относительное содержание каждого сахара,оцененное приблизительно по интенсивности окраски пятен с помощью азотнокислого серебра, варьирует от штамма к штамму (табл.4).
