Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВАI Обзор литературы: Особенности микробоценоза организма человека в современных условиях 13
1.1 Эубиоз респираторного тракта и организма в целом 13
1.2 Стафилококковое бактерионосительство среди здорового взрослого и детского населения 17
1.3 Влияние климатогеографических и экологических факторов на микробиоценоз организма 22
1.4 Значение бактериальных факторов в развитии нарушений микробоценоза организма 26 ,
1.5 Влияние пробиотических бактерий на микробоценоз организма 31
1.6 Влияние аэроионов на микробоценоз организма 37
ГЛАВА II Материалы и методы исследования
2.1 Характеристика групп исследования 44
2.2 Методы исследования 45
ГЛАВА III Структурные и микробиологические изменения слизистой носоглотки при стафилококковом бактерионосительстве 52
3.1 Стафилококковое бактерионосительство среди здоровых лиц и больных с хроническими заболеваниями дыхательных путей 52
3.2 Морфологические изменения клеток слизистых покровов носоглотки при стафилококковом бактерионосительстве з
3.3 Стафилококковое бактерионосительство среди медицинского персонала онкологического диспансера 62
ГЛАВАIV Воздействие аэроионов отрицательной полярности и пробиотических лактобактерий на штаммы стафилококков in vitro 66
ГЛАВАV Коррекция стафилококкового бактерионосительства с применением аэроионов отрицательной полярности и пробиотика «Нарине-Ф баланс» 74
Заключение 87
Выводы 90
Практические рекомендации 91
Список литературы
- Влияние климатогеографических и экологических факторов на микробиоценоз организма
- Методы исследования
- Морфологические изменения клеток слизистых покровов носоглотки при стафилококковом бактерионосительстве
- Коррекция стафилококкового бактерионосительства с применением аэроионов отрицательной полярности и пробиотика «Нарине-Ф баланс»
Введение к работе
Актуальность проблемы.
Инфекционные и паразитарные болезни остаются одними из важнейших причин массовых заболеваний людей нарушений физического развития детей нетрудоспособности инвалидизации, преждевременной смертности и в настоящее время. Инфекции и инвазии составляют около 80% общего числа заболеваний человека. Значительно возросла устойчивость к антибактериальным и дезинфицирующим средствам уже известных микроорганизмов, продолжают регистрироваться новые инфекционные агенты [Онищенко Г.Г. 2007].
Течение современных инфекционных заболеваний сопровождается неполноценным иммунным ответом частой активизацией аутоиммунных и аллергических реакций длительным носительством агента [Учайкин В.Ф. 2005]. Инфекции дыхательных путей являются серьезной проблемой для здравоохранения в связи с их широкой распространенностью, наносимым экономическим ущербом [Феклисова Л.В. и др., 2003]. При этом заболевания респираторного тракта тесно связаны с микробоценозом слизистой ротоглотки, носовой полости и всего организма в целом [Григорьев П.Я., Яковенко Э.П., 2000].
Несмотря на многочисленные работы по изучению хронических заболеваний носоглотки и нарушений микробиоценоза верхних дыхательных путей, остаются актуальными проблемы выявления донозологических изменений, определяющих особенности морфофункционального статуса, вопросы поиска адекватных и эффективных методов в медицинской реабилитации больных с хроническими воспалительными заболеваниями [Боброва С.В., 2002]. Наиболее частым персистирующим микроорганизмом носоглотки является золотистый стафилококк, капсула и тейхоевые кислоты которого являются важными факторами микробного обсеменения [Позур В.К. и др., 2005; Gonzales-Zorn B. et al., 2005; Gould S.W. et al., 2008].
В настоящее время общепризнано, что в процессе эволюции в результате взаимодействия организма хозяина с окружающими его микроорганизмами произошел отбор определенных видов микробов, способных к прикреплению и колонизации слизистых оболочек соответствующих экологических ниш и использующих организм хозяина как новую среду обитания [Бухарин О.В. и др., 2006; Ruimi R. et al., 2009]. При этом эндоэкологическое состояние организма, включающее в себя и характеристику нормобиоценозов различных биотопов, является одним из основополагающих компонентов системы саморегуляции и защиты организма, в то время как дисбиоз - первооснова для развития донозологических изменений и большинства патологических явлений [Грачева Н.М., Бондаренко В.М., 2009; Kaibni M.N. et al., 2009]. На современном этапе патогенные и условно-патогенные микроорганизмы рассматриваются как ассоциативные симбионты с их универсальным характером взаимодействия с хозяином и доминирующей нормофлорой. Отмечено, что основу взаимодействий симбионтов составляют синергетические и конкурентные связи, в результате которых меняются свойства, персистентный потенциал как самого возбудителя инфекции, так и комменсальных микроорганизмов [Бухарин О.В., 2009].
Объективная оценка состояния эндоэкологии организма в целом, предполагающая определение качественного и количественного состава различных биотопов, его взаимосвязи с факторами резистентности макроорганизма, позволит выявить ранние, донозологические изменения у лиц, предрасположенных к формированию хронической инфекционной патологии респираторного тракта. Вышеизложенное определяет актуальность поиска новых подходов к раннему выявлению и коррекции эндоэкологического статуса организма здорового человека.
Таким образом, практическое значение приобретает оценка бактериологической обсемененности верхних дыхательных путей и разработка эффективного и безопасного метода коррекции стафилококкового бактерионосительства, при этом патогенетически обоснованным является использование пробиотических средств, нормализующих общий микробный статус организма. Следовательно, актуальным является определение показаний для проведения пробиотикотерапии при стафилококковом бактерионосительстве и применение различных физиотерапевтических методов для восстановления нормоценоза и повышения резистентности макроорганизма.
Цель и задачи исследования.
Оценить состояние микробоценоза верхних дыхательных путей и свойств выделенных при этом микроорганизмов, у здоровых и лиц, имеющих хронические заболевания верхних дыхательных путей, с разработкой способа комплексной санации стафилококкового бактерионосительства при воздействии аэроионов отрицательной полярности и препарата-пробиотика.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
-
Оценить состояние микробоценозов верхних дыхательных путей с изучением частоты встречаемости, плотности популяции и биологических свойств выделенных штаммов микроорганизмов.
-
Исследовать цитологический статус слизистых оболочек верхних дыхательных путей у лиц, имеющих заболевания органов дыхания.
-
Изучить динамику биологических свойств микроорганизмов носоглоточного биотопа при комплексном воздействии аэроионов отрицательной полярности и пробиотика «Нарине-Ф-баланс»
-
Разработать способ коррекции микроэкологических нарушений верхних дыхательных путей с использованием аэроионов отрицательной полярности и пробиотика «Нарине-Ф-баланс».
Научная новизна и теоретическая значимость: Впервые показано, что в эндемичных климато-географических условиях Забайкальского края, нарушения цитологического статуса слизистых оболочек верхних дыхательных путей у лиц с хроническими инфекциями респираторного тракта, характеризуются выраженными изменениями деструктивного и цитолитического характера, процессами инвазии стафилококками эпителиальных клеток носоглотки.
Впервые установлены изменения биологических свойств выделенных штаммов стафилококка, происходящие в микробной клетке под влиянием потока аэроионов отрицательной полярности при участии лактобактерий.
Предложен новый способ коррекции стафилококкового бактерионосительства на слизистой носолотки с применением аэроионов отрицательной полярности и лактобактерий (Патент РФ № 2341273).
Практическая значимость и внедрение в практику.
Материалы исследований позволили разработать новый эффективный метод коррекции стафилококкового бактерионосительства. Предложенный метод безопасен, физиологичен, осуществляется с применением облигатных лактобактерий и потока отрицательных аэроионов, позволяет проводить лечение стафилококковой инфекции носоглотки и одновременно может быть использован с целью профилактики контаминации верхних дыхательных путей патогенными и условно-патогенными возбудителями.
Материалы диссертации использованы при:
- организации и проведении учебного процесса на кафедре микробиологии с вирусологией и иммунологией Читинской государственной медицинской академии (Акт о внедрении результатов НИР от 11.09.2009);
- разработке и внедрении Патента РФ №2341273 «Способ лечения стафилококкового бактерионосительства в носоглотке» (Заявка №2007122881, приоритет изобретения от 18 июня 2007 г).
Положения, выносимые на защиту:
-
Ассоциативный симбиоз у резидентных носителей золотистого стафилококка характеризуется высокой плотностью популяции данного микроорганизма, высоким коэффициентом постоянства микробов-ассоциантов на фоне деструктивных изменений клеток слизистой оболочки носоглотки по сравнению с транзиторными носителями. Адгезивная активность штаммов стафилококков, выделенных от резидентных носителей выше, чем у штаммов, изолированных от транзиторных носителей. Антилизоцимная активность выявлена у всех резидентных штаммов и только у 36,5% транзиторных.
-
Поток отрицательных аэроионов, как изолированно, так и в сочетании с лактобактериями, не только подавляет рост стафилококков, но и значительно снижает показатели адгезии, распространенность и выраженность антилизоцимной активности S. aureus.
-
Использование комплекса аэроионов отрицательной полярности и пробиотика «Нарине-Ф-баланс» является безопасным и физиологичным способом санации стафилококкового бактерионосительства, коррекции микробоценоза и восстановления деструктивных изменений клеток слизистой оболочки носоглотки. Комплексный метод санации позволяет более половине носителей избежать использования местных и системных противомикробных препаратов, которые могут подавлять аутофлору, способствовать появлению резистентных штаммов микроорганизмов, обладать аллергизирующим и иммуносупрессивным эффектом.
Апробация результатов исследования
Основные положения работы были доложены и обсуждены на:
- Областной межведомственной конференции Всероссийской научной конференции «Современные проблемы науки и образования» (Москва, 2006);
- IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов «Итоги и перспективы обеспечения эпидемиологического благополучия населения РФ» (Москва, 2007);
- Региональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию Государственной санитарно-эпидемиологической службы РФ (Чита, 2007);
- Международной научно-практической конференции, посвященной 30-летию детской инфекционной больницы №4 г. Тулы «Третьи Тульские педиатрические чтения» (Тула, 2007);
- IX Тихоокеанской международной конференции «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины» (Владивосток, 2008);
- V Scientific Conference «Present-day problems of experimental and clinical medicine» (Thailand, 2008);
- VIII Конгрессе детских инфекционистов России «Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики» (Москва, 2009);
- Региональной научно-практической конференции, посвященной 75-летию санитарной службы Забайкальского края (Чита, 2010);
- 14th International Congress on Infectious disease (Miami, 2010);
- Научной конференции с международным участием «Этиологические, эпидемиологические и клинические аспекты инфекционных болезней» (Иркутск, 2010).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 18 печатных работ, в том числе 1 монография, патент РФ и 2 статьи в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.
Личный вклад автора
Личное участие автора осуществлялось на всех этапах работы и заключалось в выполнении всех микробиологических исследований, статистической обработке результатов, анализе полученных данных, в обобщении и оформлении результатов.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста, иллюстрирована 18 таблицами, 10 рисунками, 5 фотографиями. Состоит из введения, 5 глав, заключения, списка литературы. Указатель литературы включает 283 наименования (из них 187 отечественных и 96 зарубежных авторов).
Влияние климатогеографических и экологических факторов на микробиоценоз организма
Последние 20 лет отмечается прогрессирующее ухудшение показателей здоровья населения в целом, что является следствием деструктивных процессов, затронувших биологические основы жизнедеятельности. Продолжительность жизни снижается, а общая заболеваемость повышается [42, 83, 135]. Распространенность рецидивирующих респираторных инфекций у детей, например, составляет от 20 до 60%. Лечение и профилактика рецидивирующих заболеваний дыхательной системы в современных условиях ориентированы, прежде всего, на нормализацию иммунного ответа и неспецифической реактивности организма [20, 130, 165, 252].
Инфекция - основная причина заболеваемости при нарушениях иммунного статуса, в том числе в физиологических условиях. Поскольку инфекционные осложнения являются предсказуемыми, поэтому они могут быть предупреждены [27, 88, 221, 233, 258]. Защита организма от инфекции складывается из последовательного включения в борьбу с возбудителем заболевания факторов естественной резистентности (тканевые фагоциты, естественные киллерные клетки, естественные IgG антитела, комплемент), раннего индуцибельного ответа (активированные макрофаги, естественные киллерные клетки, интерферон, белки острой фазы). Третьим типом защиты является специфический иммунный ответ [65, 98, 250, 253, 283]. Обязательным условием включения иммунного ответа является-распознавание антиген-неспецифическими клетками (эффекторами врождённого иммунитета) групп веществ, которые связаны с патогенами 18 это липополисахариды, маннаны, гликаны, порины, двунитевая РНК и другие. Ответом на них вырабатывается ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, то есть формируется полноценный СД4Ч- Т-клеточный иммунный ответ. В»последние несколько лет обнаружены рецепторы к этим веществам и названы Toll-рецепторами [83,116,140,186, 228].
Имеется- связь между энергетической ценой иммунной, защиты, тяжестью заболевания и свойствами микроорганизмов. БАВ (биологически активные вещества), находящиеся в клетке микробов различаются от видов флоры. Поэтому иммунная реакция организма различна в зависимости от микрофлоры, вызвавшей заболевание. В частности, компенсаторная и лизосомальная активность не зависят от вида микрофлоры [89, 248, 275].
При гнойно-воспалительных процессах, где основным возбудителем является стафилококк, бактерицидная активность и число Т-лимфоцитов существенно снижается. При стафилококковом сепсисе фракции IgM и IgG так же снижаются, что указывает на ослабление защитных сил организма [128, 143, 150].
В современной медицине большее внимание уделяется эффективным методам выявления скрытой иммуносупрессии. Нормой является не только спокойное функционирование иммунной системы у здорового человека, но и её активная работа при развитии воспалительного процесса. Выделение микроба является отправной точкой для выявления недостаточности работы иммунной системы, при этом назальное носительство наиболее распространенного микроорганизма S. aureus является фактором риска возникновения стафилококковой инфекции [75, 82, 192].
По данным современных исследователей приблизительно треть населения планеты являются бессимптомными носителями S. aureus [203, 216]. На территории РФ у 30-40% практически здоровых людей обнаруживается носительство условно-патогенных и патогенных микроорганизмов. Например, возбудителями риносинуситов чаще всего являются S. epidermidis - 35,4%, S. aureus - 27,3%, оба вида стафилококков 19 в 9% случаев [122, 277]. Штаммы S. aureus, полученные из носовой полости и аспиратов НДП, практически во всех случаях идентичны между собой [243] . Среди здоровых взрослых в слюне стафилококки обнаруживаются в 83,9% случаев, из них S. aureus — 46,4%, S. epidermidis — 41,1%, другие виды»— 12,5%. Генетический анализ подтверждает идентичность всех комбинаций для микробиоты носа и зева [257]. Наиболее выраженные изменения иммунного статуса вызывает S. aureus: снижение уровня Т- и В-лимфоцитов, повышение уровня IgM [70, 124, 277].
У носителей не выявляются изменения в абсолютном содержании основных субполяций лейкоцитов периферической крови. Концентрация ИЛ-4 при ассоциированном носительстве S. aureus и Candida albicans повышена. Часто носительство S. aureus сопровождается увеличением фагоцитарной активности нейтрофилов, при этом уровень ИФ-у не изменяется. У носителей условно-патогенных и патогенных микроорганизмов выявляются особенности изменения поглотительного потенциала нейтрофилов и дисбаланс уровня про- и противовоспалительных цитокинов [39, 168]. Важным аспектом стафилококкового взаимодействия с макроорганизмом является способность внедрившейся бактерии ускользнуть от врожденного иммунитета, особенно от смеси антимикробных пептидов. Кроме того, внешний белок S. aureus играет ведущую роль в развитии носительства, так как защищает от лактоферрина и действует как ингибитор протеаз [31, 32, 201].
Существуют латентные формы стафилококковой инфекции в полости носа и зева, возможны проявления на коже в виде атопического дерматита, присутствуют хронический рецидивирующий тонзиллит, частые острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ) в анамнезе. При этом во всех вышеперечисленных случаях отмечается снижение slgA и лизоцима в отделяемом носовой полости и слюне [139, 160]. Даже после 3-4 курсов антибиотикотерапии в содержимом носовой полости и зева может высеваться S. aureus. Это свидетельствует о том, что одной терапии антибиотиками недостаточно, необходима коррекция защитных сил организма и нормализация микробиоты носоглотки [13, 53]. Латентная инфекция сопровождается нарушениями клеточного и гуморального иммунитета с дефицитом Т-лимфоцитов, дисиммуноглобулинемией; исчезают СД8+ и СД16+, что ведёт к риску формирования злокачественной патологии [88, 126]. Для выработки эффективной схемы иммунокоррекции при стафилококковых инфекциях целесообразно проводить оценку иммунного статуса и скрининг антиоксидантных свойств возбудителя [2, 22].
Следует различать резидентное и транзиторное носительство золотистого стафилококка в составе микробиоты носовой полости и ротоглотки. Транзиторное носительство сопровождается присутствием S. aureus на слизистой оболочке, как правило, кратковременным и легко корректируемым без применения антибактериальных препаратов с возвращением постоянной собственной микрофлоры к обычным показателям [52, 123, 219]. Факторами персистенции S. aureus являются в первую очередь его антилизоцимная, антиинтерфероновая и антикомплементарная активность. Цитоскопическим методом обнаруживают эпителиальные клетки слизистой переднего отдела носа с хорошо видимым ядром, содержащие микроколонии стафилококков группами из 4 и более бактерий, что позволяет сделать заключение о резидентном бактерионосительстве [52, 53]. Резидентное бактерионосительство сопровождается выраженными изменениями в составе основной и дополнительной микрофлоры носовой полости и ротоглотки: снижается содержание КОС, Micrococcus, Strepococcus, Bacillus, а также отмечается нарушение высокой сопряженности симбионтных пар между КОС, Micrococcus, Streptococcus, Corynebacterium. Среди представителей облигатной микрофлоры нарушается при этом комплекс факторов колонизации, тогда как у S. aureus, наоборот, активируется [6, 134, 162].
Методы исследования
С помощью стерильных ватных тампонов, смоченных в физрастворе, забирали клетки эпителия слизистой оболочки переднего отдела носовой полости.. Тампон погружали в стерильную пробирку с 1,0 мл среды; 199J. встряхивали в течение 15 минут, отжимали; о стенки пробирки.. Затем- этим тампоном производили посев? на ЖЄА. Содержимое:пробирки инкубировали прщ37С 1 -2 часа. Иосле этого верхнийслотжидкости удаляли пастеровской пипеткой из осадкам делали; мазок,, который- окрашивали по? методу Романовского-Еимзаі При; микроскопии просматривали; не менее; 30! микроколоний стафилококков. При обнаружении 5: и более клеток, содержащих микроколонии стафилококков делали заключение о резидентном бактерионосительстве; 2-2.3. Цитологический метод мазков-отпечатков с полости носа [97]
Оценка, деструктивных процессов; в клетках эпителия слизистой верхних дыхательных, путей и мигрирующих нейтрофилов позволяет оценить состояние местных факторов защиты и служить дополнительным методом диагностики заболевания. Определяли количество и функциональную активность мигрирующих нейтрофилов,. плоский и цилиндрический эпителий. Мазки-отпечатки со слизистой5 верхних дыхательных путей: были взяты стерильным тампоном; со слизистой, носа;. подвергались окраске по Романовскому - Гимзе с фиксацией смесью; Никифорова и световой микроскопии при увеличении х 1350. Подсчитывалось 590 клеток, при этом учитывали четыре степени цито деструкции и составляли индивидуальные цитограммы для-нейтрофилов, клеток плоского и цилиндрического эпителия. 2.2.4 Изучение адгезивных свойств Si. aureus [21]
Адгезивные свойствахтафило кокков изучали на штаммах, полученных от резидентных и транзиторных носителей; Для этого из дважды отмытых буфером (0,1 М раствор фосфата натрия в физрастворе; рН 7,2-7,3); эритроцитов человека O(I) Rh(+) готовили взвесь, содержащую 10 эр/мл в-буфере. В пробирку с 0,5 мл полученной взвеси эритроцитов добавляли 0,5 мл взвеси изучаемых штаммов стафилококков (так же дважды отмытых буфером суточных агаровых культур) в количестве 109 м.к./мл буфера. Термостатировали 30 мин. при 37С при постоянном встряхивании. Затем готовили мазки, фиксировали метанолом, окрашивали по Граму. При микроскопировании мазков определяли средний показатель адгезии» (СПА) и коэффициент участия эритроцитов.в адгезивном процессе (КУЭ). Показатели адгезивности подсчитывались следующим образом: ЄПА - среднее количество микроорганизмов, прикрепившихся к одному эритроциту (при подсчете не менее 50 эритроцитов); КУЭ (%) — относительное количество эритроцитов, имеющих адгезированные микроорганизмы. 2.2.5 Изучение влияния ОАИ на ростовые и адгезивные свойства S. aureus in vitro
Из суточных агаровых культур готовили взвесь по стандарту мутности МакФарланда до разведения 2-3 lg КОЕ/мл. Высевали по 0,1 мл на поверхность питательного агара в двух повторных пробах. В качестве источника ОАИ использовался бытовой аэроионификатор «Сферион» (произв. ООО «Сьютиби», г. Новосибирск, ТУ 3468-001-16921707-2009, серт. соотв. № РОСС RU.AE88.B00041, генерация ОАИ до 5000 ион/см3 воздуха, фото №1). Опытные чашки Петри с посевами подвергали воздействию ОАИ в течение часа, на расстоянии 50 см от прибора. Контролем служили чашки, не подвергавшиеся воздействию прибора. После экспозиции опытные и контрольные чашки инкубировались при 37С 18-24 часа. Затем подсчитывалось среднее количество выросших колоний на двух опытных и контрольных чашках. На подготовительном этапе было выяснено, что однократное воздействие ОАИ существенно не изменяют адгезивные свойства S. aureus, также, по данным литературы, адгезивная активность микроорганизмов может снижаться при длительном культивировании на агаре. Эти обстоятельства были учтены при исследовании адгезивных свойств S. aureus. Штаммы культивировали на питательном агаре при 37С 10 дней с периодическими пересевами, при этом опытные чашки ежедневно подвергали воздействию ОАИ в течение 60 мин. Контрольные чашки во время опытов находились вне зоны» действия? ОАИ: Затем определялись показатели адгезии у контрольных и опытных образцов;. ,
Морфологические изменения клеток слизистых покровов носоглотки при стафилококковом бактерионосительстве
В результате проведенных исследований обнаружено, что общий процент инфицированных среди обследованных лиц составил 33,6±4,1%, чаще инфицированным оказывался средний медицинский персонал. Встречались самые различные фенотипические варианты стафилококков без формирования преобладания какого-либо из них, 25,0±6,5% штаммов вообще оказались нефаголизабельными. Наиболее резистентными стафилококки оказались к оксациллину и левомицетину. Все испытанные изоляты золотистого стафилококка оказались отрицательными к скрининг-тесту на выявление MRSA.
Таким образом, у трети медицинского персонала онкологического диспансера обнаружено стафилококковое бактерионосительство на слизистой верхних дыхательных путей. Достаточно высокая адгезивность выделенных у медицинских работников золотистых стафилококков позволяет формировать на слизистой ВДП резидентное стафилококковое бактерионосительство.
Современные экологические условия\ резко - ухудшили состояние аэроионификации биосферы И изменили микробные ассоциации!1 почвы, воды, воздуха-и, соответственно, населения. Для благополучного состояния1 микрофлоры ВДП важнейшее значение имеет и качество, вдыхаемой воздушнойхреды.
В исследование было включено 100 штаммов S. aureus, выделенных от транзиторных и резидентных бактерионосителей, 50-штаммов S. epidermidis, 20 штаммов S. haemolyticus и 20 штаммов - S. warneri. Опытные чашки Петри с посевами подвергали воздействию ОАИ в течение 60 мин. на расстоянии 50 см от прибора. Контролем служили культуры микроорганизмов, не подвергавшиеся воздействию прибора (табл. 8).
После экспозиции и термостатирования, обнаружено, что ОАИ подавляют рост стафилококков в среднем на 34,0±3,43%, наибольший % ингибирования обнаружен у S. epidermidis, наименьший - у S. aureus.
К настоящему времени получены убедительные данные, позволяющие считать, что способность к адгезии (колонизации) является основным, фактором, определяющим вирулентность микроорганизмов и их взаимоотношения с представителями нормальной микрофлоры организма. Поэтому нами- были исследованы адгезивные свойства выделенных от носителей штаммов S. aureus. Показатели адгезии определяли по методике Бриллис В: И. с соавт. (1986) [21] с вычислением среднего, показателя адгезии (ОПА) и коэффициента участия эритроцитов (КУЭ) в адгезивном процессе.
Были исследованы 159 штаммов, выделенных от транзиторных, носителей и 111 штаммов от резидентных носителей. На. первом этапе эксперимента были определены исходные показатели адгезивности стафилококков. Адгезивная активность транзиторных и резидентных штаммов стафилококков различалась: у транзиторных штаммов СПА составил 1,7 бакт. / эритр., КУЭ - 44,5 %; уровень СПА и КУЭ резидентных штаммов составил 3;2 бакт. / эритр. и 68,2 % соответственно (р 0,05).
На подготовительном этапе было выяснено, что однократное воздействие ОАИ существенно не изменяют адгезивные свойства S. aureus, также, по данным литературы, адгезивная активность микроорганизмов может снижаться при длительном культивировании на агаре. Эти обстоятельства были учтены при дальнейшем исследовании.
Изучаемые штаммы культивировали на питательном агаре при 37 С в течение 10 дней с периодическими пересевами, при этом опытные чашки ежедневно подвергали воздействию ОАИ в течение 60 мин. Контрольные чашки во время, опытов находились вне зоны действия потока ОАИ. Затем определялись показатели адгезии у контрольных и опытных образцов.
Было выявлено, что десятикратный пассаж на питательном агаре понижает адгезивные свойства штаммов стафилококка незначительно, а воздействие ОАИ снижают показатели адгезии почти в 2 раза, как при действии только потока ОАИ; так и при культивировании на питательном агаре с пробиотиком «Нарине-Ф-баланс» в разведении 1:5 в тех же опытных условиях (таблицы 9,10, рис. 6;7).
Коррекция стафилококкового бактерионосительства с применением аэроионов отрицательной полярности и пробиотика «Нарине-Ф баланс»
В этиологической структуре острых и хронических инфекций верхних дыхательных путей, госпитальных инфекций ведущая роль принадлежит грамположительной микрофлоре, преимущественно стафилококкам [Онищенко Г.Г., 2007]. В последнее время широкое распространение получили дисбиозы носовой полости, ротоглотки, являющиеся основной причиной стафилококкового носительства на слизистой верхних отделов респираторного тракта [Чучалин А.Г., 2004; Бухарин О.В. и др., 2006; Malhora-Kumar S., 2007].
Согласно современной научной концепции нормальная микрофлора выполняет ряд важных функций, обеспечивающих колонизационную резистентность, антитоксическое действие, поддержание оптимального уровня метаболических и ферментативных процессов, иммунного статуса, антимутагенной и антиканцерогенной активности, что достаточно широко освещено в медицинской литературе.
Верхние дыхательные пути являются одними из самых открытых систем организма человека, которая легко колонизируется и подвержена массивному воздействию внешних факторов. В ряде случаев иммунная система человека не способна эффективно защищать организм от вирусной и бактериальной инфекций.
Следовательно, проведенные исследования показывают, что стафилококковое бактерионосительство требует наблюдения и лечебно-профилактических мероприятий, как у взрослых, так и у детей.
Реабилитация включает в себя целый комплекс мероприятий, направленных на восстановление нарушенных функций организма. Основной целью реабилитации является максимальное использование всех средств и методов для наиболее полного устранения механизмов, поддерживающих стафилококковое бактерионосительство. Комплексная реабилитация строится по современным принципам активного воздействия на бактериальных микробиоценоз организма.» Микробиологический статус организма - это постоянно меняющийся процесс, поэтому требуется динамическое наблюдение за состоянием микробиоценоза организма с использованием сведений о состоянии здоровья наблюдаемого субъекта и стандартизованной схемы клинико-лабораторной оценки.
Наиболее эффективным для восстановления- деятельности функциональных систем организма является- метод длительного специального восстановления нормального микробиоценоза, как организма в целом, так, и его отдельных биотопов. Спонтанного восстановления нарушенного микробиоценоза при резидентном бактерионосительстве не происходит. Восстановление микробиоценоза, направленное пробиотиками, является начальным этапом любого процесса репарации естественной биопленки слизистых. Базовый слой из лактобактерий создается достаточно быстро на основе временных связей между бактериями пробиотической культуры и эпителиальными клетками. Самые первичные связи, биологически наиболее значимые на первых этапах восстановления, фиксируются на определенный срок и тем самым обеспечивают возможность ранних этапов индивидуального восстановления- биопленки слизистых оболочек организма. Формируется прочная временная связь, и вырабатываются стабильные специализированные взаимоотношения между бактериальными клетками с одной стороны и клетками эпителия с другой, а также бактериями друг с другом.
В течение восстановительного процесса требуется определенная фармакотерапия. Препараты с пробиотическими свойствами, стимулируют выработку адаптивных ответов со стороны эпителиальных клеток, что связано с прямым вмешательством нормальной микрофлоры в специфические процессы формирования биопленки и реакций по ее поддержанию. Особенностью применения лактобактерий и всех других пробиотических препаратов считается проявление лечебного эффекта только 89 при сравнительно длительном применении, т. е. отмечается длительный латентный период в их действии.
В современных научных исследованиях признается высоко значимая взаимозависимость параметров функционирования биопленки слизистых оболочек организма и иммунитета. Существуют множественные научные данные, свидетельствующие о взаиморегулирующих механизмах между функционированием нормофлоры организма и его иммунной системы. Механизмы и взаимовлияние иммунитета и микробиоценоза организма человека выходят на первую линию исследований в иммунологии и медицинской микробиологии, имеют большое значение в медицинской практике.
Одними из важнейших факторов, оказывающими значительное влияние на здоровье человека и животных, являются свойства окружающей среды. В частности, для поддержания микробиоценоза и иммунологической реактивности слизистой оболочки верхних дыхательных путей неизменно важным считается достаточное содержание аэроионов отрицательной полярности в единице объема вдыхаемого воздуха. Проведенные нами исследования показали важнейшую роль отрицательных аэроионов в поддержании защитных свойств слизистых покровов носоглотки.
Таким образом, коррекция микробоценоза носоглотки у стафилококковых бактерионосителей с применением пробиотических средств и потока аэроионов отрицательной полярности может стать одним из важнейших способов реабилитации после перенесенных острых респираторных инфекционных заболеваний, а также позволит сформировать новый подход в профилактике стафилококкового бактерионосительства, как у взрослых, так и у детей.
