Содержание к диссертации
Введение
РАЗДЕЛ 1. Обзор литературы (Проблема распространения кандидомикозов и пути ее решения)
1.1. Грибы рода Candida в развитии оппортунистических микозов 14
1.2. Методы выявления чувствительности к антифунгальным препаратам 23
1.3. Резистентность грибов рода Candida к антифунгальным препаратам 27
1.4. Сапонины как природные антифунгальные средства 30
РАЗДЕЛ 2. Материалы и методы исследования
2.1. Штаммы и изоляты грибов 37
2.2. Штаммы и изоляты бактерий 38
2.3. Тритерпеновые сапонины таурозиды и антимикотики 39
2.4. Микробиологические методы исследования
2.4.1. Определение чувствительности грибов к антифунгальным препаратам методом дисков 42
2.4.2. Определение активности антифунгальных средств методом колодцев 43
2.4.3. Определение чувствительности бактерий к тритерпеновым сапонинам таурозидам с помощью метода серийных разведений на среде МПБ 44
2.4.4. Определение чувствительности грибов к тритерпеновым сапонинам таурозидам и антимикотикам с помощью метода серийных разведений в среде Сабуро 45
2.4.5. Определение чувствительности грибов к тритерпеновым сапонинам таурозидам и антимикотикам с помощью метода серийных разведений в среде RPMI-1640 з
2.5. Определение влияния тритерпеновых сапонинов таурозидов на
адгезию грибов рода Candida к буккальным эпителиоцитам 2.6. Определение противокандидозного действия тритерпеновых
сапонинов таурозидов на модели кандидоза у мышей 48
2.7 Патоморфологическое исследование тканей животных 51
2.7. Статистическая обработка результатов исследования 52
РАЗДЕЛ 3. Видовой спектр и чувствительность к известным антимикотикам дрожжеподоьных грибов, выделенных в 2000-2008 годах от больных и здоровых людей в г.симферополе раздел 4. определение воздействия тритерпеновых сапонинов таурозидов на микроорганизмы с использованием различных методов и усовершенствование методики тестирования в соответствии со стандартами CLSI/NCCLS
4.1. Воздействие на бактерии и грибы рода Candida тритерпеновых сапонинов, полученных из плюща крымского 74
4.2. Сравнительное изучение противокандидозного действия таурозида Sxl и антимикотиков методом колодцев и методом дисков 76
4.3. Чувствительность к таурозиду Sxl бактерий и дрожжеподобных грибов 80
4.4. Модификация метода серийных разведений на среде RPMI-1640 для определения чувствительности дрожжеподобных грибов к антимикотикам и тритерпеновым сапонинам таурозидам 83
РАЗДЕЛ 5. Чувствительность к таурозиду sx1 и амфотерицину в дрожжеподобных грибов, выделенных в 2000-2008 годах от больных и здоровых людей в г.Симферополе
Раздел 6. Определение воздействия тритерпеновых сапонинов таурозидов из плюща крымского на адгезивные свойства candida albicans и развитие кандидоза у мышей
6.1 Определение воздействия тритерпеновых сапонинов таурозидов Sxl и Н2 на адгезию С. albicans к буккальным эпителиоцитам 99
6.2. Анализ результатов воздействия таурозида Sxl и амфотерицина В на развитие оппортунистического кандидоза у мышей 103
РАЗДЕЛ 7. Обсуждение полученных результатов 130
Выводы 152
Практические рекомендации 154
Список сокращений и условных обозночений 155
Список цитируемой литературы
- Методы выявления чувствительности к антифунгальным препаратам
- Определение чувствительности бактерий к тритерпеновым сапонинам таурозидам с помощью метода серийных разведений на среде МПБ
- Сравнительное изучение противокандидозного действия таурозида Sxl и антимикотиков методом колодцев и методом дисков
- Определение воздействия тритерпеновых сапонинов таурозидов Sxl и Н2 на адгезию С. albicans к буккальным эпителиоцитам
Методы выявления чувствительности к антифунгальным препаратам
Для лечения кандидамикозов у детей чаще всего применяют препараты группы азолов, так как полиеновые антибиотики более токсичны. Однако, при наличии резистентности выделенных грибов к азолам приходится использовать препарат амфотерицин В [31, 128].
Кандидомикозы - это один из признанных маркеров ВИЧ-инфекции. Кандидозные заеды могут встречаться почти у 20% ВИЧ- инфицированных [129-131]. Кандидоз полости рта при ВИЧ-инфекции и СПИДе отличается большей площадью поражения, вовлечением слизистой щёк, нёба, языка, красной каймы губ, нередко глотки и миндалин. Кандидоз полости рта и жалобы на боли или жжение за грудиной при СПИДе считаются достаточным основанием для подозрения на кандидный эзофагит [132]. Считается, что в половине случаев кандидоз полости рта при СПИДе служит предвестником саркомы Капоши или другой тяжолой оппортунистической инфекции [133].
ВИЧ-инфекция и СПИД способствуют селекции особо агрессивных штаммов Candida spp., не только устойчивых к антифунгальным средствам, но и обладающих большей протеолитической активностью и способностью к адгезии [134, 135]. Тем не менее, на ранних стадиях орофарингеального кандидоза у ВИЧ-инфицированных лиц выделяются менее агрессивные штаммы [136]. Среди устойчивых видов при ВИЧ - ассоциированном кандидозе полости рта встречаются разные виды Candida, но среди них преобладают преимущественно резистентные штаммы С. albicans. Новым устойчивым видом, выделяемым почти исключительно при кандидозе полости рта на фоне ВИЧ-инфекции, является С. dubliniensis [137].
Кандидоз - одна из наиболее частых и ранних оппортунистических инфекций у ВИЧ-инфицированных детей. Кандидозная инфекция у ВИЧ-инфицированных детей практически всегда характеризуется поражениями слизистой оболочки, лишь на поздней стадии заболевания встречаются системные инвазивные формы. До появления антиретровирусной терапии у 50-70% ВИЧ-инфицированных пациентов развивался кандидоз слизистых оболочек, а у 20-40% - поражение пищевода. Кандидоз пищевода - наиболее частая причина поражения пищевода у детей на стадии СПИДа [138, 139]. Кандидоз слизистой оболочки ротовой полости может возникать даже при умеренной иммуносупрессии. Орофарингеальный кандидоз у ВИЧ-инфицированных детей часто проявляется в виде эритематозной и псевдомембранозной формы заболевания [8]. У части пациентов возможно развитие бронхолёгочного кандидоза. У детей с тяжелой иммуносупрессией нередко наблюдают генерализованный кандидоз с наличием фунгемии и инвазивным поражением ткани, иногда в сочетании с септикопиемией, при которой наблюдается инвазия и другими оппортунистическими возбудителями [8].
Основным этиологическим фактором первичной кандидозной инфекции у ВИЧ -инфицированных считается С albicans (80-100%), значительно реже - С. tropicalis и С krusei. На поздней стадии ВИЧ-инфекции у части пациентов выделяются С parapsilosis и С glabrata [8].
Своевременное распознавание оппортунистической инфекции у ВИЧ-инфицированных и больных СПИДом, а также рациональная терапия такой инфекции облегчает клиническое состояние больных, продлевает им жизнь. Для лечения таких пациентов обычно применяют препараты группы азолов (флюконазол, клотримазол, итраконазол и др.) так как полиеновые антибиотики являются более токсичными. Наличие ВИЧ-инфекции у больного с кандидамикозом является одним из факторов, при наличии которого терапевтическая доза антимикотика и продолжительность курса лечения может быть увеличена [31]. Однако такая тактика лечения микозов приводит к увеличению риска селекции устойчивых форм грибов рода Candida [140].
Таким образом, изучение видового спектра грибов рода Candida, изолированных от пациентов с различными заболеваниями, из разных возрастных групп, определение чувствительности данных изолятов к антифунгальным препаратам является актуальным для решения проблем, связанных с лечением кандидомикозов. 1.2 Методы выявления чувствительности дрожжеподобных грибов к антифунгальным препаратам
Главными проблемами, возникающими при изучении чувствительности грибов к антифунгальным средствам, являются воспроизводимость результатов в разных лабораториях и наличие единых стандартов - критериев чувствительности и устойчивости к каждому из изучаемых препаратов. Результаты определения такой чувствительности в значительной мере зависят от условий проведения теста [141]. К ним относятся химический состав и рН среды, температура и продолжительность культивирования, масса и тип инокулята [142-145]. При использовании различных методик тестирования чувствительности определённых грибов к одному и тому же препарату данные разных лабораторий могут расходиться на порядки, иногда - до 50 00 раз. [146]
Для решения этих проблем в 1982 г. Национальным комитетом по клиническим лабораторным стандартам США (NCCLS), ныне Институт по клиническим и лабораторным стандартам (CLSI) были начаты исследования по стандартизации методик определения чувствительности грибов к антимикотикам. В 1992 г. CLSI/NCCLS был опубликован документ М27-Р, в котором в качестве стандартного подхода предлагалось использовать технику постановки метода разведений препаратов в среде RPMI-1640, а для практических целей допускалось использование техники микроразведений в той же среде [147]. Предложенные методики давали хорошую воспроизводимость результатов тестирования в разных лабораториях. Вместе с тем, они неоднократно подвергались критике за трудоёмкость, субъективность оценки результатов и не оптимальные условия культивирования микроорганизмов. В результате положения документа М27 подверглись пересмотру и в 1996г. вышла его третья, исправленная и дополненная версия М27-А. В настоящее время, последняя версия документа М27-А (2002 г.) является международным стандартом тестирования чувствительности дрожжеподобных грибов к антимикотикам [148]. Указанным стандартам соответствуют модификации микрометода М27-А, применяемые сегодня в виде таких коммерческих наборов, как «Fungitest» и «АТВ- Fungus».
Однако, практическое использование указанных наборов в повседневной практике диагностических лабораторий затруднено в связи с их высокой стоимостью [149].
Определение чувствительности бактерий к тритерпеновым сапонинам таурозидам с помощью метода серийных разведений на среде МПБ
Первоначальные исследования, проведенные методом серийных разведений в среде Сабуро, показали, что полученные нами значения МІЖ для известных антимикотиков не соответствуют данным других исследователей, применявших методики, соответствующие международным стандартам. В связи с этим методика определения антифунгальной активности изучаемых веществ была модифицирована нами путём использования среды RPMI-1640 (ООО «БилоТ», Санкт-Петербург, Россия), добавления к ней лошадиной сыворотки и специально подобранной концентрации микробного инокулята. Среда RPMI-1640 содержит неорганические соли Ca(N03)2, MgS04, КС1, NaHC03, NaCl, Na2HP04; 20 L-аминокислот; D-глюкозу; витамины (аминобензойная кислота, биотин, фолиевая кислота, ниацин, пантотеновая кислота, пиридоксин, рибофлавин, тиамин, витамин В12), мио-инозитол, холин, восстановленный глутатион. При разработке модификации использовали рекомендации NCCLS, США [147]. В случае применения модифицированной методики исследования проводились в стерильных 96- луночных пластиковых планшетах (ПО «Ленмедполимер», Россия) на среде RPMIc добавлением 3 % лошадиной сыворотки. Грибы выращивали на твердой среде Сабуро в течение 48 часов при 28 С. Затем производили смыв культуры стерильным ИР. Полученную взвесь грибов разводили ИР до показателя оптической плотности d=0,27 на фотоколориметре КФК-2 (ОМЗ, Загорск, Россия) при длине волны 540 нм в режиме чувствительности-2, кювета 10 мм толщиной, что соответствовало концентрации клеток 2,5-1,5 X 106КОЕ/мл. Полученную взвесь разводили на среде RPMI-1640 с плазмой крови доноров до концентрации клеток 2,5-1,5x10 КОЕ/мл. Эту взвесь добавляли в среду RPMI с сывороткой, содержащую исследуемое вещество в различных концентрациях. В лунки планшет вносили указанные ингредиенты в соотношении 0,05 мл микробной взвеси на 0,05 мл смеси среды с исследуемым веществом. Конечная концентрация инокулята на лунку составляла 75-125 клеток. При этом учитывали то, что при постановке аналогичного теста в документах CLSI/NCCLS рекомендуемая концентрация инокулята 50 - 250 клеток на лунку. Контролем служил посев такого же количества клеток в среду с добавлением ИР вместо исследуемого вещества.
Полученные смеси инкубировали при 28 С и 5% содержании СОг в воздушной среде в течение 48 часов, в закрытом эксикаторе, с предварительным выжиганием избытка кислорода. Затем производили высев из каждой лунки на твердую среду Сабуро в чашки Петри. Результат учитывали через 48 ч инкубации. Наименьшая концентрация изучаемого вещества в лунке, посев из которой не давал роста на чашке с твердой средой, отмечалась как МПК вещества для данного микроорганизма. Для оценки чувствительности грибов использовали следующие критерии [43]: для флюконазола (дифлюкана) чувствительные - МПК ниже 32 мг/л, устойчивые - МПК выше 64 мг/л; для амфотерицина В чувствительные - МПК ниже 1 мг/л, устойчивые - МПК выше 2 мг/л. Определение влияния тритерпенових сапонинов таурозидов на адгезию грибов рода Candida к буккальным эпителиоцитам
Для проведения исследований использовали метод А.Н. Маянского с соавторами [201]. Исследовали влияние тритерпеновых сапонинов таурозидов на адгезию грибов на тестовом штамме С. albicans ССМ 885. Культуру выращивали на плотной питательной среде Сабуро в течение 48 ч при 28 С. Выросшие грибы смывали забуференным физиологическим раствором (ЗФР) - рН 7,2-7,4; инактивировали 0,4% раствором формалина (24 ч, 20 С), затем дважды отмывали на центрифуге (3000 об/мин) по 10 мин. и готовили взвесь в ЗФР в концентрации Q
КОЕ/мл. Буккальные эпителиоциты получали от доноров в возрасте 18-20 лет, дважды отмывали ЗФР (300 об/мин, 5 мин.) и готовили взвесь с концентрацией 10 клеток/мл. Смешивали равный объем (по 0,25 мл) взвеси эпителиоцитов и кандид. Для изучения влияния таурозидов на адгезивные свойства грибов в пробирки добавляли исследуемое вещество в концентрациях 125; 62,5; 31,2; 15, 5 мг/л. В контрольные пробирки добавляли ИР. Инкубировали в течение 60 минут при 37 С, встряхивая каждые 5 минут. Эпителиоциты трехкратно отмывали ЗФР (300 об/мин, 5 мин.) и из осадка клеток готовили мазок. Фиксировали мазок этанол-эфирной смесью и окрашивали геницианом фиолетовым. Подсчитывали количество адгезированных кандид на 50 эпителиоцитах и вычисляли индекс адгезии (ИА) - среднее количество адгезированных кандид на 1 эпителиоцит. Для анализа прочности адгезии эпителиоциты, с прикрепившимися кандидами (0,5 мл) наслаивали на фиккол-верографин (Sigma-Aldrich, США) с плотностью 1,077 г/см (1 мл) и центрифугировали при 1000 об/мин 10 мин. Эпителиоциты трехкратно отмывали ЗФР (300 об/мин, 5 мин.) и из осадка клеток готовили мазок. Подсчитывали количество адгезированных кандид на 50 эпителиоцитах и вычисляли индекс прочности адгезии (ИПА) - среднее количество адгезированных кандид на 1 эпителиоцит после прохождения через фиккол -верографин. Процент прочноадгезированных кандид вычисляли по формуле: ИПА/ИАхЮО.
Сравнительное изучение антимикотических свойств таурозида Sxl и амфотерицина В in vivo проводили с помощью использования модифицированной нами модели кандидоза у мышей. Для создания модели кандидоза использовали подходы и рекомендации, приведенные в работах [159-161]. Исследования проводили со стандартным штаммом С. albicans ССМ 885. Культуру выращивали на плотной питательной среде Сабуро в течение 48 ч при 28 С. Затем проводили смыв грибов стерильным ИР и полученную взвесь троекратно отмывали центрифугированием при 3000 об/мин. Далее взвесь грибов разводили ИР до концентрации (2,5-1,5) X 10 КОЕ/мл. Концентрацию клеток во взвеси определяли измерением оптической плотности как это описано выше (см. 2.4). Схема постановки экспериментов представлена в таблице 2.1
Сравнительное изучение противокандидозного действия таурозида Sxl и антимикотиков методом колодцев и методом дисков
Для подтверждения антифунгального эффекта таурозида Sxl, сравнения его активности с действием известных антимикотиков амфотерицина В, нистатина, клотримазола, флуконазола, а также с целью изучения возможности их синергидного совместного действия использовали сочетание метода дисков и метода колодцев. Исследование проводили со стандартным тест- штаммом С. albicans ССМ 885 в чашках Петри. Эксперименты проводили в двух повторностях. В первом эксперименте таурозид Sxl вносили в колодец, сформированный в агаризованной среде Сабуро, в концентрации 1000 мг/л, а для оценки действия коммерческих антимикотиков применяли стандартные диски (рисунок 4.1 и 4.2). В качестве контроля в лунку вносили ИР (V). Расстояние между лунками и дисками было 2 см.
Результат определения антифунгального действия таурозида Sxl, флуконазола (ФКН) и клотримазола (КОТ), при использовании метода колодцев и метода дисков на одной чашке.
Во втором эксперименте все испытуемые вещества вносили в колодцы: таурозид Sxl в концентрации 2000 мг/л, амфотерицин В - в виде растворов с концентрациями 12,5 мг/мл; 1,56 и 0,09 мг/мл (рисунок 4.3). Расстояние между колодцами было 1,5 см.
Антифунгалное действие веществ оценивали с помощью определения диаметров зон задержки роста микроорганизмов. Полученные результаты представлены в таблице 4.2. При оценке результатов действия таурозида Sxl как положительный результат (грибы считали чувствительными) учитывали такой, когда диаметр зоны отсутствия роста микроорганизмов превышал 12 мм. Данный параметр был выбран для определения минимальной антифунгальной активности, поскольку соответствовал минимальному диаметру зоны задержки роста чувствительных грибов к флюконазолу и клотримазолу при использовании метода дисков.
Исходя из результатов исследования, представленных в таблице 4.2, таурозид Sxl, при использовании метода колодцев, показал умеренное фунгицидное действие на эталонный штамм грибов Candida albicans в концентрации 1000 мг/л. К нистатину, амфотерицину, клотримазолу и флюконазолу тестовый штамм был чувствителен. Более выраженное фунгицидное действие таурозид Sxl проявил в концентрации 2000 мг/л. Чувствительность грибов к амфотерицину В проявилась только при добавлении в колодец данного препарата в концентрации 12,5 мг/л. Таблица 4.2 - Антифунгальное действие таурозида Sxl и известных антимикотиков, выявленное методом дисков и методом колодцев
Исследуемое вещество Концентрация веществ (вколодецвносили по0,05 млрастворавещества) Критерии оценки чувствительности Диаметры зонзадержки ростагрибов, мм 4)3я лчО)н я со нсо 3 сояЯ зЯ о н Эксперимент №1 Эксперимент№2 Таурозид Sxl (раствор) 1000 мкг/мл 1000мкг/мл 1000 мкг/мл 15,5±0,5 2000 мкг/мл - 20,5±0,5 Нистатин 80 мкг/диск 18 мм 18 мм 23,0±0,7 Флюконазол 40 мкг/диск 12 мм 12 мм 27,8±1,3 Клотримазол 10 мкг/диск 12 мм 12 мм 19,0±0,0 Амфотерицин В (диск) 40 мкг/диск 14 мм 14 мм 22,8±0,5 Амфотерицин В (раствор) 12,5 мкг/мл 1 мкг/мл 2 мкг/мл - 24,5±0,5 1,56 мкг/мл - 0,09 мкг/мл - - антимикотики - в виде стандартных дисков, а таурозид Sxl - в виде раствора в лунки; все вещества вносили в лунки. Проведенные исследования показали дозозависимое увеличение диаметра зоны отсутствия роста грибов, что подтверждает наличие у таурозида Sxl антимикотических свойств.
Чувствительность к таурозиду Sxl бактерий и дрожжеподобных грибов Для выявления спектра антимикробного действия таурозида Sxl было исследовано его влияние на различные виды бактерий и дрожжеподобных грибов. Чувствительность к таурозиду Sxl была определенна с помощью метода серийных разведений на среде Сабуро и МПБ.
Для исследования отобрали 21 штамм грамположительных и грамотрицательных бактерий, принадлежащих к 14 видам микроорганизмов, и 27 изолятов грибов, относящихся к 5 видам рода Candida.
Все исследованные нами штаммы бактерий, за исключением Bacillus cereus были не чувствительны к таурозиду Sxl в концентрации 1000 мг/л (максимально изученая концентрация). К ним относились: Bacillus subtilis, Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Alcaligenes faecalis, Corynebacterium diphtheriae, Corynebacterium xerosis, Proteus mirabilis (2 штамма), Escherichia coli (2 штамма), Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Micrococcus luteus, Staphylococcus aureus (6 изолятов). Ha B. cereus сапонин таурозид Sxl оказывал бактерицидное действие в концентрации 1000 мг/л, но не подавлял рост бактерий в концентрации 500 мг/л.
Чувствительность исследованных грибов была существенно выше (рисунок 4.4). Два изолята Candida albicans были чувствительны к таурозиду Sxl при концентрации 75 мг/л. Одиннадцать изолятов грибов, большинство из которых также принадлежали к виду С albicans, погибали при концентрации сапонина 150 мг/л.
Определение воздействия тритерпеновых сапонинов таурозидов Sxl и Н2 на адгезию С. albicans к буккальным эпителиоцитам
Старение населения многих стран, ухудшающиеся экологические условия, распространение ВИЧ-инфекции и туберкулёза, увеличение числа лиц с метаболическими нарушениями, снижение уровня жизни определенных социальных групп населения и прочие негативные процессы обусловливают увеличение числа людей с низкой иммунологической реактивностью и наличием фоновой патологии. Кроме того, массовое бесконтрольное и часто необоснованное применение современных антибактериальных и противовоспалительных средств привело к нарушению естественного биологического равновесия в микробных ассоциациях. Всё это выдвинуло на первый план в качестве возбудителей инфекционно-воспалительных заболеваний условно-патогенную микрофлору, в том числе грибы рода Candida [207, 208]. В структуре инфекционных заболеваний человека микозы уже занимают пятое место в мире [209].
В последнее десятилетие отмечается значительный рост заболеваемости поверхностными и глубокими кандидозами. ВИЧ-инфекция и СПИД, ятрогенные иммунодефициты, вызванные химиотерапией при онкологических заболеваниях, и трансплантации органов, а также широкое использование антибактериальных препаратов вывели кандидоз в число ведущих инфекционных осложнений в стационарах разного профиля [31]. На сегодняшний день грибы рода Candida занимают 5-е место среди возбудителей нозокомиальных инфекционных осложнений, 4-е место среди возбудителей нозокомиальной ангиогенной инфекции и сепсиса, 1-е - среди случаев нозокомиальной урологической инфекции [25]. В последние годы отмечается все более возрастающая роль грибов рода Candida как возбудителей нозокомиальной инфекции в отделениях хирургии и интенсивной терапии. Опасность этой инфекции связана со значительным ростом летальности при развитии системного кандидоза. В частности, летальность при инвазивном кандидозе с признаками эндофтальмита составляет 40-80% [210, 2011]. Общая летальность при кандидемии колеблется от 25 до 60% [212]. Системный кандидоз существенно увеличивает продолжительность стационарного лечения на 8-30 суток [210]. Кандиды могут заселять полость рта, кожу, кишечник, инвазия происходит чаще всего через поврежденный эпителий кишечного тракта. При таком варианте диссеминации (через кишечник) наблюдается инвазия грибами печени, селезенки и легких. Циркуляция кандид в крови обычно происходит непродолжительное время. Затем повреждается эндотелий сосудов и грибы внедряются в разные органы, вызывая образование небольших абсцессов [9]. Основываясь на этих сведениях, мы в своей работе выбрали в качестве главного объекта исследований грибы рода Candida, изолированные от пациентов с разной патологией и выделенные из разного биологического материала, чувствительность этих микроорганизмов к известным антимикотикам и экспериментальному веществу таурозиду Sxl.
В настоящее время широко распространено мнение, что благодаря выяснению основных факторов риска развития кандидоза и доступности различных антифунгальных препаратов, есть надёжная возможность профилактики и лечения этого заболевания. Вместе с тем, признаётся существование проблемы снижения эффективности антифунгальной терапии из-за возрастания количества штаммов Candida spp., устойчивых к коммерческим антимикотикам [28, 30]. В решении данной проблемы основными считаются два направления: поиск новых антифунгальных средств [36, 176-178, 213] и более широкое применение в клинической практике доступных количественных стандартизованных лабораторных тестов для определения чувствительности грибов к уже имеющимся антимикотикам [31,154]. Среди источников получения новых антимикотических препаратов важными считаются различные соединения природного происхождения [35, 176, 214-216]. В данной работе мы проводили исследования в обоих указанных направлениях.
Грибы рода Candida, изученные в данной работе, были полученны от здоровых людей и больных с различными заболеваниями. Первая группа обследованных, здоровые люди, использовалась как группа сравнения.
Полученные данные по видовому составу грибов, изолированных в данной группе, совпадали с данными других авторов [31, 154]. Из четырёх видов, которые по сведениям этих авторов выделяются от здоровых людей чаще других (С. albicans, С. tropicalis, С. parapsilosis, С. glabrata), нами было идентифицировано три вида - С. albicans, С. parapsilosis, С. glabrata. Кроме того, были изолированы по 1 штамму достаточно редко встречающихся видов С. lusitaniae и С. dubliniensis.
Обобщая сведения о видовом составе дрожжеподобных грибов, изолированных от здоровых людей и представителей 4- х изученных групп больных с разной патологией, можно сказать, что преобладающим видом для всех групп исследованных людей, за исключением больных с ЯБДК, является С. albicans. Общая встречаемость видов С. поп-albicans колебалась от 19,04% (стоматологические больные) до 54,5% (ЯБДК). При этом средняя встречаемость одного вида С. поп-albicans колебалась от 5,21±1,04% (здоровые люди) до 27,27±2,12% (ЯБДК). Для этих двух групп обследованных людей различия во встречаемости вида С. поп-albicans являються статистически достоверными (р=0,002). Различное распределение видов С. albicans и С. поп-albicans среди грибов, изолированных от разных категорий пациентов, выявленное в нашей работе, в основном не противоречило данным, опубликованным другими авторами [3, 4, 8, 28, 31, 45, 98, 166].
По нашим данным грибы вида С. albicans высевались приблизительно в одинаковом проценте случаев у здоровых людей и больных со стоматологической патологией (около 80 %). Схожесть показателей можно объяснить тем, что в том и в другом случае материал для исследования был получен из зева. Эти данные сравнимы с данными других авторов, которые отмечали, что из всех грибов, высеваемых из зева, С. albicans обнаруживается в 77,7 % случаев [4, 31]. Вместе с тем, показатель 45,5% для С. albicans, полученный нами при изучении биологического материала от больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, не совпадал с данными других авторов, опубликованными в 2000 г., в которых утверждалось, что С. albicans составляет около 80% штаммов грибов, изолированных из желудочного содержимого [166]. Однако, он был близок к данным других исследователей, опубликованным позже (2006г.), где этот показатель составил 29,2% [104]. Грибы, изолированные нами в группе детей с различной патологией, в 50% случаев идентифицировались как С.albicans. Мы считаем, что такой процент показывает усредненное значение высеваемости представителей вида С. albicans от больных детей, так как при исследовании этой группы изучался различный материал, полученный от пациентов с разными заболеваниями. Процентное соотношение, полученное в нашей работе для изолятов С. albicans, выделенных от ВИЧ - инфицированных детей, совпадало с результатами других исследований (70 - 80%) [8, 217, 218], хотя некоторые авторы отмечают снижение данного показателя за последние 10 лет [28].
