Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Восстановление переменновалентных элементов микроорганизмами
1. Восстановление трехвалентного железа микроорганизмами 6
2. Бактериальное восстановление нитратов, сущность и механизм восстановления 14
3. Микробиологическая сульфатредукция 23
а) сущность и механизм процесса 30
б) Роль сульфатредуцирующих бактерий в процессах коррозии металлов 40
Глава II. Материалы и методы исследований 50
Глава III. Экспериментальная часть
1. Поиск в естественной среде обитания микроорганизмов, обладающих полиредуктазными свойствами 58
а) Использование в качестве теста способности микроорганизмов к денитрификации и сульфатредукции 59
б) использование в качестве теста способности к восстановлению трехвалентного железа 73
в) использование в качестве теста способности к восстановлению арсената 77
2. Методика выделения микроорганизмов, обладающих полиредуктазными свойствами 82
3. Культурально-морфологические и физиологические свойства и идентификация выделенных микроорганизмов-полиредуктантов
а) проверка чистоты культур. 84
б) характеристика культуры штаммов 18 и 126-4 при аэробном росте 86
в) характеристика культуры штаммов 28 и 39в-4 при аэробном росте
г) микроаэрофильные свойства бактерий 88
д) возможность роста микроорганизмов в присутствии некоторых источников органичес
кого вещества в анаэробных условиях 89
е) описание микроорганизмов, обладающих полиредуктазными свойствами 95
4. Восстановление переменновалентных элементов бактериями
а) Способность микроорганизмов восстанавливать нитраты 103
б) способность микроорганизмов восстанавливать сульфаты 108
в) восстановление Fe , Аз и Сг микроорганизмами 113
г) последовательность процессов денитрификации и сульфатредукции 119
д) последовательность процессов восстановления "Fe3+ и As5+ 119
5. Исследование процесса микробиологического осаждения неорганических фосфатов в связи с проблемой коррозии металлов 127
Обсуждение результатов 138
Выводы 143
Литература 145
- Восстановление трехвалентного железа микроорганизмами
- Роль сульфатредуцирующих бактерий в процессах коррозии металлов
- Использование в качестве теста способности микроорганизмов к денитрификации и сульфатредукции
- Способность микроорганизмов восстанавливать нитраты
Введение к работе
Природа таит в себе множество микроорганизмов с еще неизвестными науке свойствами. Они не выявляются вследствие ограниченности наших знаний об их физиологии, особенностях метаболизма или из-за отсутствия соответствующих методических приемов, позволяющих выделить их из среды обитания.
В настоящее время хорошо установлено решающее значение биохимической деятельности микроорганизмов в восстановительных процессах, в частности, в восстановлении нитратов, сульфатов, окисленных форм железа и марганца. Восстановительные превращения азота и серы, переменно-валентных элементов, изменение окислительно-восстановительного потенциала почвы, формирование сульфидных, глеевых горизонтов, разрушение структуры почвы - следствие активной деятельности микроорганизмов. Многочисленные наблюдения показывают, что в простерилизованной и инкубированной аэробно почве восстановительные процессы не идут, что свидетельствует о микробиологической природе этих процессов.
Восстановление неорганических акцепторов электронов в большинстве случаев осуществляется широким кругом микроорганизмов ( железо-восстанавливающие, сульфатредуцирующие бактерии).
Чистая культура микроорганизмов, как правило, в случае факультативных анаэробов передает электрон на кислород или нитраты, а у строгих анаэробов - на один терминальный акцептор SOT или С0. В литературе мы не встречали сообщений об одновременном или последовательном восстановлении одним факультативно-анаэробным микроорганизмом нескольких неорганических акцепторов электронов. Имеются единичные сообщения о строгих анаэробах, способных осуществить такой процесс.
При изучении микроорганизмов из месторождений полезных ископаемых мы обратили внимание на явно выраженное исчезновение нитратов и появление запаха сероводорода в некоторых колбах. Это могло быть следствием деятельности смешанной культуры денитрифицирующих и сульфатредуцирующих бактерий, однако многократные пересевы на разнообразные питательные среды и микрокопирование показали чистоту культуры. Дальнейшие исследования показали, что выделенные микроорганизмы способны восстанавливать не только нитраты и сульфаты, но и трехвалентное железо и арсеналы.
Теоретической предпосылкой для изучения микроорганизмов с широким диапазоном восстановительных реакций является отсутствие данных о широте их распространения, методике их выделения, физиологических и биохимических свойствах.
Целью работы было установление существования в природных субстратах микроорганизмов, способных расти аэробно, а в анаэробных условиях - восстанавливать нитраты и сульфаты, разработать методику выделения и определить возможность их практического использования.
Восстановление трехвалентного железа микроорганизмами
К наиболее легко восстанавливаемым переменновалентным элементам относятся Мп и Ре . Восстановление этих элементов связано с деятельностью спонтанной микрофлоры в целом. Железо весьма чувствительно к изменениям условий среды и поэтому можно было ожидать, что оно легко может переходить в закисную форму химическим путем. Однако исследования Гальворсона и Старки (Hal-vorson, Starkey , 1927) показали, что восстановление гидрата окиси железа в стерильных условиях в почве не идет. С другой стороны, образование восстановленных форм железа прекращается сразу после добавления ингибиторов бактериального роста, что ука-зывает на то, что превращение Ре —а» Ре термодинамически осуществляется в условиях постоянного выделения энергии окисления органического вещества и поэтому может осуществляться только микроорганизмами.
Многие исследователи занимались изучением систематического положения микроорганизмов, участвующих в восстановлении железа в различных природных биотопах. Основная роль, особенно в ранних исследованиях, отводилась анаэробным микроорганизмам. Значение анаэробов в процессах мобилизации и восстановления железа и марганца в почве в настоящее время хорошо установлена. Анаэробные микроорганизмы, по мнению В.И.Дуда (1976,1981), способны оказывать на состояние железа и марганца более энергичное воздействие, чем сильные экстрагенты и восстановители, которые растворяют имеющиеся в почве аморфные и кристаллические формы железа или редуцируют легко восстанавливаемые соединения марганца или железа.
Эти данные свидетельствуют о том, что микробиологические мобилизационные процессы затрагивают и запасы Мп и Ре , входящие в состав минералов. Процессы мобилизации железа и марганца наиболее активно осуществляются смешанной микрофлорой при инкубации нестерилизованных почв. Но высокой восстанавливающей способностью обладали также чистые культуры анаэробных бактерий из родов Clostridium и Desulfotomaculum, а из факультативных форм были активны спороносные бактерии рода Bacillus.
Б литературе встречается мало сведений об участии аэробных микроорганизмов в процессах восстановления переменновалентных элементов. Исследования, проведенные Б.Б.Шахобовой (1975,1976, 1981) в лугово-болотных почвах Гиссарской долины Таджикистана, позволили обнаружить аэробные микроорганизмы, относящиеся к роду ArthrobacterH микроскопические грибы родов Fusarium, Aspergillus и Penicillium, способные восстанавливать окисленную форму железа в виде Fe(0H)g. Процессы восстановления железа подобными культурами ранее не изучались. Роль аэробных микроорганизмов в процессах восстановления Fe исследовалась в работе Оттоу (ottow, . Klopotek , 1969). Многочисленные исследования свидетельствуют о значительном видовом разнообразии микроорганизмов, восстанавливающих гидроокись железа. Роберте (Roberts, 1947) выделил из почвы 265 культур, среди которых были актиномицеты, бактерии и дрожжи. Опыты проводились в анаэробных условиях. Из всех культур активной восстановительной способностью обладали две культуры Вас.роіутухаи Clostridium sp. , причем Bac.polymyxa восстанавливал гидрокись железа от 84 до 153 мг за 24 часа, тогда как Clostridium sp . -5мг Fe+ за то же время. Бромфилд (Bromfield, 1954), изучая способность восстанавливать железо у ряда чистых культур микроорганиз - 8 -лов, показал, что Bacillus polymyxa и Bacillus circulans проявляем себя как сильные восстановители, тогда как у бактерий рода Ischerichia, Aerobacter это свойство выражено гораздо слабее. Л.В. Калакуцкий и В.И.Дуда (1961) установили, что у почвенных микроорганизмов железо редуцируют чаще всего представители рода Pseudomo-nas и маслянокислые бактерии. А.Ю.Дараган (1967) показала, что существенную роль в формировании глеевого горизонта подзолистых [10чв, обогащенного двухвалентным железом, играют также микроорганизмы рода Pseudomonas. рудоносных озер Карельского перешейка Э.Д.Трошановым (1968) на модифицированной среде Бромфилда выделены в чистой культуре микро-эрганизмы, восстанавливающие окисленные соединения марганца и железа. Наиболее активные из них образовывали за 17-20 суток до 600 дг/л двухвалентного марганца и до 240 мг/л двухвалентного железа, исследования показали, что чаще всего встречаются формы, способ-ные восстанавливать только марганец, а микроорганизмы, восстанавливающие железо, одновременно восстанавливают и марганец. Большинство выделенных микроорганизмов относятся к роду Pseudomonas , встречаются представители рода Clostridium, Bacillus, Micrococcus. Все указанные микроорганизмы обладали регулирующей способностью лри развитии в микроаэрофильных или анаэробных условиях, хотя хорошо переносили присутствие кислорода в среде. Кроме того, они нуждались в органическом источнике углерода, используя различные сахара. В своих исследованиях Оттоу (ottow, 1968,1969,1970,1981) показал, что в природе существует множество различных железовос-станавливающих микроорганизмов и большинство их относится к семействам Enterobacteriaceae, Васі11асеае,Р8Є отоп їасеаеВосстановле-ние железа и других элементов с переменной валентностью не осуществляется узкоспециальной группой микроорганизмов, этой способностью обладают представители различных таксономических групп.
Восстановление железа в анаэробных условиях на минеральной среде в атмосфере водорода обнаружено у Pseudomonas sp.(Thawer e.t al., 1976; Балашова, Заварзин, 1979). Способность к восстановлению железа обнаружена и у аэробных хемолитотрофных бактерий Thio-bacillua thiooxidans,Thiobacillus ferrooxidans и Sulfolobus aci-docaldarius при их развитии в микроаэрофильных условиях (Brock , Gustafson,\ 1976). Надо отметить, что Sulfolobus acidocaldarius способна окислять элементарную серу в анаэробных условиях с образованием сероводорода, используя при этом Мо(УІ) в качестве акцептора электронов (Corale е.а., 1982). Эрлих (Ehrlich, 1980) из обогащенных К2СгО. - донных осадков реки Гудзон выделил устойчивый к хрому штамм Pseudomonas fluorescens . Этот штамм восстанавливаете!» до Сг+ при росте в аэробных условиях на различных источниках углерода. Из активного ила биовосстановителя, куда поступали бытовые сточные вода и промышленные стоки, была выделена чистая культура бактерий, способная использовать хроматы и бихрома-ты в качестве донаторов кислорода при развитии на органических веществах в анаэробных условиях. Подобрана питательная среда и изучены морфологические и культуральные свойства. Авторы показали, что восстановление хроматов и бихроматов происходит только в анаэробных условиях при участии выделенных микроорганизмов и при этом шестивалентный хром быстро переходит в трехвалентную форму. Культура была названа Pseudomonas dechromaticansCPoMaHeHKO, Корень-ков, 1977).
Роль сульфатредуцирующих бактерий в процессах коррозии металлов
Была сделана попытка выделить такую культуру. Для этого изучили топографию энзимов и переносчиков электронов. Исходя из топографии электронтранспортных компонентов вывели заключение, что дис-симиляторная сульфатредукция с водородом является векториальным восстановительным процессом, в котором водород окисляется на пе-риплазматической стороне, а сульфат восстанавливается до H2S на цитоплазматической стороне мембраны ( Kobayashi , 1969). Много работ посвящено изучению локализации дегидрогеназ и редуктаз в клетках сульфатвосстанавливающих бактерий ( Odom et al., 1980; Glick et al. , 1980; Martin et al. , 1980; Odom, Peck , 1981). Известно, что бактерии рода Desulfоvibrio содержат две различные гидрогеназы. Одна, связанная с мембраной, и другая, находящаяся в периплазматическом пространстве ( Martin et al. , 1980). Одом и Пек ( Odom, Peck , I981), изучая различные де гидрогеназы, ре-дуктазы и компоненты цепи переноса электронов, участвующих в дис-симиляторном восстановлении сульфата, показали, что они локализованы в периплазматическом пространстве, мембране и цитоплазме. б) Роль сульфатредуцирующих бактерий в процессах коррозии металлов
Каждая шестая доменная печь работает на коррозию - таков итог действия коррозии, приводящей к разрушению металлических конструкций. Коррозия - это процесс разрушения металлов вследствие химического, электрохимического или биохимического взаимодействия их с окружающей средой. Большая роль в разрушительном действии коррозии принадлежит микроорганизмам. Первые сведения о роли микроорганизмов в коррозийных разрушениях металлов появились в конце прошлого века. В настоящее время участие микроорганизмов в процессе коррозии металлов не вызывает сомнения. Среди микроорганизмов, участвующих в коррозийном процессе особое место занимают тионовые и сульфатредуцирующие микроорганизмы. Например, в США подземная коррозия железных труб, происходящая за счет деятельности сульфатредуцирующих бактерий, оценивается между 500 и 2000 млн.долларов в год (Greathouse, Wessel , 1954). Эти данные свидетельствуют о значительной роли микроорганизмов в процессе коррозии. Микробиологическая коррозия происходит различными путями: I) путем воздействия продуктов метаболизма микроорганизмов на металлическую поверхность; к ним (продуктам) относятся COg, HpS, ин , органические и неорганические кислоты; 2) путем образования органических продуктов, которые могут действовать как деполяризаторы или катализаторы коррозионных реакций; .3) когда коррозионные реакции являются частью метаболического цикла бактерий (Андреюк, Козлова, 1977),
В процессах коррозии могут принимать участие микроорганизмы, относящиеся к различным таксономическим группам. В большинстве случаев эти микроорганизмы создают агрессивные среды, в которых коррозионные процессы ускоряются. В зависимости от аэрации и насыщенности среды кислородом, коррозия бывает аэробной и анаэробной. Основным возбудителем анаэробной коррозии являются сульфат-редуцирующие микроорганизмы. Изучению этих микроорганизмов посвящено очень много работ ( Booth , 1964; Miller , 1980; Bell, Ыт , 1981; Васильева и др.,1982). Так, из топливного бака корабля были выделены микроорганизмы рода Desulfovibrio . С помощью метода потенциометрии снимали кривые поляризации на различных участках стали в ходе коррозии. Проведенные эксперименты показали, что скорость и характер коррозии сильно зависели от присутствия в среде даже небольших количеств сероводорода. Авторы предполагают, что действие анаэробных бактерий на коррозию стали осуществляется косвенным путем через образование продуктов метаболизма, и особенно сульфида (Salvaressa, Videla , 1980). Гард и другие ( Gard et al., 1980) изучали влияние стадий развития культуры, количества инокулята, рН среды, температуры на уровень коррозии нержавеющей стали двумя штаммами Desul-fovibrio desulfuricans.Наибольшие коррозионные потери образцов наблюдали в культуре D.desulfuricans в течение первых пяти дней, они в 2,5 раза превышали коррозионные потери в стерильной среде. Наиболее активной оказалась культура в возрасте 4-5 дней. Количество добавленного инокулята не влияло на уровень коррозии нержавеющей стали. Наиболее активно процесс коррозии протекал при рН 7,0 и при температуре 40С. Ингибиторами коррозии в этих условиях явились хроматы. Авторы полагают, что по степени коррозионной устойчивости металла можно распределить их в следующем порядке: алюминий, углеродистая сталь, цинк, латунь, медь, нержавеющая сталь. Под действием сульфатредуцирующих бактерий корродируют и хранилища для нефти. Так, Роберте (Roberts , 1969) исследовал причину коррозии трех стальных цистерн для долгосрочного хранения нефти, вышедших из строя после 6-8 лет. Коррозия имела вид глубоких и мелких питтингов. Продукты коррозии состояли из черной слизи, содержащей 0,15% сульфида железа и сульфатредуцирующих бактерий Desulfovibrio desulfuricans Большое значение придается сульфатвоостанавливающим бактериям в нефтяных пластах. Роль сульфатвосстанавливающих бактерий в нефтяной промышленности подробно изучена Е.П.Розановой (Розанова, 1964; Розанова и др.,1973а; Розанова и др.,19736; Розанова, Худякова, 1974; Розанова, Кузнецов, 1974; Розанова, 1978а) и С.И. Кузнецовым (1961,1967).
Так, например, исследование нефтяных месторождений Апшеро-на показало, что наиболее активно коррозия протекает по линии смешения пластовой и обогащенной сульфатами нагнетаемой воды, то есть там, где сульфатредукция только начинается. Когда оседает все двухвалентное железо, растворенное в пластовой воде, сероводород образует сплошной налет FeS на металле,и коррозия замедляется (Розанова и др.,1969).
Использование в качестве теста способности микроорганизмов к денитрификации и сульфатредукции
Исследование Текелийского свинцово-цинкового месторождения показало, что прозрачные, бесцветные шахтные воды и пробы руды имеют рН от 5,5 до 8. Исключение составил кристаллический налет на руде голубого цвета с рН I. Температура шахтных вод месторождения колебалась от 13 до 30С. Высокая численность десульфурирующих микроорганизмов обнаружена в пробах из капежей, которые проходят по трещинам внутри рудного тела, где вполне вероятны анаэробные условия. Пробы воды с рН 8-8,2 содержали от 476 до 69020 кл/мл сульфатредуцирующих бактерий (табл.1). Денитрифицирующие микроорганизмы встречались практически во всех пробах и численность их составила от Ю00 до 10000 кл/мл. Следует отметить, что денитрификаторы были обнаружены также в пробах со слабо-кислой реакцией среды (рН 5,5-6,5).
Обследование Зыряновского месторождения полиметаллических руд показало, что для этого месторождения характерны слабокислые значения рН шахтных вод 5,5-7,0, а температура воды колебалась от 5 до 18С (табл.2). На этом месторождении обращает внимание тот факт, что в шахтах довольно часто встречались зоны, имеющие запах сероводорода. Исследования на Джезказганском месторождении показали возможность биогенного образования сероводорода (Ляли-кова, Соколова, 1965). Образование сероводорода в рудном теле Зыряновского месторождения, по-видимому, таюке связано с деятельностью микроорганизмов, что подтверждается наличием в таких пробах большого количества десульфурирующих микроорганизмов. Тот факт, что образующийся сероводород находится в значительном количестве в несвязанном состоянии с металлами может быть объяснен тем, что руды Зыряновского месторождения очень упорны и поэтому контакт сероводорода с металлом может быть только по редким трещинам. Наибольшее количество сульфатвосстанавливающих микроорганизмов (2380 кл/мл) было найдено в наплывах черного цвета на руде. В пробах шахтных вод, проходящих сквозь рудное тело, где есть анаэробные условия, их численность составила от 952 до 1900 кл/мл. Как и в Текелийском месторождении денитрифицирующие микроорганизмы были найдены почти во всех пробах и число их доходило до Ю00 кл/мл.
Таким образом, обследование Текелийского и Зыряновского месторождений показало, что денитрифицирующие микроорганизмы встречаются в этих месторождениях повсеместно, тогда как распространение сульфатредуцирующих бактерий приурочено к определенным анаэробным условиям.
Изучение распространения десульфурирующих и денитрифицирующих микроорганизмов в водоемах Казахстана проводилось с целью последующего выделения полиредуцирующих микроорганизмов. Пробы отбирались в весенне-летний период, так как на этот период приходится наибольшее развитие микроорганизмов. Например, Тан и Овербек ( Tan, Overbeck , 1973), изучая экологию денитрифицирующих микроорганизмов в озере Плюсзее, пришли к выводу, что наибольшая активность денитрифицирующих микроорганизмов приходится в весенне-летние периоды. Пробы воды и ила, отобранные в Аральском и Каспийском морях, водохранилище канала Иртыш-Караганда и из Атлантического океана были любезно представлены нам сотрудниками лаборатории водной микробиологии Института микробиологии и вирусологии АН КазССР. Все водоемы отличаются друг от друга глубиной, температурным и солевым режимами, содержанием различных органических и неорганических соединений, что создает разнообразные экологические условия для развития микроорганизмов.
В Аральском море пробы воды были отобраны из центральной части моря и две пробы (точка 13 и 2) из Малого моря. Максимальная и минимальная глубина отбора проб была 20,5 м и 4,8 м соответственно. Микробиологический анализ обследованных проб Аральского моря показал, что численность десульфурирующих микроорганизмов составила от 1424 до 40840 тыс.кл/мл и увеличивалась с возрастанием глубины точки отбора проб. Так, если на глубине 8 м она составила 1424 кл/мл, то на глубине 20,5 м - количество суль фатредуцирующих бактерий достигло 40840 кл/мл. Количество денитрифицирующих микроорганизмов в Аральском море колебалось от 10 до Ю кл/мл и они распространены почти по всей водной толще водоема (табл.3). В Каспийском море количество сульфатредуцирующих бактерий достигало от 12852 до 60545 кл/м воды, а денитрифицирующих микроорганизмов от Ю00 до 10000 кл/мл воды. Надо отметить, что количество сульфатвосстанавливающих микроорганизмов в Каспийском море гораздо выше, чем в Аральском море (табл.3).
Способность микроорганизмов восстанавливать нитраты
После длительных перекрестных посевов проб из ряда природных источников в соответствии с разработанной методикой было выделено четыре штамма бактерий, восстанавливающих нитраты, сульфаты, трехвалентное железо и арсенаты.
Из шахтных вод Бакырчикского золото-мышьяковистого месторождения выделены два штамма - 18 и 28, из лечебной грязи озера Балпаш-Сор - штамм 126-4, из воды канала Иртыш-Караганда - штамм 39в-4. Столь необычное сочетание свойств аэробных и анаэробных микроорганизмов, заставило вначале предположить, что мы имеем дело с симбиотической ассоциацией микроорганизмов, в которой в зависимости от условий культивирования, получают преимущественное развитие аэробные или анаэробные формы. В связи с этим была принята попытка разделить предполагаемую ассоциацию на 2 или более штаммов, хотя при микроскопировании культуры всегда выглядели однородно. Работу проводили в отделе геохимической деятельности микроорганизмов Института микробиологии АН СССР.
Для проверки чистоты культур микроорганизмов использовали твердые и жидкие среды Штурм, Постгейта "В" с лактатом и пируватом, среду "Д" с пируватом или сукцинатом в качестве единственного источника органического вещества, среду Гильтая для де-нитрификаторов, РПА,МПА, сусло-агар, мясо-пептонный бульон (МПБ). Из отдельных колоний черного цвета на среде Штурм, с жидкой среды Гильтая и с РПА (скошенный агар) произведены посевы на все вышеперечисленные среды. После 2-3 дней инкубации все посевы были промикроскопированы. Дальнейшие перекрестные посевы на сусло-агар, МПА,МПБ и микроскопирование показали, что культура однородна и не имеет спутников. В дальнейшем, при посеве одной колонии с МПА в агаризованную среду Постгейта "В" с пируватом и лактатом на третий день появились вновь крупные черные колонии микроорганизмов, способные восстанавливать сульфаты и нитраты.
Микроскопирование и перекрестные посевы на все среды клеток, взятых из-под колонии, выросшей на МПА, вновь подтвердило чистоту культур. При пересеве чистой культуры, выросшей на поверхности ры-бо-пептонного агара в чашке Петри на среду с нитратом, наблюдалось подщелачивание раствора от рН 7-7,2 до рН 8-9 и исчезновение нитратов. При посеве этой же культуры на среду с сульфатом в анаэробных условиях, наблюдалось почернение среды и образование отдельных черных колоний микроорганизмов, а на жидкой среде -образование сероводорода. Многократные перекрестные пересевы показали, что эти штаммы в чистой культуре способны расти в аэробных условиях на РПА, как факультативные анаэробы - на среде для денитрифицирующих и как строгие анаэробы - на среде для суль-фатредуцирующих бактерий. Была проверена возможность роста культур микроорганизмов на среде с ацетатом натрия для отделения спутников от истинных сульфатредуцирующих бактерий в соответст Приношу глубокую благодарность д.б.н.Г.А.Дубининой и к.б.н. Е.П.Розановой за помощь и ценные советы при определении чистоты культурывий с рекомендациями (Розанова, Назина, 1981). Микроорганизмы хорошо развивались на среде с ацетатом и последующий пересев из одной колонии на среду Штурм показал, что культуры не утратили способности к сульфатредукции. Приготовление микроскопических препаратов клеток, выращенных на РПА и взятых с поверхности колоний и под колонией микроорганизмов показал, что культура однородна. В связи с тем, что эти микроорганизмы проявляли свойства как аэробных, так и анаэробных форм, для идентификации и более полного изучения выделенных бактерий были исследованы их свойства и характер роста на различных органических субстратах при развитии в аэробных условиях, а также потребности в ростовых веществах при развитии в анаэробных условиях, характерные для истинных сульфатредуцирующих микроорганизмов. С известной долей условности исследованные микроорганизмы идентифицировали как аэробные формы. Выделенные микроорганизмы отличались некоторыми культурально-морфологическими свойствами и поэтому были разделены на 2 группы, в одну из которых вошли штаммы 18 и 126-4, а во вторую - штаммы 28 и 39в-4. б) Характеристика культуры штаммов 18 и 126-4 при аэробном росте Микроорганизмы хорошо растут на рыбо-пептонном агаре, в аэробных условиях в чашках Петри с образованием округлых колоний, коричневатого и кремового цвета. Грамотрицательные, подвижные, неспорообразующие палочки с одним полярным жгутиком. Клетки штамма 18 имеют размеры 2 х 0,5-0,7 мкм, а штамм 126-4 имеет размеры 1,5 х 0,4-0,6 мкм. Оптимальное значение рН в пределах 7,2-8,5. Температурный оптимум 25-30С. но может расти и при 42С. При 4С роста нет. Хемоорганотрофы. Оксидазоположительны. В качестве единственного источника углерода используют глюкозу, фруктозу, ксилозу, арабинозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, декстрозу, глицерин, сорбит, маннит, этанол. Штамм 126-4 не использует глицерин, декстрозу, сорбит и этанол. В качестве источника азота в аэробных условиях используют пептон, мочевину, аспарагин. Восстанавливают нитраты до Ир . Протеолитической активностью не обладают, гидролизуют крахмал. Слабо расщепляют жиры. При росте на мясо-пептонном бульоне образуют скудный осадок, выделяют небольшие количества щ и H?S . Индол не образуют. Содержание Г+Ц в ДНК для штамма 18 - 62,5 мол. %.
