Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Трихомониаз и трихомонадный дисбактериоз в микроэкосистеме влагалища . 14
1.1. Микроэкосистема влагалища в норме 14
1.1.1. Микрофлора влагалища 15
1.1.2. Биохимический состав влагалищной жидкости 17
1.1.3. Особенности местного иммунитета влагалища 19
1.1.4. Морфологические и метаболические особенности эпителия влагалища 20
1.2. Взаимосвязь дисбактериоза влагалища и трихомониаза 21
1.2.1. Клинические и эпидемиологические особенности трихомониаза 22
1.2.2. Особенности биологии и метаболизма влагалищной трихомонады 25
1.3. Эпителиотоксическая активность трихомонад .30
1.4. Состояние иммунитета при трихомониазе 33
РЕЗЮМЕ 35
Глава 2. Материалы и методы исследования 37
2.1. Общая характеристика обследованных групп 37
2.2. Гинекологические методы исследований 38
2.2.1. Методика определения кислотности содержимого влагалища 39
2.2.2. Методика аминового теста 39
2.2.3. Отбор образцов материала для биохимических исследований 40
2.3. Лабораторные исследования 41
2.3.1. Оборудование и применяемая техника 41
2.3.2. Микробиологические методы исследований 41
2.3.3. Биохимические методы исследования ВЖ 42
2.3.3.1.Методы определения показателей белкового обмена 42
2.3.3.2. Методы определения показателей водно-электролитного и минерального обменов 43
2.3.3.3. Метод определения содержания глюкозы 46
2.3.3.4. Методы определения показателей липидного обмена 46
2.3.3.5. Методы определения активности ферментов 47
2.3.3.6. Методика определения гликогена в клетках эпителия влагалища
2.4. Методы определения факторов неспецифической резистенции ВЖ 52
2.4.1. Методикаопределения содержания slgA во ВЖ 52
2.4.2. Метод определения содержания перекиси водорода во ВЖ..53
2.5. Методы сбора и математико-статистической обработки результатов исследований 53
Глава 3. Характеристика изменений основных биохимических показателей влагалищной жидкости при остром трихомониазе и в периоде реконвалесщнции 55
3.1. Общая характеристика влагалищных выделений 55
3.1.1. Результаты исследования кислотности ВЖ 58
3.1.2. Результаты исследования аминового теста 60
3.2. Результаты исследования биохимического состава ВЖ 61
3.2.1 Результаты исследования показателей белкового обмена во ВЖ 62
3.2.2. Результаты исследования показателей минерального обмена во ВЖ 64
3.2.3. Результаты исследования содержания глюкозы во ВЖ 70
3.2.4. Результаты исследования показателей липидного обмена во ВЖ 72
3.2.5. Результаты исследования активности ферментов во ВЖ .73
Глава 4. Результаты микробиологических, иммунологических и цитологических исследований при остром трихомониазе и в периоде реконвалесценции 81
4.1. Результаты исследования показателей состояния эпителия влагалища 81
4.2. Характеристика микробного пейзажа влагалища 83
4.2.1. Результаты микроскопии нативного препарата содержимого влагалища 84
4.2.2. Результаты микроскопии влагалищного мазка 85
4.2.3. Результаты культуральных исследований содержимого влагалища 86
4.3. Результаты исследования факторов неспецифической резистентности во ВЖ при остром трихомониазе и в периоде реконвалесценции 88
4.3.1.Результаты исследования уровня перекиси водорода во ВЖ 88
4.3.2. Результаты исследования уровня slgA во ВЖ 89
Глава 5. Направления оптимизации терапии острой трихомонадной инвазии , и профилактика трихомонадного дисбактериоза влагалища 92
5.1. Оптимизация антипротозойной терапии 92
5.2. Коррекция трихомонадного дисбактериоза влагалища 94
Обсуждение 97
Выводы 103
Практические рекомендации 104
Список литературы
- Биохимический состав влагалищной жидкости
- Гинекологические методы исследований
- Результаты исследования биохимического состава ВЖ
- Характеристика микробного пейзажа влагалища
Введение к работе
Актуальность проблемы. В последние годы трихомониаз уверенно занимает ведущее место в структуре инфекций передающихся половым путем (ИППП) и поражает в основном социально активную группу населения (Адаскевич В.П., 2001; Кулаков В.И., 2003).
В мире ежегодно заболевает около 170 миллинонов человек (Hernandez-Gutierrez R., Aliva-Gonzalez L., Ortega-Lopez J. et al., 2004; Мол очков В. A., 2001), при этом в России регистрируется 279 случаев на 100 тыс. населения (Кулаков В.И., 2003). Важность проблемы определяется не только опасностью для здоровья и эпидемиологической значимостью, но и тяжелыми осложнениями, выражающимися мужским и женским бесплодием (el-Sharcowy I.M., Hamza S.H., el - Sayed M.K.,2000; El-Shazly A.M., El-Naggar H.M., Soliman M. et al., 2001), патологией беременности и родов, рождением неполноценного потомства, возникновением психической и сексуальной дисгармонии в семье (Temesvari P., Kerekes A., Tege A., Szarka К., 2002; Simpson Т., Ivey 1,2004).
Подобная динамика определяется наличием ряда причин. Благодаря не достаточно эффективным схемам антибиотикотерапии и биологическим особенностям трихомонад формируются устойчивые к этиотропным препаратам штаммы микроорганизмов. Этот феномен во многом определяет развитие хронических форм заболевания, затруднений в диагностике и лечении трихомониаза, а также стойких нарушений биоценоза влагалища (Hrdy I., Cammack R. et al, 2005). Отрицательные результаты терапии в плане сохранения синдрома- патологических белей во многом определяются рутинностью терапевтических схем, традиционно ориентированных в основном на антипротозоиныи компонент, без учета других аспектов взаимоотношений микро- и макроорганизма.
Важной стороной терапевтической стратегии при трихомонадной инвазии являются вопросы восстановления нормального состояния микроэкосистемы влагалища после санации от возбудителя. Известно, что до 84% женщин перенесших острую форму трихомониаза в последующем обречены на развитие стойкого дисбиотического состояния микроэкосистемы влагалища, во многом напоминающего бактериальный вагиноз (БВ) [Van der Meijden et al., 1989]. Трихомонадный дисбактериоз влагалища (ТДВ), БВ и хронический трихомониаз имеют много похожих симптомов. Вероятно, по этой причине наличие в анамнезе трихомониаза часто мотивирует врача на постановку соответствующего диагноза, что является причиной гипердиагностики и необоснованного назначения антипротозойных лекарственных схем.
Вследствии наличия у ассоциированной с трихомонадным дисбактериозом влагалища анаэробной микрофлоры перекрестной чувствительности к препаратам 5-нитроимидазолового ряда достигается краткосрочный положительный эффект от терапии. Тем не менее, последующее восстановление синдрома патологических белей часто является причиной затруднений в диагностике и лечении. Подобные нарушения часто являются причиной формирования трудноразрешимых семейно-бытовых проблем и конфликтов. Именно по этому определение закономерностей развития ТДВ представляет важность не только для медицинской науки, но и для всего общества.
Цели и задачи. Целью настоящего исследования явилось определение лабораторных и клинических особенностей развития трихомонадного дисбактериоза влагалища, а также разработка методов его коррекции.
Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи:
1. Изучить показатели, характеризующие состояние
микроэкосистемы влагалища при остром трихомониазе и в периоде
реконвалесценции.
Определить значимость изменения значений показателей микроэкосистемы влагалища в формировании трихомонадного дисбактериоза влагалища.
Разработать патогенетически обоснованную схему терапии дисбактериоза влагалища у женщин репродуктивного возраста, больных острым трихомониазом.
Положения, выносимые на защиту:
1. Острая трихомонадная инвазия приводит nk выраженным
нарушениям в микроэкосистеме влагалища, проявляющимся в изменении
функциональной активности эпителия, состава влагалищной жидкости,
микробного пейзажа.
При остром трихомониазе наиболее значимымые изменения в составе влагалищной жидкости установлены в концетрации глюкозы, белка, мочевины, меди, железа, активности ферментов АсАт, АлАт, ЛДГ, щелочной фосфатазы, амилазы, значениях рН.
После антипротозойной терапии, в периоде реконвалесценции у 80,3% пациенток сохраняются стойкие изменения показателей микроэкосистемы влагалища и микробного пейзажа, что приводит к формированию характерного сисмптомокомплекса дисбактериоза влагалища.
4. Антипротозойная терапия, включающая назначение
антианаэробных препаратов и пробиотиков предотвращает развитие
трихомонадного дисбактериоза влагалища.
Научная новизна. Впервые комплексно изучены изменения в основных звеньях микроэкосистемы влагалища при острой
трихомонадной инвазии и в периоде реконвалесценции у небеременных женщин репродуктивного возраста.
Установлено, что в периоде реконвалесценции даже после эффективного этиотропного лечения создаются условия для формирования дисбактериоза влагалища с характерным симптомокомплексом.
Определена степень чувствительности трихомонад к основным антипротозойным препаратам и их комбинациям.
Разработан лечебный антипротозойно-реабилитационный комплекс, позволяющий предотвратить развитие трихомонадного дисбактериоза влагалища.
Практическая значимость работы заключается в получении данных, расширяющих представление о роли трихомонад не только как специфического возбудителя вульвовагинита, но и как причинного фактора формирования трихомонадного дисбактериоза влагалища. Доказано, что острая трихомонадная инвазия вызывает изменения во всех звеньях микроэкосистемы влагалища. Предложенная схема терапии, включающая этиотропные противотрихомонадные средства и средства реабилитации микроэкосистемы влагалища существенно повышает эффективность лечения.
Внедрение результатов исследования в практику. Методика комплексной оценки изменений в микроэкосистеме влагалища после острой трихомонадной инвазии и реабилитационный принцип терапии внедрены в клиническую практику:
- кафедр инфекционных болезней и акушерства и гинекологии
Военно-медицинской академии:
КВД 1 Центрального района Санкт-Петербурга;
женских консультаций Санкт-Петербурга № 9 и 22.
Оптимизация диагностического и лечебного процесса позволили существенно снизить частоту формирования трихомонадного дисбактериоза влагалища.
Результаты исследования используются в программах подготовки врачей-интернов, клинических ординаторов, аспирантов, слушателей курсов повышения квалификации и переподготовки врачей Военно-медицинской академии.
Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на научно-практической конференции «Вопросы женского и мужского репродуктивного здоровья» (Санкт-Петербург, 2006), научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии в урологии и гинекологии» (Санкт-Петербург, 2007), 2-й Российской конференции «Иммунология репродукции: теоретические и клинические аспекты» (Сочи,2007), XI Всероссийском научном форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Молекулярные основы иммунорегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии» (Санкт-Петербург, 2007), на сборах военных гинекологов (Санкт-Петербург, 2006,2007), на начно-практической конференции «Актуальные проблемы диагностики, посвященной 115-летию кафедры клинической биохимии и лабораторной диагностики Военно-медицинской академии, на межкафедральном совещании в Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова (Санкт-Петербург, 2008).
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, 5-й глав, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста, содержит 13 таблиц и 22 рисунка. Указатель литературы состоит из 182 источников (41 отечественных и 141 зарубежных).
Биохимический состав влагалищной жидкости
Влагалищные выделения содержат органические и неорганические вещества. Среди электролитов обнаруживаются ионы Na, К, Mg и хлора (Молчанов О.Л., Кира Е.Ф., 1997]. Концентрация Na+, К+ и хлора во влагалищных выделениях значительно отличается от таковых в плазме крови. Содержание Са и К во влагалище в 6 раз превышает их уровень в плазме крови. Уровень Na+ и хлора составляет соответственно 46 и 61% от уровня в плазме [Mende Н .Е. etal., 1990]. Доказано, что подобное соотношение концентраций электролитов является результатом процессов регуляции осмолярности и кислотности влагалищной среды, прежде всего реакций катализируемых ферментом карбоангидразой в метаболически активных слоях эпителия влагалища (Молчанов О.Л., 2000).
Известно, что большую роль в регуляции метаболизма выполняют такие микроэлементы, как железо, медь, цинк. Они занимают важное место в обеспечении полноценности процессов фертильности и овуляции, поддержании факторов неспецифической резистентности организма [Авцын А.П., 1991, Скальный А.В., 2001]. Эти микроэлементы также обнаружены во влагалищной жидкости. Установлено, что при бактериальном вагинозе содержание их во ВЖ существенно меняется (Молчанов О.Л., Карпищенко А.И., Кира Е.Ф., Берлев И.В., 1998).
Среднее количество белка в содержимом влагалища по сравнению с плазмой крови невелико, составляет 1,8 — 2,0 г/л. Его уровень зависит от состояния слизистой оболочки, синтетических и цитолитических процессов, а также наличия воспалительной реакции.
При электрофоретическом разделении белков влагалищного отделяемого определены альбумин, а-1-антитрипсин, а-2-гаптоглобин, а- 2-макроглобулин, (3-липопротеины, орозомукоид, церулоплазмин, а также иммуноглобулины- классов A, G, М , лактоферрин и трансферрин [Briese V.etal., 1982].
Лактоферрин и трансферрин относятся к группе сидерофилинов. Они ограничивают доступность железа бактериям, прочно связывая этот микроэлемент. В связи с этим указанные белки участвуют в реализации естественного иммунитета. Особенно важно присутствие во влагалищной жидкости лактоферрина, поскольку он сохраняет способность удерживать железо в кислом диапазоне рН, характерном для содержимого влагалища в норме. Микроорганизмы используют этот микроэлемент для обеспечения синтеза главным образом железосеропротеинов и цитохромов [ГоттшалкГ., 1982].
Молочная, уксусная, а также летучие жирные кислоты с короткой углеродной цепочкой (Сз - Сб) также являются важными составляющими содержимого влагалища. Они образуются из эпителиального гликогена. Ацидофильные микроорганизмы ферментируют углеводы до молочной и уксусной кислот [Ефимов Б.А., 2002; Олина А.А., 2002]. Кислоты являются нормальной физиологической составляющей влагалищной среды и во многом обеспечивают поддержание физиологического уровня рН. В норме рН соответствует кислому диапазону в пределах 3,8 - 4,2 [Анкирская А.С., 2005; Torok M.R., et al., 2007]. Кроме молочной и уксусной кислот методом газожидкостной хроматографии определено наличие пропионата, бутирата и сукцината [Осипов 1995]. При дисбактериозе влагалища установлено повышение концентрации короткоцепочечных жирных кислот СЗ - Сб (Элькин Г.И., Молчанов О.Л., Кира Е.Ф., 1998). Состояние местного иммунитета влагалища чрезвычайно важно, поскольку определяет потенциал ответа при первичном инфицировании и перспективы хронизации процесса. Во влагалище обнаружены иммуноглобулины классов A,M,G [Медведев Б.Ф., Долгушина В.Ф., 1989; Kutteh W.H., Mestecky J., 1999]. Иммуноглобулины секретируются плазматическими клетками, располагающимися в субэпителиальном слое маточных труб, эндо- и эктоцервикса, матки и влагалища. Значительная часть Ig G попадает во влагалищное отделяемое из кровеносной системы [Wira C.R., 2005].
Антитела препятствуют прикреплению бактерий или вирусов к клеточным мембранам. Они являются пусковым фактором для системы комплемента, которая принимает участие в уничтожении чувствительных микроорганизмов, и стимулируют фагоцитарную активность резидентных макрофагов и нейтрофилов (Фримель X., Бройк Й., 1986; Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989).
Гинекологические методы исследований
Клиническое обследование начинали подробного сбора анамнеза болезни и жизни. При этом особое внимание уделяли сведениям о наличии воспалительных и/или сексуально-трансмиссионных заболеваний, использования антибиотиков и гормональных препаратов, а также рациональности их назначения. При объективном обследовании оценивали общее состояние, выполняли гинекологические и специальные исследования.
Клиническое обследование завершали отбором проб материала для лабораторных исследований. В процессе гинекологического обследования применяли стандартизованные приемы и манипуляции, которые заключались в следующем. В начале осматривали наружные половые органы для исключения вульвита и выявления выделений из преддверия влагалища. Бимануальному исследованию внутренних гениталий всегда предшествовал осмотр влагалища и шейки матки с помощью стерильных зеркал. Визуально производили оценку количества, цвета и других характеристик содержимого.
Производили взятие материала для микробиологических исследований. Часть нативного материала наносили стерильным ватным тампоном на обезжиренные предметные стекла, которые после подсушивания на воздухе использовали для последующего окрашивания и микроскопии. После приготовления мазков производили смыв теплым физиологическим раствором, часть которого использовали для световой микроскопии с целью обнаружения ключевых клеток, трихомонад, псевдогифов грибов, микроорганизмов рода Mobiluncus sp. и лейкоцитов. После удаления остатков физиологического раствора в области заднего свода влагалища размещали стерильный гигроскопический тампон, обеспечивающий сбор содержимого влагалища для последующих исследований.
Принцип метода: в зависимости от кислотности исследуемой биологической жидкости окраска индикаторной бумаги изменяет окраску. Согласно стандартной тест-шкале производится учет результатов.
Определение кислотности содержимого влагалища осуществляли с помощью универсальной индикаторной бумаги (Lachema, Чехия) непосредственно во время осмотра на зеркалах и с использованием рН-метра "LKB" (Pharmacia, Швеция) при отсроченном исследовании полученных смывов со стенок влагалища.
Принцип метода : заключается в том, что при добавлении 10% раствора гидроксида калия биогенные амины переходят в летучую фазу, что и определяет появление или усиление резкого неприятного запаха "гниющей рыбы". Летучие амины - продукты метаболизма строгих анаэробных микроорганизмов. Оценку результатов анализа проводили полуколичественным методом, предложенным Е.Ф. Кира в 1995 г. (табл.1.). Ватный тампон гигроскопичностью в 2 мл, размещаемый во влагалище, предварительно взвешивали и хранили в бакпечатке. После 24-часовой экспозиции тампон удаляли и помещали в бакпечатку. Полученный материал доставлялся в лабораторию для последующей обработки и исследований. Тампон, не вынимая из бакпечатки, взвешивали и определяли массу адсорбированного материала. После прибавления 5-кратного объёма стерильного физиологического раствора хлорида натрия и 30-минутной экспозиции на шейкере при частоте покачивания 120 раз в минуту, производили отбор исследуемого материала в центрифужную пробирку. Для разделения клеточной и жидкой фаз пробы центрифугировали в течение 10 мин при 2000 об/мин. Полученную надосадочную жидкость помещали в пластиковые пробирки и до исследований хранили в жидком азоте при температуре - 273 С. Из осадочной фракции делали мазки для последующего исследования показателей функции эпителиальных клеток.
Результаты исследования биохимического состава ВЖ
Влагалищная жидкость состоит из микроорганизмов, клеток эпителия и жидкой фазы. Она имеет в своем составе вещества, по содержанию которых можно судить о состоянии микроэкосистемы влагалища в целом. При различных патологических состояниях, в том числе и при трихомониазе, содержание метаболитов может изменяться, что имеет диагностическую значимость.
Согласно полученных нами данных содержание белка во влагалищной жидкости у женщин первой группы составляет 1,88 ± 0,06 г/л, тогда как при острой форме трихомонадной инвазии концентрация белка достоверно выше (р 0,01) и соответствует 4,48 ±0,17 г/л. В периоде реконвалесценции уровень белка во влагалищной жидкости также был достоверно повышен и составил 2,41+ 0,11 г/л (р 0,01).
По нашему мнению повышенное содержание общего белка во ВЖ при остром трихомониазе связано в первую очередь с лейкореей. Повышение концентрации белка в период посттрихомонадной реконвалесценции может быть вызвано не только сохранявшейся в ряде случаев повышенной лейкоцитарной реакцией влагалищного мазка, но и увеличением количества микроорганизмов, а также усилением процессов деградации эпителиальных клеточных слоев влагалища и шейки матки.
Результаты исследования содержания мочевины во ВЖ Мочевина является конечным продуктом метаболизма белков и нуклеиновых кислот. На уровне организма синтез ее происходит главным образом в печени. Являясь осмотически активным метаболитом, мочевина во многом определяет водно-электролитный баланс биологической жидкости. Динамика уровня мочевины во ВЖ Согласно полученных нами данных в первой группе обследованных уровень мочевины во ВЖ составляет 22,47 + 1,82 ммоль/л, при острой форме трихомонадной инвазии этот показатель достоверно не отличался от нормальных значений и составил 23,15+2,12 ммоль/л. В период пострихомонадной реконвалесценции уровень мочевины во ВЖ был достовено ниже значений в первой и второй группах обследованных и составил 16,11 + 1,44 ммоль/л (р 0,05).
Результаты исследования содержания ионов меди во ВЖ Медь в клетках организма человека участвует в обеспечении биохимических процессов связанных с транспортом электронов в дыхательной цепи, она входит в состав активных центров ряда ферментов. Результаты исследования содержания ионов меди во влагалищной жидкости представлены в таблице 3 и рис.6.
Согласно полученных нами данных концентрация ионов меди во влагалищной жидкости в первой группе обследованных составляет 26,64 + 5,03 мкмоль/л. При острой трихомонадной инвазии этот показатель соответствовал уровню 16,11+4,18 мкмоль/л. В третьей группе пациенток значения составили 5,02+ 0,93 мкмоль/л, достоверно отличаясь (р 0,01) от контрольных значений и показателей во второй исследуемой группе.
Результаты исследования содержания ионов железа во ВЖ Железо в клетках организма выполняет ряд важнейших функций: обеспечивает окислительно-восстановительные реакции, формирует активные центры ферментов, во многом определяет степень иммунологической защиты. Результаты исследования содержания ионов железа во влагалищной жидкости представлены в таблице 3 и рис.7.
Согласно полученных нами данных в первой группе обследованных концентрация ионов железа во ВЖ составляет 388,59 ± 32,38 мкмоль/л. При остром трихомониазе этот показатель был достоверно ниже и соответствовал 204,83 ± 12,22 мкмоль/л. (р 0,01). В группе реконвалесценток этот показатель еще более снижался и соответствовал значениям в 176,43+ 38,40 мкмоль/л (р 0,01). 450400350300 250о1 2001 150100500 здоровые о.трих. реконвал. Рис.7.Динамика содержания железа во ВЖ
Известно, что железо необходимо большинству бактерий, особенно трихомонадам и анаэробам, для обеспечения пластических и энергетических процессов. Снижение концентрации ионов железа во ВЖ во второй и третьей группах может происходить вследствие повышенного его потребления трихомонадами и гиперколонизированными анаэробными микроорганизмами.
Результаты исследования содержания ионов цинка во ВЖ Результаты исследования содержания ионов цинка во влагалищной жидкости представлены в таблице 3 и рис.8.
Результаты исследования содержания ионов кальция во ВЖ В биологических жидкостях концентрация кальция относительно постоянная величина. Кальций распределяется в трех фракциях: ионизированной, связанной комплексной связью с неорганическими кислотами, связанной с белками, преимущественно с альбумином. При ощелачивании биологической жидкости доля связанного кальция увеличивается, а при закислении возрастает содержание его ионизированной формы. Биологически активным является только ионизированный кальций. Он оказывает влияние на проницаемость биологических мембран, необходим для активации полиморфноядерных лейкоцитов во всех формах их функциональной деятельности.
Этот факт можно объяснить тем, что в посттрихомонадном периоде многократно повышается титр микроорганизмов - представителей влагалищной микрофлоры, активно использующих глюкозу в процессах брожения. Гиперколонизированная анаэробная микрофлора в результате метаболизма в основном образует короткоцепочечные жирные кислоты. Они не могут использоваться эпителием влагалиша в процессах глюконеогенеза и гликогеногенеза.
Характеристика микробного пейзажа влагалища
Стабильность микроэкосистемы влагалища во многом зависит от присутствия резидентных микроорганизмов. В норме комплекс ацидофильной микрофлоры (палочка Додерлейна) определяет сбалансированное равновесие, содружественные взаимоотношения между микроорганизмами. Представители нормальной микрофлоры в результате жизнедеятельности, обеспечения пластических и энергетических процессов продуцируют ряд субстанций, определяющих гомеостаз микросреды влагалища и защиту от проникновения патогенной флоры. Нормоценоз свидетельствует об отсутствии дисбактериоза или колонизации во влагалище представителей других микробиологических сообществ, резидентно проживающих в других полостях и органах организма. В целом бактериоценоз влагалища - сложная микроэкологическая система, все участники которой, находясь в строго сбалансированном равновесии и симбиозе, обеспечивают так называемое состояние эубиоза. Важной составляющей, обеспечивающей компенсированность полноценной микрофлоры влагалища является достаточная функциональная активность эпителия и собственно компонентный состав и биофизические параметры влагалищной жидкости. При инфицировании среды влагалища специфическими микроорганизмами, а также наличии условий для формирования инфекционного процесса развивается специфическая воспалительная реакция. К сожалению, использование антибактериальных препаратов не может гарантировать восстановление всех нарушенных звеньев микроэкосистемы влагалища в рамках нормоценотической картины. Антибиотики воздействуют на чувствительные микророрганизмы, в том числе травмируя сохранившийся пул резидентной микрофлоры. В результате формируется дисбиоз, проявляющийся именно дисбактериозом органа с характерным симптомокомплексом. Нарушение функций нормальной микрофлоры, наблюдающееся при дисбактериозе, приводит к десинхронизации метаболических и физиологических функций органа и организма в целом.
С этих позиций исследование состояния микробиологического сообщества влагалища женщин при острой трихомонадной инвазии и после проведенного рациональной этиотропной терапии имеет большую актуальность.
При микроскопическом исследованим нативного препарата влагалищной жидкости на фоне острой трихомонадной инвазии определены выраженные признаки воспаления. При увеличении 400 количество лейкоцитов составляло 50 — 70 — 100 и более в поле зрения. Лейкоцитарные конгломераты часто формировались вокруг трихомонад, в этом случае для них характерно было наличие маятникообразной подвижности.
В препаратах определяли признаки цитолиза, а именно, наличие свободно лежащих клеточных ядер, клеточный детрит. При остром трихомониазе патогномоничным является обнаружение в нативном мазке живых трихомонад. Установлено, что в ряде случаев имеет место прогрессивно поступательное перемещение. Тем не менее, встречаются формы, для которых характерно слабо заметные колебательные движения. Нами установлено, что для прогрессивно подвижных форм (74%) характерным был диапазон рН ВЖ от 4,8 и выше. Практически все слабоподвижные трихомонады (26%) были обнаружены при более высоких значениях кислотности влагалищной жидкости. Результаты микроскопии влагалищного мазка В результате проведенных микроскопических исследований в нативных препаратах у всех обследованных женщин второй группы были обнаружены характерные подвижные формы трихомонад. На основании этого и характерного симптомокомплекса вульвовагинита был определен диагноз - острый трихомониаз. Для более детальной оценки состояния микрофлоры и эпителиальных клеток проводилась микроскопия фиксированных окрашенных влагалищных мазков. Результаты этих исследований представлены в таблице 6.
При световой микроскопии у всех женщин с острой трихомонадной инвазией определялись характерные признаки воспаления, которые проявлялись умеренной и выраженной лейкорреей (50 - 100 и более лейкоцитов в поле зрения) и характерными цитолитическими реакциями в виде вакуолизированной цитоплазмы клеток эпителия, свободно лежащих ядер и фрагментов клеточных мембран.
В периоде реконвалесценции при микроскопии мазка также выявляли признаки цитолиза, при уменьшении выраженности воспалительной реакции. Лейкоррея или воспалительный тип мазка (от 20 до 50 лейкоцитов в поле зрения) определялась у 12 (19,7%) пациенток. Вероятно, развитие острого процесса при трихомониазе не способно в короткий после инфицирования промежуток времени существенно нарушить пул, продуцирующих перекись водорода, ацидофильных лактобактерий. Тем не менее, разрущение эпителиальных слоев и модификация состава ВЖ способны модифицировать микробиологический спектр влагалища. Таким образом, в результате проведенных исследований обнаружены существенные изменения в микробиологическом сообществе влагалища женщин при трихомонадной инвазии и в переод реконвалесценции. Установлено, что после проведенной эффективной антипротозойной терапии в периоде реконвалесценции имеют место существенные нарушения в плане формирования дисбактериоза влагалища. Эти изменения выражаются в значимом снижении титра резидентной ацидофильной микрофлоры при одновременной колонизации влагалища представителями кокко-бацилярными микроорганизмами. Вероятно, эти микроорганизмы относятся к семейству строгих анаэробов, за что свидетельствует отсутствие выраженного роста на обычных питательных средах при характерной для гиперколонизации картине микробиологического мазка.
