Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. SAICAR-синтаза из дрожжей Saccharomyces revisiae - фермент, катализирующий седьмую стадию синтеза пуриноновых тслеотидов. Бкосинтез пуриноновых нуклеотидов является жизненно важный кшессом в метаболизме живых клеток, в связи с чем хорошо изучен юхимически и гинетически. Однако, до настоящего времени единственным из грментов биосинтеза, для хоторого методом рентгеноструктурного анализа была щучена трехмерная атомная модель, является аденилсукцинат синтетаза, нггролирующая одиннадцатую стадию синтеза в Е. coli.
SAICAR-синтазы выделены более чем из десяти различных источников, для большинства из них определена аминокислотная последовательность. ADE1 н, кодирующий SAICAR-синтазу в дрожжах Saccharomyces cerevisiae, тонирован и экспрессирован, но структурно-функциональные исследования ермента, в частности, методом направленого мутагенеза, не проводились из-за гсутствия данных о его пространственной структуре.
Данное ренггеяоегрукгуряое исследоваЕше SAICAR-синтазы юсобствует изучению механизма ферментативных реакций синтеза, проходящих образованием амидной связи, выявлению структурных мотивов, отвечающих за ?язывание нуклеотидов в нуклеотид-зависимых белках, а также исследованию AICAR-синтаз из других организмов с помощью метода молекулярного смещения.
ЦЕЛЬ. РАБОТЫ заключалась в определении пространственной груктуры SAICAR-синтазы из дрожжей Saccharomyces cerevisiae методом ентгеноструктурного анализа с разрешением 1.9 А.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ состоит в следующем:
Впервые определена пространственная структура SAICAR-синтазы, проведен нализ вторичной и третичной структуры молекулы.
Проведено сравнение 11 первичных структур SAICAR-синтаз из различных сточников. Выделены 24 эволюционно консервативных аминокислотных остатка і определено их расположение в молекуле фермента.
Проведено сравнение пространственной структуры SAICAR-синтазы с ізвестнами структурами других нуклеотид-зависимых белков.
. На основе анализа полученной пространственной структуры определено іаиболее вероятное расположение субстратов в молекуле SAICAR-синтазы.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАРОТЫ заключается в том, что юлученные результаты являются основой для шучения механизма действия рермента путем исследования структур, его комплексов с субстратами и их анало-
іами. Необходимость детального понимания механизма действия фермент обуславливается потребностью в разработке терапевтических препаратої способных влиять на скорость деления живых клеток.
ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликованы сек< научных работ. Список публикаций приведен в конце автореферата.
ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация состоит из введения, пяти гла выводов, списка цитируемой литературы и приложений, рна изложена на. страницах, содержит рисунков и таблиц.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты работы докладывались на Х\ Международном кристаллографическом конгрессе (Китай, 1993), \ Международной конференции по кристаллизации биологических макромолек) (Япония, 1995), XVII Международном кристаллографическом конгрессе (СІШ 1993).