Введение к работе
Актуальность проблемы
Ревматоидный артрит (РА) является одним из самых распространенных хронических воспалительных заболеваний суставов, которое поражает людей наиболее трудоспособного возраста, приводя к ранней инвалидизации и снижению продолжительности жизни больных (Е.Л. Насонов, 2002, И.А. Андрианова, В.Н. Амирджанова и соавт., 2006; О.М. Фоломеева, Ш.Ф. Эрдес, 2006).
Этиология РА достоверно неизвестна, а используемая патогенетическая терапия не оказывает достаточного эффекта у части больных, что определяет необходимость поиска новых подходов к лечению, основанных на данных о патофизиологии процесса (Е.Л. Насонов, 2004, C.M. Weyand, 2000).
В настоящее время большое внимание в патогенезе РА уделяется изучению апоптоза – генетически запрограммированной формы гибели клетки, обеспечивающей в организме клеточный гомеостаз (А.А. Ярилин, 1998; А.Н. Богданов, Т.А. Камилова и соавт., 2005; M. Schirmer, A.N. Vallejo et al., 1998; R.M. Pope, 2002).
Внимание к апоптозу как возможному механизму развития и поддержания патологического процесса при РА обусловлено современными представлениями о патофизиологии и патоморфологии заболевания. Поражение суставов в виде синовиальной гиперплазии позволяет предполагать нарушения программированной клеточной гибели синовиоцитов, приводящие к формированию паннуса, а местная инфильтрация различными клетками воспаления не исключает дефекты апоптоза лимфоцитов, поддерживающих хроническое течение болезни (А.Н. Богданов, Т.А. Камилова и соавт., 2006; K. Eguchi, 2001; H. Perlman, L.J. Pagliari et al., 2001; R.M. Pope, 2002; K. Itoh, H. Hase et al., 2004).
Менее изученным вопросом является процесс программированной клеточной гибели циркулирующих лимфоцитов, нарушение которого может вести к потере иммунологической толерантности в результате увеличения продолжительности жизни и накопления функционально активных аутореактивных Т-клеток (А.Н. Богданов, Т.А. Камилова и соавт., 2005; F.M. Bryl, A.D. Foey et al., 2002).
Продолжается изучение роли в нарушениях процесса апоптоза главных его участников – аспартат-специфических протеаз (каспаз (К)), среди которых выделяют активаторы провоспалительных цитокинов, активаторы эффекторных К и эффекторные К – непосредственные исполнители апоптоза (Е.Б. Владимирская, 2002; М.Ю. Григорьев, Е.Н. Имянитов, К.П. Хансон, 2003; А.А. Фильченков, 2003; J.M. Adams, 2003).
Проводятся исследования особенностей функционирования при РА основных регуляторов программированной клеточной гибели, в том числе наиболее изученного индуктора апоптоза Fas-лиганда (FasL), экспрессируемого на активированных Т-лимфоцитах, и его растворимой формы (sFasL) (A.N. Vallejo, M. Schirmer et al., 2000; O. Bohana-Kashtan, C.I. Civin, 2004). Фактор некроза опухоли-альфа (ФНО-), являющийся одним из основных участников патогенеза РА, в настоящее время рассматривается как регулятор апоптоза с разнонаправленными эффектами от апоптотической гибели до стимуляции клеточной пролиферации и дифференцировки (А.А. Ярилин, 1998). Продемонстрировано влияние интерлейкинов (ИЛ) как провоспалительных цитокинов на активность программированной клеточной гибели лимфоцитов синовиальной ткани и периферической крови при РА (K. Eguchi, 2001; H. Perlman, L.J. Pagliari et al., 2001).
На основании имеющихся данных последнее время предпринимаются попытки создания препаратов, влияющих на апоптоз, – блокаторов рецепторов, регулирующих программированную клеточную гибель, блокаторов ингибиторов апоптоза и средств, модифицирующих активность К (M.D. Smith, J.G. Walker, 2004; U. Fisher, K. Schulze-Osthoff, 2005).
В то же время активация апоптоза считается одним из механизмов патогенетического действия рекомендованных для лечения РА базисных противовоспалительных препаратов (БПВП) (Е.Л. Насонов, 2005; M. Cutolo, A. Sulli et al., 2001). Не исключается возможность прогнозирования эффективности базисных средств на основании результатов изучения программированной клеточной гибели (S. Herman, N. Zurgil et al., 2003). Более активное исследование влияния БПВП на апоптоз поможет объяснить различную чувствительность пациентов к имеющимся лекарственным средствам.
Несмотря на признанное участие периферических лимфоцитов в патогенезе РА опубликованные сведения, посвященные нарушениям апоптоза как причине накопления клона аутореактивных Т-клеток, весьма малочисленны. Имеющиеся данные отражают главным образом иммунологические характеристики программированной клеточной гибели in vitro без учета активности, течения заболевания и проводимой терапии.
С учетом вышеизложенного в работе необходимо продолжить изучение интенсивности апоптоза периферических лимфоцитов при различной активности РА и влияния проводимого лечения на программированную клеточную гибель.
Цель исследования
Изучить интенсивность апоптоза периферических лимфоцитов и оценить возможность использования показателей активности программированной клеточной гибели для прогнозирования эффективности проводимой терапии при ревматоидном артрите.
Задачи работы
Определить интенсивность апоптоза периферических лимфоцитов по активности каспаз-4, -6, -8 и количеству разрывов ДНК у больных ревматоидным артритом.
Сравнить результаты исследования активности апоптоза периферических лимфоцитов у больных ревматоидным артритом с показателями здоровых доноров и пациентов с остеоартрозом.
Оценить активность апоптоза периферических лимфоцитов у больных с впервые выявленным и ранее установленным ревматоидным артритом.
Оценить интенсивность программированной клеточной гибели периферических лимфоцитов в зависимости от активности ревматоидного артрита.
Сопоставить показатели активности апоптоза с основными клинико-лабораторными проявлениями ревматоидного артрита.
Определить влияние ФНО-, интерлейкина-2, интерлейкина-6, растворимого Fas-лиганда сыворотки крови на интенсивность апоптоза периферических лимфоцитов.
Изучить динамику апоптоза периферических лимфоцитов на фоне проводимой базисной терапии.
Оценить возможность использования показателей активности программированной клеточной гибели для прогнозирования эффективности терапии базисными противовоспалительными препаратами.
Научная новизна работы
В ходе исследования изучены особенности программированной клеточной гибели периферических лимфоцитов при ревматоидном артрите и остеоартрозе. Выявлены существенные различия в интенсивности апоптоза при этих заболеваниях.
Впервые методом флуоресценции определена активность каспаз и степень реализации программированной клеточной гибели в виде разрывов ДНК при ревматоидном артрите со сравнительной оценкой показателей при различных стадиях, длительности и активности заболевания. Обнаружена закономерная связь нарушений апоптоза периферических лимфоцитов с активностью ревматоидного артрита.
В работе впервые исследована динамика интенсивности программированной клеточной гибели периферических лимфоцитов на фоне проводимого лечения базисными противовоспалительными препаратами. Выявлено коррегирующее влияние эффективной базисной терапии в отношении ассоциированного с воспалительной активностью снижения реализации апоптоза.
Впервые оценена возможность использования показателей активности программированной клеточной гибели периферических лимфоцитов в качестве прогностических факторов эффективности лечения базисными противовоспалительными препаратами.
Практическая ценность работы
Полученные результаты позволяют оценить характер изменений активности апоптоза при ревматоидном артрите. В работе показана способность базисных противовоспалительных препаратов индуцировать программированную клеточную гибель периферических лимфоцитов. В ходе исследования выявлено, что количество разрывов ДНК и активность каспазы-4, определяемые в динамике методом флуоресценции как показатели интенсивности апоптоза, могут быть использованы в комплексе с традиционными клинико-лабораторными данными для оценки эффективности лечения базисными средствами при ревматоидном артрите.
Положения, выносимые на защиту
-
Для больных ревматоидным артритом характерна более высокая активность апоптоза периферических лимфоцитов, которая существенно отличается от таковой у здоровых.
-
Интенсивность программированной клеточной гибели периферических лимфоцитов при ревматоидном артрите зависит преимущественно от активности заболевания.
-
Эффективная терапия базисными противовоспалительными препаратами достоверно снижает активность ревматоидного артрита и усиливает апоптоз периферических лимфоцитов.
Апробация работы
Материалы работы изложены в тезисах V Северо-Западной научно-практической конференции по ревматологии (г. Санкт-Петербург, 2005), Всероссийской молодежной медицинской конференции молодых ученых (г. Омск, 2006), VI Северо-Западной научно-практической конференции по ревматологии (г. Петрозаводск, 2006), I Национальном конгрессе терапевтов (г. Москва, 2006). Результаты исследования были представлены в виде постерного доклада на VI Северо-Западной научно-практической конференции по ревматологии (г. Петрозаводск, 2006), обсуждены на совместном заседании кафедры госпитальной терапии Петрозаводского государственного университета и сотрудников ГУЗ «Республиканская больница им. В.А. Баранова» (Республика Карелия, г. Петрозаводск).
Реализация результатов работы
Результаты исследования внедрены в практику работы ревматологического отделения ГУЗ «Республиканская больница им. В.А. Баранова» (Республика Карелия, г. Петрозаводск). Полученные материалы используются в учебном процессе для студентов 5-6 курсов медицинского факультета и врачей, проходящих специализацию по программе повышения квалификации на кафедре госпитальной терапии.
Объем и структура диссертации
![Апоптоз лимфоцитов при ревматоидном артрите [Электронный ресурс]](/i/i/4505/190488.png "Апоптоз лимфоцитов при ревматоидном артрите [Электронный ресурс] Рябов Вадим Александрович")
![Клинико-патогенетическое значение исследования активности ксантиноксидазы, ксантиндегидрогеназы, пуриннуклеозидфосфорилазы и 5'-нуклеотидазы в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ревматоидным артритом [Электронный ресурс]](/i/i/4391/194221.png "Клинико-патогенетическое значение исследования активности ксантиноксидазы, ксантиндегидрогеназы, пуриннуклеозидфосфорилазы и 5'-нуклеотидазы в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ревматоидным артритом [Электронный ресурс] Агафонова Наталья Львовна")
