Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1 Обзор литературы 11
ГЛАВА 2 Материалы и методы 39
2.0. Экспериментальные животные и условия их содержания
2.1. Цитологический метод определения стадии полового цикла у самок
2.2. Операция удаления яичников
2.3. Поведенческие тесты
2.4. Биохимические методы
2.6. Препараты
2.7. Схема эксперимента
2.8. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3 Результаты собственных исследований 49
3.1. Влияние эстрального цикла на аффективное поведение интактных самок крыс
3.2. Аффективный статус интактных крыс в условиях гормональной терапии 17а- и 17Р-Эг
3.3. Аффективное поведение интактных самок крыс в условиях хронического введения СЭРМ
3.4. Аффективное поведение интактных самок крыс при дефиците эстрогенов
3.5. Влияние 17а- и 170-Э2 на аффективное поведение у ОЭ крыс
3.6. Влияние СЭРМ на аффективный статус у ОЭ крыс
3.7. Влияние эстрального цикла на концентрацию половых гормонов
3.8. Влияние 17а- и 17р-Эг на концентрацию половых гормонов в сыворотке крови у интактных крыс
3.9. Влияние СЭРМ на сывороточную концентрацию половых гормонов в сыворотке крови у интактных крыс
3.10. Концентрация половых гормонов на фоне введения 17а- и 17Р-Эг в условиях искусственного дефицита эстрогенов
3.11. Влияние СЭРМ на концентрацию половых гормонов в крови ОЭ крыс
ГЛАВА 4 Обсуждение результатов 130
Выводы 141
Список цитируемой литературы 143
- Цитологический метод определения стадии полового цикла у самок
- Аффективное поведение интактных самок крыс в условиях хронического введения СЭРМ
- Влияние 17а- и 17р-Эг на концентрацию половых гормонов в сыворотке крови у интактных крыс
- Концентрация половых гормонов на фоне введения 17а- и 17Р-Эг в условиях искусственного дефицита эстрогенов
Введение к работе
Актуальность проблемы. Не вызывает сомнений, что эстрогены оказывают модулирующее влияние на когнитивный и психо-эмоциональный статус. Вынужденная или естественная гипоэстрогения часто сопровождается комплексом расстройств, включая подавленное настроение, тревогу, плаксивость, депрессию. Наиболее часто прослеживается корреляция между гормональным фоном и развитием аффективных расстройств в пубертатный период, при использовании пероральной контрацепции, во время предменструального синдрома, при беременности, в послеродовом климактерическом периоде. В основе патогенеза развития аффективного статуса лежит тесная взаимосвязь между гипоталамо-гипофизарно-овариальной системой и нейромедиаторными системами головного мозга. Эстрогены оказывают модулирующее действие на холинергическую, дофаминергическую, серотонинергическую системы, способствуя развитию антиамнестического, антидепрессивного, анксиолитического эффектов. Кроме того, Bruse McEwen (1999, 2002) в условиях доклинических исследований продемонстрировал зависимость между синаптогенезом в нейронах гиппокампа и колебанием уровня эстрадиола в крови в течение эстрального цикла у крыс, что свидетельствует о нейропротективном действии эстрогенов. В настоящее время для купирования менопаузальных симптомов, для лечения пациенток после гистерэктомии, а также в качестве пероральной контрацепции широко используется заместительная гормональная терапия (ЗГТ). Однако применение ЗГТ связано с риском развития масталгии (болезненность молочных желез), пролиферации тканей молочной железы и эндометрия, что провоцирует развитие опухолей, маточного кровотечения, а длительное использование гормональной терапии может привести к венозной тромбоэмболии и патологическим изменениям в сердечно-сосудистой и гепатобилиарной системах (Сапронов, Федотова, 2009). Поэтому возникает необходимость поиска новых лекарственных препаратов для коррекции психоэмоционального статуса в условиях естественного или вынужденного дисбаланса эстрогенов. Альтернативой ЗГТ выступает класс фармакологически активных веществ – селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов (СЭРМ), – проявляющие избирательную активность в эстроген-чувствительных тканях, в том числе в ЦНС. СЭРМ это соединения, которые, в отличие от «чистых» агонистов и антагонистов эстрогенов, способны проявлять селективную избирательность к эстрогеновым рецепторам. Пока остается неясным, по какому механизму СЭРМы реализуют агонист/антагонистические эффекты в эстроген – чувствительных тканях. Однако наиболее вероятны 3 механизма действия: различной экспрессией рецептора эстрогена в ткани-мишени; разной конформацией эстрогенового рецептора и чувствительного к нему лиганда; различной экспрессией и образованием корегуляторных белков на рецепторе эстрогенов. Существуют противоречивые сведения и об эффектах СЭРМ на поведенческие процессы, аффективный статус. Очень мало исследований анализируют роль СЭРМов в формировании гормонального статуса при их длительном применении. Таким образом, особую актуальность представляет вопрос о взаимодействии гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы и нейромедиаторных систем головного мозга, участвующих в формировании эмоционального поведения и когнитивного статуса, на фоне хронического введения СЭРМ синтетического и растительного происхождения при циклических колебаниях половых гормонов и при дефиците эстрогенов.
Целью настоящей работы являлся сравнительный анализ эффектов агонистов\антагонистов эстрогеновых рецепторов, введенных изолированно или в комбинации с 17-Э2 и с 17-Э2, на депрессивноподобное и тревожное поведение у самок крыс, а также определение их гормонального статуса при естественном колебании эстрогенов в крови и в условиях экспериментального дефицита эстрогенов.
В задачи исследования входило:
1. Выяснить участие - и -эстрогеновых рецепторов (ЭР) в механизмах развития депрессии и тревожных расстройств при экспериментальном дефиците эстрогенов;
2. Изучить возможность применения селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов для коррекции аффективных состояний при вынужденном или естественном дефиците эстрогенов;
3. В эксперименте на животных оценить перспективность сочетанного применения СЭРМ в комбинации с высокочувствительным лигандом к -ЭР - 17-Э2, или в комбинации с лигандом к -ЭР - 17-Э2 в терапии депрессивных и тревожных состояний в условиях овариоэктомии;
4. Провести сравнительный анализ поведенческих эффектов 17- и 17-Э2, а также синтетических (тамоксифен) и растительных (экстракт цимицифуги, генистейн) модуляторов ЭР при дисбалансе половых гормонов.
Научная новизна. Впервые показано влияние ряда СЭРМ (тамоксифен, генистейн, климадинон) на аффективное поведение и гормональный статус при естественных колебаниях эстрогенов, а также в условиях экспериментального дефицита у самок крыс. Продемонстрированы разнонаправленные эффекты исследуемых препаратов и заместительной терапии 17- и 17-Э2 на депрессивное поведение и уровень тревожности у интактных и ОЭ самок крыс. Показано, что тамоксифен, генистейн и климадинон изолированно и в сочетании с 17- и 17-Э2 способны модулировать аффективный статус и баланс половых гормонов у животных. Установлено, что эффекты изолированного и сочетанного применения селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов различаются у ОЭ крыс и интактных самок.
Научно-практическое значение работы. Полученные результаты расширяют представления об участии половых гормонов в патогенезе депрессии и тревожных расстройств. Кроме того, показана корреляция между степенью вовлечения - и -ЭР, их физиологической активностью, а также уровнем циркулирующих в крови экзогенных и эндогенных лигандов к этим рецепторам и тревожно-депрессивным состоянием у грызунов. Результаты работы могут быть использованы для разработки схем лечения аффективного состояния при дисбалансе и дефиците половых гормонов у пациенток. Показана перспективность применения СЭРМ в комбинации с эстрогенами для лечения психоэмоциональных расстройств на фоне различных патологий репродуктивной системы.
Основные положения, выносимые на защиту: Естественные колебания эстрогенов на протяжении эстрального цикла у крыс сопровождаются изменением уровня тревожности и депрессивноподобного состояния. Как высокое содержание эстрогенов, так и низкое приводит к развитию тревожно-депрессивного состояния у грызунов. Селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов вовлекаются в формирование психо-эмоционального статуса. Экспериментальная овариоэктомия у крыс сопровождается нарушением аффективного статуса, что выражается изменениями в различных поведенческих тестах. Депрессивные и тревожные нарушения у ОЭ животных лишь частично снижаются на фоне заместительной терапии 17-Э2. Применение 17-Э2 и/или 17-Э2 в комплексе с тамоксифеном, генистейном или климадиноном повышает эффективность антидепрессантной и анксиолитической терапии при дефиците эстрогенов. Важную роль при этом играет формирование гормонального статуса на фоне указанных комбинаций препаратов.
Личный вклад соискателя. Соискателем написан обзор литературы, спланированы и выполнены эксперименты, статистическая обработка и анализ полученных результатов, а также подготовлены основные публикации по теме работы.
Апробация работы. Результаты были доложены и обсуждались на 2-ой Российско-китайской научной конференции «Фундаментальная фармакология и фармация в клинической практике» (Пермь, 2006), 1-й конференции Российской ассоциации психонейроэндокринологии (2008), на научных заседаниях отдела нейрофармакологии (2008, 2009).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ, из них 3 статьи в рецензируемых журналах.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах, иллюстрирована 22 рисунками и 18 таблицами, включает введение, обзор литературы, описание методов исследования, изложение результатов их обсуждение, а также заключение, выводы, список цитированной литературы, из которых 36 отечественных и 95 иностранных источников.
Цитологический метод определения стадии полового цикла у самок
Как хорошо известно, эстрогены, наряду с эффектами в репродуктивной системе, оказывают многогранное действие на высшие функции мозга (McEwen, 1999; Gruber, 2002; Федотова, Сапронов, 2007; Сапронов, Федотова, 2009). Установлено, что эстрогены участвуют в формировании психо-эмоционального статуса у женщин в течение всей жизни (Lund et al., 2005; Федотова и др., 20066; Rubinov, Schmidt, 2006). Наиболее часто прослеживается корреляция между гормональным фоном и развитием аффективных расстройств в пубертатный период, при использовании пероральных контрацептивных средств, во время предменструального синдрома, в течение беременности, в послеродовом и климактерическом периоде, для которых характерен низкий уровень эстрадиола в крови (McEwen, 2002; Rubinov, Schmidt, 2003, 2006; Bloch et al., 2006). Установлено, что эстрадиол играет ключевую роль в пренатальном и раннем постнатальном периоде развития головного мозга, а также в течение всей жизни при различных нарушениях функционирования гипофизарно-овариальной системы (McEwen, 2002; Федотова, Сапронов, 2007). В процессе доклинических исследований показано, что эстрогены участвуют в контроле синтеза и кругооборота нейромедиаторов. Доказано модулирующее влияние эстрадиола на серотонинергическую, норадренергическую, холинергическую, дофаминергическую, ГАМК-ергическую и другие медиаторные системы (McEwen, 1999, 2002; Gruber, 2002; Федотова, Сапронов, 2007). В частности, выявлено, что экспериментальная овариоэктомия у крыс сопровождается уменьшением концентрации серотонина (Landry, di Paolo, 2003) (участвует в модуляции настроения, сна, либидо) и снижением его обратного нейронального захвата в ядрах дорсального шва, вентромедиального гипоталамуса и гиппокампа (Sumner et al., 1999), а также понижением плотности 5-ГТ2А-рецепторов в следующих структурах головного мозга - frontal cingulate, piriform cortex, nucleus accumbens, caudate putamen, olfactory tubercle (Сапронов и соавт., 2004; Le Saux, 2005; Федотова и др., 20066). Наряду с этим, при гипоэстрогении наблюдается тенденция к снижению уровня норадреналина (НА), а также его метаболизма в срединном возвышении, при этом транспорт и нейрональный захват не изменяется (McEwen, 1999, 2002; Gruber, 2002). В то же время, введение эстрадиола ОЭ самкам снижает активность МАО-А, в результате чего уровень НА и серотонина (5-ГТ) в ЦНС повышается (Richardson, Robinson, 2000; Сапронов и соавт., 2006; Rubinov, Schmidt, 2006). Дефицит эстрогенов приводит к уменьшению активности ацетилхолинтрансферазы и нейронального транспорта холина в гиппокампе, что объясняет сниженное высвобождение ацетилхолина при овариоэктомии (Мегги, 2004). Как показал ряд исследований, совместное введение эстрадиола и агонистов М-холинорецепторов повышало чувствительность М-холинорецепторов к своим лигандам в условиях дефицита эстрогенов (Лосев и др., 2006; Сапронов и соавт., 2006).
Дофаминовая система, участвующая в двигательной функции, мотивации, когнитивной функции и в контроле секреции гипофиза, также подвержена влиянию эстрогенов (McEwen, 1999; Gruber et al., 2002; Федотова и др., 20066). Содержание и метаболизм дофамина колеблются на протяжении эстрального цикла у крыс (Густафссон, Нильссон, 2004). Обнаружено, что овариоэктомия у самок крыс сопровождается снижением плотности дофаминовых рецепторов в гипофизе и гипоталамусе, а введение эстрогенов потенцирует секрецию дофамина (Daniel et al., 2006).
Таким образом, половые гормоны и нейромедиаторные системы являются единой нейрогуморальной системой, которая является ключевой для обеспечения интегративных функций головного мозга. Такие множественные эффекты эстрогенов обусловлены наличием двух форм эстрогеновых рецепторов (ЭР), имеющих разную аффинность к стероидным и нестероидным лигандам (Russel et al., 2005; Waif, Frye, 2005). Идентифицировано 2 подтипа эстрогеновых рецепторов — альфа (а) и бета (Р) (McEwen, 1999; Gruber, 2002; Федотова, Платонова, 2006). Эстрогеновый рецептор представляет собой белок, принадлежащий к семейству гормонально-активирующих транскрипционных факторов, инициирующих транскрипцию генов (Гарин, 2005). В структуре ЭР выделяют 6 независимых, но функционально связанных доменов. «А/В» аминотерминальный домен, наименее стабильный среди ядерных рецепторов. Домен «В» содержит AF-1 — активирующий транскрипционный фактор 1 (лиганднезависимый), позволяющий ЭР взаимодействовать с элементами транскрипции. Домен «С» состоит из 2 участков типа «цинковые пальцы» и поверхности димеризации, которая является местом соединения рецептора с ДНК клеток с помощью этих цинковых «пальцев». Так называемая «шарнирная область» «D» домена необходима для придания определенной гибкости между ДНК и лигандсвязывающим доменом; кроме того, она связывает белок теплового шока hsp 90. «E/F» домен является полифункциональным, узнает и связывает лиганд, участвует в димеризации рецептора, взаимодействует с факторами транскрипции и кофакторами. Домен «Е» содержит лигандзависимый AF-2. Домен «F» является карбокситерминальным (Jordan, 2001; Смирнов, 2002; McEwen, 2002; Diez-Perez, 2006). В середине 90-х годов был открыт второй вид эстрадиолового рецептора 0-ЭР (Гарин, 2005). Первый, ранее описанный, получил название а-ЭР. Р-ЭР имеет меньшие размеры, при этом в нем только домен «С» на 95% гомологичен а-ЭР, домены «Е» и «F» гомологичны в 53,5%, домен «D» - в 28,9% и домены «А/В» - в 16,5% (Гарин, 2005). Таким образом, имеющиеся структурные различия обоих подтипов рецепторов определяют их разную аффинность к экзогенным и эндогенным лигандам, что имеет важное значение для реализации физиологических и фармакологических эффектов (Katzenellenbogen et al., 2000; Jordan, 2001; Zhao et al., 2005). В свою очередь, лиганды способствуют образованию различных конформаций рецептора (Jordan, 2001), что оказывает существенное влияние на активность коактиваторов и корепрессоров (Густафссон, Нильссон, 2004), которые взаимодействуют с комплексом «лиганд-рецептор» и соответственно определяют агонист/антагонистический профиль лигандов. Особое внимание уделяется изучению коактиваторов ядерных рецепторов, корепрессоров и связанным с ними гистоновым ацетилтрансферазам и диацетилазам, так как им принадлежит ключевая роль в индуцированной ЭР регуляции транскрипции генов мишеней (Густафссон, Нильссон, 2004).
Аффективное поведение интактных самок крыс в условиях хронического введения СЭРМ
Вместе с тем существуют прямо противоположные сведения. Так, отмечалось, что хроническое введение генистейна на фоне ОЭ у самок крыс оказывает нейропротективное действие (Zhao et al., 2005).
Lephart и соавторы (2002) оценивали уровень тревожности у самцов крыс на фоне диеты с высоким содержанием фитоэстрогенов. Было установлено, что самцы, получавшие с пищей фитоэстрогены, в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» проявляли менее выраженную тревожность, чем интактные самцы крыс. Кроме того, исследовалось влияние генистейна на уровень ферментов, участвующих в метаболизме андрогенов и содержание ароматазы в мозге самцов крыс. Авторами было установлено, что генистейн не оказывал существенного влияния на уровень ароматазы в мозге у взрослых самцов крыс (у мужчин и женщин с недостаточностью ароматазы повышены концентрации ЛГ и ФСГ, андрогенов, но крайне низки концентрации эстрадиола и эстрона), но при этом увеличивал размер sexually dimorphic nucleus в преоптической области гипоталамуса.
Вместе с тем, существуют прямо противоположные сведения. Показано, что у самцов крыс, получавших генистейн в дозе 150 мкг/г, уходило значительно меньше времени на социальное взаимодействие, а в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» отмечался более низкий показатель числа заходов в открытые рукава лабиринта, чем в контрольной группе, что указывает на анксиогенную способность генистейна в этих испытаниях (Hartley et al., 2003). В то же время, уровень базального кортикостерона не различался у контрольных и опытных крыс, тогда как у крыс, получавших генистеин, повышался уровень стресс-зависимого кортикостерона. Концентрация в плазме крови стресс-зависимого вазопрессина также была повышена.
Вышеизложенные факты доказывают, что генистеин участвует не только в формировании эмоционально-когнитивного статуса, но оказывает непосредственное влияние, как на структуры гипоталамуса, так и на метаболизм и содержание гормонов в крови. Поэтому представляют интерес исследования по оценке степени воздействия генистейна на гипоталамо-гипофизарно-овариальную ось, а также на формирование эстрального цикла. В литературе приводятся сведения, что генистеин подобно эстрадиолу участвует в половой дифференциации мозга и вызывает его дефеминизацию, оказывая непосредственное влияние на лордозную реакцию и формирование эстрального цикла (Kouki et al., 2003). В эксперименте новорожденных самок подвергали лечению дайдзеином и генистейном. По влагалищным мазкам оценивали степень изменения эстрального цикла у животных при их половом созревании. Интересны результаты исследования Faber и Hughes (1993), которые хронически вводили генистеин новорожденным самкам крыс, а в постпубертатном периоде этих самок кастрировали, после чего вводили гонадолиберин и изучали ответную реакцию гипофиза. Было установлено, что результатом неонатального введения генистейна являлось увеличение размеров ядер преоптической зоны гипоталамуса. Последующая реакция на ГнРГ у ОЭ крыс зависела от количества введенного в неонатальном возрасте генистейна: чем выше доза фитоэстрогена, тем слабее проявлялась реакция гипофиза на введение ГнРГ. McGarvey и соавторы (2001) провели сравнительный анализ эффектов куместрола и генистейна на пульсирующую генерацию ГнРГ и ответную секрецию ЛГ. В отличие от куместрола, генистейн не влиял на пульсирующий выброс ЛГ и незначительно снижал ГнРГ-зависимый выброс ЛГ, что говорит о минимальном вмешательстве генистейна в физиологическую деятельность репродуктивной системы на уровне гипоталамо-гипофизарной системы. Ряд авторов также показали, что генистейн не оказывает влияния на фазность полового цикла в отличие от куместрола и тамоксифена (Kouki et al., 2003). Напротив, Hughes (1988) сообщал о полной блокаде ГнРГ-зависимого выброса ЛГ. Такие результаты можно объяснить методологическими различиями в проведении эксперимента. Кроме того, авторы продемонстрировали зависимость эффектов данного изофлавона от его концентрации. Так, самая низкая доза 0,1 мг/кг приводила к супрессии базального уровня ЛГ, тогда как в 10 и 100 раз большие дозы генистейна такого эффекта не оказывали. Такой неоднозначный эффект генистейна на секрецию ЛГ в зависимости от дозы является феноменом, который до сих пор не получил объяснения.
Ряд исследователей продемонстрировали, что генистейн, как и 17р-эстрадиол, вызывает секрецию пролактина (Stahl et al., 1998). Результаты опытов указывают, что генистейн является активным лактотрофом в гипофизе. Выявлена зависимость между секрецией пролактина и концентрацией генистейна, поскольку при введении антиэстрогена ICI, секреция пролактина была полностью ингибирована. Такое влияние на уровень пролактина косвенно подтверждает анксиолитические свойства данного фитоэстрогена, поскольку пролактин является индикатором стресса (Зозуля и соавт., 2007). При введении его в мозг снижаются поведенческие и нейроэндокринные показатели тревожности самцов и нерожавших самок крыс, а при использовании антисыворотки к пролактиновым рецепторам эти проявления увеличиваются (Tomer et al., 2001). В период лактации у крыс происходит усиление экспрессии гена пролактина в гипоталамусе, что может быть одной из причин выраженного снижения уровня тревожности животных в этот период (Torner et al., 2002). В практической медицине для устранения менопаузальных симптомов широко используется СЭРМ растительного происхождения климадинон. Это галеновый препарат, содержащий экстракт корневища цимицифуги. В настоящее время выделено 3 активные фракции из указанного экстракта. Биологически активные вещества 1 фракции проявляют клонидин-подобную активность, то есть являются а2-адреномиметиками, которые тормозят секрецию ЛГ, но не имеют эстрогепоподобной активности. Фракция 2 типа содержит компоненты, имеющие высокую аффинность к ЭР и тормозят эстроген-зависимый выброс ЛГ. Третья фракция содержит активные вещества, не влияющие на синтез и выброс ЛГ, но аффинные к ЭР (Сметник, 2001).
Влияние 17а- и 17р-Эг на концентрацию половых гормонов в сыворотке крови у интактных крыс
Влияние 17(3- и 17а-эстрадиола на поведение интактных самок в тесте «открытое поле. Хроническое введение 170-32 приводило к достоверному снижению двигательной (горизонтальная активность 22,9 ± 1,2; стойки 2,3 ± 0,3) и исследовательской активности (2,6 ± 0,4), а также груминга (0,5 ± 0,2), но достоверно повышало число болюсов (5,0 ± 0,7) у интактных самок (эструс) по сравнению с контролем 1 (эструс) (63,7 ±3,8, 14,7 ± 1,8 и 3,7 ± 0,4, а также 3,3 ± 0,8 и 2,0 ± 0,2 соответственно) (табл. 4). Хроническое введение 17а-Э2 самкам в фазу диэструса приводило к снижению горизонтальной (20,8 ± 1,2) и вертикальной (7,8 ± 0,7) активности и к отсутствию дефекаций. При этом число «обследованных» норок (1,3 ± 0,6) и представленность груминга (3,3 ± 0,6) не отличались от контрольных крыс, находившихся в той же стадии цикла. В стадию проэструса и эструса животные, получавшие 17а-Э2, характеризовались снижением двигательной и исследовательской активности и повышением грумингового компонента по сравнению с контролем 1 (проэструс и эструс соответственно). У самок крыс в фазу метэструса на фоне 17а-Э2 наблюдалось повышение горизонтальной активности (98,5 ± 4,3), а количество стоек (12,4 ± 1,8), исследовательская активность (5,6 ± 0,5) и груминг (3,0 ± 0,4) не отличались от таковых показателей у контрольных самок в фазе метэструса. Таким образом, исследования показали, что при тестировании интактных самок крыс в тесте «открытое поле» 17р-Э2 проявлял анксиогенные свойства, вызывая снижение «норковой» активности и увеличение эмоциональности, что можно интерпретировать как показатель стресса и высокого уровня тревожности (Калуев, 1998). На фоне введения 17а-Э2 в фазе диэструса и метэструса пространственно-ориентировочная активность и степень тревожности крыс существенно не отличались от контрольных самок, которые находились в той же фазе цикла. Однако хроническое введение 17а-Э2 в фазу проэструса и эструса сопровождалось снижением числа «обследованных» норок и увеличением груминга, что служит показателем анксиогенного действия препарата. Результаты проведенных исследований показали, что в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» у животных в фазе эструса на фоне введения 17J3-32 отмечалось увеличение времени пребывания в «открытых» рукавах и повышение числа заходов в них, что свидетельствует об анксиолитическом профиле препарата. Однако эти данные не коррелировали с результатами, полученными в тесте «открытое поле». В условиях «открытого поля» 17Р-Э2 снижал число «обследованных» норок и повышал эмоциональность (дефекация), что рассматривается в качестве показателей поведения животного с высоким уровнем тревожности.
У самок крыс в фазу диэструса и метэструса 17а-Э2 так же проявлял анксиолитическое действие, что выражалось увеличением времени нахождения и числа заходов в «открытые» рукава лабиринта и снижением эмоционального компонента в тесте «открытое поле». У крыс в фазе проэструса и эструса 17а-Э2 увеличивал время пребывания в открытых «рукавах» лабиринта, но при этом животные демонстрировали фризинг и снижение числа заходов в открытые и закрытые «рукава» лабиринта. Эти результаты коррелировали со снижением исследовательской активности и увеличением эмоциональности в тесте «открытое поле», что указывает на анксиогенный поведенческий профиль 17а-Э2 у интактных животных в указанные фазы цикла.
Таким образом, влияние 170-Э2 на уровень тревожности интактных самок крыс требуют более детального изучения. Поведенческие эффекты 17а-Э2 зависят от уровня эндогенных эстрогенов в крови животных в различные фазы цикла. Так, в фазы метэструса и диэструса, для которых характерно низкое содержание половых гормонов (ряд авторов считают метэструс начальной фазой покоя (Дедов, 2000), 17а-Э2 проявлял анксиолитические свойства. Однако при резких колебаниях эстрадиола и прогестерона в крови, которое характерно для стадий проэструса (высокий уровень эстрадиола) и эструса (высокий уровень прогестерона), 17а-Э2 оказывал анксиогенное действие. Таким образом, можно полагать, что 17а-Э2 может оказывать сенситизирующее действие (усиливает эффекты эндогенных эстрогенов на поведенческие процессы) или приводить к суммации поведенческих эффектов указанного препарата и половых гормонов.
Концентрация половых гормонов на фоне введения 17а- и 17Р-Эг в условиях искусственного дефицита эстрогенов
Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что хроническое введение селективного модулятора эстрогеновых рецепторов тамоксифена интактным самкам оказывает разнонаправленное действие на степень тревожности в зависимости от естественных колебаний уровня эстрогенов в крови. Так, в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» животные в фазе диэструса на фоне введения тамоксифена демонстрировали характерный для высокого уровня тревожности фризинг, а также уменьшение числа заходов в «открытые» и «закрытые» рукава. Однако эти данные не коррелировали с результатами, полученными в тесте «открытое поле». В условиях «открытого поля» указанный препарат в 2 раза увеличивал исследовательскую активность, при этом эмоциональное поведение было подавлено у самок, находящихся в фазе диэструса, что можно интерпретировать как стратегию поведения нетревожного животного (Калуев, 1998). В то же время, тамоксифен понижал состояние тревожности у интактных крыс в фазу проэструса в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт», о чем говорит увеличение времени нахождения в «открытых» рукавах и повышение числа заходов в них, а также угнетение эмоционального поведения в тесте «открытое поле». У интактных самок в фазу метэструса на фоне введения тамоксифена показатели, полученные в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт» и «открытое поле», существенно не отличались от таковых у интактных крыс, находящихся в той же фазе цикла. Таким образом, эффекты тамоксифена зависят от естественных колебаний эстрогенов в течение эстрального цикла у интактных животных и сопровождаются значительными изменениями аффективного поведения. Так, в фазу диэструса при естественном среднем уровне эстрогенов в крови животных хроническое введение модулятора эстрогеновых рецепторов вызывает анксиогенное действие, что выражается в преобладании фризинга. Однако при наиболее высоком уровне секреции эстрадиола в стадию проэструса тамоксифен проявляет анксиолитический эффект. Хроническое введение тамоксифена нарушает фазность полового цикла, что проявляется отсутствием у самок стадии эструса. Полученные нами данные согласуются с результатами других исследователей, которые также описывают нарушение эстрального цикла у самок при хроническом введении указанного препарата (Шекунова, 2006). Вместе с тем, в фазу метэструса при постепенном снижении уровня эндогенного эстрадиола тамоксифен не влияет на аффективное поведение животных. проэструса и метэструса по сравнению с контрольными животными и группой самок, которая получала 17а-Э2. В стадию эструса данный показатель на фоне генистейна не изменялся по сравнению с контролем 1, но был меньше по сравнению с группами животных, получавших 17а-Э2 или 17р-Э2. Таким образом, генистейн оказывал ярко выраженный антидепрессивный эффект в фазах диэструса, проэструса и метэструса и не влиял на степень депрессии в стадию эструса.
Влияние генистейна на уровень тревожности интактных самок в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт». Генистейн не влиял на изучаемые показатели исследовательской активности в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» у крыс, находившихся в фазе диэструса (табл. 7). В стадию проэструса и метэструса хроническое введение генистейна сопровождалось повышением числа заходов в открытые и закрытые рукава лабиринта по сравнению с контролем 1 и группой крыс, которые получали 17а-Э2 и находились в той же фазе цикла. Эстрирующие крысы, получавшие генистейн, характеризовались повышением времени пребывания в открытых рукавах лабиринта по сравнению с контролем 1 и животными, получавшими 17Р-Э2, но при этом данный показатель не отличался от показателя в группе животных, получавших 17а-Э2. В то же время, число заходов в открытые и закрытые рукава не отличалось от контроля 1, снижалось по сравнению с группой животных, получавших 17р- Э2, но эти показатели были в 2 раза выше по сравнению с животными, получавшими 17а-эстрадиол (табл. 7).
Влияние генистейна на поведение интактных самок в тесте «открытое поле. Из таблицы 8 видно, что хроническое введение селективного модулятора эстрогеновых рецепторов генистейна не оказывало достоверного влияния на двигательную активность, исследовательское поведение и эмоциональность самок крыс в фазе диэструса. В стадию проэструса указанный препарат выражений повышал двигательную активность и число обследованных норок, снижая при этом эмоциональность по сравнению с контрольными крысами и животными, получавшими 17а-Э2. В фазе эструса у крыс, получавших генистейн, снижалась двигательная активность, а также число болюсов и груминг по сравнению с контролем 1, но эти показатели не отличались от таковых в группе животных, получавших 17а-Э2, и в группе животных, получавших 170-32. В фазе метэструса крысы, получавшие генистейн, характеризовались достоверным снижением двигательной и норковой активности и эмоциональности по сравнению с контролем 1 и теми же показателями в группе животных, получавших 17а-Э2 (табл. 8).
Результаты исследований показали, что генистейн не влиял на тревожное поведение самок крыс, которые находились в стадии диэструса, а также не оказывал влияния на параметры поведения в условиях «открытого поля». Хроническое введение генистейна снижало уровень тревожности у животных в фазу проэструса, о чем свидетельствует увеличение числа заходов в «открытые» и «закрытые» рукава и числа «обследованных» норок, а также снижение эмоциональности крыс в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт» и «открытое поле». В фазу эструса препарат проявлял анксиолитическое действие, что подтверждается увеличением времени нахождения крыс в «открытых» рукавах лабиринта, повышением исследовательского поведения и снижением эмоциональности в условиях «открытого поля».
