Введение к работе
Актуальность проблемы. Несмотря на достижения современной медицины, фармакотерапия острых, особенно хронических заболеваний печени остается актуальной проблемой, так как использование стандартных схем лечения оказывается достаточно часто малоэффективным при сохранении высокой летальности у данной категории больных (Сыч В.Ф. и др., 2009; Лазебник Л.Б. и др., 2012; Петракова О.С. и др., 2012). Основным способом лечения тяжелых заболеваний печени все еще остается пересадка органа или его части (Федоро-ва Н.Н., Сентюрова Л.Г., 2009; Арешидзе Д.А. и др., 2012). В связи с недостатком донорского материала и проблемами, возникающими после операции, разрабатываются методики заместительной клеточной терапии заболеваний печени. Большой зкспериментальный и клинический материал, накопленный за последние годы, показывает, что клеточную терапию можно рассматривать как одно из приоритетных направлений в современной биомедицине и биотехнологии (Урываева И.В., 2009; Conigliaro A. et al., 2010).
Гепатоциты стали первым типом клеток, использованных для клинических целей – клеточной терапии больных с врожденными и приобретенными дефектами печени (Судаков Н.П., 2004; Бенеманский В.В. и др., 2005; Паль-
цев А.И. и др., 2006). По сравнению с клетками-предшественниками и стволовыми клетками, культуры гепатоцитов обладают очень ограниченной способностью к делению, что является серьезным лимитирующим фактором для их практического использования, но в стрессовых условиях (например, при острых поражениях печени) они впадают в состояние гиперплазии и приобретают способность к массовому размножению. Данное свойство гепатоцитов легло в основу их использования для восстановительных процессов при заболеваниях печени (Ohashi K. et al., 2007).
Эффективность замещения дефектов тканей, способность стимулировать собственную регенерацию органа, отсутствие опасностей возникновения фиброзов зависят главным образом от используемых клеток. В ряде исследований показано, что при определенных условиях культивирования клетки различного типа способны экспрессировать специфичные для гепатоцитов маркеры (Пальцев А.И. и др., 2006). Однако истинная функциональность тех или иных клеток остается недоказанной, поэтому актуальными являются исследования по изучению метаболической активности аллогенных гепатоцитов (Онищенко Н.А., 2004; Yokoyama T. et al., 2006).
Для более широкого внедрения заместительной клеточной терапии в клиническую практику необходимы дальнейшие экспериментальные исследования, направленные на определение иммунометаболических эффектов различных вариантов регенеративной клеточной терапии (использование аллогенных гепатоцитов и их культуральной жидкости), а также сочетанное применение аллогенных гепатоцитов и фармакологических препаратов при патологии печени.
Цель работы: установить эффективность фармакологической коррекции иммунных и метаболических нарушений в условиях экспериментальной гипоксии печени с использованием гептрала, мексикора, аллогенных гепатоцитов и их культуральной жидкости.
Задачи исследования.
1. Изучить влияние введения аллогенных гепатоцитов, их культуральной жидкости, гептрала и мексикора на иммунные, оксидантные показатели и функцию гепатоцитов у интактных животных.
2. Определить метаболическую активность и сорбционные свойства мембран эритроцитов интактных реципиентов при введении им аллогенных гепатоцитов, их культуральной жидкости, гептрала и мексикора.
3. Оценить влияние аллогенных гепатоцитов, их культуральной жидкости, гептрала и мексикора на иммунометаболические показатели животных с экспериментальной гипоксией печени.
4. Изучить воздействие аллогенных гепатоцитов, их культуральной жидкости, гептрала и мексикора на метаболическую активность и сорбционные свойства мембран эритроцитов при экспериментальной гипоксии печени.
5. Провести сравнительную оценку иммунокорригирующего, антиоксидантного и мембранопротекторного эффектов аллогенных гепатоцитов, их культуральной жидкости, гептрала и мексикора при экспериментальной гипоксии печени.
Научная новизна. Получены новые данные о взаимосвязи иммунных, оксидантных нарушений, функционально-метаболической активности гепатоцитов и эритроцитов при экспериментальной гипоксии печени.
Впервые представлены иммунные и метаболические эффекты воздействия на интактных животных аллогенных гепатоцитов, их культуральной жидкости, гептрала, мексикора при раздельном введении и в различных сочетаниях.
Доказано, что в коррекции иммунометаболических нарушений, вызванных экспериментальной гипоксией печени, наиболее эффективно сочетанное введение культуральной жидкости аллогенных гепатоцитов, гептрала и мексикора. Полученные данные впервые подтверждены морфологическими методами исследования.
Практическая значимость. Экспериментально обоснована фармакологическая эффективность использования аллогенных гепатоцитов, их культуральной жидкости, гептрала и мексикора у животных с гипоксией печени на иммунные и метаболические показатели.
Определены степени эффективности различных комбинаций аллогенных гепатоцитов, их культуральной жидкости, гептрала и мексикора в коррекции нарушений врожденных и адаптивных форм иммунитета, состояния перекисного окисления липидов, функционально-метаболической активности гепатоцитов и эритроцитов в условиях экспериментальной гипоксии печени.
Доказаны выраженные мембранопротекторные, антиоксидантные и иммунокорригирующие свойства аллогенных гепатоцитов, их культуральной жидкости, гептрала и мексикора, что предопределяет необходимость дальнейшего изучения их механизма действия и обосновывает перспективы клинического применения при патологии печени.
Материалы диссертации вошли в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Курского, Российского, Самарского, Смоленского государственных медицинских университетов и академий, медицинского института Орловского государственного университета.
Положения, выносимые на защиту.
1. Введение интактным реципиентам аллогенных гепатоцитов, их культуральной жидкости, гептрала и мексикора не вызывает существенных изменений иммунных и метаболических показателей, функционально-метаболической активности гепатоцитов и эритроцитов.
2. Гепатоциты, их культуральная жидкость интактных крыс, гептрал и мексикор при введении раздельно или в сочетании аллогенным донорам с экспериментальной гипоксией печени в различной степени нормализует нарушенные иммунометаболические показатели и функционально-метаболическую активность гепатоцитов и эритроцитов.
3. Наиболее эффективно совместное введение культуральной жидкости аллогенных гепатоцитов здоровых доноров, гептрала и мексикора животным с гипоксией печени.
4. Различная корригирующая эффективность аллогенных гепатоцитов, их культуральной жидкости, гептрала и мексикора при экспериментальной гипоксии печени доказана морфологическими методами.
Степень достоверности и апробация работы.
Статистическую обработку результатов исследования проводили путем вычисления средних арифметических (М), стандартных ошибок () и стандартных ошибок средних (m) (Лакин Г.Ф., 1980). Существенность различий средних величин оценивали, используя непараметрические методы, а также коэффициент ранговой корреляции Спирмена. Статистически значимыми считали различия с p<0,05 (Гублер Е.Г., Генкин А.Р., 1973).
Основные положения диссертации представлены на межвузовской научной конференции, посвященной памяти проф. В.В. Пичугина, «Актуальные вопросы фармакологии и фармации» (Курск, 2009), IV Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2010), Межрегиональном форуме «Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии – междисциплинарные проблемы» (Санкт-Петербург, 2010), XV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2010), XVIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2011), итоговой научной конференции сотрудников КГМУ, Центрально-Черноземного научного центра РАМН и отделения РАЕН «Университетская наука: Взгляд в будущее» (Курск, 2011), 76-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых «Молодежная наука и современность» (Курск, 2011), совместном заседании кафедр фармакологии, биологической химии, хирургических болезней
№ 2 Курского государственного медицинского университета (2012).
