Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время терапия препаратами природного происхождения широко используется в мировой медицинской практике. Фитопрепараты находят применение для лечения и профилактики, а также в комплексной терапии различных заболеваний (Пастушенков, Лесиовская, 1995). Зачастую они используются без назначения врача, при этом пациенты рискуют превысить установленные терапевтические дозы вплоть до появления побочных эффектов. Поэтому изучение токсичности лекарственного препарата растительного происхождения является необходимым на этапе доклинической оценки.
Согласно данным ВОЗ острые респираторные заболевания в настоящее время являются одними из наиболее распространенных и нередко приобретают характер эпидемического процесса. В России ежегодно регистрируется около 50 млн. случаев инфекционных заболеваний, из них до 90% приходится на ОРВИ и грипп (Учайкин, 2001). Подобные заболевания, как правило, имеют вирусную этиологию и опасны, прежде всего, развитием бактериальных осложнений на фоне ослабленного иммунитета. Синтетические противовоспалительные средства достаточно широко применяются для лечения данной группы заболеваний, однако имеют ряд побочных эффектов, самым опасным из которых является подавление иммунного ответа (Машковский, 2008). Назначение противовоспалительного фитопрепарата, обладающего иммуномодулирующими свойствами на ранней стадии болезни, позволяет избежать осложнений, связанных со снижением иммунного ответа организма, предотвратить присоединение вторичной инфекции и антибиотикотерапию.
Противовоспалительная активность препаратов шалфея и эхинацеи изучена на моделях различных видов отеков: кротоновый отек ушной раковины мышей, формалиновый и каррагениновый отек лапы крыс и др. (Хайдукова и др., 2003; Tubaro et al., 1987; Baricevic et al., 2001; Hosseinzadeh et al., 2003). Однако данные модели являются неспецифичными для изучения патологии верхних дыхательных путей. Поэтому разработка и внедрение в практику экспериментальной модели, приближенной к острому тонзиллиту, является актуальной задачей фармакологии.
Растительный препарат представляет собой сочетание различных групп биологически активных веществ. В силу комплексности фитопрепарата, сложно выявить компонент, обуславливающий его фармакологическую активность. Поиск и изучение биологически активных соединений препаратов природного происхождения важны для понимания его механизма действия.
Комбинированный лекарственный препарат на основе шалфея лекарственного и эхинацеи узколистной в форме таблеток для рассасывания пока не представлен на Российском фармацевтическом рынке. В связи с этим многостороннее доклиническое изучение нового средства, фитохимический анализ экстрактов и стандартизация готовой лекарственной формы является актуальной задачей на этапе внедрения нового препарата в медицинскую практику.
Цель работы. Изучение эффективности, безопасности и разработка параметров стандартизации нового лекарственного препарата «Шалфей Иммунактив» на основе шалфея и эхинацеи для лечения и профилактики заболеваний верхних дыхательных путей.
Задачи исследования:
-
Изучить общую токсичность и иммунотоксичность препарата «Шалфей Иммунактив».
-
Оценить влияние препарата «Шалфей Иммунактив» на неспецифический, клеточный и гуморальный иммунный ответ.
-
Разработать экспериментальную модель острого лимфаденита у крыс для исследования противовоспалительных свойств «Шалфей Иммунактив» и препарата сравнения «Шалфей Тайсс».
-
Изучить противовоспалительное действие препарата на модели острого лимфаденита, определить его эффективные дозы.
-
Для определения биологически активных веществ препарата изучить химический состав экстрактов шалфея лекарственного и эхинацеи узколистной. Разработать и валидировать методику определения комплекса фенольных соединений в готовой лекарственной форме.
-
Выбрать и разработать необходимые параметры стандартизации, подготовить проект нормативной документации на препарат.
Научная новизна. Для нового лекарственного препарата растительного происхождения проведен комплекс доклинических исследований, в результате которого впервые установлены его противовоспалительные и иммуномодулирующие свойства, а также параметры его безопасности.
Впервые для определения класса токсичности препарата растительного происхождения использован метод установления диапазона доз, оказывающих биологическое влияние на организм – DRF (dose range finding) подход.
Разработана модель острого воспаления лимфатического узла у крыс для оценки специфической фармакологической активности препарата.
Проведен физико-химический анализ экстрактов шалфея лекарственного и эхинацеи узколистной. Разработана и валидирована методика количественного определения суммы фенольных кислот для стандартизации готовой лекарственной формы.
Научно-практическая значимость. Данные настоящего исследования включены в регистрационное досье на новый лекарственный препарат, а также разработан проект нормативной документации, представленный на регистрацию в ФГУ НЦЭСМП Росздравнадзора.
Экспериментально доказано, что «Шалфей Иммунактив» обладает противовоспалительным и иммуномодулирующим действием. Противовоспалительное действие препарата обусловлено наличием экстракта шалфея лекарственного, иммуномодулирующая активность связана с присутствием эхинацеи узколистной.
Материалы диссертации вошли в учебные программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях кафедр фармакологии и биохимии СПбГМА им. И.И. Мечникова.
Разработанная модель острого лимфаденита у крыс внедрена на кафедрах биохимии и фармакологии СПбГМА им. И.И. Мечникова для изучения противовоспалительной активности новых препаратов.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
По результатам исследования токсичности препарат признан безопасным. Для определения класса токсичности и расчета доз при планировании хронического эксперимента рекомендован метод dose range finding (DRF).
-
Разработана и апробирована модель острого лимфаденита у крыс для изучения противовоспалительной активности препаратов, рекомендованных для лечения воспалительных заболеваниях верхних дыхательных путей. Установлено, что «Шалфей Иммунактив» обладает противовоспалительными и иммуномодулирующими свойствами. Противовоспалительные свойства препарата обусловлены наличием в нем ряда биологически активных веществ шалфея, в том числе флавоноидов. Выявленная иммуномодулирующая активность связана с присутствием комплекса фенолкарбоновых кислот эхинацеи, для которых характерны иммуностимулирующий, противомикробный и антиоксидантный эффекты.
-
Стандартизацию препарата предложено проводить по содержанию фенольных соединений: флавоноидов и производных гидроксикоричной кислоты, являющихся важной группой биологически активных веществ как шалфея, так и эхинацеи, и во многом обуславливающих их фармакологическую активность.
Личный вклад соискателя заключается в самостоятельном проведении большинства экспериментальных исследований, включая работу с экспериментальными животными, проведение лабораторных тестов, статистическую обработку и анализ полученных результатов, а также в подготовке основных публикаций по теме работы.
Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены и обсуждены на 63-й итоговой научной конференции молодых ученых с международным участием (г. Ростов-на-Дону, 04.2009); Х международном конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (г. Томск, 05.2009); Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки» (г. Ярославль, 05.2009); XIII Международном съезде «Phytopharm-2009» (Bonn, Germany, 07.2009), «57th International congress & Annual meeting of the Society for Medicinal Plant and Natural Product Research» (Geneva, Switzerland, 08.2009), 3-й ежегодной конференции «Фармация и общественное здоровье» (г. Екатеринбург, 02.2010) и ежегодной конференции СПбГМА им. И.И. Мечникова (СПб, 04.2010).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ, из них 3 в центральных медицинских журналах, рекомендованных ВАК.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав, содержащих результаты собственных исследований и их обсуждение, заключения, выводов, списка литературы и трех приложений. Работа изложена на 129 страницах машинописного текста, включает в себя 29 таблиц, 16 рисунков. Список литературы содержит 207 источников, из них 140 иностранных авторов. Приложения включают проект НД на препарат «Шалфей Иммунактив», таблицы данных исследования общей токсичности препарата, акт о подаче на регистрацию ФГУ НЦЭСМП Росздравнадзора, акт о внедрении в практику выпускающего контроля качества компании «Натур Продукт Европа Б.В.» и акт внедрения на кафедре биохимии СПбГМА им. И.И. Мечникова.
